新疗法

摘要

本发明提供了一种用于预防患者活动性溃疡性结肠炎复发的寡核苷酸，其中，所述寡核苷酸包含以下序列：5'‑GGAACAGTTCGTCCATGGC‑3'(SEQ ID NO:2)。

说明书

技术领域

本发明涉及用于预防活动性溃疡性结肠炎(UC)复发的新疗法，涉及给药寡核苷酸，特别是可比托莫德(cobitolimod)。

背景技术

溃疡性结肠炎(UC)是一种以直肠粘膜和结肠粘膜的慢性炎症为特征的疾病，在第一期影响最内层(innermost lining)。该病是复发性的，其活动期和非活动期在病理、症状和治疗上均不相同。溃疡性结肠炎的根本原因尚不清楚，也不知道什么会触发该疾病在非活动形式和活动形式之间复发(Irvine,E.J.(2008)Inflamm Bowel Dis 14(4):554-565)。据报道，2012年UC的年度最高发病率在欧洲为24.3例/100,000人/年，在亚洲和中东为6.3例/100,000人/年，在北美为19.2例/100,000人/年，患病率在欧洲为505例/100,000人，在北美为249例/100,000人(Molodecky NA,Soon IS,Rabi DM等人.Gastroenterology.2012:142(1):46-54)。

活动性溃疡性结肠炎的症状包括进行性带血稀便和排便频率增加。活动性粘膜炎症通过内窥镜检查来诊断。大便中含有脓液、粘液和血液，常伴有腹部绞痛和排泄急迫(里急后重(tenesmi))。腹泻可能隐匿发病，或较罕见的是非常突然发作。在严重情况下，症状可能包括发烧和全身不适。在严重阶段，肠壁深层炎症可能会发展为腹部压痛、心动过速、发烧以及肠穿孔风险。此外，溃疡性结肠炎患者可能遭受额外的肠道表现，例如关节痛和关节炎、结节性红斑、坏疽性脓皮病和眼睛发炎。在缓解或非活动性溃疡性结肠炎的情况下，患者通常没有肠症状。

溃疡性结肠炎患者粘膜发炎和受损程度不同。仅影响直肠的溃疡性结肠炎被称为溃疡性直肠炎。当结肠左侧直至脾曲处出现炎性变化时，这种情况称为远端结肠炎。在广泛型溃疡性结肠炎中，横结肠也受到影响，而全结肠炎是指累及整个结肠的疾病。

活动性粘膜炎症通过内窥镜检查来诊断，特征是血管纹路消失(loss ofvascular patterning)、水肿、瘀斑、自发性出血和纤维蛋白渗出物。内窥镜检查图像是从直肠开始并以不同程度近侧延伸到结肠中的连续发炎的图像。在内窥镜检查下获得并经过组织学检查的活组织检查帮助诊断病情。包括艰难梭菌(clostridium difficile)、弯杆菌(campylobacter)、沙门氏菌(Salmonella)和志贺氏菌(Shigella)在内的传染病因可能类似于溃疡性结肠炎，可以通过大便培养来排除。

溃疡性结肠炎的医疗管理分为活动性疾病治疗和维持缓解。

尽管治疗活动期疾病很重要，但预防或防范进一步活动期的再发或复发对于疾病的长期治疗至关重要。维持治疗是长时间地使用药物。可以使用此类维持治疗来例如减少活动期频率，即，使患者处于疾病的非活动期。

预防活动性溃疡性结肠炎再发的实例包括维持低的疾病活动指数、正常体重或低的组织病理学评分(例如低于3)，以及通过维持缓解状态来避免再发成活动性溃疡性结肠炎状态。

有许多治疗方法可以诱导活动性溃疡性结肠炎的缓解。治疗活动性溃疡性结肠炎患者旨在减少炎症并促进结肠愈合和粘膜恢复。对于中度病例，可以用常规药物控制疾病，所述常规药物包括氨基水杨酸盐，例如柳氮磺胺吡啶、5-氨基水杨酸(5-ASA)(Sutherland,L.,F.Martin,S.Greer,M.Robinson,N.Greenberger,F.Saibil,T.Martin,J.Sparr,E.Prokipchuk和L.Borgn(1987)Gastroenterology 92:1894-1898)和糖皮质激素(GCS)(Domenech,E.,M.Manosa and E.Cabre(2014).Dig Dis 32(4):320-327)。通常，采用直肠制剂会使限于直肠和直肠乙状结肠区域的远端疾病得以缓解。当程度更接近和/或症状更严重时，还需要口服GCS。

对于GCS难治或不耐受GCS或不愿使用GCS且遭受溃疡性结肠炎重度或中度重度发作的患者，通常使用免疫调节剂，例如环孢霉素、6-巯基嘌呤[6-MP]、咪唑硫嘌呤[AZA]、甲氨蝶呤和他克莫司。这些免疫调节剂也可用于氨基水杨酸盐难治或不耐受氨基水杨酸盐或不愿使用氨基水杨酸盐且遭受溃疡性结肠炎重度或中度重度发作的患者。

溃疡性结肠炎的其他治疗选项包括生物药剂(Fausel,R.和A.Afzali(2015)TherClin Risk Manag 11:63-73)。目前批准用于治疗中度至重度溃疡性结肠炎的三种TNF-α抑制剂是英夫利昔单抗(infliximab)、阿达木单抗(adalimumab)和戈利木单抗(golimumab)。所有这三种都带有与其用途相关的潜在风险，应避免用于某些患者，例如那些患有不受控制感染、晚期心力衰竭、神经系统疾病的患者，以及有恶性肿瘤病史的患者，因为有加速肿瘤生长的潜在风险。TNF-α抑制剂治疗的其他潜在不良反应包括中性粒细胞减少、肝中毒、血清病、白细胞碎裂性血管炎、皮疹(包括牛皮癣样皮疹)、诱导自体免疫、以及注射或输注部位反应(包括过敏反应、抽搐和低血压)。溃疡性结肠炎的其他治疗选项包括抗整合素抗体(例如维多珠单抗(vedolizumab))和JAK抑制剂(例如托法替尼(tofacitinib))。

不能预测已知有效诱导活动性溃疡性结肠炎缓解的治疗剂对维持缓解是否也是有益的或适用的。

实际上，推荐用于治疗溃疡性结肠炎活动期的药物中几乎没有适合于长期维持疗法的。因此，一般不推荐将GCS用于维持疗法，因为存在与长期使用GCS相关的明显的副作用，并可能产生类固醇依赖性疾病。文献中已明确反对使用全身性GCS进行维持治疗(Prantera,C.and S.Marconi(2013)Therap Adv Gastroenterol 6(2):137-156)。带中度至重度症状的患者可能会从免疫抑制剂(例如环孢霉素、6-巯基嘌呤[6-MP]、咪唑硫嘌呤[AZA]，甲氨蝶呤[MTX]和他克莫司)中获益。但是，这些药剂的使用作为诱导治疗因起效缓慢(3到6个月)且作为维持疗法因不良事件(AE)(包括骨髓抑制、感染、肝毒性、胰腺炎和恶性肿瘤)而受到限制(Kombluth A,Sachar DB.Am J Gastroenterol.,2010；105(3):501-23；quiz 524和Beaugerie L,Brousse N,Bouvier AM等人.Lancet.2009；374(9701):1617-25)。至于生物药剂，发现大部分患者(>50％)会随着时间推移而对生物TNF-α抑制剂失去反应(Fausel,R.和A.Afzali(2015)Ther Clin Risk Manag 11:63-73)。结合其严重的副作用，这意味着此类生物药剂因此不能代表理想的长期维持方案。

尽管有上述限制，当前用作溃疡性结肠炎维持疗法的活性剂包括氨基水杨酸盐、6-MP、AZA、TNF-α抑制剂[例如英夫利昔单抗、阿达木单抗和戈利木单抗]、维多珠单抗和托法替尼。

在缺乏适当的长期维持疗法的情况下，在大多数情况下，缓解期患者旧病复发不可避免。溃疡性结肠炎可能会变成慢性病，而用现有的治疗方法基本上难以治疗。在这种情况下，仅剩做法就是结肠切除术。全结肠切除术是重度溃疡性结肠炎的可能的治疗选择，但它是改变生活的手术，伴随着并发症风险，例如储袋失败(pouch failure)、盆腔脓毒症、女性不育症和夜间大便失禁(nocturnal faecal soiling))。这些并发症最终可能导致约0.5％的病例死亡(Ferrante M等人,Inflamm Bowel Dis 2008；14:20-8)。因此，期望找到长期的维持疗法以防止溃疡性结肠炎再发。

