公开/公告号CN113194977A
专利类型发明专利
公开/公告日2021-07-30
原文格式PDF
申请/专利权人 格罗制药公司;
申请/专利号CN201980083235.2
发明设计人 罗伯特·A·洛夫;
申请日2019-10-15
分类号A61K38/10(20060101);A61P13/10(20060101);A61P17/00(20060101);A61P43/00(20060101);A61Q19/00(20060101);A61Q19/08(20060101);
代理机构11262 北京安信方达知识产权代理有限公司;
代理人贺淑东;韦昌金
地址 美国加利福尼亚州
入库时间 2023-06-19 12:02:28
本申请要求2018年10月16日提交的系列号为62/746,398的美国临时申请和2019年6月26日提交的系列号为62/867,128的美国临时申请的权益，所述临时申请通过引用整体并入本文。
本申请含有序列表，该序列表已经以ASCII格式电子提交，并且通过引用整体并入本文。创建于2019年10月9日的所述ASCII副本被命名为54780-703_601_SL.txt，大小为30,738个字节。
背景技术
脊椎动物骨骼肌中的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体介导神经肌肉接头处的神经肌肉传递。它们对乙酰胆碱的结合作出响应，引起肌肉收缩。
发明内容
本发明包括与抑制乙酰胆碱(ACh)与肌肉型烟碱乙酰胆碱受体(肌肉nAChR)活性位点结合的新型肽拮抗剂相关的组合物和方法。在一些实施方案中，本发明包括包含本发明的肽拮抗剂的化妆品或药物组合物。在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂可用于预防或改善皮肤皱纹的外观或相关皮肤状况的局部化妆品或药物组合物。在一些实施方案中，本发明涉及用于预防或治疗通过抑制肌肉nAChR而改善的病症，例如偏头痛的药物组合物。在一些实施方案中，本发明涉及使用包含本发明的肽拮抗剂的化妆品或药物组合物的方法。在一些实施方案中，本发明涉及使用本发明的组合物或方法阻断或抑制神经肌肉传递和/或ACh与肌肉nAChR的结合的方法。
本发明包括一种肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其包含氨基酸序列Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14，其中：Xaa1不存在或选自Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa2不存在或选自：Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu、Ile，以及Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa3和Xaa8形成连接Xaa3-Xaa8；Xaa4和Xaa14形成连接Xaa4-Xaa14；Xaa5选自：Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His、Lys，以及Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His或Lys的衍生物；Xaa6选自：Pro及其衍生物；Xaa7选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa9选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa10选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；Xaa11选自：Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His、Lys，以及Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His或Lys的衍生物；Xaa12选自：Phe、Trp、Tyr，以及Phe、Trp或Tyr的衍生物；Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Ser、Thr、Arg、His、Lys，以及Cys、Met、Sec、Ser、Thr、Arg、His或Lys的衍生物；N末端任选地被修饰；并且C末端任选地被修饰。
在一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂是最初阐述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中：Xaa1不存在；Xaa2不存在；Xaa3-Xaa8连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳(dicarba)连接；Xaa4-Xaa14连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；Xaa5选自：Asn、Asp、Gln、Glu，以及Asn、Asp、Gln或Glu的衍生物；Xaa6选自：Pro及其衍生物；Xaa7选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa9选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa10选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；Xaa11选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；Xaa12选自：Phe、Trp、Tyr，以及Phe、Trp或Tyr的衍生物；并且Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Ser、Thr，以及Cys、Met、Sec、Ser或Thr的衍生物。
在一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂是最初阐述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中：Xaa1不存在；Xaa2不存在；Xaa3-Xaa8连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；Xaa4-Xaa14连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；Xaa5选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；Xaa6选自：Pro及其衍生物；Xaa7选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa9选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa10选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；Xaa11选自：Asn、Asp、Gln、Glu，以及Asn、Asp、Gln或Glu的衍生物；Xaa12选自：Phe、Trp、Tyr，以及Phe、Trp或Tyr的衍生物；并且Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Ser、Thr，以及Cys、Met、Sec、Ser或Thr的衍生物。
