提高肌痛性脑脊髓炎患者运动耐量的方法

摘要

本发明涉及治疗患有肌痛性脑脊髓炎/慢性疲劳综合征症状的受试者的方法，所述方法包括：向目标受试者施用包含治疗性dsRNA(tdsRNA)的药物组合物。

说明书

背景技术

肌痛性脑脊髓炎/慢性疲劳综合征(ME/CFS)是一种衰弱性疾病，其特征是不能通过卧床休息改善的丧失能力的疲劳，包括各种不同的体征和症状的组合。大多数病人是女性。ME/CFS的病因学/病原基础尚不清楚，可能是多因素的——多种微生物、激素和免疫异常与其发病机制相关，并依赖于遗传特征。

发明内容

本公开提供了用于鉴定和治疗对治疗性dsRNA(tdsRNA)的治疗有反应的ME/CFS患者亚群的方法，所述患者在本文中被称为目标受试者。本公开的方法和组合物还可用于筛选临床试验的受试者，并促进对受试者的治疗决策。

一个实施方案涉及治疗患有肌痛性脑脊髓炎/慢性疲劳综合征症状的受试者的方法。该方法包括两个步骤。第一步包括确定受试者是在治疗前2至8年出现ME/CFS症状的目标受试者。第二步包括向所述目标受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含作为活性成分的有效量的治疗性dsRNA(tdsRNA)。本公开的发现之一是，在约2至约8年之间出现ME/CFS症状的目标受试者对用tdsRNA治疗反应更明显。

另一方面涉及本公开的方法(例如，上述方法)，其中目标受试者表现出约2至约8年的ME/CFS症状，以及持续约24小时或更长时间的运动后不适(PEM)。

另一方面涉及本公开的方法(例如，上述方法)，其中与治疗前相比，治疗使所述目标受试者在治疗后的运动耐量增加了至少25％的临床显著量。

另一方面涉及本公开的方法(例如，上述方法)，其中至少40％至50％或更多的目标受试者表现出运动耐量增加至少25％。

另一方面涉及本公开的方法(例如，上述方法)，其中给药是颊部给药、植入给药、吸入给药、滴注给药、雾化给药、栓剂给药、肠内给药、上皮给药、颅内给药、皮内给药、肌内给药、鼻内给药、眶内给药、腹膜内给药、鞘内给药、气管内给药、静脉注射给药、心室内给药、膀胱内给药、口服给药、肠外给药、皮下给药、舌下给药、局部给药、经皮给药、经粘膜给药、或其组合。

另一方面涉及本公开的方法(例如，上述方法)，其中所述药物组合物以平均每治疗日提供约25-700毫克tdsRNA的剂量每周向受试者给药一至三次，持续最多一个月、超过一个月、最多一年，或者超过一年。

另一方面涉及本公开的方法(例如，上述方法)，其中所述药物组合物以平均每治疗日提供约25-700毫克tdsRNA的剂量每周向所述受试者静脉内给药一至三次，持续至少一个月或超过一个月、最多一年，或者超过一年。在本说明书中，“每治疗日”有时简称为“每天”。

另一方面涉及本公开的方法(例如，上述方法)，其中受试者是人。

另一方面涉及本公开的方法(例如，上述方法)，其中所述治疗性dsRNA是选自以下dsRNA的至少一种dsRNA：rI

另一方面涉及本公开的方法(例如，上述方法)，其中所述治疗性dsRNA包含最少90重量％的dsRNA，其大小大于以下数量的碱基对：40个碱基对、50个碱基对、60个碱基对、70个碱基对，以及80个碱基对。

另一方面涉及本公开的方法(例如，上述方法)，其中所述治疗性dsRNA包含最少90重量％的dsRNA，其大小小于以下数量的碱基对：10,000个碱基对、9,000个碱基对、8,000个碱基对，以及7,000个碱基对。

另一方面涉及本公开的方法(例如，上述方法)，其中所述治疗性dsRNA具有约4个至约5,000个螺旋的双链RNA链。

另一方面涉及本公开的方法(例如，上述方法)，其中治疗性dsRNA的分子量为约10千道尔顿至约30,000千道尔顿。

另一方面涉及本公开的方法(例如，上述方法)，其中治疗性dsRNA包含强固性dsRNA，并且所述强固性dsRNA占所述药物组合物中总RNA的重量百分比大于以下数值：1重量％、5重量％、10重量％、20重量％、30重量％、40重量％、50重量％、60重量％、70重量％、80重量％，以及90重量％。

另一方面涉及本公开的方法(例如，上述方法)，其中tdsRNA与稳定聚合物复合。例如，聚合物可以选自聚赖氨酸、聚赖氨酸+羧甲基纤维素、聚精氨酸、聚精氨酸+羧甲基纤维素、聚ICLC、及其组合。

