丹参CYP76AK5v2的基因克隆引物、表达载体、催化功能及应用

摘要

本发明公开了丹参中一条反向调控丹参酮合成的细胞色素P450基因CYP76AK5v2的编码基因序列；本发明所提供的CYP76AK5v2基因具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，所述基因编码蛋白质具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。本发明检测了CYP76AK5v2在丹参组织中的表达情况，发现其在丹参根和根周皮高丰度表达；构建了CYP76AK5v2‑RNAi载体及CYP76AK5v2‑过表达(CYP76AK5v2‑oe)载体，通过发根农杆菌介导的丹参遗传转化获得转基因毛状根阳性株系；化学检测分析发现，在CYP76AK5v2‑RNAi株系中，丹参酮类化合物含量升高，而在CYP76AK5v2‑oe株系中，丹参酮类化合物含量显著降低。本发明提供的CYP76AK5v2具有反调控丹参酮类化合物生物合成的功能，可能参与丹参酮生物合成途径的竞争途径。本研究有助于解析植物次生代谢途径分子机制，为丹参酮的合成生物学研究奠定基础。