在一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂是最初阐述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中：Xaa1不存在；Xaa2选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；Xaa3-Xaa8连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；Xaa4-Xaa14连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；Xaa5选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；Xaa6选自：Pro及其衍生物；Xaa7选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa9选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa10选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；Xaa11选自：Asn、Asp、Gln、Glu，以及Asn、Asp、Gln或Glu的衍生物；Xaa12选自：Phe、Trp、Tyr，以及Phe、Trp或Tyr的衍生物；并且Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Ser、Thr，以及Cys、Met、Sec、Ser或Thr的衍生物。
在一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂是最初阐述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中：Xaa1不存在；Xaa2不存在；Xaa3-Xaa8连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；Xaa4-Xaa14连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；Xaa5选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；Xaa6选自：Pro及其衍生物；Xaa7选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa9选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa10选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；Xaa11选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；Xaa12选自：Phe、Trp、Tyr，以及Phe、Trp或Tyr的衍生物；并且Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Ser、Thr，以及Cys、Met、Sec、Ser或Thr的衍生物。
在一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂是最初阐述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中：Xaa1不存在或选自Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa2不存在或选自：Asn、Asp、Gln、Arg、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu、Ile，以及Asn、Asp、Gln、Arg、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa3-Xaa8连接选自：Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；Xaa4-Xaa14连接选自：Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；Xaa5选自：Asp、Gln、Glu、Arg、His、Lys，以及Asp、Gln、Glu、Arg、His或Lys的衍生物；Xaa6选自：Pro及其衍生物；Xaa7选自：Gly、Val、Leu、Ile以及Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa9选自：Ala、Val、Leu、Ile以及Ala、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa10选自：His、Lys，以及His或Lys的衍生物；Xaa11选自：Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、Lys，以及Asn、Asp、Gln、Glu、Arg或Lys的衍生物；Xaa12选自：Phe、Trp、Tyr，以及Phe或Trp的衍生物；并且Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Thr、Arg、His、Lys，以及Cys、Met、Sec、Thr、Arg、His或Lys的衍生物；
在一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂是最初阐述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中：Xaa1不存在或选自Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa2不存在或选自：Asn、Asp、Gln、Arg、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu、Ile，以及Asn、Asp、Gln、Arg、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa3-Xaa8连接选自：Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；Xaa4-Xaa14连接选自：Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；Xaa5选自：Asp、Gln、Glu、Arg、Lys，以及Asp、Gln、Glu、Arg或Lys的衍生物；Xaa6选自：Pro及其衍生物；Xaa7选自：Gly、Val、Leu、Ile以及Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa9选自：Ala、Val、Leu、Ile以及Ala、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa10选自：Arg、His，以及Arg或Lys的衍生物；Xaa11选自：Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、Lys，以及Asn、Asp、Gln、Glu、Arg或Lys的衍生物；Xaa12选自：Trp、Tyr，以及Trp或Tyr的衍生物；并且Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Thr、Arg、His、Lys，以及Cys、Met、Sec、Thr、Arg、His或Lys的衍生物；