附图说明

图1描述了ME/CFS患者第40周时的运动跑步机耐量测试(ETT)相比基线增加超过25％，其中卡方试验得出p值。

图2描述了相对于雷他莫德(Rintatolimod)，安慰剂调整的组内平均运动百分比提高量。

图3描绘了使用雷他莫德治疗的通过运动跑步机耐量测试(ETT)测量的患者反应(大于或等于25％对比小于25％)。

具体实施方式

本公开部分涉及一种被称为治疗性dsRNA(tdsRNA)的dsRNA，其优选实施方案是雷他莫德(例如，安普利近

就本公开而言，tdsRNA可以指本公开中讨论的任何dsRNA，尤其是本节中公开的任何dsRNA。

tdsRNA的一个实施方案是雷他莫德。雷他莫德(例如聚I:聚C

聚I:聚C

tdsRNA的另一个实施方案是如下所述的特定类型的错配dsRNA。错配dsRNA可以具有通式rI

rI

例如，r(C

因此，rI

在本公开中，除非另有说明，否则施于患者的所有多核苷酸都是dsRNA或其化学类似物，例如核糖肌苷(即，除非另有说明，否则是RNA而不是DNA)。“n”是dsRNA的长度(以碱基为单位)，n是整数，其值为40-50,000；10到440,000；10到500；10-50或40-500(强固性dsRNA)。在这个公式和其他公式中，r＝核糖，rI＝肌苷。

用于本发明的其它错配的dsRNAs是基于共多核苷酸，如聚(C

另一方面涉及通过修饰聚(核糖苷酸)核糖(In)的核糖基骨架，例如通过包含2'-O-甲基核糖基残基得到源自核糖(I)、核糖(C)的特定构型的dsRNA。还可以在分子末端修饰特定构型的dsRNA，以添加铰点来防止碱基对的滑动，从而在人生物流体中存在的溶剂或水环境中赋予特定的生物活性。美国专利4,024,222、4,130,641和5,258,369(通过引用并入本文)中描述的特定构型的dsRNA通常适合在选择强固性dsRNA后作为起始材料。虽然本公开描述了强固性dsRNA，但本公开中描述的其它非强固性dsRNA(包括tdsRNA)仍然是生产强固性dsRNA的合适的起始材料。在任何实施方案中，包括强固性dsRNA在内的tdsRNA可与稳定化聚合物，如聚赖氨酸、聚赖氨酸+羧甲基纤维素、聚精氨酸、聚精氨酸+羧甲基纤维素、或其任意组合复合。

用作tdsRNA的错配dsRNA的其他例子包括：rI

简而言之，tdsRNA是一种dsRNA，如下所述。应该了解，即使没有说明，如果一条链的长度是n，另一条链的长度也是n。此外，在要求范围的情况下，要求保护的是比例的每个中间值。

例如，rI

作为另一个实施例，rI

具体构型的tdsRNA可以具有以下通式：ribo(I

对于受试者(如150Ib或70Kg的人)，dsRNA的剂量范围为0.1至1,000,000μg，优选0.4至400,000μg。

错配的dsRNA可以通过任何已知的给药方法给药(例如，参见“给药方法”的详细描述以获得更详细的列表)。

用于给药的制剂包括水溶液、糖浆、酏剂、粉末、颗粒、片剂和胶囊，其通常包含常规赋形剂，例如粘合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂、润湿剂、悬浮剂、乳化剂、防腐剂、缓冲盐、调味剂、着色剂和/或甜味剂。它们可以用喷雾器或雾化器鼻腔给药。应该理解的是，优选的途径将随着接受者的状况和年龄、感染或情况的性质以及所选择的活性成分而变化。

在另一方面，错配的dsRNA可以是强固性dsRNA(参见，例如美国专利8,722,874和美国专利9,315,538)。一方面，强固性dsRNA可以是分离的双链核糖核酸(dsRNA)，其在能够分离杂化的聚(核糖肌苷酸)和聚(核糖胞苷酸)链的条件下抗变性，其中所述分离的dsRNA的一个单链包含一个或多个尿嘧啶或鸟嘌呤碱基，所述碱基不与相对的链的碱基配对，并且其中所述单链由聚(核糖胞嘧啶

合成后，强固性dsRNA可以通过以下方式进行分离：至少使dsRNA群体的部分杂化链经受使群体中大多数dsRNA变性的条件(大于10wt％或10mol％、大于20wt％或20mol％、大于30wt％或30mol％、大于40wt％或40mol％、大于50wt％或50mol％、大于60wt％或60mol％、大于70wt％或70mol％、大于80wt％或80mol％、大于90wt％或90mol％，超过95wt％或95mol％，或超过98wt％或98mol％)，然后对保持部分杂化的dsRNA进行负选择或正选择(或两者兼有)。展开至少部分杂化的dsRNA链的变性条件可以包括适当选择的缓冲盐、pH、溶剂、温度或其任意组合。变性条件可以通过观察核糖核酸双链的展开或溶解来凭经验确定。强固性dsRNA的产量可以通过部分水解较长的核糖核酸链来提高，然后选择具有合适大小且可抗变性的(部分)杂化链。