可比托莫德(Kappaproct/DIMS0150)是一种基于修饰的单链DNA的合成寡核苷酸，长度为19个碱基，具有序列5'-G*G*A*ACAGTTCGTCCAT*G*G*C-3'(SEQ ID NO:1)，其中CG二核苷酸是未甲基化的，并且其中星号(*)表示序列中的硫代磷酸酯键，其通过靶向免疫细胞中存在的Toll样受体9(TLR9)充当免疫调节剂。这些免疫细胞(即B细胞和浆细胞样树突状细胞(pDC))大量存在于粘膜表面(例如结肠和鼻粘膜)上。免疫系统是溃疡性结肠炎中所涉及的改变的关键媒介。溃疡性结肠炎患者的结肠和直肠的粘膜含有导致组织受损的活性免疫细胞。可在炎症区域局部给药可比托莫德，这使药物与大量预期的靶细胞紧密接触，确保药物将到达富TLR9表达细胞的区域。通过可比托莫德对这些细胞的激活诱导了多种细胞因子，例如I型干扰素和白介素10(IL-10)，它们被认为是可比托莫德的临床疗效的重要因素。

已经使用可比托莫德进行了一系列非临床安全性研究以及四项临床试验以评估可比托莫德在活动性溃疡性结肠炎患者中诱导缓解的能力。总体而言，有关可比托莫德的数据支持了正面的对溃疡性结肠炎患者的获益风险评估。可比托莫德安全且耐受良好，并且已被证明对活动性溃疡性结肠炎患者在临床反应和诱导缓解方面有效，并且在严重的积极治疗顽固性溃疡性结肠炎或中度至重度积极治疗顽固性溃疡性结肠炎患者中，对症状缓解和内窥镜检查缓解也有效。

鉴于缺乏用于预防活动性溃疡性结肠炎复发的安全有效的维持疗法以及与已知疗法相关的问题，需要开发具有更好的功效、安全性和耐受性的新的维持疗法。

发明内容

现已令人惊讶地发现，给药可比托莫德可用于预防活动性溃疡性结肠炎的复发或再发以及与其相关的使人衰弱的症状，而没有已知的溃疡性结肠炎疗法的副作用。

因此，本发明提供了一种用于预防患者活动性溃疡性结肠炎复发的寡核苷酸，其中该寡核苷酸包含序列5'-GGAACAGTTCGTCCATGGC-3'(SEQ ID NO:2)。

本发明还提供了一种用于预防如本文所定义的患者中如本文所定义的活动性溃疡性结肠炎复发的药物组合物，该药物组合物包含如本文所定义的寡核苷酸以及一种或多种药学上可接受的载体。

本发明还提供了一种预防如本文所定义的患者中如本文所定义的活动性溃疡性结肠炎复发的方法，其包括将如本文所定义的寡核苷酸或如本文所定义的组合物给药至所述患者。

本发明还提供了如本文所定义的寡核苷酸在制备用于预防如本文所定义的患者中活动性溃疡性结肠炎复发的药物中的用途。

在优选的实施方式中，寡核苷酸具有以下序列5'-G*G*A*ACAGTTCGTCCAT*G*G*C-3'(SEQ ID NO:1)，其中CG二核苷酸是未甲基化的。因此，在优选的实施方式中，寡核苷酸是可比托莫德。硫代磷酸酯键在序列中以星号(*)表示。

附图说明

图1显示了在第0周和第4周给药30mg可比托莫德后第4周症状持续缓解的患者的百分比，以及在第8周和第12周该组患者该百分比的变化情况。

图2显示了实施例2中患者p12的治疗过程，显示了相对于数月时间的结肠炎活性指数[CAI]。线上的数字表示在特定时间点的特定CAI评分。值在上虚线上方的CAI评分表示该患者的疾病严重恶化，而值在下虚线下方的的CAI评表示该患者处于临床缓解。没有数字的线显示了每天给予一定量的去氧皮质酮(Decortin)[mg]的类固醇治疗过程。灰色箭头表示进行了给药随访(2010年3月26日，2010年4月28日，2010年5月26日，2010年8月25日，2010年9月22日，2010年10月19日)，黑色箭头表示可以确定CAI评分的随访(2010年4月1日，2010年5月5日，2010年5月19日，2010年6月23日，2010年7月12日，2010年9月1日，2010年10月25日，2010年11月24日，2011年3月9日)，右侧灰色箭头表示2011年3月24日治疗医师最后一次联系所有患者跟进治疗时的状态。

图3是实施例3中每组动物的代表性结肠的照片。

图4显示了实施例3中每个治疗组的结肠长度(以cm为单位)，并对于每个组以平均值±SD表示。显著性[*：p<0.05，***：p<0.005和****：p<0.001]是通过单因素方差分析与Tukey多重比较检验确定的。

图5显示了实施例3中每个治疗组的结肠重量/长度比，并对于每个组以平均值±SD表示。显著性[*：p<0.05，***：p<0.005和****：p<0.001]是通过单因素方差分析与Tukey多重比较检验确定的。

具体实施方式

本文引用的所有专利、专利申请和出版物均通过引用全文并入本文。

如本文所用，术语“患者”通常是指人类患者。但是，患者可以是其他脊椎动物，例如哺乳动物。术语“对象”和“患者”在本文可互换使用。

如本文所用的，词语“治疗(treatment/treating)”应理解为包含疾病或病症的症状的加重/恶化的治疗和/或改善和/或防止和/或减轻，以及对引起该疾病或病症的原因的治疗，并且可以包括以改善或稳定对象病症的方式逆转、减轻或阻止病症的症状、临床体征和潜在病理。

对疾病或病症(的复发)的“预防(prevention/preventing)”的提及包括对疾病或病症的防范和/或抑制。术语“预防”是本领域公认的，且当与病症(诸如溃疡性结肠炎或其相关症状)关联地使用时是本领域所熟知的，并且包括给药药物，(例如寡核苷酸)，和/或相对于未接受药物和/或组合物的对象，减少对象医学病症的症状的频率或延迟所述症状发作的组合物。

溃疡性结肠炎是本领域技术人员所熟知的。本领域的技术人员将熟悉该疾病的活动期和缓解期的概念。溃疡性结肠炎表现为以典型症状为特征的疾病活动期以及通常在治疗疾病的活动期之后的基本上没有症状的缓解期。指示溃疡性结肠炎活动期的典型症状包括大便带血和大便频率增加。活动期溃疡性结肠炎可以使用多种不同的评分系统进行诊断，如下所述，包括Mayo评分系统和改良Mayo评分系统。

在本发明的上下文中，对预防活动性溃疡性结肠炎的复发的提及用于指预防疾病的活动期的复发，即维持患者的缓解并提供维持疗法。

因此，本发明涉及如本文所定义的寡核苷酸在预防活动期溃疡性结肠炎复发或再发中的用途(即提供维持疗法)。

因此，预防活动性溃疡性结肠炎复发或再发包括，例如，在治疗群体中，相对于未用寡核苷酸(例如根据统计上和/或临床上显著的量)治疗的对照群体，延迟溃疡性结肠炎的一个或多个活动期的发作(延长发作之间的时间)或减少次数(发病率)、频率、严重性或持续时间。因此，患者通常保持临床缓解状态。通常还维持患者的粘膜愈合(通常通过内窥镜外观评估)。因此，优选维持/保持患者临床缓解和粘膜愈合。

尽可能长时间预防活动性溃疡性结肠炎复发或再发以确保患者的最佳生活质量是具有临床益处的。缓解可以被定义为至少一个月缺乏本文中讨论的症状或症状最小化。鉴于溃疡性结肠炎是不能治愈的慢性病症，通常预防复发或再发是指对复发/再发进行较长时间预防，通常至少6个月，优选至少1年或2年，例如至少5年或10年。理想地，无限期地防止复发/再发。

缓解可以定义为临床缓解、症状缓解、内窥镜缓解和/或组织病理学缓解。缓解也可以是患者报告的缓解，通常对应于症状缓解。

临床缓解可以如本文参考临床活动性(Rachmilewitz)指数(CAI)、Mayo评分或改良Mayo评分定义。症状缓解(或患者报告的缓解)可定义为大便中无血，每周大便频率少于35次。在内窥镜检查中观察到粘膜愈合的情况即出现内窥镜缓解(例如Mayo评分低于2)。组织病理学缓解可定义为Geboes评分小于2或Nancy指数为0级或1级。深层缓解是观察到内窥镜缓解和组织病理学缓解的情况。

在一方面，根据本发明使用的寡核苷酸用于维持患者处于临床缓解中。在另一方面，根据本发明使用的寡核苷酸用于维持患者处于患者报告的缓解中。在另一方面，根据本发明使用的寡核苷酸用于维持患者处于内窥镜缓解(即维持粘膜愈合)中。在另一方面，根据本发明使用的寡核苷酸用于维持患者的组织病理学缓解。

优选地，根据本发明使用的寡核苷酸用于维持患者处于(a)临床缓解和症状缓解中，或(b)临床缓解和内窥镜缓解中，或(c)临床缓解和组织病理学缓解中，或(d)症状缓解和内窥镜缓解中，或(e)症状缓解和组织病理学缓解中，或(f)内窥镜缓解和组织病理学缓解中。更优选地，根据本发明使用的寡核苷酸用于维持患者处于(a)临床缓解、症状缓解和内窥镜缓解中，或(b)临床缓解、症状缓解和组织病理学缓解中，或(c)临床缓解、内窥镜缓解和组织病理学缓解中，或(d)症状缓解，内窥镜缓解和组织病理学缓解中。最优选地，根据本发明使用的寡核苷酸用于维持患者的临床缓解、症状缓解、内窥镜缓解和组织病理学缓解中。

