一种优化的食蟹猴单个核细胞分离方法

摘要

本发明提供了一种优化的食蟹猴单个核细胞分离方法，具体包括以下步骤：获取猴血后，添加羟乙基淀粉，混匀沉降20min；将ficoll溶液使用DPBS溶液进行稀释；取一只50ml离心管，添加20ml稀释过后的ficoll溶液；在ficoll溶液中缓慢添加20ml沉降过的猴血，且注意保持界面的清晰；温度20℃，600g离心30min；静置后，弃去上层血清层，收取第三层的白细胞层，转移到另一只离心管里；添加DPBS溶液至50ml，450g离心10min洗去杂质；重悬细胞沉淀，并计数。本发明建立了一种较为简单的从食蟹猴外周血中分离PBMC的技术体系，可以降低实验成本。

说明书

技术领域

本发明属于核细胞分离技术领域，具体涉及一种优化的食蟹猴单个核细胞分离方法。

背景技术

单个核细胞(PBMC)是外周血中具有单个细胞核的白细胞，其中包括淋巴细胞和单核细胞。猴来源的PBMC是许多药物测试工作中重要的原材料，但是猴子的白细胞密度与人源的白细胞密度并不完全一致，因此，直接使用1.077g/ml的ficoll分离效果并不十分理想，且现有的分离试剂盒价格较贵。

发明内容

本发明的目的在于提供一种优化的食蟹猴单个核细胞分离方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种优化的食蟹猴单个核细胞分离方法，具体包括以下步骤：

步骤1、获取猴血后，添加羟乙基淀粉，混匀沉降20min；

步骤2、将1.077g/ml的ficoll溶液使用DPBS溶液进行稀释；

步骤3、取一只50ml离心管，添加20ml稀释过后的ficoll溶液；

步骤4、在ficoll溶液中缓慢添加20ml沉降过的猴血，且添加过程中注意保持界面的清晰；

步骤5、温度20℃，600g离心30min，升速设置为5min，降速设置为10min；

步骤6、静置后，弃去上层血清层，收取第三层的白细胞层，转移到另一只离心管里；

步骤7、添加DPBS溶液至50ml，450g离心10min洗去杂质；

步骤8、重悬细胞沉淀，并计数。

优选的，所述步骤1中的羟乙基淀粉为1/4体积的6％羟乙基淀粉。

优选的，所述步骤2中的ficoll溶液和DPBS溶液的体积比为4:1。

优选的，所述步骤1-步骤8须在II级生物安全柜内操作，并严格遵守无菌操作。

本发明的技术效果和优点：本发明建立了一种较为简单的从食蟹猴外周血中分离PBMC的技术体系，可以获得高细胞活性的PBMC并降低实验成本。

具体实施方式

实施例1

一种优化的食蟹猴单个核细胞分离方法，具体包括以下步骤：

步骤1、获取猴血后，添加羟乙基淀粉，混匀沉降20min；

步骤2、将1.077g/ml的ficoll溶液使用DPBS溶液进行稀释；

步骤3、取一只50ml离心管，添加20ml稀释过后的ficoll溶液；

步骤4、在ficoll溶液中缓慢添加20ml沉降过的猴血，且添加过程中注意保持界面的清晰；

步骤5、温度20℃，600g离心30min，升速设置为5min，降速设置为10min；

步骤6、静置后，弃去上层血清层，收取第三层的白细胞层，转移到另一只离心管里；

步骤7、添加DPBS溶液至50ml，450g离心10min洗去杂质；

步骤8、重悬细胞沉淀，并计数。

实施例2

一种优化的食蟹猴单个核细胞分离方法，具体包括以下步骤：

步骤1、获取猴血后，添加1/4体积的6％羟乙基淀粉，混匀沉降20min；

步骤2、将1.077g/ml的ficoll溶液使用DPBS溶液进行稀释，ficoll溶液和DPBS溶液的体积比为4:1；

步骤3、取一只50ml离心管，添加20ml稀释过后的ficoll溶液；

步骤4、在ficoll溶液中缓慢添加20ml沉降过的猴血，且添加过程中注意保持界面的清晰；

步骤5、温度20℃，600g离心30min，升速设置为5min，降速设置为10min；

步骤6、静置后，弃去上层血清层，收取第三层的白细胞层，转移到另一只离心管里；

步骤7、添加DPBS溶液至50ml，450g离心10min洗去杂质；

步骤8、重悬细胞沉淀，并计数。

优选的，所述步骤1-步骤8须在II级生物安全柜内操作，并严格遵守无菌操作。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。