在一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂是最初阐述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中：Xaa1不存在或选自Ala、Val、Leu、Ile以及Ala、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa2不存在或选自：Asn、Asp、Gln、Glu、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu、Ile，以及Asn、Asp、Gln、Glu、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa3-Xaa8连接选自：Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；Xaa4-Xaa14连接选自：Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；Xaa5选自：Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、Lys，以及Asn、Asp、Gln、Glu、Arg或Lys的衍生物；Xaa6选自：Pro及其衍生物；Xaa7选自：Gly、Val、Leu、Ile以及Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa9选自：Ala、Val、Leu、Ile以及Ala、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa10选自：Arg、His，以及Arg或His的衍生物；Xaa11选自：Asp、Gln、Glu、Arg、His、Lys，以及Asp、Gln、Glu、Arg、His或Lys的衍生物；Xaa12选自：Phe、Trp，以及Phe或Trp的衍生物；并且Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Thr、Arg、His、Lys，以及Cys、Met、Sec、Thr、Arg、His或Lys的衍生物；
在一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂是最初阐述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中：Xaa1不存在；Xaa2不存在或选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；Xaa3-Xaa8连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；Xaa4-Xaa14连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；Xaa5选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；Xaa6选自：Pro及其衍生物；Xaa7选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa9选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；Xaa10选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；Xaa11选自：Arg、His、Lys、Asn、Asp、Gln、Glu，以及Arg、His、Lys、Asn、Asp、Gln或Glu的衍生物；Xaa12选自：Phe、Trp、Tyr，以及Phe、Trp或Tyr的衍生物；并且Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Ser、Thr，以及Cys、Met、Sec、Ser或Thr的衍生物。
在一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂是最初阐述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中：Xaa1不存在；Xaa2不存在或选自：Arg以及Arg的衍生物；Xaa3-Xaa8连接是Cys-Cys连接；Xaa4-Xaa14连接选自：Cys-Cys连接和胱硫醚连接；Xaa5选自：His以及His的衍生物；Xaa6选自：Pro及其衍生物；Xaa7选自：Ala以及Ala的衍生物；Xaa9选自：Gly以及Gly的衍生物；Xaa10选自：Arg、Lys，以及Arg或Lys的衍生物；Xaa11选自：His、Asn，以及His或Asn的衍生物；Xaa12选自：Tyr以及Tyr的衍生物；并且Xaa13选自：Ser以及Ser的衍生物。
在一些实施方案中，所述Xaa3-Xaa8连接和Xaa4-Xaa14连接独立地选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接。在一些实施方案中，所述硫醚连接是羊毛硫氨酸连接。在一些实施方案中，Xaa3与Xaa8之间的连接在Xaa3和Xaa8各自的α碳或几何中心之间的空间间隔为约3.5至约10埃，其中Xaa4与Xaa14之间的连接在Xaa4和Xaa14各自的α碳或几何中心之间的空间间隔为约3.5至约10埃，或两者兼具。
在一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂是本发明的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中N末端被修饰为包含C
在一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂是本发明的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中C末端被修饰为包含NH
在一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂是本发明的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中脂质共价连接至半胱氨酸、丝氨酸、赖氨酸、苏氨酸或酪氨酸。在一些实施方案中，所述脂质共价连接至半胱氨酸或赖氨酸。在一些实施方案中，所述脂质包含C