根据本发明使用的寡核苷酸可用于维持患者处于无类固醇缓解中。在这种情况下，患者无需伴随给药类固醇即可保持缓解。

对“复发”或“再发”的提及表示患者先前已患有活动性溃疡性结肠炎。当患者经历缓解或恢复期后出现一种或多种指示活动性溃疡性结肠炎的症状时，则该患者“复发”或“再发”。通常，患者已经历了与本文所定义的活动性溃疡性结肠炎有关的一种或多种症状，并且通常已经历了治疗后的在活动期之间的基本上无症状的时间段(“缓解”或“恢复”)。寡核苷酸的给药通常将那些无症状的时间段尽可能长地延长，例如如上所述的特定时间段。

因此，本文所定义的寡核苷酸用于先前经历过活动性溃疡性结肠炎的患者。本文所定义的寡核苷酸用于预防患者活动性溃疡性结肠炎的复发。通常，患者已经被诊断为患有溃疡性结肠炎。通常，患者先前已经经历了本文所定义的溃疡性结肠炎的一个或多个活动期，并且用于本发明的寡核苷酸起到了防止任何持续时间的更多的这种活动期的作用。

通常，患者经历与轻度、中度或重度活动性溃疡性结肠炎有关的一种或多种症状。该寡核苷酸可以用于先前已经经历过轻度、中度或重度活动性溃疡性结肠炎的患者。寡核苷酸可用于预防患者轻度、中度或重度活动性溃疡性结肠炎的复发。例如，寡核苷酸可用于先前已经历过轻度活动性溃疡性结肠炎的患者。例如，寡核苷酸可用于先前已经历过中度活动性溃疡性结肠炎的患者。例如，寡核苷酸可用于先前已经历过重度活动性溃疡性结肠炎的患者。短语轻度、中度和重度可以如本文中参考所提到的任何疾病指数所描述。

溃疡性结肠炎患者通常表现出从缓解到重度活动性的一系列疾病严重程度。临床评估可用于将溃疡性结肠炎患者分为如D’Haens,Gastroenterology 2007；132:763-786(其全部内容通过引用并入本文)所定义的4个疾病活动性亚组：(1)缓解(排便<2或3次/天，粪便中无血和/或脓液，没有全身症状)；(2)轻度活动性疾病(排便3或4次/天，和/或少于每天的粪便见血和/或脓液，没有全身发烧或体重减轻的症状)；(3)中度活动性疾病(排便>4次/天，和/或每天有血和/或脓液)，全身症状最小；(4)重度活动性疾病(排便>6次/天，并且有毒性反应的证据，如发烧、心动过速、贫血或红细胞沉降速率ESR所证明)。本文所述的其他评分系统也可以用于对患者的疾病严重性进行分类。

通常，根据本发明治疗的患者未患有活动性溃疡性结肠炎。通常，根据本发明治疗的患者未患有由Mayo评分或改良Mayo评分、优选改良Mayo评分所确定的活动性溃疡性结肠炎。EMA在日期为2018年6月28日的“用于治疗溃疡性结肠炎的新药物开发指南”中指出，推荐改良Mayo评分。同样，FDA在2016年8月发布的“溃疡性结肠炎：临床试验终点-行业指南”草案中指出，推荐改良Mayo评分。

因此，本发明的寡核苷酸用于给药至如本文所述缓解的患者，即溃疡性结肠炎处于非活动状态的患者。

通常，溃疡性结肠炎缓解阶段的患者的改良Mayo评分≤2，其中直肠出血分项评分为0，大便频率分项评分为0或1，内窥镜分项评分为0或1。

可根据一种或多种标准疾病指数确定溃疡性结肠炎患者的反应或缓解的诱导。典型的疾病指数包括但不限于以下所述：(i)通过临床和生化疾病活动性确定的疾病活动性，(ii)通过内窥镜下疾病活动性确定的疾病活动性，(iii)通过临床和内窥镜下疾病综合活动性指数确定的疾病活动性，(iv)生活质量，(v)组织学疾病活动性。这些指数在D’Haens,Gastroenterology 2007；132:763-786(其全部内容通过引用并入本文)中进行了讨论。

基于由临床和生化疾病活动性确定的疾病活动性的指数包括：Truelove和Witts严重性指数；Powell-Tuck(St.Mark’s)指数；临床活动性(Rachmilewitz)指数(CAI)；活动性(Seo)指数；医师总体评估；Lichtiger(改良的Truelove和Witts严重性)指数；研究者全球评估；简单的临床结肠炎活动性指数；基于个体症状评分的改善；溃疡性结肠炎临床评分；和患者定义的缓解。这些指数在D'Haens(同上)中进行了讨论。

基于由内窥镜下疾病活动性确定的疾病活动性的指数包括：Truelove和Witts乙状结肠镜评估；Baron评分；Powell-Tuck乙状结肠镜评估；内窥镜检查(Rachmilewitz内窥镜检查)指数；乙状结肠镜指数；乙状结肠镜炎症等级评分；Mayo评分柔性直肠乙状结肠镜评估；Sutherland粘膜外观评估；和修改的Baron评估。这些指数在D'Haens(同上)中进行了讨论。

基于根据临床和内窥镜下疾病活动性指数确定的疾病活动性的指数包括：Mayo评分(Mayo临床评分/疾病活动性指数)；改良Mayo评分和Sutherland指数(疾病活动性指数/UC疾病活动性指数)。

Mayo评分和Sutherland指数在D'Haens(同上)中进行了讨论。

基于生活质量的指数包括：IBD患者关注度评分表；和炎症性肠病问卷(Inflammatory Bowel Disease Questionnaire，IBDQ)。这些指数在D'Haens(同上)中进行了讨论。

基于组织学疾病活动性的指数包括在D'Haens(同上)中讨论的那些，例如Geboes指数和Riley指数，以及其他指数，例如Nancy指数和Robarts指数。

评估溃疡性结肠炎患者的优选指数包括临床活动性(Rachmilewitz)指数、Mayo评分和改良的Mayo评分。

临床活动性(Rachmilewitz)指数是考虑7个变量的指数：排便次数、便血、研究人员对症状状态的整体评估、腹部疼痛或痉挛、结肠炎引起的发烧、肠外临床表现和实验室检查结果。这在D’Haens(同上)和Rachmilewitz D.,BMJ 1989；298:82-86(其全部内容通过引用并入本文)中进一步进行了讨论。确定临床活动性(Rachmilewitz)指数可为患者产生0到29分之间的评分(评分越高意味着疾病越严重)。

临床缓解可被视为临床活动性(Rachmilewitz)指数评分<4分。由临床活动性(Rachmilewitz)指数确定的反应意味着患者治疗后的得分比治疗前低。

Mayo评分是考虑以下4项的指数：大便频率、直肠出血、柔性直肠乙状结肠镜结果以及医师总体评估(Physician’s Global Assessment，PGA)。这在D’Haens(同上)和Schroeder KW等人,N Engl J Med 1987；317:1625-1629(其全部内容通过引用并入本文)中进一步进行了讨论。Mayo评分的确定产生0到12分之间的评分(评分越高是指疾病越严重)。除了所述四个具体项目之外，还对患者的功能评估进行了测量，这并不是指要包括在12-分指数计算中，而应在确定PGA分项评分时用作整体健康水平的量度。

下表列出了4项中每一项的Mayo评分。

根据Mayo评分的缓解(完全反应)可定义为下述完全消除：(1)大便频率(正常的大便频率)，(2)直肠出血(无直肠出血)，(3)患者功能评估得分(通常良好)，(4)内窥镜检查结果(正常)，并且PGA评分为0。由Mayo评分确定的部分反应通常需要PGA评分的改善(与基线相比至少降低1分)，和至少一项其他临床评估(大便频率、直肠出血、患者的功能评估、内窥镜检查结果)的改善，并且在任何其他临床评估中无恶化。

可替代地，临床缓解可被定义为Mayo评分为0，临床改善(反应)可被定义为Mayo评分从基线降低了≥3分。

可替代地，临床缓解可被定义为Mayo评分为0，临床改善(反应)可被定义为Mayo评分从基线降低了≥3分(或者，如果基线Mayo评分≤3分，则可被定义为降低了≥2分)。

可替代地，由Mayo评分确定的缓解可被定义为要求

内窥镜检查和直肠出血的分项评分均为0，大便频率和PGA分项评分的得分为0或1。反应可被定义为Mayo评分从基线降低了>3分；临床反应可被定义为Mayo评分(无内窥镜检查分项评分，也称为部分Mayo评分)从基线降低了>2分，内窥镜检查反应可被定义为内窥镜检查评分从基线降低了>1分。

