胡椒碱在制备预防和/或治疗高尿酸血症的药物中的应用

摘要

本发明属于药物技术领域，公开了胡椒碱在制备预防和/或治疗高尿酸血症的药物中的应用。本发明首次公开了胡椒碱或其衍生物在制备预防和/或治疗高尿酸血症及与高尿酸血症相关的代谢性疾病的药物中的应用，这是基于发明人发现胡椒碱对治疗高尿酸血症的重要药物靶点URAT1具有抑制作用，通过胡椒碱或其衍生物可以显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平，促进尿酸从尿液中排泄，从而改善高尿酸血症及与高尿酸血症相关的代谢性疾病，可用于治疗和/或治疗高尿酸血症及与高尿酸血症相关的代谢性疾病。

说明书

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体涉及胡椒碱在制备预防和/或治疗高尿酸血症的药物中的应用。

背景技术

高尿酸血症是继高血脂，高血糖之后的又一高发病率的代谢疾病，其主要原因为饮食习惯不好造成，如食用大量海鲜，过量饮酒，过多摄取大鱼大肉等。该类食物嘌呤含量过高，尿酸是体内嘌呤类物质的最终代谢产物，体内的腺嘌呤、次黄嘌呤等被肝脏中的黄嘌呤氧化酶催化生成尿酸嘌呤摄入过多或者代谢异常均可导致高尿酸血症的发生进而导致痛风，高血压，心血管疾病和肾脏疾病等。

临床上目前可供选择的降尿酸药物不多，黄嘌呤氧化酶抑制剂是目前临床常用的一类降尿酸药物，该类药物作用于肝脏抑制尿酸的生成，如别嘌呤醇、非布司他等。但别嘌呤醇易引起高敏性反应，非布司他也被美国食品药品监督管理局(Food and DrugAdministration，FDA)提出其易诱发心脑血管疾病。除肝脏外，肾脏是血尿酸排泄的主要部位，肾脏尿酸盐的排泄取决于尿酸盐的重吸收和排泄的平衡，该转运过程涉及一系列转运体，包括尿酸盐重吸收转运体/尿酸有机阴离子转运体(SLC22A12，URAT1)和葡萄糖转运蛋白9(SLC2A9，GLUT9)及促进尿酸排泄的OAT1，OAT3等，该类药物为促尿酸排泄药。其中通过抑制肾小管上转运体URAT1而达到促进尿酸从尿液排泄，如苯溴马隆(BM)，丙磺舒(PB)，雷西纳德(Lesinurad)等，但这些药物因为副作用大，药效差等原因，也限制了其临床上的应用。URAT1是肾脏重吸收尿酸的重要转运体，肾小管中90％以上的尿酸由URAT1重吸收。

当前的降尿酸临床治疗指南表明，促尿酸排泄法和减低尿酸生成法是治疗高尿酸血症的关键点。尽管目前已证实降低尿酸的药物可以控制高尿酸血症，但是总是存在其他不良副作用。例如降低尿酸生成的药物(例如AP和非布索坦)会引起过敏综合征和胃肠道问题，而尿酸排泄药物BM也持续存在不良反应，例如肝脂肪变性。因此，对于预期的未来临床应用，迫切需要开发毒性更小，更有效的高尿酸血症治疗策略。现代药理学研究表明，胡椒碱具有多种药理活性，包括抗肿瘤，抗氧化，降血脂，抗炎，免疫调节。暂时无胡椒碱降尿酸的相关报道。

发明内容

本发明第一个方面的目的，在于提供胡椒碱或其衍生物在制备预防和/或治疗高尿酸血症的药物中的应用。

本发明的第二方面的目的，在于提供胡椒碱或其衍生物在制备预防和/或治疗与高尿酸血症相关的代谢性疾病的药物中的应用。

本发明的第三方面的目的，在于提供胡椒碱或其衍生物在作为和/或制备URAT1抑制剂中的应用。

本发明的第四方面的目的，在于提供一种药物。

为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供胡椒碱或其衍生物在制备预防和/或治疗高尿酸血症的药物中的应用。

