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背景技术
支气管肺发育不良(Bronchopulmonary dysplasia，BPD)是一种主要影响早产儿的严重慢性肺病。早产儿在使用补充氧气和机械呼吸辅助装置而使肺部受损后可能会发展为BPD。BPD婴儿肺部有炎症和疤痕，并且在严重情况下，会处于长期需要呼吸机或氧气支持、肺动脉高压、反复呼吸道感染、肺功能异常、心脏功能受损、运动不耐受、后期神经发育病况甚至死亡等高风险。
许多BPD婴儿会随着时间的推移而有所恢复和改善，然而，这些儿童罹患包括哮喘和病毒性肺炎等进一步并发症的风险增加。尽管大多数婴儿都能存活，但即使经过数月的护理后，一些患有极严重BPD的婴儿仍会死于此疾病。
发明内容
本发明尤其提供用于基于抗Flt-1抗体疗法治疗慢性肺病症，特别是支气管肺发育不良(BPD)的改良方法和组合物。如下文实例所述，本发明部分基于以下发现：抗Flt-1抗体或其抗原结合片段可抑制VEGF和其它配体与Flt-1受体的结合，从而增加可用于与VEGF受体结合的VEGF和/或其它配体的量。这种增加的结合可诱导促血管生成作用，其增加毛细血管密度并且促进纤维化和炎症的减少，并缓解与BPD相关的症状和特征。实际上，如实例中所示，本公开显示抗Flt-1抗体的施用改善了BPD动物模型中的肺病理学测量结果，包括改善心脏功能。因此，本发明提供用于治疗BPD的安全和有效的基于抗体的治疗剂。
在一个方面，本发明提供治疗支气管肺发育不良(BPD)的方法，其包含向需要治疗的个体施用有效量的抗Flt-1抗体或其抗原结合片段。
在一些实施例中，个体是患有或易患BPD的婴儿。在一些实施例中，个体怀有患有或易患BPD的胎儿。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段的特征在于能够在表面等离子体共振结合测定中以大于10
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段的特征在于在与人Flt-1的竞争测定中IC
在一些实施例中，竞争测定是抑制VEGF与人Flt-1的结合。在一些实施例中，竞争测定是抑制PLGF与人Flt-1的结合。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段不结合VEGFR2和/或VEGFR3。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段不结合小鼠或猴Flt-1。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段结合小鼠和/或猴Flt-1。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段选自由以下组成的群组：IgG、F(ab')
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体。在一些实施例中，单克隆抗体是人源化单克隆抗体。在一些实施例中，人源化单克隆抗体含有人Fc区。在一些实施例中，Fc区含有一个或多个突变，所述突变增强所述Fc区与FcRn受体之间的结合亲和力，使得所述抗体的体内半衰期延长。在一些实施例中，Fc区在对应于人IgG1的Thr250、Met 252、Ser 254、Thr 256、Thr 307、Glu 380、Met 428、His 433和/或Asn 434的一个或多个位置处含有一个或多个突变。
在一些实施例中，肠胃外施用抗Flt-1抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，肠胃外施用选自静脉内、皮内、鞘内、吸入、透皮(局部)、眼内、肌肉内、皮下、肺递送和/或透粘膜施用。在一些实施例中，肠胃外施用是静脉内施用。
在一些实施例中，经口施用抗Flt-1抗体或其抗原结合片段。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段每两个月、每月、每三周、每两周、每周、每天或以可变间隔施用。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段递送至选自肺和心脏的一个或多个靶组织。在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段递送至肺。在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段递送至心脏。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段的施用相对于对照组引起健康肺组织生长、肺炎症减少、肺泡生成增加、血管生成增加、肺血管床结构改善、肺疤痕减少、肺生长改善、呼吸功能不全减少、运动耐受性改善、不良神经结果减少和/或肺功能改善。
在一些实施例中，本发明提供一种方法，其进一步包含共施用选自表面活性剂、氧疗法、呼吸机疗法、类固醇、维生素A、吸入式一氧化氮、高热量营养制剂、利尿剂和/或支气管扩张剂中的至少一种额外药剂或疗法。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段以约0.5mg/kg体重至约100mg/kg体重的剂量施用于有需要的受试者。例如，在一些实施例中、抗Flt-1抗体或其抗原结合片段以约0.5mg/kg、约1.0mg/kg、约1.5mg/kg、约2.0mg/kg、约2.5mg/kg、大约3.0mg/kg、大约3.5mg/kg、约4.0mg/kg、约4.5mg/kg、约5.0mg/kg、约5.5mg/kg、约6.0mg/kg、约6.5mg/kg、约7.0mg/kg、约7.5mg/kg、约8.0mg/kg、约8.5mg/kg、约9.0mg/kg、约9.5mg/kg、约10.0mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg或约100mg/kg的剂量施用于有需要的受试者。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段以约1mg/kg体重至约50mg/kg体重的剂量施用于有需要的受试者。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段以约1mg/kg体重至约10mg/kg体重的剂量施用于有需要的受试者。