因此，相对于合成后群体中所有的RNA，强固性dsRNA的纯度可以从小于约0.1-10mol％(例如，强固性dsRNA为至少0.1mol％或0.1wt％，但小于约10mol％或10wt％)提高到更高的纯度。更高的纯度可以大于20wt％或20mol％、大于30wt％或30mol％、大于40wt％或40mol％、大于50wt％或50mol％、大于60wt％或60mol％、大于70wt％或70mol％、大于80wt％或80mol％、大于90wt％或90mol％、大于98wt％或98mol％。所有wt％或mol％都是相对于同一组合物中存在的所有RNA而言的。

强固性dsRNA的分子量可以从大约250kDa到大约320kDa，或者从大约270kDa到大约300kDa。一条或两条强固性dsRNA链的长度可以从大约380个碱基到大约450个碱基，或者从大约400个碱基到大约430个碱基。由强固性dsRNA的双RNA链形成的螺旋数可以从约30到约38，或从约32到约36。

在另一方面，至少一种或多种不同的强固性dsRNA可被施用需要这种治疗的受试者(例如，人类患者或动物)。

错配dsRNA的推荐剂量取决于受试者的临床状况以及医生或兽医治疗疾病或其他病理状况的经验。错配的dsRNA可以每天约0.5mg至约60mg，每天约5mg至约400mg，每天约25mg至约700mg，或每天约10mg至约800mg的剂量给药于受试者(例如，人类患者的体重约为70-80千克)，给药方案为每天一次、持续一周7天，或每周一次至每周三次(优选每周两次)，尽管剂量和/或频率可由医生或兽医对应受试者的症状而改变。也就是说，例如，可以每隔一天给药50-1400mg，即每天平均剂量为25-700mg。

固体形式的核酸可以使用已知的给药稀释剂溶解，例如生理磷酸盐缓冲盐水，然后进行静脉输液。应当理解，优选的剂量可以随着受试者的年龄、病情、性别或患者的健康状况、疾病或其他病理状况的性质、以及所选的活性成分而变化；所述疾病或其他病理状况的性质包括症状的数量和严重程度。

用于确定患者是否具有ME/CFS的两个实施例也适用于本公开的所有方面，并作为如表1所示的1988年慢性疲劳综合征病例定义或表2所示的1994年慢性疲劳综合征病例定义的诊断标准。可以通过本公开的方法治疗的受试者(患者)可以是那些满足1988年慢性疲劳综合征定义(表1)、满足1994年慢性疲劳综合征的定义(表2)或同时满足1988年定义和1994年定义的慢性疲劳综合征(表1和2)的受试者，或者那些满足其他合适的病例定义的病例，例如，2003年加拿大ME/CFS共识标准、2015年的ME/CFS IOM诊断标准等。

运动后不适是一系列症状，包括快速肌肉或认知疲劳、头痛、肌肉疼痛、全身无力、认知缺陷、失眠和淋巴结肿大。这些症状伴随着精神或体力消耗，持续约24小时或更长时间。

包含一种或多种上述活性剂的药物组合物可以通过本领域已知的任何局部或全身途径给药于受试者(参见，例如，“给药方法”的详细描述以获得更详细的列表)。药物组合物和/或活性剂可以通过将固体材料制粉或研磨而微粉化，溶解在用于注射或滴注(例如，喷雾)的载体(例如，无菌缓冲盐水或水)中局部施用，或包封在脂质体或其它用于靶向递送的载体中。应当理解，优选的途径可以随着受试者的年龄、病症、性别或健康状况、疾病或其他病理状况的性质(包括症状的数量和严重程度)、所选的活性成分而变化。

用于给药的制剂(即药物组合物)可包括水溶液、糖浆、酏剂、粉末、颗粒、片剂和胶囊，其通常包含常规赋形剂，例如粘合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂、润湿剂、悬浮剂、乳化剂、防腐剂、缓冲盐、调味剂、着色剂和/或甜味剂。应当理解，优选的制剂可以随着受试者的年龄、病症、性别或健康状况、疾病或其他病理状况的性质，包括症状的数量和严重程度、所选的活性成分而变化。

另一方面，提供了包含免疫激活剂的药物(例如药物组合物)。药物的任选的其它组分包括在一个或多个单独容器(例如鼻涂药器或注射瓶)中无菌包装的赋形剂和载体(例如含水缓冲液或注射用水)。还提供了使用和制备该药物的方法。从以下描述和权利要求及其任何概括中，其他方面将是显而易见的。

组合物以有效量递送。术语“有效量”指实现所需生物效果所必需或足够的量。结合本文提供的教导，通过在各种活性化合物中进行选择并权衡诸如效力、相对生物利用度、患者体重、疾病严重程度、副作用和优选的给药方式等因素，可以计划有效的预防性或治疗性治疗方案，该方案不会引起实质毒性，但对治疗特定受试者有效。此外，根据测试，抑制剂的毒性预计较低。任何特定应用的有效量可以根据诸如所治疗的疾病或病症、所施用的特定抑制剂、受试者的大小或疾病或病症的严重程度等因素而变化。本领域的普通技术人员可以凭经验确定特定活性成分的有效量，而无需过多的实验。通常优选使用最大剂量，即根据医学判断的最高安全剂量。