在一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂是本发明的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其包含至少一种衍生物，该衍生物是选自下组的非规范氨基酸：芳族侧链氨基酸；非芳族侧链氨基酸；脂肪族侧链氨基酸；侧链酰胺氨基酸；侧链酯氨基酸；杂芳族侧链氨基酸；侧链硫醇氨基酸；β氨基酸；和骨架修饰的氨基酸。在一些实施方案中，所述芳族侧链氨基酸是酪氨酸、组氨酸、色氨酸或苯丙氨酸的衍生物。在一些实施方案中，所述非芳族侧链氨基酸是丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸或亮氨酸的衍生物。在一些实施方案中，所述至少一种衍生物是选自下组的非规范氨基酸：2-氨基己二酸；3-氨基己二酸；β-丙氨酸；β-氨基丙酸；2-氨基丁酸；4-氨基丁酸；哌啶酸(piperidinicacid)；6-氨基己酸；2-氨基庚酸；2-氨基异丁酸；3-氨基异丁酸；2-氨基庚二酸；2,4-二氨基丁酸；锁链素；2,2'-二氨基庚二酸；2,3-二氨基丙酸；N-乙基甘氨酸；N-乙基天冬酰胺；羟赖氨酸；别羟赖氨酸；3-羟脯氨酸；4-羟脯氨酸；异锁链素；别异亮氨酸；N-甲基甘氨酸；肌氨酸；n-甲基异亮氨酸；6-N-甲基赖氨酸；N-甲基缬氨酸；正缬氨酸；正亮氨酸；和鸟氨酸。
在一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂是本发明的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中所述肽中的一个或多个氨基酸具有D-氨基酸构型，并且所述肽中的其余氨基酸具有L-氨基酸构型。
在一些实施方案中，本发明的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂选择性地抑制肌肉型烟碱乙酰胆碱受体。在相关实施方案中，IC
在一些实施方案中，本发明包括一种化妆品组合物，其包含本发明的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，用于预防或暂时改善受试者中皮肤皱纹、皮肤松弛、与皱眉肌和/或降眉间肌活动相关的中度至重度眉间纹、与眼轮匝肌活动相关的中度至重度外眦线以及与额肌活动相关的中度至重度前额线中的一种或多种的外观。在一些实施方案中，所述化妆品组合物被配制用于局部使用。在一些实施方案中，所述化妆品组合物包含一种或多种选自下组的赋形剂：水、缓冲液、吸收促进剂、稳定性增强剂、二氨基丁酰基苄基酰胺、二乙酸盐、甘油、树胶、亲水胶体或衍生物、纤维素衍生物、乳化剂、脂肪醇、丙烯酸衍生物、矿物质、表面活性剂、脂肪、油、防腐剂、单糖、双糖、多糖、糖胺聚糖和螯合剂。在一些实施方案中，所述吸收促进剂选自：脂质体递送系统、传递体递送系统、醇质体递送系统、短链醇、长链醇、多元醇、尿素、氨基酸、氨基酸酯、胺、酰胺、1-十二烷基氮杂环庚-2-酮
在一些实施方案中，本发明包括一种化妆品组合物，其包含本发明的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，用于：预防或暂时改善受试者中皮肤皱纹、皮肤松弛、与皱眉肌和/或降眉间肌活动相关的中度至重度眉间纹、与眼轮匝肌活动相关的中度至重度外眦线以及与额肌活动相关的中度至重度前额线中的一种或多种的外观；治疗膀胱过度活动症(OAB)；治疗尿失禁；预防头痛；治疗痉挛；治疗颈肌张力障碍；治疗多涎；治疗与肌张力障碍相关的眼睑痉挛；或治疗斜视。在一些实施方案中，所述药物组合物被配制用于皮内、皮下、肌肉内或逼尿肌内(intradetrusor)给药。在一些实施方案中，所述药物组合物包含一种或多种赋形剂。
在一些实施方案中，本发明包括一种预防或暂时改善受试者皮肤皱纹、皮肤松弛、与皱眉肌和/或降眉间肌活动相关的中度至重度眉间纹、与眼轮匝肌活动相关的中度至重度外眦线以及与额肌活动相关的中度至重度前额线中的一种或多种的外观的方法，其包括向所述受试者应用有效量的包含本发明的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂的化妆品组合物。在该方法的一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂以一剂或多剂化妆品组合物应用。在一些实施方案中，约每小时一次至约每两周一次应用一剂化妆品组合物。在一些实施方案中，约每天一次应用一剂化妆品组合物。在一些实施方案中，所述化妆品组合物可以无限期地应用，而没有不良反应。在一些实施方案中，所述化妆品组合物的剂量是亚免疫剂量。
本发明进一步包括一种预防或暂时改善受试者中皮肤皱纹、皮肤松弛、与皱眉肌和/或降眉间肌活动相关的中度至重度眉间纹、与眼轮匝肌活动相关的中度至重度外眦线以及与额肌活动相关的中度至重度前额线中的一种或多种的外观；治疗膀胱过度活动症(OAB)；治疗尿失禁；预防头痛；治疗痉挛；治疗颈肌张力障碍；治疗多涎；治疗与肌张力障碍相关的眼睑痉挛；或治疗斜视的方法，其包括向所述受试者施用有效量的包含本发明的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂的药物组合物。在一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂在一次或多次采用药物组合物的治疗中施用。在一些实施方案中，每次治疗的施用包括通过向一个或多个治疗部位注射来注射所述药物组合物。在一些实施方案中，每次治疗包括亚免疫剂量的所述药物组合物。
本说明书中所提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度犹如具体地且单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请均通过引用而并入。
具体实施方式
定义
如本文所用的，术语“包含”或其变化形式如“包括”或“含有”应理解为指示包含任何列举的特征，但不排除其他任何特征。因此，如本文所用的，术语“包含”是包含性的，并且不排除其他的、未列举的特征。在本文提供的任何组合物和方法的一些实施方案中，“包含”可以用“基本上由...组成”或“由...组成”代替。本文使用短语“基本上由...组成”来表示需要指定的特征以及实质上不影响请求保护的发明的特性或功能的那些特征。如本文所用的，术语“组成”用来指示单独存在所列举的特征。
如在本说明书及所附权利要求书中所使用的，除非指出意思相反，否则下列术语具有以下所述的含义。
“氨基”是指-NH
“氰基”是指-CN基团。
“硝基”是指-NO
“氧杂”是指-O-基团。
“氧代”是指＝O基团。
“硫代”是指＝S基团。
“亚氨基”是指＝N-H基团。
“肟基”是指＝N-OH基团。
“肼基”是指＝N-NH
“烷基”是指仅由碳原子和氢原子组成、不含不饱和度、具有1-15个碳原子(例如，C
“烷氧基”是指式-O-烷基的通过氧原子键合的基团，其中烷基为如上定义的烷基链。
“烯基”是指仅由碳原子和氢原子组成、含有至少一个碳碳双键且具有2-12个碳原子的直链或支链的烃链基团。在某些实施方案中，烯基包含2至8个碳原子。在其他实施方案中，烯基包含2至4个碳原子。该烯基通过单键与分子的其余部分连接，例如，乙烯基、丙-1-烯基(即烯丙基)、丁-1-烯基、戊-1-烯基、戊-1,4-二烯基等。除非在说明书中另有明确规定，否则烯基任选地被一个或多个下列取代基取代：卤代、氰基、硝基、氧代、硫代、亚氨基、肟基、三甲基甲硅烷基、-OR
“炔基”是指仅由碳原子和氢原子组成、含有至少一个碳碳三键、具有2-12个碳原子的直链或支链的烃链基团。在某些实施方案中，炔基包含2至8个碳原子。在其他实施方案中，炔基包含2至6个碳原子。在其他实施方案中，炔基包含2至4个碳原子。炔基通过单键与分子的其余部分连接，例如，乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。除非在说明书中另有明确规定，否则炔基任选地被一个或多个下列取代基取代：卤代、氰基、硝基、氧代、硫代、亚氨基、肟基、三甲基甲硅烷基、-OR