在一些实施例中，与基线测量结果相比，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段的施用引起心输出量增加。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段的施用降低血压。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段的施用剂量依赖性地增加心输出量、心搏量和/或LV舒张面积。
如本申请中所使用，术语“约”和“大约”用作等效物。本申请中具有或不具有约/大约使用的任何数字皆意指涵盖相关领域中普通技术人员所了解的任何正常波动。
本发明的其它特征、目的和优点在以下详细描述中显而易见。然而，应理解，虽然指出本发明的实施例，但具体实施方式仅作为说明而非限制给出。本领域的技术人员从具体实施方式将显而易见属于本发明范围内的各种变化和修改。
定义
为了使本发明更容易理解，首先在下文定义了某些术语。以下术语和其它术语的其它定义阐述在整个说明书中。
动物：如本文中所使用，术语“动物”是指动物界的任何成员。在一些实施例中，“动物”是指处于任何发育阶段的人。在一些实施例中，“动物”是指处于任何发育阶段的非人动物。在某些实施例中，非人动物是哺乳动物(例如，啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、猴子、狗、猫、绵羊、牛、灵长类和/或猪)。在一些实施例中，动物包括但不限于哺乳动物、鸟类、爬行动物、两栖动物、鱼类、昆虫和/或蠕虫。在一些实施例中，动物可以是转基因动物、经基因工程改造的动物和/或克隆物。
抗体：如本文所使用，术语“抗体”是指任何免疫球蛋白，无论是天然的或完全或部分地合成产生的。维持特异性结合能力的其所有衍生物也包括于所述术语中。所述术语还涵盖具有与免疫球蛋白结合结构域同源或大部分同源的结合结构域的任何蛋白。此类蛋白可源自天然来源，或部分或完全合成产生。抗体可以是单克隆或多克隆的。抗体可以是任何免疫球蛋白类别的成员，包括人类类别中的任一者：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。在某些实施例中，抗体可以是IgG免疫球蛋白类别的成员。如本文所使用，术语“抗体片段”或“抗体的特征部分”可互换地使用，并且是指小于全长的抗体的任何衍生物。一般来说，抗体片段保留全长抗体的至少相当大部分的特异性结合能力。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')
抗原结合片段：如本文所使用,术语“抗原结合片段”是指与抗原(即，Flt-1)接触并结合的免疫球蛋白分子的一部分。
大约或约：如本文所使用，术语“大约”或“约”在应用于所关注的一或多个值时是指与所述参考值类似的值。在某些实施例中，术语“大约”或“约”指落入所述值任一方向(大于或小于)中的25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更少的一系列值，除非另有说明或从上下文中另外显而易见的(除非该数字超过可能值的100％)。
生物活性的：如本文所使用，短语“生物活性的”是指在生物系统中并且特别是在生物体中具有活性的任何药剂的特征。例如，当施用于生物时对所述生物体具有生物作用的药剂视为生物活性的。在特定实施例中，当肽是生物活性的情况下，共享所述肽的至少一种生物活性的所述肽的一部分通常被称为“生物活性的”部分。在某些实施例中，肽并不具有内在生物活性，但抑制一种或多种VEGF配体的结合的肽被视为具有生物活性。
载体或稀释剂：如本文所使用，术语“载体”和“稀释剂”是指适用于制备药物制剂的药学上可接受的(例如，向人施用安全并且无毒的)载体或稀释物质。示例性稀释剂包括无菌水、注射用抑菌水(BWFI)、pH缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲盐水)、无菌盐水溶液、林格溶液或右旋糖溶液。
剂型：如本文所使用，术语“剂型”和“单位剂型”是指用于待治疗患者的治疗性蛋白(例如抗体)的物理离散单位。每一单位含有经计算以产生所需治疗效果的预定量的活性物质。然而，应理解，组合物的总剂量将由主治医师在合理医学判断范围内决定。
功能等效物或衍生物：如本文所使用，在氨基酸序列的功能性衍生物的上下文中，术语“功能等效物”或“功能衍生物”指示保留与原始序列基本上类似的生物活性(功能或结构)的分子。功能衍生物或等效物可以是天然衍生物或合成制备的。示例性的功能衍生物包括具有一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加的氨基酸序列，其条件是蛋白的生物活性是保守的。取代氨基酸宜具有与经取代氨基酸类似的化学-物理特性。期望的类似化学-物理特性包括电荷、膨松性、疏水性、亲水性等方面的类似性。
融合蛋白：如本文所使用，术语“融合蛋白”或“嵌合蛋白”是指通过连接两个或更多个最初分离的蛋白或其一部分而产生的蛋白。在一些实施例中，接头或间隔子将存在于各蛋白之间。
半衰期：如本文所使用，术语“半衰期”是如在时间段开始时所测量，例如蛋白浓度或活性的量降低至其价值的一半所需的时间。
肥大：如本文所使用，术语“肥大”是指由于其组分细胞的增大而导致的器官或组织的体积增加。
改进、增加或减少：如本文所使用，术语“改善”、“增加”或“减少”或语法等效物指示相对于基线测量结果的值，所述基线测量结果如在本文所述的治疗开始之前相同个体中的测量结果，或在不存在本文所述的治疗的情况下对照受试者(或多个对照受试者)中的测量结果。“对照受试者”是罹患与正接受治疗的受试者相同形式的疾病的受试者，其年龄与正接受治疗的受试者约相同。
体外：如本文所使用，术语“体外”是指在人造环境中，例如在试管或反应容器中，在细胞培养物中等，而不是在多细胞生物体内发生的事件。
体内：如本文所使用，术语“体内”是指在如人和非人动物等多细胞生物体内发生的事件。在基于细胞的系统的情况下，所述术语可用于指在活细胞(与例如体外系统相反)内发生的事件。
接头：如本文所使用，术语“接头”是指在融合蛋白中，除在天然蛋白中的特定位置处呈现的氨基酸序列以外的氨基酸序列，并且一般设计为柔性的或在两个蛋白部分之间插入如α-螺旋的结构。接头也称为间隔子。接头或间隔子通常本身不具有生物功能。