对于本文所述的任何化合物，治疗有效量可以从初步体外研究和/或动物模型中初步确定。治疗有效剂量也可以从已经在人体中测试的抑制剂和已知具有类似药理活性的化合物的人类数据中确定，例如其它相关活性剂。这可以根据所给化合物的相对生物利用度和效力来调整应用剂量。基于上述方法和本领域众所周知的其他方法调节剂量以获得最大功效是本领域普通技术人员力所能及的。

用于治疗受试者的合适的给药/治疗方案包括，例如，给患者(受试者)施用有效量的tdsRNA。

在一些实施方案中，本发明的联合治疗包括施用tdsRNA。本公开中的任何化合物或化学品或制剂可以通过公开的任一给药方法给药。可以以本领域已知的任何合适的方式施用tdsRNA。例如，可以顺序地(在不同的时间)或以一次剂量或大剂量施用tdsRNA。在一些实施方案中，持续施用tdsRNA。

给药期间通常约为1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、1周、2周、3周、4周、一个月、多于一个月、一年或多于一年。

在某些实施方案中，施用tdsRNA的频率为每日给药一次，每2天给药一次，每3天给药一次，每4天给药一次，每5天给药一次，每周两次，每周一次，每两周一次，每三周一次，每四周一次，或每月一次，或所述值之间的任何值。

在特定的方面，例如，以每两周约1mg/kg至10mg/kg的剂量施用tdsRNA。

在某些实施方案中，tdsRNA的给药剂量为约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约15mg//kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg，所述值之间的任何值，或者所述值之间的任何范围。范围的实施例是4至20mg/kg或6至20mg/kg。

作为上述内容的其他实施例，以下范围也是适用的和可预见的：约0.1mg/kg至约30mg/kg、约0.1mg/kg至约20mg/kg、约0.1mg/kg至约10mg/kg、约0.1mg/kg至约8mg/kg、约0.1mg/kg至约7mg/kg、约0.1mg/kg至约6mg/kg、约0.1mg/kg至约5mg/kg、约0.1mg/kg至约4mg/kg、约0.1mg/kg至约3mg/kg、约0.2mg/kg至约3mg/kg、约0.3mg/kg至约3mg/kg、约0.4mg/kg至约3mg/kg、约0.6mg/kg至约3mg/kg、约0.8mg/kg至约3mg/kg、约0.1mg/kg至约2mg/kg、0.1mg/kg至约1mg/kg。

总日剂量可以在约20mg至约800mg之间变化，优选约50mg至约600mg，最优选约100mg至约400mg。

在某些实施方案中，tdsRNA的给药剂量为每日给药两次、每日给药一次、每周一剂，每周两剂，每周三剂，每周四剂，每周五剂，或每周六剂或更多剂。

一个实施方案中，tdsRNA的给药剂量为约0.50mg/kg至10mg/kg，每周两次，每周一次，每隔一周一次。

为了预防或治疗慢性疲劳综合征，可以施用有效量的tdsRNA，以减轻症状和/或增加运动耐受性或运动表现。适当的tdsRNA剂量可根据待治疗的症状、tdsRNA的类型、ME/CFS的严重程度和病程、受试者的临床状况、受试者的临床病史和对治疗的反应、所涉及的症状、受试者的体重、性别、免疫状态和主治医生的判断来确定。本领域技术人员可以通过考虑这些因素来选择合适的方案。

因此，一个实施方案中，tdsRNA的剂量按mg/kg体重计算。然而，在另一个实施方案中，tdsRNA的剂量是稳定的固定剂量，与患者的体重无关。

tdsRNA可以通过相同的给药途径或不同的给药途径给药。例如，在一些实施方案中，tdsRNA的给药途径为颊部给药、皮下注射给药、吸入给药、滴注给药、雾化给药、栓剂给药、肠内给药、上皮给药、颅内给药、皮内给药、肌内给药、鼻内给药、眶内给药、腹膜内给药、鞘内给药、气管内给药、静脉注射给药、心室内给药、膀胱内给药、口服给药、肠外给药、皮下给药、舌下给药、局部给药、经皮给药、经粘膜给药、或其组合。

本文使用的术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”、“治疗(treated)”或“治疗(treatment)”是指治疗性治疗，其中目标是消除或减轻症状。有益的或期望的临床结果包括但不限于症状的消除、症状的缓解、病情程度的减轻、病情的稳定(即，不恶化)、病症发展的延迟或减缓。

如本文所用的，“受试者”是哺乳动物，优选人类。除了本发明范围内的人类、哺乳动物种类，还包括例如农场动物、家养动物、实验室动物等。农场动物的一些示例包括牛、猪、马、山羊等。家养动物的部分示例包括狗、猫等。实验动物的部分示例包括非人灵长类动物、大鼠、小鼠、兔子、豚鼠等。在这个和其他实施方式的一些方面，受试者是哺乳动物。优选地，哺乳动物选自人类、灵长类动物、农场动物和家养动物。更优选地，哺乳动物是人。这里使用的术语“患者”或“受试者”可互换，指的是哺乳动物，包括但不限于人类或非人类哺乳动物，例如牛、马、犬、羊或猫。优选地，患者是人。

