一种荸荠茎尖组织培养方法

摘要

一种荸荠茎尖组织培养方法，包括以下步骤：S1配制培养基母液，该培养基母液选用大量元素、微量元素、螯合铁、有机质、蔗糖、固化物、水配制而成；S2配制植物生长调节剂，该植物生长调节剂选用细胞分裂素、生长素、植物延缓剂配制而成；S3配制培养基，该培养基选用50℃～60℃水、卡拉胶、母液、糖配制而成；S4荸荠培养芽的选择与消毒；S5荸荠培养芽的培养、选择、炼苗，获得荸荠茎尖。该培养方法可以很好的保持了荸荠的品种特性，发挥了新品种的优良优势。

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种茎尖组织培养方法，具体涉及一种荸荠茎尖组织培养方法。

【背景技术】

荸荠(学名：Heleocharis dulcis(Burm.f.)Trin.)，又名马蹄、水栗、乌芋、菩荠等，属单子叶莎草科，为多年生宿根性草本植物。荸荠是广西名特优农产品之一，也是我国传统的重要出口创汇产品之一。近十年来我国荸荠产业迅速发展，但长期以来农民一自留自繁的球茎繁殖的种植方式，导致品种退化严重，造成病虫害危害严重、防治成本大幅度增加、产量显著下降、大果率降低，商品性差，单位效益下降显著。这几年加快了荸荠品种选育工作，且在产量及商品性都得到较好提高，为了保持新品种的优良性状，学者研究发展了荸荠组织培养技术，保持其品种特性，发挥新品种优良优势。

【发明内容】

为了解决上述问题，本发明提供一种荸荠茎尖组织培养方法，该培养方法可以很好的保持了荸荠的品种特性，发挥了新品种的优良优势。

本发明是通过以下技术方案实现的，提供一种荸荠茎尖组织培养方法，包括以下步骤：

S1配制培养基母液，该培养基母液选用大量元素、微量元素、螯合铁、有机质、蔗糖、固化物、水配制而成；

S2配制植物生长调节剂，该植物生长调节剂选用细胞分裂素、生长素、植物延缓剂配制而成；

S3配制培养基，该培养基选用50℃～60℃水、卡拉胶、培养基母液、糖按167:1:28:4配制而成；

S4荸荠培养芽的选择与消毒；

S5荸荠培养芽的培养、选择、炼苗，获得荸荠茎尖。

特别的，所述S1中的培养基母液pH值为5.8～6.2，所述大量元素选用NH

特别的，所述S2中细胞分裂素为浓度为1～3mol的6苄基腺嘌呤和浓度为0.5～2.5mol的6-糠基氨基嘌呤混合而成，所述生长素为浓度为 0.01～1.0mol的吲哚乙酸和浓度为0.01～1.0mol的萘乙酸混合而成，所述植物延缓剂为浓度为0.1～0.35mol的多效唑的浓度。

特别的，所述S4具体采用以下方法实现：

选取无病虫危害球茎，用清水漂洗干净，晾干表面水，用70％酒精擦拭表面，切取完整的顶芽和侧芽，置于无菌瓶内，然后在超净台上，用70％酒精浸泡2min，无菌水冲洗2次后，再用0.1％升汞浸泡10min～15min，再用无菌水冲洗3～5次。

特别的，所述S5具体采用以下方法实现：

S51将S4获得的荸荠培养芽放于在无菌虑纸或铝片上，切取长度 0.1cm～0.2cm含1～2个节的芽尖放入混合液中，所述混合液为培养基母液、植物生长调节剂、培养基配置完成后混合，之后用0.1M盐酸或0.1M 氢氧化钠溶解，调pH值为5.8～6.2，然后加蒸馏水定获得；

S52将S51获得的荸荠培养芽在26℃±2℃条件下培养15d后，选择颜色深绿、粗壮的材料转接到MS+6-BA 1mg～2.5mg/L+NAA 0.01mg～0.1mg/L 培养基上进行初代培养，诱导丛生芽，同时取材送病毒检测，淘汰带毒株系，获得丛生芽；