药学上可接受的：如本文所使用，术语“药学上可接受的”是指在合理医学判断范围内适用于与人类和动物的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，与合理效益/风险比相称的物质。
多肽：如本文所使用，术语“多肽”是指经由肽键连接在一起的氨基酸的连续链。所述术语用于指任何长度的氨基酸链，但本领域普通技术人员将理解，所述术语并不限于长链，并且可以指包含经由肽键连接在一起的两个氨基酸的最小链。如本领域技术人员已知的，多肽可进行加工和/或修饰。
预防：如本文所使用，当与疾病、病症和/或病况的发生结合使用时，术语“预防”是指降低疾病、病症和/或病况发展的风险。参见“风险”的定义。
蛋白：如本文所使用，术语“蛋白”是指充当离散单位的一种或多种多肽。如果单个多肽是离散功能单元，并且不需要与其它多肽永久或暂时物理结合以便形成离散功能单元，则术语“多肽”和“蛋白”可互换地使用。如果离散功能单元由超过一种彼此物理结合的多肽组成，则术语“蛋白”是指物理上耦合并且一起充当离散单元的多个多肽。
风险：如根据上下文将理解，疾病、病症和/或病况的“风险”包含特定个体将发展成疾病、病症和/或病况(例如BPD)的可能性。在一些实施例中，风险表示为百分比。在一些实施例中，风险为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90直至100％。在一些实施例中，风险表示为相对于与参考样品或参考样品组相关的风险的风险。在一些实施例中，参考样品或参考样品组具有疾病、病症、病况和/或事件(例如BPD)的已知风险。在一些实施例中，参考样品或参考样品组来自与特定个体相当的个体。在一些实施例中，相对风险为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多。
受试者：如本文所使用，术语“受试者”是指人或任何非人动物(例如，小鼠、大鼠、兔、狗、猫、牛、猪、绵羊、马或灵长类动物)。人包括产前和产后两种形式。在许多实施例中，受试者是人。受试者可以是患者，所述患者是指向医疗提供者提出进行疾病诊断或治疗的人。术语“受试者”在本文中与“个体”或“患者”可互换地使用。受试者可以罹患疾病或病症或易罹患疾病或病症，但可以或可以不显现出所述疾病或病症的症状。
基本上：如本文所使用，术语“基本上”是指表现出全部或接近全部范围或程度的目标特征或性质的定性条件。生物学领域的普通技术人员将理解，生物学和化学现象很少(如果曾经有)完成和/或继续完成或达到或避免绝对结果。因此，在本文中使用术语“基本上”来捕获许多生物学和化学现象中固有的潜在完整性缺失。
基本同源性：如本文所使用，短语“基本同源性”是指氨基酸或核酸序列之间的比较结果。如本领域普通技术人员将了解，如果两个序列在相应位置中含有同源残基，则它们一般视为“基本上同源的”。同源残基可以是相同的残基。或者，同源残基可以是将适当地具有类似结构和/或功能特征的不相同的残基。例如，如本领域普通技术人员众所周知的，某些氨基酸通常被分类为“疏水”或“亲水”氨基酸，和/或具有“极性”或“非极性”侧链。一种氨基酸取代相同类型的另一种氨基酸通常可以认为是“同源”取代。
如本领域中众所周知，可以使用多种算法中任一种来比较氨基酸或核酸序列，包括商业计算机程序中可获得的那些算法，如用于核苷酸序列的BLASTN以及用于氨基酸序列的BLASTP、空位BLAST和PSI-BLAST。示例性的此类程序描述于Altschul等人，“基本局部对比搜索工具(Basic local alignment search tool)”,《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》,215(3):403-410,1990；Altschul等人，“酶学方法(Methods in Enzymology)”；Altschul等人，“空位BLAST和PSI-BLAST：新一代蛋白数据库搜索程序(Gapped BLAST and PSI-BLAST:a new generation of protein database search programs)”,《核酸研究(NucleicAcids Res.)》25:3389-3402,1997；Baxevanis等人，《生物信息学：基因和蛋白分析的实用指南(Bioinformatics:A Practical Guide to the Analysis of Genes andProteins)》,威立出版社(Wiley),1998；以及Misener等人(编)《生物信息学方法和协议(分子生物学方法，第132卷)(Bioinformatics Methods and Protocols(Methods inMolecular Biology,Vol.132))》,胡马纳出版社(Humana Press),1999中。除识别同源序列以外，上述程序通常提供对同源性程度的指示。在一些实施例中，如果两个序列中的至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的相应残基在相关的残基段上同源，则这两个序列被认为是基本上同源的。在一些实施例中，相关段是完整序列。在一些实施例中，相关段是至少10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500个或更多个残基。
基本同一性：如本文所使用，短语“基本同一性”用于指氨基酸或核酸序列之间的比较结果。如本领域普通技术人员将了解，如果两个序列在相应位置中含有相同的残基，则它们一般视为“基本上同源的”。如本领域中众所周知，可以使用多种算法中任一种来比较氨基酸或核酸序列，包括商业计算机程序中可获得的那些算法，如用于核苷酸序列的BLASTN以及用于氨基酸序列的BLASTP、空位BLAST和PSI-BLAST。示例性的此类程序描述于Altschul等人，“基本局部对比搜索工具”,《分子生物学杂志》,215(3):403-410,1990；Altschul等人，“酶学方法”；Altschul等人，《核酸研究》25:3389-3402,1997；Baxevanis等人，《生物信息学：基因和蛋白分析的实用指南》,威立出版社(Wiley),1998；以及Misener等人(编)《生物信息学方法和协议(分子生物学方法，第132卷)》,胡马纳出版社,1999中。除识别相同的序列以外，上述程序通常提供对同一性程度的指示。在一些实施例中，如果两个序列中的至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的相应残基在相关的残基段上相同，则这两个序列被认为是基本上相同的。在一些实施例中，相关段是完整序列。在一些实施例中，相关段是至少10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500个或更多个残基。