“减少或抑制”是指导致总体减少20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的能力。减轻或抑制可以指正在治疗的病症的症状。

如本文所用，术语“改善(ameliorate)”、“改善(ameliorating)”及其语法变化意味着降低受试者疾病症状的严重性。

在本发明中，本文公开的tdsRNA的“有效量”或“治疗有效量”指的是当施用给受试者时，足以产生本文所述的有益或期望的结果的物质的量。有效剂型、给药方式和剂量根据本领域技术基于经验确定。本领域技术人员可以理解的是，剂量随给药途径、排泄率、治疗持续时间、任何其它给药药物的特性、哺乳动物(例如人类患者)的年龄、大小和种类以及医学和兽医学领域熟知的类似因素而变化。一般来说，本文公开的任何活性剂或含有该活性剂的组合物的合适剂量将是该活性剂或组合物的量，这是有效产生所需效果的最低剂量。

对选择性TLR3激动剂雷他莫德的双盲、随机、安慰剂对照试验分析显示，通过运动跑步机耐量测试(ETT)测量，疲劳缓解具有统计学意义(p<0.05)。雷他莫德也注册为

208名受试者(n＝208)的意向治疗(ITT)人群被分为两个亚组。第一亚组包含具有ME/CFS症状的受试者，可选地包括这些也具有持续约24小时或更长的PEM、持续2-8年的ME/CFS症状的受试者，第一亚组中总共有75个受试者(n＝75)。第二亚组包含不符合第一个亚组的受试者。例如，第二亚组的成员是那些ME/CFS症状持续时间小于2年或大于8年的成员，第二亚组中共有133名受试者(n＝133)。

对于以下几种情况，对基于跑步机倾斜的运动跑步机持续时间和运动跑步机耐量测试数据的垂直升高分量进行分析，

a：应答者亚组，其中n＝75

b：非应答者亚组，其中n＝133；和

c：意向治疗人群，其中n＝75+133＝208。

在208名受试者的意向治疗人群中，接受雷他莫德的患者比例(39％)明显高于安慰剂组(23％)，前者的运动跑步机持续时间改善量大于或等于25％(p＝0.013)。对于其基线肌痛性脑脊髓炎/慢性疲劳综合征(ME/CFS)症状持续2-8年(即应答者亚组)的亚组的患者，51.2％的患者、17.6％的使用雷他莫德患者、安慰剂患者的运动持续时间分别改善25％(p＝0.003)。在意向治疗人群中，安慰剂调整后的改善率为15.9％，而在2-8年的患者亚组的改善率为33.6％。安慰剂调整的运动持续时间的改善百分比和2-8年亚组的垂直升高是意向治疗人群的两倍多。与安慰剂相比，少于2年和多于8年的亚组(无应答者亚组，其中n＝133)未显示任何响应于雷他莫德的临床显著的运动跑步机耐量测试(ETT)。

对使用雷他莫德的双盲、随机、安慰剂对照研究的运动跑步机数据进行分析，发现与意向治疗(ITT)人群相比，ME/CFS患者的亚组出现症状的时间为2-8年，运动反应增加了2倍多。大多数严重虚弱的患者(51.2％)的身体表现得到了显著改善，他们的运动时间延长了≥25％。在该研究人群中，运动持续时间的≥25％改善与生活质量的临床显著改善相关。在这些患有严重ME/CFS的患者中，雷他莫德通常耐受性良好。

单链聚(I)和聚(C

在退火步骤中混合等摩尔量的ssRNA，并冷却至室温。溶液经过无菌过滤。

所需的强固性dsRNA或dsRNA的另一部分通过高效液相色谱法(HPLC)从退火的dsRNA中产生。本公开的其他部分定义了强固性dsRNA的特征。

在临床试验中，严重的ME/CFS受试者在系统使用雷他莫德后，在主要评估指标运动跑步机耐量测试(ETT)上表现出显著的改善。在这项研究中，雷他莫德每周给药两次，持续40周，而对对照受试者施用安慰剂，持续40周。

这项主要基于基线ME/CFS症状持续时间的亚组(n＝75)的跑步机运动耐量(ETT)的反应分析显示，与意向治疗(ITT)人群(n＝208)相比，安慰剂调整的雷他莫德改善率高出2倍还多。

该研究是一项前瞻性、双盲试验，进行了等同的平行群体研究，以评估雷他莫德对ME/CFS的安全性和有效性。许多ME/CFS患者(本文也称为受试者)不能进行通常用于评估心脏功能的标准布鲁斯亚最大运动方案。出于患者安全的原因，使用了一种改进的布鲁斯ME/CFS方案，该方案在能量需求方面类似于为老年人设计的布鲁斯方案。主要评估指标是从基线到第40周的运动跑步机耐量测试(ETT)的变化。