可替代地，临床缓解可被定义为Mayo总评分≤2分，而没有单独的分项评分>1分，临床反应可被定义为Mayo总评分从基线降低了≥3分且降低≥30％，并且直肠出血分项评分降低了≥1或绝对直肠出血分项评分为0或1，粘膜愈合可被定义为绝对内窥镜检查分项评分为0或1。

通常，患有活动性溃疡性结肠炎的患者的Mayo评分＞2。溃疡性结肠炎缓解期患者的Mayo评分通常≤2。

改良Mayo评分与以上定义的Mayo评分有关。改良Mayo评分与Mayo评分的不同之处例如在于内窥镜检查评分不太考虑脆性。该改良Mayo得分的得分表如下所示。可替代的改良Mayo分数也可以是没有PGA分项评分的Mayo分数。

通常，根据已知方法(Schroder KW,Tremaine WJ,Ilstrup DM.(1987)N Engl JMed 317(26):1625-9)评估改良Mayo评分。

直肠出血分项评分1级的无脆性改良Mayo范围为0-12，得分越高表明疾病越严重。

直肠出血分项评分1级的无脆性改良Mayo通常可以使用以下评分系统进行评估。对于本领域的技术人员来说，使用这样的系统来评估患者将是常规的。

改良Mayo评分的缓解和反应值与上面所述的Mayo评分相同。改良Mayo评分通常根据FDA的草案指南文件“溃疡性结肠炎：临床试验终点-工业指南”进行评估，其见于http://www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/UCM515143.pdf。

可替代地，改良Mayo评分不同于Mayo评分之处可在于，结肠镜检查/乙状结肠镜检查评分不太考虑脆性，而且医师整体评估是非决定性的。因此，改良Mayo评分的评分表也可以如下。

此可替代的改良Mayo评分的缓解值和反应值通常如上针对Mayo评分所述。可替代地，可以根据该可替代的改良Mayo评分，通过以下分项评分来定义缓解：i)直肠出血为0，ii)大便频率为0或1(与基线即第0周相比降低至少1分)，和iii)内窥镜检查评分为0或1(不包括脆性)。临床反应可被定义为临床缓解或改良Mayo总评分从基线降低了≥3分且降低≥30％。

溃疡性结肠炎缓解的诱导可以依据S.P.L.Travis,Aliment Pharmacol Ther2011；34:113-124(其全部内容通过引用并入本文)中列出的标准，即直肠出血、急迫感和大便频率增加完全停止，优选通过内窥镜下粘膜愈合来确认。

可替代地，反应或缓解的诱导可以依据E.F.Stange,Journal of Crohn's andColitis(2008)2,1-23；S.P.L.Travis,Journal of Crohn's和Colitis(2008)2,24-62；KGeboes,Gut 2000；47:404-409(其全部内容通过引用并入本文)中所述的标准。

溃疡性结肠炎的严重性以及对患者是否处于缓解的确定可以通过参考一个或多个标准指数(例如上文讨论的改良Mayo评分)进行衡量。

本发明的寡核苷酸用于给药至患有非活动性溃疡性结肠炎疾病的患者。例如，患者的改良Mayo分项评分可能≤2，其中直肠出血分项评分为0，大便频率分项评分为0或1，内窥镜检查分项评分为0或1。给药寡核苷酸通常会尽可能长地(例如以如上定义的特定时间段)延长这样的患者的时间段：Mayo改良分项评分≤2，并且直肠出血分项评分为0，大便频率分项评分为0或1，内窥镜检查分项评分为0或1。

预防活动性溃疡性结肠炎复发或再发可以通过在任何合适的评分系统中，例如在改良Mayo评分中均不变差来预示。通常，本发明的治疗会导致对于治疗时间尽可能长(例如在如上定义的特定时间段)的患者，在任何合适的评分系统中，例如在改良Mayo评分中均不变差。

通常，本发明的治疗预防活动性溃疡性结肠炎的复发或再发，正如通过改良Mayo评分所确定的。

在治疗溃疡性结肠炎中呈现的典型临床情况是患者遭受疾病的急性/活动期。临床医生的任务是首先解决急性/活动期，并且还要建立尽可能长时间地预防活动性溃疡性结肠炎和/或与之相关的症状的复发或再发的方案。

因此，通常，先前已经对根据本发明治疗的患者进行了溃疡性结肠炎治疗。优选地，先前已经对患者成功地进行溃疡性结肠炎治疗，即，根据本发明治疗的患者通常不再遭受活动期溃疡性结肠炎，即患者处于缓解或恢复中。通常，该先前的治疗涉及给药有效治疗活动性溃疡性结肠炎(即诱导活动性溃疡性结肠炎的缓解)的一种或多种治疗剂。在某些实施方式中，一种或多种治疗剂包括寡核苷酸，特别是可比托莫德。在其他实施方式中，一种或多种治疗剂不是寡核苷酸，可以例如包括一种或多种用于治疗本文所定义的溃疡性结肠炎的其他治疗剂，例如，可以选自免疫调节药物、抗整合素疗法药物、TNF-α抑制剂、免疫抑制药物、JAK抑制剂或其他用于治疗溃疡性结肠炎的药物。

合适药物的具体实例包括氨基水杨酸盐(例如5-ASA[也称为美沙拉敏(mesalamine)]、柳氮磺胺吡啶、奥沙拉嗪和巴柳氮)、GCS(例如强的松、甲基强的松龙、氢化可的松和布地奈德)、咪唑硫嘌呤(AZA)、6-巯基嘌呤(6-MP)、他克莫司、甲氨蝶呤、环孢霉素、英夫利昔单抗

根据本发明治疗的对象通常是对疗法而言难治的或反应不足或不耐受的。根据本发明治疗的对象通常是对抗炎疗法而言难治的或反应不足或不耐受的。因此，对象通常先前已经接受或目前正在接受抗炎疗法，优选用于溃疡性结肠炎的抗炎疗法。本文讨论了溃疡性结肠炎的抗炎疗法，通常包括GCS、TNF-α抑制剂、抗整合素疗法药物、氨基水杨酸盐和JAK抑制剂，其具体实例在上文中列出。

难治性疾病或对疗法不充分反应的疾病通常是尽管有至少一个疗程史(例如抗炎疗法)，但活动性疾病的体征和症状仍持续存在的疾病。

对疗法(例如抗炎疗法)的不耐受意味着该疗法已在对象中引起了不耐受的副作用，例如通常会导致疗法中断的副作用。

通常，对象先前已经接受或目前正在接受针对溃疡性结肠炎的氨基水杨酸盐疗法，优选5-ASA疗法。

通常，对象先前已经接受或目前正在接受针对溃疡性结肠炎的口服、直肠或肠胃外糖皮质激素(GCS)疗法，优选口服GCS的疗法。

通常，对象先前已经接受或目前正在接受针对溃疡性结肠炎的TNF-α抑制剂疗法药物。

通常，对象先前已经接受或目前正在接受针对溃疡性结肠炎的抗整合素疗法，例如维多珠单抗。

通常，抗炎疗法难治的或对抗炎疗法反应不足或不耐受的对象显示出或先前显示出对口服、直肠或肠胃外GCS治疗(由于早期副作用而不包括GCS治疗)的反应不足或反应丧失(即难治的)或不耐受。

通常，抗炎疗法难治的或对抗炎疗法反应不足或不耐受的对象具有对不充分反应(例如，类固醇难治性)、类固醇依赖性、或GCS治疗反应丧失、或GCS治疗不耐受的病史或当前状态。在治疗溃疡性结肠炎的过程中，对象通常已接受类固醇/GCS。

类固醇难治性通常是指尽管有至少一个包括每日剂量相当于在4周的时间段内每天口服强的松40-60mg或静脉内(IV)给药强的松高达0.75mg/Kg/天的诱导方案史，但对象表现出持续活动性溃疡性结肠炎的体征和症状。

类固醇依赖性通常是指患者无法在开始类固醇治疗后的3个月内将类固醇降低到相当于强的松龙10mg/d以下的水平而活动性溃疡性结肠炎不复发的，或患者在停止类固醇治疗后3个月内再发。

GCS治疗的不耐受通常意味着该对象经历了库欣综合征、骨质减少/骨质疏松、高血糖症、失眠、感染或GCS治疗后对象无法忍受的其他副作用。

通常，患者表现出或先前已经表现出对至少一种免疫调节剂、免疫抑制疗法、TNF-α抑制剂或抗整合素的反应不足、反应丧失或不耐受。通常已向患者给药这些试剂以治疗溃疡性结肠炎。

对免疫调节剂反应不足或反应丧失通常是指尽管先前已使用免疫调节剂药物进行了治疗(例如至少一个8周的口服咪唑硫嘌呤(≥1.5mg/kg)或6-巯基嘌呤(≥0.75mg/kg)的方案)，但活动性溃疡性结肠炎的体征和症状仍持续存在。

对免疫调节剂不耐受通常是指对象在接受免疫调节剂后经历恶心/呕吐、腹痛、胰腺炎、肝功能测试(LFT)异常、淋巴细胞减少、硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)基因突变或感染。