“亚烷基”或“亚烷基链”是指连接分子的其余部分与基团的直链或支链二价烃链，其仅由碳和氢组成，不包含不饱和度并具有1-12个碳原子，例如，亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚正丁基等。亚烷基链通过单键与该分子的其余部分连接并通过单键与该基团连接。亚烷基链与分子的其余部分以及与基团的连接点是通过亚烷基链中的一个碳或通过该链内的任意两个碳。在某些实施方案中，亚烷基包含1至8个碳原子(例如，C
“芳基”是指通过从环碳原子上去除氢原子而由芳族单环或多环烃环体系衍生的基团。芳族单环或多环烃环体系仅包含氢和来自5-18个碳原子的碳，其中该环系中的至少一个环是完全不饱和的，即，其根据休克尔
“芳烷基”是指式-R
“碳环基”或“环烷基”是指仅由碳和氢原子组成的稳定的非芳族单环或多环烃基团，其包括稠环或桥环体系，具有3至15个碳原子。在某些实施方案中，碳环基包含3至10个碳原子。在其他实施方案中，碳环基包含5至7个碳原子。该碳环基通过单键与分子的其余部分连接。碳环基是饱和的(即仅包含单一C-C键)或不饱和的(即含有一个或多个双键或三键)。完全饱和的碳环基基团还被称为“环烷基”。单环环烷基的实例包括，例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。不饱和的碳环基还被称为“环烯基”。单环环烯基的实例包括，例如，环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和环辛烯基。多环碳环基基团包括，例如，金刚烷基、降冰片基(即，双环[2.2.1]庚烷基)、降冰片烯基、十氢萘基、7,7-二甲基-双环[2.2.1]庚烷基等。除非在说明书中另有明确说明，否则术语“碳环基”意在包括任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基所取代的碳环基基团：烷基、烯基、炔基、卤代、氟烷基、氧代、硫代、氰基、硝基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的芳烯基、任选取代的芳炔基、任选取代的碳环基、任选取代的碳环基烷基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环基烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳基烷基、-R
“碳环基烷基”是指式-R
“卤代”或“卤素”是指溴代、氯代、氟代或碘代取代基。
“氟烷基”是指被一个或多个如上定义的氟代基团取代的如上定义的烷基基团，例如，三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基等。在一些实施方案中，氟烷基的烷基部分如以上针对烷基所述任选地被取代。
“杂环基”或“杂环烷基”是指稳定的3至18元非芳族环基团，其包含2至12个碳原子和1至6个选自氮、氧和硫的杂原子。除非在说明书中另有明确说明，否则杂环基基团是单环、双环、三环或四环的环系，其任选地包括稠环或桥环体系。杂环基基团中的杂原子任选地被氧化。如果存在一个或多个氮原子，则其任选地被季铵化。杂环基是部分或完全饱和的。杂环基通过环中的任何原子连接至分子的其余部分。这类杂环基基团的实例包括但不限于二氧戊环基、噻吩基[1,3]二噻烷基、十氢异喹啉基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑烷基、奎宁环基、噻唑烷基、四氢呋喃基、三噻烷基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、硫杂吗啉基、1-氧代-硫代吗啉基和1,1-二氧代-硫代吗啉基。除非在说明书中另有明确说明，否则术语“杂环基”意在包括任选地被一个或多个选自以下的取代基所取代的如上所定义的杂环基基团：烷基、烯基、炔基、卤代、氟烷基、硫代、氰基、硝基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的芳烯基、任选取代的芳炔基、任选取代的碳环基、任选取代的碳环基烷基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环基烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳基烷基、-R
“N-杂环基”或“N-连接的杂环基”是指含有至少一个氮的如上定义的杂环基基团，并且其中该杂环基基团与该分子的其余部分的连接点是通过该杂环基基团中的氮原子。N-杂环基基团如上文针对杂环基基团所述任选地被取代。这样的N-杂环基基团的实例包括但不限于1-吗啉基、1-哌啶基、1-哌嗪基、1-吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑啉基和咪唑烷基。
“C-杂环基”或“C-连接的杂环基”是指含有至少一个杂原子的如上定义的杂环基基团，并且其中该杂环基基团与该分子的其余部分的连接点是通过该杂环基基团中的碳原子。C-杂环基基团如上文针对杂环基基团所述任选地被取代。这样的C-杂环基基团的实例包括但不限于2-吗啉基、2-或3-或4-哌啶基、2-哌嗪基、2-或3-吡咯烷基等。
“杂芳基”是指由包含2至17个碳原子以及1至6个选自氮、氧和硫的杂原子的3至18元芳环基团衍生的基团。如本文所用的，杂芳基基团是单环、双环、三环或四环环系，其中该环系中的至少一个环是完全不饱和的，即，其根据休克尔
“N-杂芳基”是指含有至少一个氮的如上定义的杂芳基基团，并且其中该杂芳基基团与该分子的其余部分的连接点是通过该杂芳基基团中的氮原子。N-杂芳基基团如上文针对杂芳基基团所述任选地被取代。
“C-杂芳基”是指如上所定义的杂芳基，其中该杂芳基基团与该分子的其余部分的连接点是通过该杂芳基基团中的碳原子。C-杂芳基基团如上文针对杂芳基基团所述任选地被取代。
在一些实施方案中，本文公开的化合物含有一个或多个不对称中心，因此产生了对映异构体、非对映异构体以及根据绝对立体化学被定义为(R)-或(S)-的其他立体异构形式。除非另有说明，否则本公开意在涉及本文公开的化合物的所有立体异构形式。当本文所述的化合物含有烯烃双键时，除非另有说明，否则本发明意在同时包括E和Z几何异构体(例如，顺式或反式)。同样，还意在包括所有可能的异构体，以及其外消旋形式和光学纯形式，和所有互变异构形式。术语“几何异构体”是指烯烃双键的E或Z几何异构体(例如顺式或反式)。术语“位置异构体”是指围绕中心环的结构异构体，如围绕苯环的邻位、间位和对位异构体。
“互变异构体”是指这样的分子，其中质子从分子的一个原子移动到同一分子的另一原子是可能的。在某些实施方案中，本文提出的化合物作为互变异构体存在。在可能发生互变异构的情形下，将存在互变异构体的化学平衡。互变异构体的确切比例取决于若干因素，包括物理状态、温度、溶剂和pH。互变异构平衡的一些实例包括：
在一些实施方案中，本文公开的化合物以不同的富集同位素形式使用，例如，富含
除非另有说明，否则本文所示的结构旨在包括仅在是否存在一个或多个同位素富集的原子方面不同的化合物。例如，除了氢被氘或氚替代或者碳被
本公开的化合物任选地在构成此类化合物的一个或多个原子处含有非天然比例的原子同位素。例如，可使用同位素如氘(
在某些实施方案中，本文公开的化合物的一些或全部