胡椒碱(Piperine)是一种生物碱，分子式为C

优选地，所述衍生物包括胡椒碱在药学上可以接受的水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药。

优选地，所述药物还包含药学上可接受的辅料。

优选地，所述辅料为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂和润滑剂中的至少一种。

优选地，所述药物的剂型为固体制剂、液体制剂和半固体制剂中的至少一种。

优选地，所述固体制剂包括片剂、颗粒剂、粉剂和胶囊剂。

优选地，所述液体制剂包括注射剂。

优选地，所述半固体制剂包括软膏剂和霜剂。

本发明的第二个方面，提供胡椒碱或其衍生物在制备预防和/或治疗与高尿酸血症相关的代谢性疾病的药物中的应用。

胡椒碱(Piperine)是一种生物碱，分子式为C

优选地，所述衍生物包括胡椒碱在药学上可以接受的水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药。

优选地，所述与高尿酸血症相关的代谢性疾病为急性痛风、慢性痛风、痛风关节炎、痛风发作、尿酸性肾石病、痛风性肾病、尿路结石和心血管疾病中的至少一种；进一步优选地，所述与高尿酸血症相关的代谢性疾病为尿酸性肾石病、尿路结石和心血管疾病中的至少一种。

优选地，所述药物还包含药学上可接受的辅料。

优选地，所述辅料为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂和润滑剂中的至少一种。

优选地，所述药物的剂型为固体制剂、液体制剂和半固体制剂中的至少一种。

优选地，所述固体制剂包括片剂、颗粒剂、粉剂和胶囊剂。

优选地，所述液体制剂包括注射剂。

优选地，所述半固体制剂包括软膏剂和霜剂。

本发明的第三个方面，提供胡椒碱或其衍生物在作为和/或制备URAT1抑制剂中的应用。

胡椒碱(Piperine)是一种生物碱，分子式为C

优选地，所述衍生物包括胡椒碱在药学上可以接受的水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药。

本发明的第四个方面，提供一种药物，包含以下组分：

(1)胡椒碱和/或其衍生物；和

(2)药学上可接受的辅料。

胡椒碱(Piperine)是一种生物碱，分子式为C

优选地，所述衍生物包括胡椒碱在药学上可以接受的水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药。

优选地，所述辅料为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂和润滑剂中的至少一种。

优选地，所述药物的剂型为固体制剂、液体制剂和半固体制剂中的至少一种。

优选地，所述固体制剂包括片剂、颗粒剂、粉剂和胶囊剂。

优选地，所述液体制剂包括注射剂。

优选地，所述半固体制剂包括软膏剂和霜剂。

优选地，所述药物还包含其他促进尿酸排泄、抑制尿酸合成或者促进尿酸转换成尿囊素的药物。

优选地，所述抑制尿酸合成的药物为别嘌呤醇、非布司他、托匹司他、肌醇和Ulodesine中的至少一种。

优选地，所述促进尿酸排泄的药物为苯溴马隆、雷西纳德、丙磺舒和多替诺德(Dotinurad)中的至少一种。

优选地，所述促进尿酸转换成尿囊素的药物为拉布立酶。

本发明的有益效果是：

本发明首次公开了胡椒碱或其衍生物在制备预防和/或治疗高尿酸血症及与高尿酸血症相关的代谢性疾病的药物中的应用，这是基于发明人发现胡椒碱对治疗高尿酸血症的重要药物靶点URAT1具有抑制作用，通过胡椒碱或其衍生物可以显著降低高尿酸血症患者血清尿酸水平，促进尿酸从尿液中排泄，从而改善高尿酸血症及与高尿酸血症相关的代谢性疾病，可用于治疗和/或治疗高尿酸血症及与高尿酸血症相关的代谢性疾病。

附图说明

图1是胡椒碱和雷西纳德(lesinurad)对URAT1抑制作用的量效关系曲线图：其中，A是胡椒碱对URAT1抑制作用的量效关系曲线图；B是雷西纳德对URAT1抑制作用的量效关系曲线图。

图2是胡椒碱和雷西纳德对高尿酸血症小鼠血清和尿液中尿酸水平的影响图：其中，A是胡椒碱和雷西纳德对高尿酸血症小鼠血清中尿酸水平的影响图；B是胡椒碱和雷西纳德对高尿酸血症小鼠尿液中尿酸水平的影响图；###表示，与对照组相比，p<0.001；*表示，与模型组相比，p<0.05；**表示，与模型组相比，p<0.01；***表示，与模型组相比，p<0.001。