对TNF-α抑制剂反应不足或反应丧失是指尽管先前已使用TNF-α抑制剂进行了治疗，例如英夫利昔单抗(5mg/kg(IV)，2剂，相隔至少2周)、或戈利木单抗(200/100mg(SC)，2剂，相隔至少2周)；或阿达木单抗(160/80mg(SC)，2剂，相隔至少2周)的至少一个4周诱导方案(或根据当前标签推荐的剂量)，活动性溃疡性结肠炎的体征和症状仍持续存在，或在先前临床受益后的维持用药期间出现症状复发。

对TNF-α抑制剂不耐受是指在接受TNF-α抑制剂后与输注相关的反应、脱髓鞘、充血性心力衰竭、感染、皮疹或上文列出的其他副作用。

对抗整合素反应不足或反应丧失是指尽管先前用抗整合素(例如至少10周的维多珠单抗300mg(IV)方案，或按照当前标签中推荐的)进行了治疗，但活动性溃疡性结肠炎的体征和症状仍持续存在，或在先前临床获益后的维持用药期间出现症状复发。

在某些实施方式中，先前已经使用寡核苷酸治疗了患者活动性溃疡性结肠炎，然后该寡核苷酸也用于防止其复发/再发。因此，本发明还提供了用于预防先前使用该寡核苷酸对活动性溃疡性结肠炎进行治疗后的患者的活动性溃疡性结肠炎的复发或再发的如本文所定义的寡核苷酸，特别是可比托莫德。在这样的实施方式中，给药以诱导缓解和/或预防活动性溃疡性结肠炎复发或再发的寡核苷酸的剂量可以相同或不同。

通常，根据本发明治疗的患者容易再发或复发为活动期溃疡性结肠炎。

该药物特别适用于对容易再发或复发活动性溃疡性结肠炎的患者的连续治疗。如上文所述的寡核苷酸可用作维持疗法，以预防与活动性溃疡性结肠炎有关的症状复发或再发，和/或改善患者的病症。

通常，对象已被诊断为患有左侧溃疡性结肠炎(即远端结肠炎)，其包括直肠乙状结肠炎。

如本文所用，术语“寡核苷酸”是指由多个连接的单个核苷单元形成的多核苷。这样的寡核苷酸可从现有的核酸来源获得，包括基因组DNA或cDNA、质粒、载体或细菌DNA，但优选通过合成方法产生。核苷残基可以通过任意众多已知的核苷间键中的任一个来彼此耦合。这样的核苷间键包括但不限于天然的核苷间磷酸二酯键或实际上经修饰的核苷间键，例如但不限于硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、烷基膦酸酯、烷基硫代膦酸酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、硅氧烷、碳酸酯、烷氧羰基、乙酰氨基酸酯、氨基甲酸酯、吗啉基、硼基(borano)、硫醚、桥连的氨基磷酸酯、桥连的亚甲基磷酸酯、桥连的硫代磷酸酯和砜核苷间键。术语“寡核苷酸”还包括具有一个或多个立体特异性核苷间键(例如，(Rp)-或(Sp)-硫代磷酸酯、烷基膦酸酯或磷酸三酯键)的多核苷。如本文所用，术语“寡核苷酸”和“二核苷酸”明确旨在包括具有任何这样的核苷间键的多核苷和二核苷，而无论该键是否包含磷酸基团。在某些优选的实施方式中，这些核苷间键可以是磷酸二酯、硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯键或其组合。

术语“寡核苷酸”还包括具有额外取代基的多核苷，所述额外取代基包括但不限于蛋白质基团、亲脂基团、嵌入剂、二胺、叶酸、胆固醇和金刚烷。术语“寡核苷酸”还涵盖任何其他含核碱基的聚合物，包括但不限于肽核酸(PNA)、具有磷酸基的肽核酸(PHONA)、锁核酸(LNA)、吗啉代主链寡核苷酸和主链部分有烷基接头或氨基接头的寡核苷酸。烷基接头可以是支链的或直链的，取代的或未取代的，纯手性的或外消旋混合物。

本发明的寡核苷酸可包括天然存在的核苷、修饰的核苷或其混合物。如本文所用，术语“修饰的核苷”是包括修饰的杂环碱基、修饰的糖部分或其组合的核苷。在一些实施方式中，如本文所述，修饰的核苷是非天然嘧啶或嘌呤核苷。在一些实施方式中，修饰的核苷是2'-取代的核糖核苷，阿拉伯核苷(arabinonucleoside)或2'-脱氧-2'-取代的阿拉伯糖苷。

如本文所用，术语“杂合寡核苷酸”是具有多于一种类型核苷的寡核苷酸。

本文中，术语“寡核苷酸”包括杂合寡核苷酸和嵌合寡核苷酸。“嵌合寡核苷酸”是在其序列结构内具有多于一种类型的核苷间键的寡核苷酸。这种嵌合寡核苷酸的一个优选实例是包含硫代磷酸酯、磷酸二酯或二硫代磷酸酯区域和非离子键如烷基膦酸酯或烷基硫代磷酸酯键的嵌合寡核苷酸(US5635377和US5366878)。

在此，术语“寡核苷酸”也包括环化变体和环状寡核苷酸。

优选地，寡核苷酸包含至少一种天然存在的磷酸二酯，或一种修饰的硫代磷酸酯，或二硫代磷酸酯核苷间键，但是也考虑了以下的优选的键或实际上主链修饰，包括但不限于：甲基膦酸酯、甲基硫代磷酸酯、磷酸三酯、硫代磷酸三酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、三酯前药、砜、磺酰胺、氨基磺酸酯、甲缩醛(formacetal)、N-甲基羟胺、2'OMe(在2'位的氧甲基)、碳酸酯、氨基甲酸酯、吗啉代、硼代膦酸酯、氨基磷酸酯、尤其是伯氨基氨基磷酸酯、N3氨基磷酸酯和N5氨基磷酸酯以及立体特异性键(例如(Rp)-或(Sp)-硫代磷酸酯、烷基膦酸酯或磷酸三酯键)。

核苷的糖部分可以是非天然存在的糖部分。在本文中，“天然存在的糖部分”是作为核酸的一部分天然存在的糖部分，例如核糖和2'-脱氧核糖，“非天然存在的糖部分”是指不是作为核酸的一部分天然存在的但可以在寡核苷酸的主链中使用的任何糖，例如但不限于己糖。阿拉伯糖和阿拉伯糖衍生物是优选的糖部分的实例。

修饰或取代的寡核苷酸通常，由于期望性质例如增强的细胞摄取、增强的核酸靶向亲和力和在核酸酶存在下增强的稳定性，而优于天然形式。寡核苷酸通常由多于10个直到100个或更多个脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸组成，尽管优选为在约8个至约40个之间，最优选为在约8个至约20个之间。确切的大小将取决于许多因素，而这些因素转而取决于寡核苷酸的最终功能或用途。寡核苷酸可以以任何方式产生，包括化学合成、DNA复制、反转录或其组合。

用于本发明的寡核苷酸包含序列5'-GGAACAGTTCGTCCATGGC-3'(SEQ ID NO:2)。通常，至少一个CG二核苷酸是未甲基化的。

通常，所述寡核苷酸中的至少一个核苷酸具有磷酸主链修饰。主链修饰通常是硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯修饰。

在序列中，例如在以下序列中，硫代磷酸酯键可以用星号(*)说明：

5'-G*G*A*ACAGTTCGTCCAT*G*G*C-3'(SEQ ID NO:1)，其中CG二核苷酸是未甲基化的。

优选地，所述寡核苷酸具有序列

5'-G*G*A*ACAGTTCGTCCAT*G*G*C-3'(SEQ ID NO:1)，其中CG二核苷酸是未甲基化的。因此，优选地所述寡核苷酸是可比托莫德。

本发明的治疗通常包括给予患者多剂量的所述寡核苷酸以尽可能长时间地(例如以如本文所定义的时间段)防止复发/再发。通常将多个剂量间隔开以尽可能延长寡核苷酸的预防/保护作用，并且优选以规则的间隔给药各个剂量。

通常，各个剂量之间的间隔为至少1周，优选至少4周或至少6周或至少8周。通常，各个剂量之间的间隔为最长12个月，优选最长6个月，更优选为最长十二周。为了避免疑问，“间隔”是指各个剂量之间的时间段。因此，在(例如)4周间隔的情况下，各个剂量的给药之间的持续时间为4周。

通常，各个剂量之间的间隔为1周至12个月，优选4周至6个月，更优选4周至12周，例如4周至8周或8周至12周。

通常，各个剂量之间的间隔是1周、2周、3周、4周、6周、8周、12周、6个月或12个月。优选地，各个剂量之间的间隔为1周、4周、8周或12周，更优选为4周、8周或12周，更优选为4周或8周。因此，在本发明的优选方面，各个剂量之间的间隔是4周。在本发明的另一个优选方面，各个剂量之间的间隔是8周。