S53将无污染、叶状茎5根以上的丛生芽分切成带有2～3个芽点的小块放入备好的MS继代培养基上培养，一个继代周期25d～30d，在培养过程中，控制增殖系数在3.0～5.0范围，继代次数10周期；

S54在继代材料中选择无污染、叶状茎5跟以上的材料，培养基添加不同浓度的加PP333，每处理50瓶，接种于袋装MS+PP3330.1mg/L～0.35 mg/L+NAA 0.5mg/L～1mg/L生根培养基上，然后放置在温度(28℃±2℃) 的光照培养室内培养，25天后统计苗高、根数、根长，计每丛平均数。

本发明提供一种荸荠茎尖组织培养方法，经过培养基配置、荸荠选择消毒、接种、初代培养、继代培养、生根材料选择与培养、炼苗后，获得荸荠茎尖组织，该培养方法获得的荸荠茎尖组织在产量及商品性上得到了提高，保持了荸荠的优良性状。

【具体实施方式】

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，对本发明进一步详细说明。

本发明提供一种荸荠茎尖组织培养方法，包括以下步骤：

S1配制培养基母液，该培养基母液选用大量元素、微量元素、螯合铁、有机质、蔗糖、固化物、水配制而成，所述大量元素选用NH

S2配制植物生长调节剂，该植物生长调节剂选用细胞分裂素、生长素、植物延缓剂配制而成，所述S2中细胞分裂素为浓度为1～3mol的6苄基腺嘌呤和浓度为0.5～2.5mol的6-糠基氨基嘌呤混合而成，所述生长素为浓度为0.01～1.0mol的吲哚乙酸和浓度为0.01～1.0mol的萘乙酸混合而成，所述植物延缓剂为浓度为0.1～0.35mol的多效唑的浓度。

S3配制培养基，该培养基选用50℃～60℃水、卡拉胶、培养基母液、糖按167:1:28:4配制而成。

S4荸荠培养芽的选择与消毒具体采用以下方法实现：

选取无病虫危害球茎，用清水漂洗干净，晾干表面水，用70％酒精擦拭表面，切取完整的顶芽和侧芽，置于无菌瓶内，然后在超净台上，用70％酒精浸泡2min，无菌水冲洗2次后，再用0.1％升汞浸泡10min～15min，再用无菌水冲洗3～5次。

S5荸荠培养芽的培养、选择、炼苗，获得荸荠茎尖，具体采用以下方法实现：

S51将S4获得的荸荠培养芽放于在无菌虑纸或铝片上，切取长度 0.1cm～0.2cm含1～2个节的芽尖放入混合液中，所述混合液为培养基母液、植物生长调节剂、培养基配置完成后混合，之后用0.1M盐酸或0.1M 氢氧化钠溶解，调pH值为5.8～6.2，然后加蒸馏水定容而得；

S52将S51获得的荸荠培养芽在26℃±2℃条件下培养15d后，选择颜色深绿、粗壮的材料转接到MS+6-BA 1mg～2.5mg/L+NAA 0.01mg～0.1mg/L 培养基上进行初代培养，诱导丛生芽，同时取材送病毒检测，淘汰带毒株系，获得丛生芽；

S53将无污染、叶状茎5根以上的丛生芽分切成带有2～3个芽点的小块放入备好的MS继代培养基上培养，一个继代周期25d～30d，在培养过程中，控制增殖系数在3.0～5.0范围，继代次数10周期；

S54在继代材料中选择无污染、叶状茎5跟以上的材料，培养基添加不同浓度的加PP333，每处理50瓶，接种于袋装MS+PP3330.1mg/L～0.35 mg/L+NAA 0.5mg/L～1mg/L生根培养基上，然后放置在温度(28℃±2℃) 的光照培养室内培养，25天后统计苗高、根数、根长，计每丛平均数。

为了验证本发明提供方法的可行性，以下通过实验进行对比，获得表表2，表1为15％农用多效唑不同浓度对荸荠组培生根结果，表2为15％农用多效唑不同浓度对荸荠组培生根苗移栽成活统计结果。

表1

由表1可知，MS+NAA0.6mg/l+PP3330.3 mg/l的配方最好，获得的苗正常、根系粗短、叶状茎粗。

表2