患有：“患有”疾病、病症和/或病况的个体已诊断患有所述疾病、病症和/或病况或显现出所述疾病、病症和/或病况的一种或多种症状。
易患：“易患”疾病、病症和/或病况的个体尚未诊断患有所述疾病、病症和/或病况。在一些实施例中，易患疾病、病症和/或病况的个体尚未显现出所述疾病、病症和/或病况的症状。在一些实施例中，易患疾病、病症、病况和/或事件(例如BPD)的个体的特征可在于以下中的一个或多个：(1)与疾病、病症和/或病况发展有关的遗传突变；(2)与疾病、病症和/或病况发展有关的遗传多态性；(3)与疾病、病症和/或病况有关的蛋白的表达和/或活性增加和/或减少；(4)与疾病、病症、病况和/或事件发展有关的习惯和/或生活方式；(5)已进行移植、计划进行移植或需要移植。在一些实施例中，易患疾病、病症和/或病况的个体将发展疾病、病症和/或病况。在一些实施例中，易患疾病、病症和/或病况的个体将不发展疾病、病症和/或病况。
靶组织：如本文所使用，术语“靶组织”是指受待治疗的疾病(如BPD)影响的任何组织。在一些实施例中，靶组织包括显示疾病相关病理学、症状或特征的那些组织，包括但不限于肺炎症、肺疤痕、肺生长受损、早期肺损伤、长期呼吸功能不全、肺部感染、运动不耐受和不良神经结果。
治疗有效量：如本文所使用，术语治疗剂的“治疗有效量”是指当施用于患有或易患疾病、病症和/或病况的受试者时，足以治疗、诊断、预防和/或延迟所述疾病、病症和/或病况的症状发作的量。本领域普通技术人员将了解，通常经由包含至少一个单位剂量的给药方案来施用治疗有效量。
治疗：如本文所用，术语“治疗(treat/treatment/treating)”是指用于部分或完全缓解、改善、减轻、抑制、预防、延迟特定疾病、病症和/或病况的一种或多种症状或特征的发作、减少其严重性和/或减少其发病率的任何方法。为了降低发展与疾病有关的病理的风险，可以向未表现出疾病征兆和/或仅表现出疾病早期征兆的受试者施用治疗。
具体实施方式
本发明尤其提供基于抗Flt-1抗体或其抗原结合片段作为用于治疗BPD的治疗剂的用途，用于治疗慢性肺病症，特别是支气管肺发育不良(BPD)的方法和组合物。在一些实施例中，本发明提供治疗BPD的方法，其包括向患有或易患BPD的个体施用有效量的抗Flt-1抗体或其抗原结合片段，使得BPD的至少一种症状或特征的强度、严重性或频率降低或者延迟发作。
在以下部分中详细描述了本发明的各个方面。部分的使用并不意在限制本发明。每个部分可以适用于本发明的任何方面。在本申请中，除非另有说明，否则“或”的使用意指“和/或”。
支气管肺发育不良(BPD)
随着表面活性剂疗法、母体类固醇、新呼吸机策略、动脉导管未闭的积极管理、营养改善和其它治疗的引入，患有RDS的早产新生儿的临床病程和结果在过去30年中发生了巨大变化。最近已证实，罹患BPD的婴儿中有约三分之二在出生时仅具有轻度呼吸窘迫。这表明，肺损伤的形成时间是BPD病因学中的关键因素。
在这种流行病学和临床模式变化的同时，BPD中的肺组织学的关键特征也发生了变化。现在人们越来越认识到，在早产后患有持续性肺病的婴儿的临床病程和病理学不同于传统上在表面活性剂治疗前时代(presurfactant era)所观察到的死于BPD的婴儿。由于临床管理的变化，最初以BPD为特征的经典进展期通常不存在，并且BPD已从主要由急性肺损伤的严重度来定义明显地改变为目前主要由远端肺生长受阻来定义的特征。因此，表面活性剂治疗后时期(postsurfactant period)的所谓新BPD代表了肺发育受到抑制，伴随肺结构、生长和远端气腔和血管系统的功能发生变化。在生理上，这表明肺泡-毛细血管表面积显著减小，潜在地导致气体交换的减弱，增加了运动不耐受、肺动脉高压和急性呼吸道感染耐受性差的风险。
BPD的发病机制
BPD表示在肺生长的关键时期，即在小管期(人的17至26周)期间肺对损伤的反应，在此期间气腔分隔和血管发育急剧增加。在一些实施例中，增加早产儿对罹患BPD的易感性的因素包括表面活性剂缺乏、抗氧化剂防御力降低、上皮离子和水转运功能受损和肺结构不成熟。在一些实施例中，早产后的肺损伤和随后的肺生长停滞是由多种不良刺激之间的复杂相互作用引起的，所述不良刺激包括防御力差的发育中的肺的炎症、高氧、机械通气和感染。在一些实施例中，由于母体绒毛膜羊膜炎，产前暴露于促炎性细胞因子，如TNF-α、IL-6、IL-8等，增强了子宫中的肺成熟，但也增加了BPD的风险。
高氧和氧化应激是罹患BPD的关键因素。在一些实施例中，早产新生儿从正常胎儿的低氧张力环境过渡到宫外生活的相对高氧环境增加了伴随肺泡化降低和血管系统畸形的BPD的风险。在一些实施例中，氧环境的过早变化阻碍正常的上皮-间充质相互作用，并且导致微血管系统中的内皮细胞存活、分化和组织的改变。在一些实施例中，由于早产后缺乏足够的抗氧化剂，早产婴儿特别易受活性氧物质(ROS)诱发的损伤。在一些实施例中，抗氧化剂酶[例如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶]在妊娠后期显著增加。在一些额外实施例中，在早产动物中响应于高氧而增加抗氧化剂酶的合成的能力降低，因此早产可能早于在产后早期持续存在的抗氧化剂的正常上调。在一些实施例中，内皮和肺泡II型细胞极易发生高氧和ROS诱发的损伤，导致水肿增加、细胞功能障碍以及细胞存活和生长受损。
在一些实施例中，即使在不存在气压伤或容积伤的明显征兆的情况下，用机械通气治疗早产儿仍会引发并促进伴有炎症和渗透性水肿的肺损伤，并导致BPD。在一些实施例中，呼吸机相关的肺损伤(VALI)由拉伸远端气道上皮和毛细血管内皮引起，其增加渗透性水肿，抑制表面活性剂功能并引发复杂的发炎级联反应。在一些实施例中，即使是短暂的正压通气，如在产房进行复苏期间，也可能导致肺中支气管上皮和内皮损伤，从而为进行性肺炎症和损伤奠定基础。