这些分析使用了SAS(9.2版)统计软件(Cary,NC)。所有的统计分析都是双向的。运动跑步机的持续时间和垂直升高采用双面学生T测试进行分析。使用卡方检验对至少改善25％运动跑步机耐量测试(ETT)的患者比例的比较进行分析。研究参与者被要求使用改进的布鲁斯方案进行运动跑步机耐量测试(ETT)测试，该方案通过7次调升，每次增加3％，将跑步机倾斜度从0％逐渐增加到21％。运动跑步机耐量测试(ETT)测试方案有一个垂直分量，该分量是为完成的每个倾斜阶段计算的。尝试的最后一个阶段通常只是部分完成，也包括在基于完成百分比的计算中。计算每个患者从基线到第40周的垂直升高的增加，并表示为垂直“爬升”的英寸数。

与整个意向治疗(ITT)人群相比，主要基于ME/CFS症状持续时间，意向治疗(ITT)人群(n＝208)的群组(应答者亚组)被确定为运动跑步机耐量测试(ETT)应答的两倍。应答者亚组由症状持续时间为2-8年的ME/CFS患者组成(n＝75)。无应答者人群由不符合应答者亚组定义的意向治疗(ITT)人群亚组组成。

表3说明了应答者和非应答者亚组的人口统计数据。平均年龄、年龄范围和性别在亚组和原始意向治疗(ITT)人群之间匹配良好。然而，根据选择标准的预期，在开始服用雷他莫德/安慰剂(p<0.001)之前，在ME/CFS症状持续时间的两个亚组中观察到显著差异。

表3.意向治疗(ITT)人群与应答者和非应答者亚组的人口统计比较

*非应答者亚组由不包括在应答者亚组的意向治疗(ITT)人群的剩余部分组成。

表4说明了应答者亚组和非应答者亚组在跑步机耐受方面的显著差异。在应答者亚组中，雷他莫德和安慰剂组之间的差异为122.5秒，而在非应答者亚组中为30.1秒，在意向治疗(ITT)人群中为67.5秒。意向治疗(ITT)人群(n＝208，p＝0.043)和应答者亚组(n＝75，p＝0.047)在运动跑步机耐量测试(ETT)上的差异具有统计学意义。

表4：意向治疗(ITT)人群与应答者和非应答者亚组在从基线到第40周的平均运动跑步机耐量测试(ETT)持续时间(秒)变化上的比较

Δ＝雷他莫德和安慰剂之间的差异

*学生T测验(双面)

表4还显示了从基线到第40周组内平均运动持续时间的增加百分比。安慰剂调整后的平均增加显示在Δ后。应答者亚组(Δ＝23.6％)的增加是意向治疗(ITT)人群(Δ＝11.8％)的两倍。

在图1所示的应答者分析中，进一步说明了对雷他莫德的反应的差异。图1描述了患有ME/CFS的患者从基线到第40周在运动跑步机耐量测试(ETT)上的增加大于或等于25％。在图1中，p值来自卡方检验。在雷他莫德段(arm)对安慰剂(23.1％)中看到的运动跑步机耐量测试(ETT)应答者的百分比(运动持续时间提高≥25％)(39.0％)对于意向治疗(ITT)人群(p＝0.013)具有统计学意义。在应答者亚组中，相对于安慰剂(17.6％)(p＝0.003)，接受雷他莫德的大多数患者(51.2％)是运动跑步机耐量测试(ETT)应答者。图1中显示的应答者亚组(Δ＝33.6％)p值以下安慰剂调整后的应答者百分比差异是意向治疗(ITT)人群(Δ＝15.9％)的两倍。无应答者亚组的差异仅为4.8％(p＝0.54)。≥25％的增加值是基于FDA(美国食品和药物管理局，抗病毒药物产品司)的要求，即建立一个有意义的百分比变化，该变化高于患者内部运动耐量的可变性。

运动跑步机耐量测试(ETT)方案包括以7个3％的增量从0％逐渐增加到21％的倾斜度。计算每个受试者的垂直升高英尺数。表5显示了意向治疗(ITT)人群(n＝208)和两个亚组从基线到第40周的垂直升高的平均变化。治疗意向(ITT)人群中，雷他莫德组的垂直升高改善量(56.9英尺)比安慰剂组(22.5英尺)大得多(p＝0.033)。

表5：意向治疗(ITT)人群与应答者和非应答者亚组在从基线到第40周的平均运动跑步机耐量测试(ETT)垂直升高(英尺)变化上的比较

Δ＝雷他莫德和安慰剂之间的差异

*学生T测验(双面)

雷他莫德组的应答者亚组(n＝75)的垂直升高幅度为85.2英尺，而安慰剂组为23.3英尺。垂直升高的差异为61.9英尺，处于统计学显著性阈值(p＝0.050)。尽管如此，组内增加百分比的差异意味着在应答者亚组中观察到的雷他莫德和安慰剂组之间的差异70.3％是意向治疗(ITT)人群(28.6％)的两倍多。在无应答者亚组中，雷他莫德组和安慰剂组的垂直升高幅度分别为37.3英尺和22.2英尺，这没有统计学意义(p＝0.401)。