继续上述剂量方案，即以规则的间隔向患者给药各个剂量的所述寡核苷酸持续一段时间，使得该方案提供持续的维持治疗。鉴于溃疡性结肠炎是不能治愈的慢性病症，这实际上意味着患者通常将接受本文所述的方案更长的时间，通常至少6个月，优选至少1年或2年，例如至少5年或10年。在实践中，可能需要根据需要(例如由医生确定)或无限期地向一些患者给药本文所述的方案。

通常，在以上概述的剂量方案中给药的各个剂量是10mg至350mg的所述寡核苷酸，优选20至300mg的所述寡核苷酸。通常，在每个各个剂量/给药中给药相同剂量的寡核苷酸，但是也可以使用不同的剂量。

所述寡核苷酸，优选可比托莫德的各个剂量可以为例如10至50mg，优选为15至45mg，更优选为20至40mg，甚至更优选为25至35mg，甚至更优选为26至34mg，甚至更优选27至33mg，甚至更优选28至32mg，甚至更优选29至31mg，尤其是约30mg。

所述寡核苷酸，优选可比托莫德的各个剂量可以为例如100mg至150mg，优选大于100mg高达150mg，更优选101mg至150mg，甚至更优选105mg至145mg，甚至更优选110至140mg，甚至更优选115至135mg，甚至更优选120至130mg，甚至更优选121至129mg，甚至更优选122至128mg，甚至更优选123至127mg，甚至更优选124至126mg，尤其是约125mg。

可替代地，所述寡核苷酸，优选可比托莫德的各个剂量可以为150mg至350mg，优选为175mg至325mg，更优选为200mg至300mg，甚至更优选为210至290mg，甚至更优选为220至280mg，甚至更优选为230至270mg，甚至更优选为240至260mg，甚至更优选为245至255mg，甚至更优选为249至251mg，特别是约250mg。

在本发明的优选方面，患者以规则的间隔接受多个剂量的所述寡核苷酸，所述寡核苷酸的各个剂量为约30mg，并且给药至患者的单个剂量之间的间隔为1周、4周、6周、8周或12周，更优选4周、8周或12周，更优选4周或8周。因此，在本发明的优选方面，患者以规则的间隔接受多个剂量的所述寡核苷酸，所述寡核苷酸的单个剂量为约30mg，并且在这些各个剂量之间的间隔为4周。在本发明的另一个优选方面，患者以规则的间隔接受多个剂量的所述寡核苷酸，所述寡核苷酸的单个剂量为约30mg，并且在各个剂量之间的间隔为8周。这些方案通常持续至少6个月，优选至少1年或2年，例如至少5年或10年或无限期地持续。

在本发明的优选方面，患者以规则的间隔接受多个剂量的所述寡核苷酸，所述寡核苷酸的各个剂量为约125mg，并且给药至患者的单个剂量之间的间隔为1周、4周、6周、8周或12周，更优选4周、8周或12周，更优选4周或8周。因此，在本发明的优选方面，患者以规则的间隔接受多个剂量的所述寡核苷酸，所述寡核苷酸的单个剂量为约125mg，并且在这些各个剂量之间的间隔为4周。在本发明的另一个优选方面，患者以规则的间隔接受多个剂量的所述寡核苷酸，所述寡核苷酸的单个剂量为约125mg，并且在各个剂量之间的间隔为8周。这些方案通常持续至少6个月，优选至少1年或2年，例如至少5年或10年或无限期地持续。

在本发明的优选方面，患者以规则的间隔接受多个剂量的所述寡核苷酸，所述寡核苷酸的各个剂量为约250mg，并且给药至患者的单个剂量之间的间隔为1周、4周、6周、8周或12周，更优选4周、8周或12周，更优选4周或8周。因此，在本发明的优选方面，患者以规则的间隔接受多个剂量的所述寡核苷酸，所述寡核苷酸的单个剂量为约250mg，并且在这些各个剂量之间的间隔为4周。在本发明的另一个优选方面，患者以规则的间隔接受多个剂量的所述寡核苷酸，所述寡核苷酸的单个剂量为约250mg，并且在各个剂量之间的间隔为8周。这些方案通常持续至少6个月，优选至少1年或2年，例如至少5年或10年或无限期地持续。

在活性剂的剂量的上下文中，本文所用的“约”是指+/-10％，通常+/-5％，优选+/-1％。

在以上剂量方案中，在间隔特定周数的多个场合下向患者给药各个剂量(如本文指定的量)的所述寡核苷酸。这意味着在以指定的时间分隔的指定的剂量/给药次数之间，患者不会接受任何其他寡核苷酸。

如本文中所使用的，对间隔数周的时间段的提及在某些实施方案中是指精确地以间隔数周的时间例如4周给药剂量，即恰好意味着28天。然而，将理解，对此的微小变化仍在本发明的范围内。由于例如患者患病或药物不能利用导致的这样的微小变化是不可避免的。因此，如本文所用，相隔数周的时间段是指周数+/-3天，优选地+/-2天，更优选地+/-1天。因此，在本文中，“相隔4周”是指相隔25至31天，通常相隔26至30天或相隔27至29天的给药。

本发明中使用的药物可以作为适应症的单一疗法给药，或与其他药物(一种或多种)作为适应症的辅助疗法一起施用，如下文更详细地描述的。在辅助(或“附加”(add-on))疗法的情况下，用于本发明的药物可以与其他药物(一种或多种)，例如以固定剂量组合或以分开的剂量，同时地、分开地或依次地给药。

如本文所用，术语“附加(add-on)”是指在不中断当前疗法或药物方案的情况下除了当前疗法或药物方案之外还给药所述寡核苷酸。

因此，寡核苷酸可以作为单一疗法给药，或与一种或多种用于预防活动性溃疡性结肠炎复发的其他治疗剂组合给药。因此，寡核苷酸可以作为单一疗法给药，或与一种或多种用于预防活动性溃疡性结肠炎复发的其他治疗剂组合给药，所述用于预防活动性溃疡性结肠炎复发的其他治疗剂选自抗炎药物、免疫调节药物、抗整合素疗法药物、TNF-α抑制剂、免疫抑制药物、JAK抑制剂或用于治疗溃疡性结肠炎的其他合适药物或用于治疗溃疡性结肠炎的其他合适药物。适于与所述寡核苷酸联合使用的这种药物的实例包括，但不限于：氨基水杨酸盐(例如5-ASA[也称为美沙拉敏(mesalamine)]、柳氮磺胺吡啶、奥沙拉嗪和巴柳氮)，GCS(例如强的松，甲基强的松龙，氢化可的松和布地奈德)，咪唑硫嘌呤(AZA)，6-巯基嘌呤(6-MP)，他克莫司，甲氨蝶呤，环孢霉素，英夫利昔单抗

为了本发明的目的，术语“与...组合”和“附加”是指在治疗同一患者相同疾病的过程中，包括以任何顺序给药寡核苷酸和一种或多种其他治疗剂，包括同时给药，以及间隔长达几个月间隔的暂时间隔顺序。

通常，将所述寡核苷酸局部地给药，例如局部给药于粘膜。

通常，所述寡核苷酸通过结肠内给药。结肠内给药通常通过直肠进行。结肠内给药通常使用灌肠或导管进行。结肠内给药优选涉及通过灌肠(即通过直肠灌肠)进行给药。结肠内给药可以是局部的，例如在结肠镜检查期间借助于通过结肠镜检查活检通道插入的喷射导管或其他合适的医疗设备进行。所述寡核苷酸可被递送至降结肠的上部或至结肠的横向区域；然而，在合适的时候也可以使用其他区域。也可以局部给药至胃肠道的其他部位。在该方面的又一实施方式中，所述寡核苷酸可以通过任何合适的给药途径来给药，例如但不限于吸入、鼻内、肠胃外、口服、皮内、皮下、阴道和直肠给药。此外，在某些实施方式中，可以使用所述寡核苷酸的全身给药。

寡核苷酸可以以药物组合物的形式给药，该药物组合物包含如本文所限定的寡核苷酸以及一种或多种药学上可接受的载体。如本文所用，术语“载体”涵盖任何赋形剂、稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、水、稳定剂、增溶剂、脂质或本领域公知的用于药物制剂的其他材料。将理解，载体的特性将取决于具体应用的给药途径。

如本文所用，术语“药学上可接受的”是指不干扰免疫调节性寡核苷酸的有效性并且与诸如细胞、细胞培养物、组织或有机体的生物系统相容的材料。优选地，生物系统是活有机体，例如脊椎动物。

通常，组合物是寡核苷酸在液体载体或泡沫中的溶液。通常，组合物是寡核苷酸在液体载体中的溶液。

通常，载体是水，优选无菌水。因此，通常该组合物包含如本文所限定的寡核苷酸和水。

优选地，载体是水，并且寡核苷酸(以组合物的形式)结肠内给药，例如作为直肠灌肠剂。

已经发现，有利地，寡核苷酸在水中稳定，因此寡核苷酸可以作为基本上由如本文所限定的寡核苷酸和水组成的组合物给药。该组合物可以由如本文所限定的寡核苷酸和水组成。

基本上由各组分组成的组合物是指包含基本上由其组成的组分以及其他组分的组合物，条件是其他组分不会实质性地影响组合物的基本特性。通常，基本上由某些组分组成的组合物将包含大于或等于95wt％(相对于组合物的总重量)的那些组分或大于或等于99wt％(相对于组合物的总重量)的那些组分。

