他克莫司胶囊溶出曲线的测定方法

摘要

本发明公开了一种他克莫司胶囊溶出曲线的测定方法，包括：将中性溶出介质、酸性溶出介质和中等酸性溶出介质分别加入到三个溶出仪内，将他克莫司胶囊样品分别投入三个溶出仪中，样品溶出后取样，过滤掉2‑6mL样品后取续滤液；对于中性溶出介质和中等酸性溶出介质，取续滤液作为待检溶液，对于酸性溶出介质，取续滤液加入乙腈作为待检溶液；采用高效液相色谱仪检测上述待检溶液并计算分析。本发明操作简单，检测结果重复性好，对检测仪器要求低，提高了分析方法的准确性，弥补了缺少pH1.0（酸性）介质的溶出曲线分析方法，提高中性介质溶出曲线分析方法的区分力，解决他克莫司在溶出介质中响应低的问题。

说明书

技术领域

本发明涉及一种他克莫司胶囊溶出曲线的测定方法，属于药物分析技术领域。

背景技术

溶出度是指固体制剂药物在规定介质中释放的速率和程度；同时溶出曲线是针对口服固体制剂的模拟人体消化道系统环境而建立的药物释放动态模型，以便预测药物在人体内的药代动力学与药效动力学结果。二者是药品质量控制的重要指标，从而有效地保证药物在体内的生物利用度；溶出曲线在固体制剂仿制药产品的处方工艺筛选中应用广泛并起到至关重要的作用，一个良好的溶出曲线方法应对不同工艺处方具有较强的区分力，从而筛选出最优工艺配方。

他克莫司(FK506)，是从链霉菌发酵分离得到的产物，是一种大环内脂类化合物，是一种新型的免疫抑制剂，是环孢素药效的100倍。目前主要用于治疗皮炎、自身免疫性眼病、器官移植的免疫排斥反应等领域。

他克莫司在体内的生物利用度个体差异大，并在分析仪器中的响应极低，因为：1)他克莫司是一种难溶性药物；2)其在溶出介质中的主药浓度极低；3)其在pH1.0(酸性)的条件下溶出度极低且没有药典标准予以收载。

目前中国国内尚未收录他克莫司胶囊的质量检测标准。美国药典中推介的5种溶出方法中，其中4种方法采用了pH4.5(中等酸性)、1种方法采用了pH7.0(中性)作为溶出pH，并未提出pH1.0(酸性)的溶出介质方法，但按照一般的溶出曲线分析方法要求推荐，不应少于3种pH值的溶出介质进行溶出曲线的考察。

且已有的方法操作繁琐、重复性差、对仪器要求高等问题，严重影响了技术人员对检测结果的分析判断。其中，中性介质(pH7.0或6.8)方法的溶出曲线区分力不佳、原料药(主药)在其中十分不稳定。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种他克莫司胶囊溶出曲线的测定方法，操作简单，检测结果重复性好，对检测仪器要求低，提高了分析方法的准确性，弥补了缺少pH1.0介质的溶出曲线分析方法，提高中性介质溶出曲线分析方法的区分力，解决他克莫司在溶出介质中响应低的问题。

为解决上述技术问题，本发明提供一种他克莫司胶囊溶出曲线的测定方法，包括：

将未加入缓冲剂的羟丙基纤维素溶液作为中性溶出介质，以盐酸调节羟丙基纤维素溶液pH至1.0作为酸性溶出介质，以磷酸调节羟丙基纤维素溶液pH至4.5作为中等酸性溶出介质；

将中性溶出介质、酸性溶出介质和中等酸性溶出介质分别加入到三个溶出仪内，将他克莫司胶囊样品分别投入三个溶出仪中，样品溶出后取样，过滤掉2-6mL样品后取续滤液；

对于中性溶出介质和中等酸性溶出介质，取续滤液作为待检溶液，对于酸性溶出介质，取续滤液加入乙腈作为待检溶液；

采用高效液相色谱仪检测上述待检溶液；

计算他克莫司胶囊溶出度，并制作溶出曲线，计算与原研胶囊之间的相似因子。

优选地，对于酸性溶出介质，所述续滤液和乙腈的体积比为3：7。

优选地，所述羟丙基纤维素溶液的质量体积浓度为0.005-0.05％，单位为kg/L。

优选地，所述高效液相色谱仪的色谱柱选用C18色谱柱：150mm*4.6mm*5μm。

优选地，所述高效液相色谱仪的色谱条件为：柱温60℃；流动相乙腈和0.1ml/L三氟乙酸的体积比为50：50；波长205nm；进样体积400ul；流速1.5ml/min。

优选地，样品溶出的具体方法为：量取溶出介质900mL，置1000mL圆底溶出杯内，杯内温度37.0±0.5℃，转速为50r/min。

优选地，取样的具体方法为：分别于30min、60min、90min、120min取样。

优选地，采用针式玻璃纤维过滤器过滤。

本发明所达到的有益效果：

(1)对于酸性溶出介质，因为其中的盐酸较多，易影响他克莫司的稳定性，而他克莫司在乙腈中的溶解度较高，故而取续滤液加入乙腈作为待检溶液，增加了乙腈作为稀释剂，从而提高了样品溶液的稳定性。