Toll样受体(TLR)通过诱导先天免疫作为对抗微生物病原体的第一道防线，并进一步为诱导适应性免疫反应提供初始细胞协调，以提供部分由炎症细胞因子介导的特异性体液和细胞介导的免疫。它们尤其可以在树突状细胞(DC)中发现，树突状细胞是宿主适应性免疫反应系统的核心。除了TLR3使用MyD88非依赖性TRIF通路外，所有的TLR都使用MyD88依赖性信号通路。启动先天免疫反应的另外两种dsRNA激活的基因表达诱导剂是胞内解旋酶、MDA5和RIG-1。与TLR3的其他dsRNA激活剂(例如，聚I：聚C，病毒dsRNA)相比，雷他莫德(聚I:聚C

这项分析提出了令人惊讶和意想不到的发现。也就是说，主要由ME/CFS症状的持续时间(2-8年)定义的患者亚组显示出对雷他莫德的临床有益反应的可能性增加(图2)。心肺运动耐受测试是对身体疲劳疗效的客观衡量，并被接受为批准改善运动疲劳药物的监管标准。因此，在FDA的要求下，根据FDA先前对福辛普利(Fosinopril)和卡托普利(Captopril)两种药物(通过运动耐量试验(图2)显示对慢性心力衰竭有所改善)的批准，定义临床显著的运动跑步机耐量测试(ETT)改善量时，组内平均运动耐量上≥6.5％的改善在方案中预先定义为显示了雷他莫德对于ME/CFS的疗效。该方案经FDA审查并授权进行。研究完成后，FDA现已批准五种药物用于改善充血性心力衰竭、慢性心绞痛或肺动脉高压的运动耐量(图2)。图2描述了雷他莫德的安慰剂调整组内平均运动改善百分比：意向治疗(ITT)人群和应答者亚组超过了批准用于非ME/CFS严重运动疲劳的药物。五个中的四个提供了6.5％或更少的运动耐量改善。经批准用于肺动脉高压的波生坦(Tracleer)提供了11％的改善，而雷他莫德意向治疗(ITT)人群的改善率为11.8％。在有2-8年症状的意向治疗(ITT)人群中，应答者亚组对雷他莫德的应答增加，改善率为23.6％，是FDA批准的5种药物中任何一种的临床改善/生活质量益处的两倍以上。

在2-8年应答者亚组与意向治疗(ITT)人群中观察到的最重要的安慰剂调整的运动耐量反应可总结如下：(a)ITT的运动持续时间比安慰剂(秒)长67.5秒，而2-8年的亚组比安慰剂(秒)长122.5.秒；(b)ITT的组内平均净ETT持续时间增加的百分比为11.8，而2-8年的亚组组内平均净ETT持续时间增加的百分比为23.6；(c)ITT组中ETT持续时间净增加≥25％的患者百分比为15.9％，2-8年的亚组中ETT持续时间净增加≥25％的患者百分比为33.6；(d)ITT组中显示净组内平均垂直升高(英尺)的患者百分比为28.6％，而2-8年的亚组中显示净组内平均垂直升高(英尺)的患者百分比为70.3％。

雷他莫德是一种dsRNA(聚I:聚C

为了保持雷他莫德临床试验之间的直接可比性，仅仅评估对那些符合使用原始1988CDC标准的纳入标准的ME/CFS受试者的疗效和安全性。本试验登记的患者同时符合CDC1988年的诊断标准和更宽松的1994年CDC的病例定义。一个国际财团在2011年提出肌痛性脑脊髓炎是综合征的一个更好的术语。深度疲劳仍然是所有定义的核心描述符。雷他莫德临床试验的重点是减轻核心症状及其对生活质量的影响。

通过静脉输注给药的雷他莫德通常耐受性良好。最常见的不良事件是类感冒症状，包括头痛、寒战、发热、潮红和肌痛，大约44-45％的雷他莫德患者表现这些症状，而安慰剂组表现这些症状的患者为30-33％。

在这项研究中，雷他莫德对于改善患有ME/CFS的患者亚组的运动耐量和生活质量显然是积极的。在这项研究中，接受雷他莫德的严重虚弱的ME/CFS患者在运动持续时间上改善了≥25％，也证明了在两个生活质量次要指标，即卡尔诺夫斯基表现评分(KPS)和活力评分(SF-36)中，表现出相应的临床显著改善。活力评分从基线时的9.49分增加到第40周的24.10分，增加了14.6分，几乎是最低临床重要差异(MCID)的5分的三倍。活力评分是衡量CFS患者功能减退的最佳SF-36分量表之一。KPS中位数从50增加到60，提高了10个百分点。KPS增加10个百分点被预先定义为临床显著改善。KPS从50增加到60表明，KPS为50的患者需要护理人员的大量帮助来完成他们所需的日常活动(即洗澡、穿衣、打扮、准备食物、吃饭等)，现在KPS 60只需要偶尔的帮助(每周一到两次)就可以完成同样的日常活动。重要的是，KPS增加10分和活力评分增加14.6分的这些改进都与临床相关，表示生活质量的客观改善。