使用各种方法来合成氘取代的化合物，所述方法例如描述于：Dean,Dennis C.编.Recent Advances in the Synthesis and Applications of Radiolabeled Compoundsfor Drug Discovery and Development.[于：Curr.,Pharm.Des.,2000；6(10)]2000,110pp；George W.；Varma,Rajender S.The Synthesis of Radiolabeled Compounds viaOrganometallic Intermediates,Tetrahedron,1989,45(21),6601-21；以及Evans,E.Anthony.Synthesis of radiolabeled compounds,J.Radioanal.Chem.,1981,64(1-2),9-32。
氘化起始材料容易获得，并且经受本文所述的合成方法以提供含氘化合物的合成。大量的含氘试剂和结构单元可以从化学供应商如Aldrich Chemical Co.商购获得。
“药学上可接受的盐”包括酸加成盐和碱加成盐。任一种本文所述化合物的药学上可接受的盐意在包括任意的和所有的药学上合适的盐形式。本文所述化合物的优选的药学上可接受的盐是药学上可接受的酸加成盐和药学上可接受的碱加成盐。
“药学上可接受的酸加成盐”是指保留了游离碱的生物有效性和性质的那些盐，其在生物学上或其他方面不是不合需要的，并且其是用诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、氢碘酸、氢氟酸、亚磷酸等无机酸形成的。还包括用如下有机酸形成的盐：诸如脂肪族单羧酸和二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、链烷二酸、芳族酸、脂肪族和芳香族磺酸等，并且包括例如乙酸、三氟乙酸、丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。因此，示例性的盐包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、异丁酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐等。还涉及氨基酸的盐如精氨酸盐、葡糖酸盐和半乳糖醛酸盐(参见，例如，Berge S.M等人,“Pharmaceutical Salts,”Journal of Pharmaceutical Science,66:1-19(1997))。在一些实施方案中，碱性化合物的酸加成盐通过按照熟练技术人员熟悉的方法和技术使其游离碱形式与足量的所需酸接触以产生盐而制备。
“药学上可接受的碱加成盐”是指保留了游离酸的生物有效性和性质的那些盐，其在生物学上或其他方面不是不合需要的。这些盐是通过向游离酸中加入无机碱或有机碱而制备的。在一些实施方案中，药学上可接受的碱加成盐用金属或胺如碱金属和碱土金属或有机胺形成。衍生自有机碱的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。衍生自有机碱的盐包括但不限于下列有机碱的盐：伯胺、仲胺和叔胺，取代胺(包括天然存在的取代胺)，环胺和碱性离子交换树脂，例如，异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二环己基胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、N,N-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、海巴明(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、亚乙基二苯胺、N-甲基葡糖胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱(theobromine)、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等。参见Berge等人，同上。
如本文所用的，“治疗”或“处理”或“减轻”或“改善”可互换使用。这些术语是指获得有益的或期望的结果(包括但不限于治疗益处和/或预防益处)的途径。所谓“治疗益处”是指所治疗的潜在病症的消除或改善。另外，治疗益处也可以如下实现：一种或多种与该潜在病症相关的生理学症状得到根除或改善，使得在患者中观察到起色，虽然该患者仍受该潜在病症的折磨。对于预防益处，在一些实施方案中，将所述组合物施用于处于发生特定疾病的风险中的患者，或报告疾病的一种或多种生理学症状的患者，即便尚未作出该疾病的诊断。
“前药”意在表示在一些实施方案中在生理条件下或通过溶剂分解转化为本文所述的生物活性化合物的化合物。因此，术语“前药”是指药学上可接受的生物活性化合物的前体。前药当施用于受试者时一般是无活性的，而在体内例如通过水解转化为活性化合物。前药化合物在哺乳动物生物体中通常具有溶解性、组织相容性或延迟释放的优点(参见，例如，Bundgard,H.,Design of Prodrugs(1985),pp.7-9,21-24(Elsevier,Amsterdam))。
关于前药的讨论在Higuchi,T.等人,“Pro-drugs as Novel Delivery Systems,”A.C.S.Symposium Series,Vol.14和Bioreversible Carriers in Drug Design,ed.Edward B.Roche,American Pharmaceutical Association and Pergamon Press,1987中提供。
术语“前药”还意在包括任何共价键合的载体，当这种前药施用至哺乳动物受试者时该载体在体内释放活性化合物。如本文所述，活性化合物的前药通过以某种方式修饰在该活性化合物中存在的官能团来制备，该方式使得该修饰在常规操作中或在体内裂解成母体活性化合物。前药包括其中羟基、氨基或巯基键合到任何基团上的化合物，当将活性化合物的前药施用于哺乳动物受试者时，该任何基团裂解以分别形成游离羟基、游离氨基或游离巯基。前药的实例包括但不限于活性化合物中的醇或胺官能团的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物，等等。
肌肉型烟碱乙酰胆碱受体
本发明涉及肌肉型烟碱乙酰胆碱受体(也称为肌肉nAChR)的肽拮抗剂。
肌肉nAChR是一种配体激活的离子通道受体，其结构通常被描述为四个相关的、但在遗传学和免疫学上不同的亚单位的异五聚体。亚单位围绕膜中的中心孔组织化，化学计量为两个α亚单位以及β、δ和γ各一个。肌肉nAChR被神经肌肉接头处的神经释放的内源性神经递质乙酰胆碱(ACh，天然受体激动剂)激活。ACh与受体结合，导致通道激活或门控信号的传递。
本发明的肽拮抗剂在肌肉nAChR的活性位点中结合，抑制ACh与受体的结合。这导致神经肌肉突触后膜的非去极化阻断，使得来自神经的信号(ACh释放)不再有效刺激肌肉收缩。参见，例如，Albuquerque等人,2009,“Mammalian Nicotinic AcetylcholineReceptors:From Structure to Function,”Physiol.Rev.89(1):73-120，和Kalamida等人,2007,“Muscle and neuronal nicotinic acetylcholine receptors,”The FEBSJournal 274:3799-3845，各自通过引用整体并入本文。
使用抗胆碱能肉毒杆菌毒素产品：onabotulinumtoxin A(BTX-A，以