无论是在出生前(由于绒毛膜羊膜炎)还是在出生后早期(由于高氧或VALI)引起的肺炎症都在BPD的发展中起着重要作用。在一些实施例中，BPD的风险与气管流体嗜中性粒细胞计数、活化的巨噬细胞、高浓度脂质产物、氧化剂灭活的α-1-抗胰蛋白酶活性和包括IL-6和IL-8的促炎性细胞因子的持续增加以及IL-10水平降低有关。在一些实施例中，巨噬细胞释放早期反应细胞因子，例如TNF-α、IL-1β、IL-8和TGF-β，以及可溶性粘附分子(即，选择素)的存在可影响其它细胞以释放募集嗜中性粒细胞并且扩增炎性反应的趋化因子。在一些实施例中，在随后发展为BPD的婴儿生命的数小时内，升高浓度的促炎性细胞因子与减少的抗炎产物(即IL-10)一同出现在气管抽吸物中。在一些实施例中，从活化的嗜中性粒细胞释放增加的弹性蛋白酶和胶原蛋白酶可以直接破坏肺的弹性蛋白和胶原蛋白框架，并且可以在BPD婴儿的尿液中回收到胶原蛋白和弹性蛋白降解的标记物。在一些实施例中，来自相对较低毒性生物的感染，如用解脲支原体气道定植，可能增强炎症反应，从而进一步增加BPD的风险。在一些实施例中，其它因素，如营养缺乏和遗传因素，如维生素A和E缺乏或表面活性剂蛋白的单核苷酸多态性变体，分别可能增加一些早产儿发生BPD的风险。
BPD中的肺循环
除了对气道和远端气腔的不利影响之外，急性肺损伤还损害在早产后发育中肺循环的生长、结构和功能。在一些实施例中，内皮细胞特别容易因高氧或炎症而受到氧化剂损伤。在一些实施例中，小肺动脉介质经历了惊人的变化，包括平滑肌细胞增殖、未成熟间充质细胞早熟为成熟平滑肌细胞，以及成纤维细胞/成肌纤维细胞并入到血管壁中。在一些实施例中，肺血管系统的结构变化通过血管直径变窄和血管顺应性降低而导致高肺血管阻力(PVR)。在一些实施例中，除这些结构变化之外，肺循环的特征进一步在于异常血管反应性，这也增加了PVR。在一些实施例中，血管生成减少可能限制血管表面积，导致PVR进一步升高，特别是响应于运动或应激的高心输出量。
总体而言，肺循环的早期损伤导致肺动脉高压的快速发展，其显著地导致重度BPD的发病和死亡。在一些实施例中，高死亡率发生在需要长期呼吸机支持的患有BPD和肺动脉高压的婴儿中。在一些实施例中，肺动脉高压是更晚期BPD的标志，并且PVR升高还导致右心室功能不良、心输出量受损、氧递送受限、肺水肿增加，并且可能还导致更高的猝死风险。在一些实施例中，BPD中肺循环的生理异常包括PVR升高和异常血管反应性，如由对急性缺氧的显著血管收缩反应所证明。在一些实施例中，即使是轻度缺氧也会导致具有适度基础肺动脉高压水平的婴儿的肺动脉压力显著升高。在一些实施例中，氧饱和度高于92-94％的治疗水平有效地降低肺动脉压力。在一些实施例中，降低肺动脉压力或限制对肺血管系统的损伤的策略可以限制BPD中肺动脉高压的后续发展。
最后，肺动脉高压和右心功能仍然是BPD婴儿的主要临床问题。在一些实施例中，BPD中的肺血管疾病还包括由于生长受损而降低的肺动脉密度，其导致气体交换受损的生理异常，以及BPD的实际发病机制。在一些实施例中，受损的血管生成阻碍了肺泡化，并且保存和增强内皮细胞存活、生长和功能的策略提供了用于预防BPD的治疗方法。
BPD中血管生成因子的信号传导改变
多个生长因子和信号传导系统在正常肺血管生长中起重要作用。在一些实施例中，早产和氧张力、炎性细胞因子和其它信号的变化改变正常生长因子表达和信号传导，并且因此改变肺/肺血管发育。在一些实施例中，生长因子是VEGF。在临床环境中，受损的VEGF信号传导已与BPD的发病机制相关。在一些实施例中，在来自随后罹患BPD的早产新生儿的气管流体样品中，发现VEGF低于未患慢性肺病的新生儿(185)。在一些实施例中，高氧下调肺VEGF表达，并且对VEGF信号传导的药理学抑制损害肺血管生长并抑制肺泡化。在一些实施例中，杜氏肌营养不良(Duchene Muscular Dystrophy，DMD)诱发的缺血性和缺氧病况与受损的VEGF信号传导相关。VEGF信号传导导致血管生长减少和肺泡化受损的生物学基础已得到充分建立。
血管生长和肺泡化
如上所述，气道和血管之间的紧密协调生长对于正常肺发育至关重要。在一些实施例中，在肺生长的关键时期(囊状或肺泡发育阶段)，肺血管生长的失败会减少分隔，并最终导致表征BPD的肺发育不全。在一些实施例中，血管生成涉及肺发育期间的肺泡化，并且损伤和抑制肺血管生长的机制可能阻碍早产后的肺泡生长。在一些实施例中，在产后肺生长的关键时间段期间抑制肺血管生长会损害肺泡化。
Flt-1受体
Flt-1受体，也称为血管内皮生长因子受体1，是由FLT1基因编码的受体。信号糖蛋白的血管内皮生长因子(VEGF)家族在胚胎发生和产后生长期间充当血管生成的强效启动子。具体地讲，已显示VEGF-A配体与VEGF受体的结合促进血管渗透性并且还触发内皮细胞迁移、增殖和存活，并且新形成的内皮细胞提供了新血管系统的基本结构。用于血管生成的主要VEGF信号分子VEGF-A通过VEGF受体-1(VEGFR-1，也称为Flt-1)和VEGF受体-2(VEGFR-2，也称为Flk-1)介导其信号。也存在Flt-1的可溶性形式(sFlt-1)，但缺乏胞内信号传导结构域，并因此认为仅通过将与之结合的VEGF-A或其它配体螯合而发挥调节作用。sFlt-1和含有不与胞内信号转导路径连接的Ft-1结合位点的其它分子被称为“诱骗受体”。Flt-1和Flk-1受体含有胞外VEGF-A结合结构域和胞内酪氨酸激酶结构域，并且两者在成血管细胞和内皮细胞谱系中的发育阶段和组织再生期间均显示出表达。与Flk-1相比，Flt-1对VEGF-A的结合亲和力高约10倍(Kd～2-10pM)，但较弱酪氨酸激酶结构域指示VEGF-A与Flk-1结合后的血管生成信号转导相对弱于Flk-1信号。因此，纯合的Flt-1基因敲除小鼠在胚胎阶段死于内皮细胞过度产生和血管紊乱。相反，纯合的Flk-1基因敲除小鼠由于在胚胎发生期间缺乏卵黄囊血岛形成而死于组织化血管发育缺陷。Flt-1和Flk-1受体两者均是正常发育所必需的，但选择性增强VEGF-A的浓度可使其与Flk-1受体的结合更大，并且诱导促血管生成作用，所述促血管生成作用增加毛细血管密度并且促进纤维化和炎症的减少，以及缓解与BPD相关的症状和特征。
如本文所使用，术语“Flt-1受体”是指可溶性和膜结合Flt-1受体或其功能片段。
抗Flt-1抗体