图3是pcDNA3.1(+)-EGFP-URAT1重组质粒的图谱。

具体实施方式

以下通过具体的实施例对本发明的内容作进一步详细的说明。

本实施例中所采用的原料，除特殊说明外，均通过常规手段制备或者通过商业渠道购买。

本实施例中的试剂或试剂的制备方法如下：

卡那霉素和氨苄西林的配制：溶解1g卡那霉素/氨苄西林于足量的ddH

感受态细胞制备：全式金Trans1-T1感受态(货号：CD501-02)，使用前冰上溶解后备用，用于目的基因转化。

液体大肠杆菌培养基的制备：分别称取5g蛋白胨、5g氯化钠、2.5g酵母提取物至500mL洗净的瓶子中，加入超纯水500mL搅拌均匀，121℃高温灭菌20min，灭菌后降温至37℃，加入500μL的卡那霉素(50mg/mL)摇匀，4℃保存，备用。

固体大肠杆菌培养基的制备：分别称取3g蛋白胨、3g氯化钠、1.5g酵母提取物、4.5g琼脂至500mL洗净的瓶子中，加入超纯水300mL，121℃高温灭菌20min，灭菌结束后将固体培养基放置于室温，在培养基未凝固时加入300μL卡那霉素(50mg/mL)，摇匀，倒入无菌的培养皿里，凝固后4℃保存，备用。

实施例1胡椒碱对URAT1的体外抑制作用

1.pcDNA3.1(+)-EGFP-URAT1重组质粒的构建

以pcDNA3.1(+)-EGFP作为表达载体，插入目的基因URAT1(Gene ID：116085)，得到pcDNA3.1(+)-EGFP-URAT1重组质粒(如图3所示)，将重组质粒转化大肠杆菌37℃培养16h后，挑取单克隆，放置于已经制备好的液体培养液中培养，摇菌16h。摇菌后提取质粒，测序，确认得到pcDNA3.1(+)-EGFP-URAT1。

2.多聚赖氨酸包被96孔板

多聚赖氨酸PDL(0.1mg/mL)铺被96孔板24h，然后将PDL弃去，烘箱干燥12h备用。

3.细胞转染

培养HEK293T细胞，待HEK293T细胞生长融合至90％时，将HEK293T细胞接种到经PDL包被的96孔板中，置于37℃，含5％CO

在两个1.5mL的EP管(1号管和2号管)中分别加入25μL Opti培养基(Gibco)，然后在1号管中加入上述质粒(pcDNA3.1(+)-EGFP-URAT1)500ng以及1μL的P3000

4.

(1)胡椒碱(piperine)的

1)制备摄取缓冲液：按以下配方配制摄取缓冲液：140mM NaCl、5mM KCl、1mMMgCl

2)制备含药的摄取缓冲液：用摄取缓冲液稀释胡椒碱母液(20mM)，得到不同浓度的胡椒碱(100,50，25，12.5，6.25μM)，宜现配现用。

3)制备同时含

4)

(2)雷西纳德(lesinurad)的

1)制备摄取缓冲液：按以下配方配制摄取缓冲液：140mM NaCl、5mM KCl、1mMMgCl

2)制备含药的摄取缓冲液：用摄取缓冲液稀释雷西纳德，得到不同浓度的雷西纳德(40,20,10,5,2μM)，宜现配现用。

3)制备同时含

4)

结果如图1所示：胡椒碱和雷西纳德以浓度依赖性的方式抑制URAT1，其IC

实施例2胡椒碱体内降尿酸研究

1.将雄性昆明小鼠(20±2g，购于南方医科大学动物实验中心)保持在标准条件下(温度为25±1℃和50±10％的湿度的受控室内，进行12小时的明/暗循环)，允许小鼠自由进食实验室饮食和水。将小鼠随机分为4组,每组6只小鼠(空白组，模型组，胡椒碱剂量组(10mg/kg BW/d)，阳性药组(雷西纳德，lesinurad))。前六天每天分别给予空白组，模型组羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液，给药组分别给予胡椒碱(10mg/kg)，lesinurad(2.5mg/kg)，第七天模型组，胡椒碱剂量组(10mg/kg BW/d)，阳性药组(lesinurad)(2.5mg/kg)开始给予造模剂350mg/kg PO，构建高尿酸血症模型小鼠(具体方法参见文献：X.Wu,M.Wakamiya,S.Vaishnav,et al.,Hyperuricemia and urate nephropathy in urate oxidase-deficient mice,Proc Natl Acad Sci U S A,1994,91,742-746.)，一小时之后再腹腔注射给与药物，7天后，给予末次降尿酸药物30分钟后眼眶取血。并将小鼠放入代谢笼收集尿液4小时测定尿酸。检测小鼠尿液和血清中尿酸的含量，结果如图2所示：胡椒碱和雷西纳德可显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平，促进尿酸从尿液中排出。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。