相反，本发明的肽拮抗剂占据肌细胞AChR中的ACh活性位点(突触后)。当结合时，本发明的肽拮抗剂阻断从神经细胞分泌的ACh的结合。
肌肉型烟碱乙酰胆碱受体的肽拮抗剂
本发明提供了包括人类肌肉nAChR在内的哺乳动物肌肉nAChR的肽拮抗剂。在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂具有期望的性质，或相对于本领域已知的肌肉nAChR拮抗剂改进的性质。这样的性质可包括，例如，药代动力学性质(包括但不限于吸收、生物利用度、分布、代谢和排泄)、药效学性质(包括但不限于：受体结合特性，例如结合半衰期；受体后效应；和化学相互作用)、增强的活性(例如，由IC
在一些实施方案中，本发明的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂具有12-14个残基，并且包含氨基酸序列：
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14
其中：
Xaa1不存在或选自Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa2不存在或选自：Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu、Ile，以及Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa3和Xaa8形成连接Xaa3-Xaa8；
Xaa4和Xaa14形成连接Xaa4-Xaa14；
Xaa5选自：Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His、Lys，以及Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa6选自：Pro及其衍生物；
Xaa7选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa9选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa10选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa11选自：Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His、Lys，以及Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa12选自：Phe、Trp、Tyr，以及Phe、Trp或Tyr的衍生物；
Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Ser、Thr、Arg、His、Lys，以及Cys、Met、Sec、Ser、Thr、Arg、His或Lys的衍生物；
N末端任选地被修饰；并且
C末端任选地被修饰。
在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂不由以下氨基酸序列组成：
Glu-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Gly-Arg-His-Tyr-Ser-Cys(SEQ ID NO:1)
其中第一个和第三个半胱氨酸残基(Xaa3-Xaa8)连接并且第二个和第四个半胱氨酸残基(Xaa4-Xaa14)连接(α-芋螺毒素GI，或CGI)。
在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂不由以下氨基酸序列组成：
Glu-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Gly-Lys-His-Phe-Ser-Cys(SEQ ID NO:2)
其中第一个和第三个半胱氨酸残基(Xaa3-Xaa8)连接并且第二个和第四个半胱氨酸残基(Xaa4-Xaa14)连接。
在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂不由以下氨基酸序列组成：
Glu-Cys-Cys-His-Pro-Ala-Cys-Gly-Lys-His-Phe-Ser-Cys(SEQ ID NO:56)
其中第一个和第三个半胱氨酸残基(Xaa3-Xaa8)连接并且第二个和第四个半胱氨酸残基(Xaa4-Xaa14)连接(α-芋螺毒素GII序列)。
在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂不由以下氨基酸序列组成：
Gly-Arg-Cys-Cys-His-Pro-Ala-Cys-Gly-Lys-Asn-Tyr-Ser-Cys(SEQ ID NO:3)
其中第一个和第三个半胱氨酸残基(Xaa3-Xaa8)连接并且第二个和第四个半胱氨酸残基(Xaa4-Xaa14)连接(α-芋螺毒素MI，或CMI)。
在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂中氨基酸残基的数目不超过12个、不超过13个或不超过14个。在实施方案中，本发明的肽拮抗剂由12、13或14个氨基酸残基组成。
表1中显示了本发明的肽拮抗剂的非限制性实例。
表1.肽拮抗剂的实例
除非在表格中另有说明，否则表1中列出的肽可包含所有L-氨基酸或所有D-氨基酸。
在本文的任何实施方案中，根据需要在一个或多个位置处进行氨基酸置换。
氨基酸可以根据其侧链的化学和结构特性进行分类，例如，天然存在的氨基酸可以分为疏水性(正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu和Ile)、中性亲水性(Cys、Ser、Thr、Asn和Gln)、酸性(Asp和Glu)、碱性(His、Lys和Arg)、链定向(Gly和Pro)和芳族的(Trp、Tyr和Phe)。
在一些实施方案中，通过将上述类别之一的氨基酸置换为该类别的不同成员来进行保守氨基酸置换。在一些实施方案中，保守置换包括非天然存在的氨基酸残基，包括拟肽和其他反向或倒转形式的氨基酸部分。
在一些实施方案中，通过将上述类别之一的氨基酸置换为不同类别的成员来进行非保守置换。
在一些实施方案中，置换考虑氨基酸的亲水指数(参见，例如，Kyte等人,1982,1982,J.Mol.Biol.157:105-131，通过引用并入本文)。可以通过给每个氨基酸一个数值或亲水指数，并沿肽链重复地平均这些值来计算肽的亲水分布(hydropathic profile)。在这样的实施方案中，基于疏水性和电荷特性为每个氨基酸分配亲水指数。在一些实施方案中，使用的亲水指数是：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；和精氨酸(-4.5)。在一些实施方案中，氨基酸被亲水指数在原始氨基酸的0.1至0.5内的不同氨基酸置换。在一些实施方案中，亲水指数在原始氨基酸的0.1、0.2、0.3、0.4或0.5以内。
在一些实施方案中，基于亲水性进行氨基酸置换。在一些实施方案中，所使用的亲水性值为：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0.+-.1)；谷氨酸(+3.0.+-.1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5.+-.1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)和色氨酸(-3.4)。