如本文所使用，术语“抗Flt-1抗体”是指结合至Flt-1受体(例如，可溶性或膜结合Flt-1受体)的任何抗体或其抗原结合片段。示例性抗体描述于例如WO2016/164567和WO2016/164579中，其中各自的内容以全文引用的方式并入本文中。在一些实施例中，产生与Flt-1受体以高亲和力结合的抗Flt-1抗体。不希望受理论束缚，据信，与Flt-1受体结合的抗Flt-1抗体抑制一种或多种内源性配体与Flt-1结合，并且进而允许更大量的可用配体与其它VEGF受体(如Flk-1受体)结合。增加的Flk-1受体的活化可以增加毛细血管密度并且促进纤维化和炎症的减少，以及缓解与BPD相关的症状和特征。在一些实施例中，VEGF的增加可用于缓解与DMD相关的症状和特征。在一些实施例中，与Flt-1受体结合的抗体增加可用于与其它VEGF受体结合的VEGF的量。在一些实施例中，与Flt-1受体结合的抗体增加可用于与其它VEGF受体结合的胎盘生长因子(PLGF)的量。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段以大于约10
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段的特征在于在与人Flt-1的竞争测定中IC
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段抑制VEGF在Flt-1受体处的结合和/或活性。在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段的特征在于在竞争测定中，IC
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段抑制PLGF在Flt-1受体处的结合和/或活性。在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段的特征在于在竞争测定中，IC
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段选择性地结合Flt-1，并且与其它VEGF受体具有极小或不明显的结合。在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段选择性地结合Flt-1，并且与VEGFR2(Flk-1)和/或VEGFR3(Flt-4)具有极小或不明显的结合。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段选择性地结合人Flt-1，并且与其它哺乳动物Flt-1受体具有极小或不明显的结合(例如，结合亲和力小于10
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段结合人Flt-1以及猴Flt-1。在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段结合人Flt-1以及小鼠Flt-1。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段选自由以下组成的群组：IgG、F(ab')
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段是IgG。在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段是IgG1。
在一些实施例中，合适的抗Flt-1抗体含有结合至FcRn受体的Fc结构域或其部分。作为非限制性实例，合适的Fc结构域可以衍生自免疫球蛋白亚类，如IgG。在一些实施例中，合适的Fc结构域衍生自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。特别合适的Fc结构域包括衍生自人抗体或人源化抗体的那些。
预期Fc结构域与FcRn受体之间的改善的结合可引起延长的血清半衰期。因此，在一些实施例中，合适的Fc结构域包含一个或多个引起与FcRn的改善的结合的氨基酸突变。Fc结构域内影响与FcRn的改善结合的各种突变在本领域中是已知的，并且可适用于实践本发明。在一些实施例中，合适的Fc结构域在对应于人IgG1的Thr 250、Met252、Ser 254、Thr256、Thr 307、Glu 380、Met 428、His 433和/或Asn434的一个或多个位置处包含一个或多个突变。
在一些实施例中，抗FLT-1抗体或抗原结合片段含有间隔子和/或连接至另一实体。在一些实施例中，接头或间隔子包含与
抗Flt-1抗体和抗原结合片段的产生
适合本发明的重组抗Flt-1抗体或抗原结合片段可以通过任何可用的手段产生。例如，重组抗Flt-1抗体或抗原结合片段可以通过利用经工程化以表达重组抗Flt-1抗体或抗原结合片段编码核酸的宿主细胞系统以重组方式产生。
在以重组方式产生抗体的情况下，可使用任何表达系统。仅举数例，已知的表达系统包括例如卵、杆状病毒、植物、酵母或哺乳动物细胞。
在一些实施例中，适用于本发明的重组抗Flt-1抗体或抗原结合片段产生于哺乳动物细胞中。可根据本发明使用的哺乳动物细胞的非限制性实例包括BALB/c小鼠骨髓瘤品系(NSO/l，ECACC编号：85110503)；人成视网膜细胞(PER.C6，荷兰莱顿的CruCell公司(CruCell,Leiden,The Netherlands))；和通过SV40转化的猴肾CV1品系(COS-7，ATCC CRL1651)。
在一些实施例中，本发明提供由人细胞产生的重组抗Flt-1抗体或抗原结合片段。在一些实施例中，本发明提供由CHO细胞产生的抗Flt-1抗体或抗原结合片段。
药物组合物和施用
本发明进一步提供一种药物组合物，其含有本文所述的抗Flt-1抗体或抗原结合片段和生理学上可接受的载体或赋形剂。
合适的药学上可接受的载体包括但不限于水、盐溶液(例如NaCl)、盐水、缓冲盐水、醇、甘油、乙醇、阿拉伯胶、植物油、苄醇、聚乙二醇、明胶、如乳糖、直链淀粉或淀粉等碳水化合物、如甘露糖醇、蔗糖或其它等糖、右旋糖、硬脂酸镁、滑石、硅酸、粘性石蜡、芳香油、脂肪酸酯、羟基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等及其组合。需要时，药物制剂可与不与活性化合物不利地反应或干扰其活性的助剂(例如润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、影响渗透压的盐、缓冲液、着色剂、调味剂和/或芳香族物质等)混合。在一个优选实施例中，使用适合于静脉内施用的水溶性载体。