因此，基本上由如本文所限定的寡核苷酸和水组成的组合物包含大于或等于95wt％的寡核苷酸和水(相对于组合物的总重量)或大于或等于99wt％的寡核苷酸和水(相对于组合物的总重量)。

药物组合物中寡核苷酸的浓度将取决于几个因素而变化，包括要给药的寡核苷酸的浓度。作为溶液的组合物中寡核苷酸的典型浓度为0.01mg/ml至10mg/ml，在某些情况下为0.1mg/ml至6mg/ml，在某些情况下为0.1mg/ml至1mg/ml，在某些情况下为2至3mg/ml，在某些情况下为4至6mg/ml。

本发明还提供了一种用于预防如本文所定义的患者如本文所定义的活动性溃疡性结肠炎复发的药物组合物，该药物组合物包含如本文所定义的寡核苷酸以及一种或多种药学上可接受的载体。

用于如上文所定义的用途的寡核苷酸的优选特征也是用于用途的组合物的优选特征。

本发明还提供了如本文所定义的寡核苷酸或如本文所定义的药物组合物在制备用于预防如本文所定义的对象中活动性溃疡性结肠炎的复发的药物中的用途。

用于如上所述的用途的寡核苷酸的优选特征也是寡核苷酸或组合物的用途的优选特征。

本发明还提供了预防如本文所定义的对象中的如本文所定义的活动性溃疡性结肠炎复发的方法，该方法包括将如本文所定义的寡核苷酸或如本文所定义的组合物给药至所述对象。

本发明还提供了如本文所定义的寡核苷酸在制备用于预防如本文所定义的患者中活动性溃疡性结肠炎的复发的药物中的用途。

如上文所定义的所使用的寡核苷酸的优选特征也是寡核苷酸的用途的优选特征。

以下非限制性实施例说明了本发明。

实施例1-临床试验研究

在该随机双盲安慰剂对照试验中，131例中度至重度活动性UC患者随机在基线和第4周在低GI内窥镜检查期间接受两次单个剂量的寡核苷酸可比托莫德[30mg]或安慰剂局部给药。主要终点为临床缓解，定义为第12周的临床活动性(Rachmilewitz)指数[CAI]≤4。次要终点包括粘膜愈合和关键性的患者报告的结果的症状缓解[大便中无血和每周大便频率<35]。

符合条件的患者是中度至重度溃疡性结肠炎的成年人(临床活动性指数[CAI]≥9，内窥镜Mayo评分≥2)，尽管其入选前用皮质激素[GCS][强的松龙]当量≥10mg/天治疗了≥2周，并且之前对于用美沙拉嗪≥2.4g/天进行持续≥4周的治疗、以至少0.75mg/kg作为起始剂量进行GCS治疗、用咪唑硫嘌呤或巯基嘌呤进行持续≥3个月治疗和/或一个适当的TNF-α抑制剂疗程进行治疗失败或不耐受。患者可能在试验之前尝试过用环孢霉素或他克莫司治疗。安慰剂组中有4例患者(9.3％)和可比托莫德组5例患者(6.2％)在研究开始前曾使用环孢霉素，但在本研究中未使用。

在试验期间，患者可能正在服用柳氮磺胺吡啶、氨基水杨酸盐或硫嘌呤，并且应该以稳定剂量口服GCS。不允许在试验期间或招募前4周进行与环孢霉素、他克莫司或TNF-α抑制剂的同时治疗，或在招募前2周进行抗生素或非甾体类抗炎药[NSAIDs]的同时治疗。如果患者当前已诊断为暴发性结肠炎，指示要立即手术，有活动性感染迹象(温度≥38℃)或血红蛋白<100g/L，则将该患者排除在外。其他排除标准包括目前的肠胃外营养、输血、艰难梭菌(C.difficile)感染、当前或过去的结肠恶性肿瘤和/或异型增生、主要器官功能在临床上有明显损害以及招募前30天并用或以前进行过研究性治疗。怀孕或哺乳期妇女被排除在外。

符合条件的患者以2:1的比例随机分配，在进行充分肠道清洁以清除粪便后，在第0周和第4周通过内窥镜检查接受可比托莫德的给药[30mg]或稀释在50mL无菌水中的相应安慰剂。在内窥镜检查过程中使用喷雾导管，在粘膜炎症部位的近端，或者结肠炎的情况下在结肠的横断面上进行施用。要求患者在给药后保持躺卧2小时。在第1、4、8、12、22和52周后对患者进行随访。在第0、4和12周，对患者进行内窥镜评估，并从炎症最重的粘膜区域进行活检。ICON(Texas，美国)通过计算机生成的程序生成了随机码，该程序使用了随机排列的块的方法。纳入前至少2周开始以≥10mg的稳定的每日剂量口服GCS治疗。患者达到临床缓解时(最早在第12周)，根据欧洲克罗恩病和结肠炎组织[ECCO]指南的标准逐渐减量时间表(standard tapering schedule)进行类固醇逐渐减量。

终点

主要终点是在第12周诱导临床缓解，定义为CAI评分≤4。选择此终点是因为在先前的同情使用中已观察到使用该测定的临床益处。次要终点包括：黏膜愈合[内窥镜检查Mayo分项评分≤1，内窥镜检查未集中读取]；在第1、4、8、22和52周临床缓解；临床缓解和粘膜愈合；症状缓解[定义为大便中无血，每周大便频率＜35]；由单次试验组织病理学家评估的第4周和第12周的组织学Geboes评分；结肠切除的时间；基于炎性肠病调查表[IBDQ]和36项简短形式调查[SF36]评分的生活质量。事后，定义同时达到症状缓解和粘膜愈合的对象的综合评分。

安全性评估

在整个研究过程中评估了安全性和耐受性。通过生命体征、ECG结果、实验室变量和不良事件[AE]报告来评估安全性。患者可以随时自由地中止参与研究，或者可以根据研究者的判断退出研究治疗。

结果与结论

图1显示了第4周症状缓解的患者百分比(通过便血和大便频率证明)，以及在第8周和第12周同一组患者该百分比如何变化的信息。

在第0周时服用30mg可比托莫德的患者中32.1％在第4周时处于症状缓解(活性药物与安慰剂之间的δ(delta)为18.1％)。如上所述，在第4周对这些患者给药另一剂30mg的可比托莫德治疗。到第8周时，有28.4％的患者缓解(与第4周的百分比相比降低了3.7％)(活性药物和安慰剂之间的δ为16.8％)。在第8周时未向患者给药再一剂的可比托莫德。到第12周，有23.5％的患者缓解(与第8周的百分比相比下降了4.9％)(活性药物和安慰剂之间的δ为11.8％)。

这些结果表明，在第0周通过给药可比托莫德诱导缓解后，患者有再发成活动期溃疡性结肠炎的趋势。然而，患者再发成活动期溃疡性结肠炎的趋势通过给药再一剂的可比托莫德得以降低，而安慰剂治疗的患者则并非如此。这可以从比较第8周与第12周的结果明显看出来。患者在第8周通过在第4周(即4周前)接受再一剂的可比托莫德而获益，因此，再发成活动期溃疡性结肠炎的患者较少。相反，在第12周时，患者在4周前(即在第8周)未接受再一剂的可比托莫德，因此再发成活动期溃疡性结肠炎的患者较多。

从这些结果可以得出结论，除非提供更多剂的可比托莫德，否则活动性溃疡性结肠炎缓解的患者(例如，通过给药可比托莫德而诱导缓解后)倾向于再发成活动期溃疡性结肠炎。这些更多剂的可比托莫德使得患者保持缓解，并防止其再发成活动期溃疡性结肠炎。因此，一旦已经诱导缓解，重复用可比托莫德给药维持患者缓解并防止再发成活动期溃疡性结肠炎。

实施例2-同情使用程序的临床数据

该实施例与未发布的实验数据有关，该数据是作为同情使用程序的一部分收集的。根据临床、内窥镜检查和组织学特征，对溃疡性结肠炎进行了确诊。已收到患者的书面同意，并且相关地方道德委员会批准了该治疗。

患者为49岁男性，五年前首次被诊断为溃疡性结肠炎，对类固醇和免疫抑制疗法(GCS、英夫利昔单抗和天然IFN-β)而言是难治的。以实验性附加疗法的形式，使用天然干扰素-β(Fiblaferon)对再发治疗持续4年。由于保险公司未续签支付协议，而不得不停止了这种治疗。2010年1月严重复发，用大剂量类固醇联合咪唑硫嘌呤和5-ASA治疗，但未成功。该患者在1月底继续接受一剂英夫利昔单抗，但这导致在2010年2月重度沙门氏菌病并伴随败血病。在2010年3月，高剂量类固醇与英夫利昔单抗联合治疗起到一些作用，将CAI评分从14降低到9。然而，对象仍然处于该疾病的非常活动状态。

