SR1078在制备治疗酒精性肝损伤药物方面的应用、药物组合物

摘要

本发明涉及药物新用途技术领域，具体涉及SR1078在制备治疗酒精性肝损伤药物方面的应用、药物组合物。本发明实施例证实：SR1078改善酒精性肝病小鼠肝脏/体重比；SR1078能够改善小鼠的血清酶学指标，使酒精性肝病小鼠谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量明显降低；SR1078能够改善酒精性肝病小鼠肝脏的内质网应激情况，RORα升高，内质网应激的关键蛋白ATF4和CHOP降低；SR1078能够改善酒精造成的肝脏损伤和脂质积累。为酒精性肝病的治疗提供新策略，具有重要的临床治疗意义，表明SR1078能够作为酒精肝损伤治疗药物的活性成分，为日后将开发成酒精性肝病治疗药物提供科学依据。

说明书

技术领域

本发明涉及药物新用途技术领域，具体涉及SR1078在制备治疗酒精性肝损伤药物方面的应用、药物组合物。

背景技术

中国是饮酒导致死亡最多的国家，饮酒导致的疾病负担也在加重。在我国，酒精性肝病患病人数占总人数的4.5％，达到6200万人。酒精性肝病(ALD)具有三个主要阶段：酒精性脂肪性肝病、酒精性肝炎以及肝硬化。酒精性脂肪性肝病，其特征为脂肪酸在肝中的累积，通常是无症状的和戒酒后可逆的。尽管大多数重度饮酒者表现出某种水平的脂肪性肝病，在一些情况下，大量饮酒只需要在不到一周的一个时间段中每天发生，五名重度饮酒者中只有一名发展为酒精性肝炎，并且四名中有一名发展成肝硬化。酒精性肝炎的特征在于肝细胞的炎症，并且一般而言，通过戒酒是可逆的。肝硬化一般而言是不可逆的，其特征在于炎症、纤维化(细胞硬化)以及受损的膜，它们阻止了机体内化学物质的排毒，以瘢痕形成和坏死告终。

对潜藏于酒精性肝病中肝组织损害不同阶段中的细胞和分子机制了解甚少。尽管在若干领域已经取得进展，一种阻止此疾病的有效治疗方法仍然是缺少的。酒精性肝病(ALD)危害严重，且临床尚无针对性强，疗效可靠的药物。根据酒精性肝损伤不同的发展阶段和治疗目的，其治疗途径有：戒酒、营养疗法、药物疗法和联合疗法。这些疗法都存在一定的局限性，如戒酒多依靠个人对病症的认识及自制力，常被其他外界因素干扰而失败；激素治疗虽然能缓解临床症状，但不能降低严重病症的死亡率，且并发症较多，难以推广；有些药物毒副作用较大，带来肝脏负担，目前仍缺乏针对性强、疗效可靠的药物。这就需要研究新的信号通路，为药物治疗提供更多的基础研究和临床治疗靶点。

RORα是细胞核受体超家族中的一种，同时，也是一种孤核受体。其在体内各组织中广泛分布，具有多种重要的生理功能，影响炎症反应的调控，脂代谢的调节，神经组织、淋巴细胞等的发育，B、T淋巴细胞的分化等，因此存在一些与验证反应的调节、脂代谢的调节等相关的疾病的治疗，会尝试使用RORα激动剂，但是未见报道SR1078在治疗酒精性肝损伤的研究。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的之一是提供SR1078在制备治疗酒精性肝损伤药物方面的应用，SR1078能够改善脂肪累积肝损伤情况。

同时，本发明的目的之二在于提供一种治疗酒精性肝损伤的药物组合物。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

SR1078在制备治疗酒精性肝损伤药物方面的应用。

SR1078是一种视黄酸受体相关孤儿受体RORαO种激动剂，其化学结构是如下式(1)所示：

一种治疗酒精性肝损伤的药物组合物，其活性成分包含SR1078。

可选的，上述药物组合物还包括药物上可接受的辅料。

可选的，所述药物组合物的剂型为注射剂、片剂或颗粒剂。

进一步优选的，所述药物组合物的进行为注射剂，辅料包括DMSO、生理盐水，注射剂中SR1078的质量含量为0.1mg/ml，在本发明的实施例中，该注射剂的推荐用法用量为10mg/kg/day，腹腔注射，每天2次。

本发明实施例证实：SR1078改善酒精性肝病小鼠肝脏/体重比；SR1078能够改善酒精性肝病小鼠的血清酶学指标，小鼠谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量明显降低；SR1078能够改善酒精性肝病小鼠肝脏的内质网应激情况，RORα升高，内质网应激的关键蛋白ATF4和CHOP降低；SR1078能够改善酒精造成的肝脏损伤和脂质积累。为酒精性肝病的治疗提供新策略，具有重要的临床治疗意义，表明SR1078能够作为酒精肝损伤治疗药物的活性成分，为日后将开发成酒精性肝病治疗药物提供科学依据。

附图说明

图1是实验组和对照组小鼠肝脏和体重比值对比图，其中EtOH代表对照组，EtOH+SR1078代表实验组；

图2是实验组和对照组小鼠ALT和AST检测结果对比图；其中EtOH代表对照组，EtOH+SR1078代表实验组；

图3是实验组和对照组小鼠对肝损伤中起重要的内质网应激关键蛋白检测结果对比图；其中EtOH为对照组，SR1078为实验组；

图4是实验组和对照组小鼠肝脏组织学HE染色和油红O染色结果对比图；其中EtOH代表对照组，EtOH+SR1078代表实验组。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例