需要时，合适的药物组合物或药剂还可含有少量润湿剂或乳化剂或pH缓冲剂。组合物可以是液体溶液、悬浮液、乳液、片剂、丸剂、胶囊、缓释制剂或粉末。组合物也可用传统的粘合剂和载体如甘油三酯配制成栓剂。口服制剂可包括标准载体，如药物级甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。
药物组合物或药剂可根据常规程序配制为适合施用于人类的药物组合物。例如，在一些实施例中，用于静脉内施用的组合物通常是无菌等渗水性缓冲液中的溶液。必要时，组合物还可包括增溶剂和局部麻醉剂，以减轻在注射部位处的疼痛。一般来说，将成分分开供应或以单位剂型混合在一起供应，例如作为在指示活性剂数量的气密密封容器如安瓿或药囊中的干燥冻干粉末或无水浓缩物。当通过输注施用组合物时，则可以用含有无菌药物级水、盐水或右旋糖/水的输液瓶来分配。当通过注射投予组合物时，可以提供一安瓿注射用无菌水或生理盐水，以便在施用前将成分混合。
施用途径
本文所述的抗Flt-1抗体或抗原结合片段(或含有本文所述的抗Flt-1抗体或抗原结合片段的组合物或药剂)通过任何适当的途径施用。在一些实施例中，肠胃外施用抗Flt-1抗体或抗原结合片段蛋白或含有其的药物组合物。肠胃外施用可以是静脉内、皮内、鞘内、吸入、透皮(局部)、眼内、肌肉内、皮下、肌肉内和/或透粘膜施用。在一些实施例中，皮下施用抗Flt-1抗体或抗原结合片段蛋白或含有其的药物组合物。如本文所使用，术语“皮下组织”定义为紧邻皮肤下方的松散的不规则的结缔组织层。例如，皮下施用可通过将组合物注射到包括但不限于大腿部区域、腹部区域、臀部区域或肩胛部区域的区域内来执行。在一些实施例中，静脉内施用抗Flt-1抗体或其抗原结合片段或含有其的药物组合物。在一些实施例中，动脉内施用抗Flt-1抗体或其抗原结合片段或含有其的药物组合物。在一些实施例中，经口施用抗Flt-1抗体或抗原结合片段或含有其的药物组合物。需要时，可同时使用多于一个途径。
在一些实施例中，施用仅在个体中产生局部效应，而在其它实施例中，施用在个体的多个部分各处产生效应，例如全身效应。通常，施用引起抗Flt-1抗体或抗原结合片段递送至一个或多个靶组织，包括但不限于肺和心脏。
剂型和给药方案
在一些实施例中，组合物以治疗有效量和/或根据与特定所要结果(例如，治疗或降低如支气管肺发育不良的慢性肺病症的风险)相关的给药方案施用。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体的施用改善患有BPD的受试者的心脏功能。用于评估心脏功能的各种方式是本领域已知的，并且包括例如血液分析(例如，NT-proANP水平的评估、血尿素氮测量、C-反应性蛋白测量)、CT扫描、心导管术、心脏CT扫描血管造影术、超声心动图、射血分数测试、心电图、超声波和心律监测。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体的施用保持患有BPD的受试者的心脏功能。例如，在一些实施例中，抗Flt-1抗体的施用维持存在于患有BPD的受试者中的心脏功能，而没有使所述受试者的心脏功能进一步恶化。
在一些实施例中，与施用抗Flt-1抗体之前的受试者的心脏功能相比，抗Flt-1抗体的施用改善患有BPD的受试者的心脏功能。在一些实施例中，在施用抗Flt-1抗体之后改善持续。例如，心脏功能的改善在施用抗Flt-1抗体后持续约7天、约14天、约21天、约28天、约35天、约42天、约60天、约90天、约120天、约150天、约180天、约210天、约240天、约270天、约300天或约1年。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体的施用使患有BPD的受试者的心脏功能恢复到未患有BPD的健康个体的心脏功能。
根据本发明的待施用的特定剂量或量可例如取决于所要结果的性质和/或程度、施用途径和/或施用时机的细节和/或一个或多个特征(例如体重、年龄、个人历史、遗传特征、生活方式参数、心脏缺陷的严重性和/或心脏缺陷的风险水平等或其组合)而变化。此类剂量或量可由本领域普通技术人员确定。在一些实施例中，根据标准临床技术确定适当的剂量或量。替代地或另外，在一些实施例中，通过使用一种或多种体外或体内测定来确定适当的剂量或量以帮助识别待施用的所要或最优剂量范围或量。
在各种实施例中，以治疗有效量施用抗Flt-1抗体或其抗原结合片段。一般来说，治疗有效量足以实现对受试者有意义的益处(例如治疗、调节、治愈、预防和/或改善基础疾病或病况)。在一些特定实施例中，可从源自体外或动物模型测试系统的剂量反应曲线推断待施用的适当剂量或量。
在一些实施例中，提供的组合物作为药物制剂提供。在一些实施例中，药物制剂是或包含单位剂量以用于根据与实现如支气管肺发育不良的慢性肺病症的发病率或风险降低相关的给药方案施用。
在一些实施例中，包含本文所述的抗Flt-1抗体或抗原结合片段的制剂以单剂量施用。在一些实施例中，包含本文所述的抗Flt-1抗体或抗原结合片段的制剂以规律间隔施用。如本文使用的，以“间隔”施用指示治疗有效量是周期性地施用(与一次性剂量不同)。间隔可通过标准的临床技术来确定。在一些实施例中，包含本文所述的抗Flt-1抗体或抗原结合片段的制剂每两个月、每月、每月两次、每三周、每两周、每周、每周两次、每周三次、每天、每天两次或每六小时一次施用。单一个体的施用间隔不需要是固定间隔，而是可随时间变化，这取决于个体的需要。
如本文所使用，术语“每两个月”意指每两个月施用一次(即，每两个月一次)；术语“每月”意指每月施用一次；术语“每三周”意指每三周施用一次(即，每三周一次)；术语“每两周”意指每两周施用一次(即，每两周一次)；术语“每周”意指每周施用一次；而“每天”意指每天施用一次。
在一些实施例中，包含本文所述的抗Flt-1抗体或抗原结合片段的制剂无限期地以规律间隔施用。在一些实施例中，包含本文所述的抗Flt-1抗体或抗原结合片段的制剂以规律间隔施用限定时间段。
在一些实施例中，包含本文所述的抗Flt-1抗体或抗原结合片段的制剂在产前施用。在一些实施例中，包含本文所述的抗Flt-1抗体或抗原结合片段的制剂在产后施用。