2-8年应答者亚组中的大多数患者(51.2％)的运动跑步机耐量测试(ETT)提高了≥25％。在现实生活中，运动跑步机耐量测试(ETT)持续时间平均值提高≥25％意味着什么？例如，运动跑步机耐量测试(ETT)持续时间提高了≥25％的严重衰弱的ME/CFS受试者在爬楼梯能力上可能会有什么提高？图3通过比较意向治疗(ITT)人群和两个亚组从基线到第40周的垂直升高英尺数的变化，显示雷他莫德治疗的患者的运动跑步机耐量测试(ETT)反应(≥25％对比<25％)。在意向治疗(ITT)人群和应答者亚组(图3)中，运动跑步机耐量测试(ETT)应答者(增加≥25％)和无应答者(增加<25％)之间的差异是，运动跑步机耐量测试(ETT)应答者能够比无应答者多爬相当于约19层楼梯或约190英尺的垂直距离(假设10英尺/层楼梯)。

对于意向治疗(ITT)人群(n＝100)，39％的患者在运动跑步机耐量测试(ETT)上改善了≥25％，并且相比于基线，这些患者在第40周能够攀爬相当于174.6多英尺的垂直距离。175垂直英尺是平均在额外的大约6-8分钟内在倾斜度12-21％的跑步机上运动实现的。没有改善至少25％的患者的攀爬能力平均下降了18.3英尺。应答者亚组也有类似的结果，这些患者中有51.2％的人运动跑步机耐量测试(ETT)提高了≥25％(垂直的181.1英尺)。即使在无反应亚组中，运动跑步机耐量测试(ETT)改善≥25％的患者也能再往上爬约167垂直英尺。因此，总体而言，与基线相比，运动跑步机耐量测试(ETT)提高≥25％的患者能够爬上平均大于约17.5层楼梯。与安慰剂(图1)相比，雷他莫德治疗显著增加了意向治疗(ITT)人群(p＝0.013)和应答者亚组(p＝0.003)中这些应答者的数量。从图3中可以看出，应答者亚组(图1)中的大多数患者(51.2％)平均能够额外爬18层楼梯，他们的运动跑步机耐量测试(ETT)提高了≥25％，这表示着生活质量的显著提高。

利妥昔单抗(Rituximab)是一种单克隆抗体，可结合在B细胞上表达的CD20，最初在一项开放标记试验中报告为在ME/CFS中具有活性。据报道，2015年在挪威启动的一项152名患者的双盲安慰剂对照临床试验未能达到其终点。据我们所知，没有其他药物或生物制剂在对ME/CFS进行后期临床研究。雷他莫德已被阿根廷批准用于ME/CFS，预计将在不久的将来进入市场。

根据ME/CFS症状的持续时间，对雷他莫德的反应存在差异，这表明雷他莫德是一种核心药物，在ME/CFS患者的亚组内具有明确的活性。

本说明书陈述了一个数值范围，应当理解，还描述了该范围内的所有值(例如，1到10也包括1到10之间的每个值以及所有中间范围，例如2到10、1到5和3到8)。术语“大约”可以指与测量相关联的统计不确定性或数值的可变性，本领域技术人员将理解这不影响本发明的操作或其可专利性。

在权利要求的含义和它们的法律等价物的范围内的所有修改和替换都包含在它们的范围内。引用“包括(comprising)”的权利要求允许在权利要求的范围内包括其他元素；本发明也通过列举以下过渡短语的权利要求来描述：“基本上由……组成”(即允许权利要求的范围内包括其它元素，如果它们不会实质性地影响本发明的操作)，或“包括(consisting of)”(即除了通常与本发明相关的杂质或无关紧要的活性，只允许权利要求中列出的元素)，而非术语“包含”。这三个过渡语中的任何一个都可以用来要求本发明。

应当理解，除非在权利要求中明确陈述，否则本说明书中描述的元素不应被解释为对所要求保护的发明的限制。因此，授权的权利要求是确定法律保护范围的基础，而不是写入权利要求中的说明书的限制。相比之下，能够预期要求保护的发明或破坏发明新颖性的特定实施例的现有技术被明确地排除在本发明之外。

此外，除非在权利要求中明确陈述了这种关系，否则权利要求的特征之间没有特定的关系(例如，产品权利要求中的组件布置或方法权利要求中的步骤顺序不构成对权利要求的限制，除非明确声明如此)。这里公开的各个元件的所有可能的组合和排列都被认为是本发明的方面。类似地，本发明描述的概括被认为是本发明的一部分。

根据以上描述，对本领域技术人员来说显而易见的是，在不脱离本发明的精神或基本特征的情况下，本发明可以以其他特定形式实施。为本发明提供的法律保护范围由所附权利要求来表示，而非说明书来表示，因此，所描述的实施例应该仅被认为是说明性的，而不是限制性的。

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