本实施例验证RORα激动剂SR1078对酒精性肝病中的治疗功效：

1.材料：

C57BL/6小鼠，雄性，8～10周龄购于北京维通利华生物科技有限公司；SR1078购至上海Selleck公司；酒精购买于阿拉丁。

2.方法：

2.1实验分组及给药

1)8～10周龄C57BL/6雄鼠给予对普通液体饲料以适应液体饲料饲喂5天，之后饲喂lieber-Decarli酒精饲料(含5％酒精)10天，第11天用31.5％的酒精(0.25g/ml)按5g/kg/day的剂量给小鼠灌胃，分为两组，每组10只，一组为实验组，一组为对照组

实验组在第11天开始用酒精灌胃小鼠的同时，给药SR1078；对照组在同一时间给予同等体积的溶剂(生理盐水+DMSO(DMSO的浓度小于1％))。

2)给药剂量：实验组在第6天灌胃酒精开始，每天两次给予10mg/kg/day的SR1078(将SR1078溶于DMSO中，制备储备液浓度为100mg/ml，临用前用生理盐水稀释成0.1mg/ml(DMSO的终浓度小于1％))，对照组在同一时间给予同等体积的溶剂(生理盐水+DMSO(DMSO的浓度小于1％))。

3)给药方式是：腹腔注射给药。

4)给药时间：每天给药两次，分别在8:00和18:00给药。

2.2.实验过程

1)体重和肝脏检测：使用电子天平称量给药10d天后小鼠体重，小鼠用异氟烷麻醉后，取出肝脏，用吸水纸吸干血液后称量。之后用PBS清洗，用于其他实验取材；

2)小鼠血清学检测：各组小鼠麻醉后，通过心脏取全血，4℃凝固8h,3000rpm离心15min，取上清制备血清。按照试剂盒说明书进行操作，检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的含量；

3)小鼠肝脏分子生物学检测：通过蛋白印记技术检测肝脏组织中RORα、内质网应激关键蛋白ATF4和CHOP蛋白的表达情况：通过SDS-PAGE胶分离蛋白，并转移到PVDF膜上，经过5％牛奶封闭，并用RORα、ATF4和CHOP特异性的抗体4℃孵育过夜，TBST清洗3次并用HRP标记的二抗孵育1小时，TBST清洗3次之后，在条带上滴加millpore的发光液，并用美国GE超灵敏多功能成像仪Amersham Imager 600进行显影。

4)小鼠肝脏组织学HE染色：小鼠麻醉后，将肝脏取出切成小块，浸泡于4％的多聚甲醛固定。染色前，将组织块自来水冲洗过夜后，梯度脱水透化，石蜡包埋，切片、摊片、烤片、烘片。染色时首先梯度水化、苏木素染色、分化、伊红染色、脱水、透化、封片。

并通过显微镜拍摄照片；

5)雄鼠肝脏组织学油红O染色：小鼠麻醉后，将肝脏取出切成小块，浸泡于4％的多聚甲醛固定。48小时之后取出，先后至于15％、20％和30％的蔗糖溶液中脱水。采用OCT包埋机包埋，液氮速冻。切片之前提前一天拿到-20℃，在-20℃的环境下进行切片。染色时，用蒸馏水冲洗5min，60％异丙醇浸泡2s，蒸馏水洗一次，苏木素复染细胞核2s，吸水纸吸干多余水分，甘油明胶封片，显微镜拍照。

3.实验结果：

1)SR1078对小鼠肝脏/体重比值的影响：

分别称量实验组和对照组小鼠体重和肝脏体重，计算每组小鼠肝脏与体重的比值，如图1所示，结果显示SR1078治疗组(实验组)小鼠肝脏/体重比值降低，表明SR1078可以缓解肝脏损伤，降低脂质积累，从而降低肝脏/体重比值；

2)SR1078对小鼠酒精性肝病的血清酶学指标的影响：

分别检测实验组和对照组小鼠血清中ALT和AST含量，结果如图2所示，实验结果显示，与对照组相比，SR1078治疗组(实验组)小鼠谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量明显降低；

3)SR1078给药肝脏分子生物学检测：

如图3所示实验结果显示，SR1078治疗组(实验组)RORα升高，内质网应激的关键蛋白ATF4和CHOP降低，表明SR1078治疗后，肝脏的内质网应激减少，表明SR1078通过缓解内质网应激改善小鼠肝脏脂质积累和损伤；

4)SR1078减少肝脏损伤和脂质积累：

如图4所示实验结果显示，HE染色结果显示，SR1078治疗组(实验组)肝脏损伤得到缓解；油红O染色结果显示，SR1078治疗组(实验组)脂质积累减少。

通过上述实施例可知：SR1078改善酒精性肝病小鼠肝脏/体重比；SR1078能够改善酒精性肝病小鼠的血清酶学指标；SR1078能够改善酒精性肝病小鼠肝脏的内质网应激情况；SR1078能够改善酒精造成的肝脏损伤和脂质积累，表示SR1078具有应用于治疗酒精性肝损伤的临床应用价值，能够作为活性成分制备治疗酒精性肝损伤的药物。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。