在一些实施例中，包含本文所述的抗Flt-1抗体或抗原结合片段的制剂以约0.5mg/kg体重、约1.0mg/kg体重、约10mg/kg体重、约20mg/kg体重、约30mg/kg体重、约40mg/kg体重、约50mg/kg体重、约60mg/kg体重、约70mg/kg体重、约80mg/kg体重、约90mg/kg体重或约100mg/kg体重的剂量施用。
在一些实施例中，包含本文所述的抗Flt-1抗体或抗原结合片段的制剂以在约0.5mg/kg体重至约80mg/kg体重范围内的剂量施用。例如，在一些实施例中，包含抗Flt-1抗体或抗原结合片段的制剂以在约1mg/kg体重至约10mg/kg体重范围内或50mg/kg体重的剂量施用。
在一些实施例中，包含本文所述的抗Flt-1抗体或抗原结合片段的制剂以约35mg、约70mg、约700mg或约1400mg的单位剂量施用于成人。在一些实施例中，包含本文所述的抗Flt-1抗体或抗原结合片段的制剂以在约35mg至约1400mg，例如约70mg至约700mg范围内的剂量施用。
在一些实施例中，包含本文所述的抗Flt-1抗体或抗原结合片段的制剂以约2mg、约4mg、约40mg或约80mg的单位剂量施用于婴儿。在一些实施例中，包含本文所述的抗Flt-1抗体或抗原结合片段的制剂以在约2mg至约80mg，例如约4mg至约40mg范围内的剂量施用。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段的施用会降低至少一种BPD征兆或症状的强度、严重性或频率，或延迟其发作。在一些实施例中，抗Flt-1抗体或其抗原结合片段的施用会降低至少一种BPD征兆或症状的强度、严重性或频率，或延迟其发作，所述BPD征兆或症状选自由以下组成的组：肺炎症、肺疤痕、肺生长受损、早期肺损伤、长期呼吸功能不全、肺部感染、运动不耐受和不良神经结果。
在一些实施例中，抗Flt-1抗体的施用降低血压。在一些实施例中，抗Flt-1抗体的施用剂量依赖性地增加心输出量、心搏量和/或LV舒张面积。
组合疗法
在一些实施例中，抗Flt-1抗体或抗原结合片段与目前用于治疗肌营养不良的一种或多种已知治疗剂(例如皮质类固醇)组合施用。在一些实施例中，已知的治疗剂根据其标准或批准的给药方案和/或时间表施用。在一些实施例中，已知的治疗剂根据与其标准或批准的给药方案和/或时间表相比改变的方案施用。在一些实施例中，此类改变的方案与标准或批准的给药方案的不同之处在于一个或多个单位剂量的量经改变(例如减小或增加)，和/或给药频率经改变(例如，单位剂量之间的一个或多个间隔扩大，导致较低的频率，或间隔减小，导致较高的频率)。
实例
实例1.施用抗Flt-1单克隆抗体来改善心脏功能
抗Flt-1抗体增加血管内皮生长因子(VEGF)水平并且促进血管生成，继而减弱炎症、坏死和纤维化的破坏性循环。为了确定抗Flt-1抗体对心脏功能的影响，本文所述的研究评估在向啮齿动物模型施用后，抗Flt-1抗体的施用是否对心脏功具有有益影响。
在本发明研究中，评估施用抗Flt-1单克隆抗体(mAb)对心输出量和总体心脏功能的影响。本发明研究为具有8周恢复期的探索性4周大鼠毒理学研究。以0、3、10和60mg/kg(每组6只大鼠)对48只健康雄性大鼠静脉内注射抗Flt-1mAb，每周两次，共施用九次。研究分为2组：1)在第0天、第3天、第7天、第10天、第14天、第17天、第21天、第24和第28天在24只大鼠中进行24小时连续遥测采集；以及2)在第15天和第29天在另外24只大鼠中采集二维M型超声心动图。每组有三只大鼠在第30天终止用于心脏采集，并允许每组3只大鼠恢复，伴随每2周进行一次遥测和超声心动学评估。
结果显示，当与对照组相比时，抗Flt-1mAb(3、10和60mg/kg/剂量)的施用分别剂量依赖性地增加心脏重量相对于体重的比率(HW/BW)(5％、20％和35％)。N端心房利钠肽前体(NT-proANP)水平也剂量依赖性地增加，并且在第3天时增加更为显著。组织病理学评估显示，在任何剂量下均未在心脏中发现宏观或微观相关性。抗Flt-1mAb的施用降低了血压(14mmHg)和左心室(LV)-dP/dt
这种基于VEGF的疗法诱导心脏肥大，伴随偏心肥大和轻度体积超负荷。停药后，心脏功能可保持/改善长达42天。
等效物和范围
本领域的技术人员将认识到或能够使用不超过常规实验来确定本文所描述的本发明的具体实施例的许多等效物。本发明的范围并不意图限于以上描述，而是如以下所附权利要求书中所阐述。
序列表
<110> 夏尔人类遗传性治疗公司(SHIRE HUMAN GENETIC THERAPIES, INC.)
<120> 治疗支气管肺发育不良的抗FLT-1抗体
<130> SHR-2004USP1
<150> 62/688,541
<151> 2018-06-22
<160> 3
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡肽
<400> 1
Gly Ala Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ala Pro
20
<210> 2
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡肽
<400> 2
Gly Ala Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ala Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Gly Ala Pro
35
<210> 3
<211> 57
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡肽
<400> 3
Gly Ala Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ala Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Gly Ala Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala
35 40 45
Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Pro
50 55
机译： 抗FLT-1抗体治疗支气管肺发育不良
机译： 抗FLT-1抗体治疗支气管肺发育不良
机译： 抗FLT-1抗体治疗支气管肺发育不良。