(2)将羟丙基纤维素溶液(无缓冲盐)作为中性溶出介质，由于他克莫司在磷酸盐缓冲盐的体系中极不稳定，其紫外吸收系数受到影响，故而不加入磷酸盐作为pH调节剂，直接采用无缓冲盐的体系作为介质，从而提高了样品溶液的稳定性。

(3)本发明色谱条件为：柱温60℃；流动相乙腈和0.1ml/L三氟乙酸的体积比为50：50；波长205nm；进样体积400ul；流速1.5ml/min，通过改善色谱条件的参数，提高了样品的稳定性、分析方法的适用性、精密度。

(4)弥补了所缺少的pH1.0介质的溶出曲线分析方法，提高了中性介质溶出曲线分析方法的区分力，解决了他克莫司在溶出介质中响应低的问题。

附图说明

图1是本发明他克莫司胶囊溶出曲线测定方法的流程图；

图2是实施例1pH为1.0的介质溶出曲线；

图3是实施例2pH为4.5的介质溶出曲线；

图4是实施例3中性介质溶出曲线。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。

图1是本发明他克莫司胶囊溶出曲线测定方法的流程图。实施例1-3中，采用原研药1批(安斯泰来制药有限公司生产的他克莫司胶囊)和自研药3批进行溶出曲线的测定。其中，三批自研药的配方如表1所示。

表1三批自研药的配方

实施例1(pH1.0介质溶出)

1)样品溶出：配制溶出介质900mL(0.005％羟丙基纤维素溶液以盐酸调节pH至1.0)，置1000mL圆底溶出杯内，设定溶出仪杯内温度37.0±0.5℃，转速为50r/min；每批他克莫司胶囊取12粒投入12个溶出杯中，于30min、60min、90min、120min从每个溶出杯中进行取样10mL，用GF针式过滤器过滤掉2mL后取续滤液1.4mL至进样小瓶中，加入0.6mL乙腈，混匀，即得样品溶液。

2)仪器分析：采用高效液相色谱仪检测上述样品溶液；色谱柱选用C18 150mm*4.6mm*5μm，流动相选择乙腈-0.1ml/L三氟乙酸(50：50)溶液，设置仪器柱温60℃、流速1.5ml/min、波长205nm、进样体积400ul。

3)结果计算：计算他克莫司胶囊溶出度。并制作溶出曲线，计算与原研胶囊之间的相似因子,结果见表2。

表2 PH1.0介质中他克莫司原研与自制胶囊溶出度结果

溶出曲线见图2，可知该溶出方法展示了良好的区分力，以将不同的工艺与配方的样品予以区分，判断其优劣。

实施例2(pH4.5介质溶出)

1)样品溶出：配制溶出介质900mL(0.005％羟丙基纤维素溶液以磷酸调节pH至4.5)，置1000mL圆底溶出杯内，设定溶出仪杯内温度37.0±0.5℃，转速为50r/min；每批他克莫司胶囊取12粒投入12个溶出杯中，于30min、60min、90min、120min从每个溶出杯中进行取样10mL，用GF针式过滤器过滤掉2mL后取续滤液适量至进样小瓶中，即得样品溶液。

2)仪器分析：采用高效液相色谱仪检测上述样品溶液；色谱柱选用C18 150mm*4.6mm*5μm，流动相选择乙腈-0.1ml/L三氟乙酸(50：50)溶液，设置仪器柱温60℃、流速1.5ml/min、波长205nm、进样体积400ul。

3)结果计算：计算他克莫司胶囊溶出度。并制作溶出曲线，计算与原研胶囊之间的相似因子，结果见表3。

表3 PH4.5介质中他克莫司原研与自制胶囊溶出度结果

溶出曲线见图3，可知该溶出方法展示了良好的区分力，以将不同的工艺与配方的样品予以区分，判断其优劣。

实施例3(中性介质溶出)

1)样品溶出：配制溶出介质900mL(0.005％羟丙基纤维素溶液)，置1000mL圆底溶出杯内，桨法，设定溶出仪杯内温度37.0±0.5℃，转速为50r/min；每批他克莫司胶囊取12粒投入12个溶出杯中，于30min、60min、90min、120min从每个溶出杯中进行取样10mL，用GF针式过滤器过滤掉2mL后取续滤液适量至进样小瓶中，即得样品溶液。

2)仪器分析：采用高效液相色谱仪检测上述样品溶液；色谱柱选用C18 150mm*4.6mm*5μm，流动相选择乙腈-0.1ml/L三氟乙酸(50：50)溶液，设置仪器柱温60℃、流速1.5ml/min、波长205nm、进样体积400ul。

3)结果计算：计算他克莫司胶囊溶出度。并制作溶出曲线，计算与原研胶囊之间的相似因子，结果见表4。

表4中性介质中他克莫司原研与自制胶囊溶出度结果

溶出曲线见图4，可知该溶出方法展示了良好的区分力，以将不同的工艺与配方的样品予以区分，判断其优劣。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变形，这些改进和变形也应视为本发明的保护范围。