因此，考虑用可比托莫德的多剂量治疗方案，第一剂于2010年3月26日给药，另外2剂间隔4周给药。

该患者以4周为间隔接受3剂稀释于50mL无菌水的30mg可比托莫德，作为当前治疗的补充。在结肠镜检查过程中，借助于喷雾导管进行药物施用，所述喷雾导管穿过结肠镜检查活检通道而插入并递送至大约降结肠上部或横向区域的。一周后，患者的CAI评分下降了4分，几乎达到了临床缓解(见图2)。

由于要再给予2次可比托莫德的事实，医生决定开始非常缓慢的类固醇逐渐减量方案。在第4周，第二次滴注可比托莫德的时间点，患者已达到完全缓解，并且类固醇持续逐渐减量。在接受最后一剂的可比托莫德和进一步的类固醇逐渐减量的同时，完全临床缓解又维持了两个月。

出现恶化迹象(CAI评分提高)后，决定从2010年8月25日开始使用另一可比托莫德多剂量方案来治疗这次再发。这次是在4周内达到临床缓解，到第8周，患者再次处于完全临床缓解，并维持5个月直至2011年3月(见图2)。

图2显示了患者p12的治疗过程。所描绘的是结肠炎活动指数[CAI]与时间(按月计)的对比。CAI评分的值在上虚线上方表示该患者疾病严重恶化，而在下虚线下方表示该患者处于临床缓解。没有数字的实线显示了每天给予一定量的去氧皮质酮[mg]的类固醇治疗过程。灰色箭头表示进行了给药随访(2010年3月26日，2010年4月28日，2010年5月26日，2010年8月25日，2010年9月22日，2010年10月19日)，黑色箭头表示可以确定CAI评分的随访(2010年4月1日，2010年5月5日，2010年5月19日，2010年6月23日，2010年7月12日，2010年9月1日，2010年10月25日，2010年11月24日，2011年3月9日)，右侧灰色箭头表示2011年3月24日治疗医师最后一次联系所有患者跟进治疗时的状态。

图2中的CAI评分显示，患者在接受第一剂可比托莫德后处于缓解(CAI<4)，进一步重复给药可比托莫德使患者维持缓解，并防止疾病再发。在患者p12的第一种多剂量方案中，可比托莫德重复给药使患者保持缓解3个月(5月、6月和7月)。同样，对于患者p12的第二种多剂量方案，重复给药使患者保持缓解5个多月(直到2011年3月)。从该数据可以预期，如果以固定的间隔给药更多剂的可比托莫德，则缓解状态可以维持，并防止再发成活动期溃疡性结肠炎。值得注意的是，一旦停止可比托莫德给药，几个月后患者会再发成活动性疾病状态。图2中的数据表明，如果维持了可比托莫德给药，则可以抑制CAI分数，并且患者可以保持缓解状态。因此，一旦诱导了缓解，用可比托莫德重复给药可使患者保持缓解，并防止再发成活动期溃疡性结肠炎。

实施例3-在慢性UCDSS模型中的小鼠研究

该研究的目的是测试可比托莫德作为维持疗法对慢性DSS诱发性结肠炎小鼠模型的功效。

动物

将37只雄性C57BL/6小鼠纳入慢性DSS诱发性结肠炎的慢性研究中，并在研究前进行5天的稳定期圈养。将所有动物圈养在带有Sani-chips寝具的HEPA通风笼中。提供圆顶和无菌棉垫(sterile cotton scratch pad)以进行改进。荧光灯照明以12小时循环提供。每天监测和记录温度和湿度，并保持20-23℃的温度和30-70％的相对湿度。随意地提供2018S18％蛋白质维持啮齿动物饮食。

药物制剂

在实验开始时，将可比托莫德在盐水中稀释至125μg/100μl(1.25μg/μl，剂量1)或500μg/100μl(5μg/μl，剂量2)。将溶液等分并在实验期间保持在4℃。在每个给药日，向小鼠直肠给药100μl。将FTY-720(S1P1受体抑制剂)溶解在dH2O中，作为阳性对照。对于1mg/kg的剂量，以平均体重30g来制备化合物，并每天口服给药每只动物100μL。

小鼠500μg的剂量大约相当于人体内125mg的剂量(参见“行业指导-估计成年健康志愿者治疗药物的初始临床试验中的最大安全起始剂量”，美国卫生与公共服务部食品药品监督管理局药品评估与研究中心，2005年7月)。小鼠125μg的剂量大致相当于人体内30mg的剂量。在该小鼠模型中观察到的结果可被认为是在给药各个剂量为125mg或30mg的可比托莫德的人中观察到的效果的预测。

DSS诱发性慢性结肠炎的实验设计

9周龄的小鼠随意地接受溶解在高压灭菌的水中的2％DSS(第2-5组，每组n＝8)，持续5天，然后在接下来的5天改变为高压灭菌的饮用水。重复该循环，每5天交替地进行DSS处理和高压灭菌的水，总持续时间共30天。在每个5天DSS处理期中，在5天循环中的第三天提供新鲜的2％DSS。在整个研究过程中，第1组(n＝5)作为对照组(未进行处理的

表4：小鼠研究中的治疗方式

临床和组织学观察

从给药第0天到研究第30天终止时，在给药日以及每个给药日后两天记录体重、大便稠度、大便血液、身体状况评分和身体健康状况。观察动物在评分/给药日以及如果每天体重减轻＞20％时身体健康的变化。监测体重减轻超过其治疗前体重20％的动物，并给予饮食/水凝胶72小时。没有动物因持续很久的体重减轻或疾病引起的疼痛和不适而终止实验。

该研究在第30天终止，对所有动物进行尸检。称重脾脏，然后丢弃。记录结肠的长度和重量，并计算每只动物的重量/长度比。每组动物(对照组和治疗组-见图3)拍摄了一个有代表性的结肠的照片。使用GraphPad Prism软件进行统计分析。

结果

结肠炎的慢性形式可以更准确地反映人IBD的持久性质和再发性质，因此更适合评估维持疗法中的药物疗效。在慢性实验小鼠模型中，动物长期接受DSS治疗。口服DSS导致上皮细胞死亡，损害屏障功能，并且引起随后的炎症。因此，慢性模型中通常使用较低百分比的DSS的饮用水溶液。

在当前的慢性实验小鼠模型中，仅使用2％DSS，并且每5天交替使用DSS处理和高压灭菌水。结果，观察到的临床症状非常轻微。在整个研究过程中，小鼠最多损失了5％的体重，因此很难在临床终点中区分药物作用。但是，在对动物实施安乐死后测量结肠长度时，活性药物和安慰剂治疗之间的最明显区别变得清晰。结肠长度的减少是IBD的主要症状。据Cooper等人报道，结肠的长度与DSS诱发性结肠炎的严重程度成反比(H S Cooper,S NMurthy,R S Shah,D J Sedergran,Clinicopathologic study of dextran sulfatesodium experimental murine colitis.Laboratory investigation.1993,Vol.69(2),p.238-249)。在没有有效治疗的情况下，与对照动物相比，DSS处理的动物中结肠长度减少并且观察到相对结肠重量/长度比显著增加。

在本研究中，用125μg剂量的可比托莫德治疗显著降低了DSS的结肠缩短作用(见图3、4和5)。用500μg剂量的可比托莫德治疗也降低了DSS的结肠缩短作用。这表明可比托莫德能够减轻DSS在慢性UC模型中的炎症作用。特别地，在延长暴露于DSS后，重复用可比托莫德给药能够减少结肠缩短(即维持更健康的结肠长度)。与未进行处理的动物相比，DSS处理的动物的结肠重量/长度比显著增加(图5)。然而，两种剂量的可比托莫德治疗均降低了重量/长度比(图5)，也表明可比托莫德在预防炎症方面有效。

这些结果表明，可比托莫德不仅能够为DSS引起的症状提供初始治疗，而且还能够作为长期疗法持续抑制炎症，如接受可比托莫德的小鼠与未接受可比托莫德的小鼠之间结肠的物理差异所示。因此，可比托莫德可用于使患者处于缓解中，并防止再发成活动期溃疡性结肠炎。因此，一旦诱导了缓解，可比托莫德重复给药会使患者保持缓解，并防止再发成活动期溃疡性结肠炎。

序列表

<110> 英德克斯制药公司

<120> 新疗法

<130> N408438WO

<150> GB 1818579.3

<151> 2018-11-14

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> SEQ ID NO: 1 Cobitolimod

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(4)

<223> phosphorothioate linkage between bases: 1-2, 2-3 and 3-4

<220>

<221> misc_feature

<222> (16)..(19)

<223> phosphorothioate linkage between bases: 16-17, 17-18 and 18-19

<400> 1

ggaacagttc gtccatggc 19

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> SEQ ID NO: 2

<400> 2

ggaacagttc gtccatggc 19