在一些实施方案中，氨基酸被亲水性值在原始氨基酸的0.1至0.5内的不同氨基酸置换。在一些实施方案中，亲水性值在原始氨基酸的0.1、0.2、0.3、0.4或0.5以内。
在一些实施方案中，氨基酸如下表所示被置换。在一些实施方案中，氨基酸被如表2(I)中所示的保守置换或保守置换的衍生物(在本文中也称为类似物)所替换。在一些实施方案中，氨基酸被如表2(II)(其中显示了每个氨基酸的备选物的各自完整列表)中所示的备选置换或备选置换的衍生物所替换。
表2.氨基酸置换
在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂包含约束结构，包括但不限于两个位置处的残基之间的连接、桥或任何连接方式。在一些实施方案中，肽受到其末端或在肽内的位置处或两者的限制。在一些实施方案中，约束结构影响肽拮抗剂性质，例如，药代动力学性质(包括但不限于吸收、生物利用度、分布、代谢和排泄)、药效学性质(包括但不限于：受体结合特性，例如结合半衰期；受体后效应；和化学相互作用)、增强的活性(例如，由IC
在实施方案中，如本文所述被约束的肽拮抗剂被称为大环肽或结构。大环肽是指由肽中两个位置之间的连接在分子内形成的线性肽的闭环结构，称为连接氨基酸、连接氨基酸衍生物、连接分子、连接部分、连接残基、连接实体等，视情况而定。两个连接氨基酸、连接氨基酸衍生物、连接分子、连接部分、连接残基或连接实体彼此被两个或更多个氨基酸残基隔开、彼此直接结合、通过连接体结合，等等。
在实施方案中，本发明的肽拮抗剂的连接由通过例如二硫键、肽键、烷基键、烯基键、酯键、硫酯键、醚键、硫醚键、膦酸酯醚键、偶氮键、C--S--C键、C＝N--C键、C＝N--C键、酰胺键、内酰胺桥、氨基甲酰基键、脲键、硫脲键、胺键、硫代酰胺键等彼此结合的两个连接氨基酸、连接氨基酸衍生物、连接分子、连接部分、连接残基或连接实体形成。大环化可以由肽的N末端氨基酸与C末端氨基酸之间的键、末端氨基酸与非末端氨基酸之间的键或非末端氨基酸之间的键形成。
为方便起见，提及连接中涉及的特定氨基酸可以使用未连接的氨基酸的命名法(例如，在连接形成之前它可能具有的结构)。还应理解，某些连接，例如合成连接，可能不是通过连接本领域中通常提及的两个氨基酸或衍生物而形成的。因此，在此提及连接的氨基酸可以使用最接近的语言来描述肽拮抗剂中给定残基位置处的每个涉及的化学实体。相应地，肽序列中的连接的实体，例如Xaa3、Xaa4、Xaa8和Xaa14，可被称为连接的氨基酸，尽管它们不是本领域中通常提及的氨基酸。在一些实施方案中，Xaa3和Xaa8，以及Xaa4和Xaa14，当为连接的实体(例如，形成Xaa3-Xaa8连接和Xaa4-Xaa14连接)时，可以备选地被称为连接的(或连接形成)氨基酸、连接的(或连接形成)氨基酸衍生物、连接的(或连接形成)分子、连接的(或连接形成)部分、连接的(或连接形成)残基或连接的(或连接形成)实体。备选地，这些术语可用来指代存在于Xaa3、Xaa4、Xaa8或Xaa14中任一个处的氨基酸、分子、部分、残基或实体，当连接或未连接时。例如，当在本发明的肽拮抗剂中未连接但打算连接时，两个连接氨基酸也可以备选地被称为连接的(或连接形成)氨基酸、连接的(或连接形成)氨基酸衍生物、连接的(或连接形成)分子、连接的(或连接形成)部分、连接的(或连接形成)残基或连接的(或连接形成)实体。当连接时，两个连接氨基酸可以备选地被称为连接的(或连接形成)氨基酸、连接的(或连接形成)氨基酸衍生物、连接的(或连接形成)分子、连接的(或连接形成)部分、连接的(或连接形成)残基或连接的(或连接形成)实体。当未连接并且不打算连接时，两个氨基酸可称为未连接的(或非连接形成)氨基酸、未连接的(或非连接形成)氨基酸衍生物、未连接的分子、未连接的部分、未连接的残基、或未链接的实体。在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂中非连接氨基酸位置处的每个残基可称为氨基酸、氨基酸衍生物、分子、部分、残基或实体，或称为未连接的(或非连接形成)氨基酸、未连接的(或非连接形成)氨基酸衍生物、未连接的(或非连接形成)分子、未连接的(或非连接形成)部分、未连接的(或非连接形成)残基或未连接的(或非连接形成)实体。
本领域技术人员已知的任何约束结构都被考虑用于连接残基。约束结构及其各自的连接残基的实例包括但不限于选自以下的连接或桥：二硫键(例如，Cys-Cy连接，其中每个连接氨基酸是Cys)；Sec-Sec连接(硒代半胱氨酸连接，其中每个连接氨基酸是硒代半胱氨酸)；胱硫醚连接或桥(例如，Ser-同型半胱氨酸连接)，在本文中也称为Cyt-Cyt(例如，CH
在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂的Xaa3-Xaa8和Xaa4-Xaa14连接中的每一个是独立地选自以下的连接：由两个Cys连接残基形成的二硫连接，由两个硒代半胱氨酸连接残基形成的Sec-Sec连接，由Ser和同型半胱氨酸连接残基形成的胱硫醚连接，由Asp和Lys连接残基或Glu和Lys连接残基形成的内酰胺桥，作为由Cys和脱氢丙氨酸或甲基变体残基形成的羊毛硫氨酸连接的硫醚连接，由含烯烃的连接残基例如烯丙基甘氨酸或异戊二烯基甘氨酸连接残基形成的二碳连接，或由本领域已知和描述的连接残基形成的任何这些连接。在一些实施方案中，Xaa3-Xaa8或Xaa4-Xaa14连接彼此相同或不同。
(参见，例如，Knerr等人,2011,“Synthesis and activity of thioether-containing analogues of the complement inhibitor compstatin,”ACS Chem Biol.6(7):753–760；DiMarco等人,2006,“Discovery of novel,highly potent and selectiveb-hairpin mimetic CXCR4 inhibitors with excellent anti-HIV activity andpharmacokinetic profiles,”Bioorganic&Medicinal Chemistry 14:8396–8404；Dekan等人,2011,“α-Conotoxin ImI incorporating stable cystathionine bridges maintainsfull potency and identical three-dimensional structure,”J.Am.Chem.Soc.2011,133:15866–15869；Nguyen和Wong,2017,“Making circles:recent advance in chemicaland enzymatic approaches in peptide macrocyclization,”Journal of Biochemistryand Chemical Sciences1(1):1-13；Tam和Wong,2012,“Chemical Synthesis of CircularProteins,”The Journal of Biological Chemistry 287(32):27020–27025，各自通过引用整体并入本文。)在一些实施方案中，考虑由使用本领域已知的连接残基产生的任何合适的约束结构用于本发明的肽拮抗剂中。
在一些实施方案中，基于其对降解(例如，由二硫键约束结构的还原引起的降解)的抵抗力来选择特定的约束结构。在一些实施方案中，肽拮抗剂包含抵抗通过还原的降解的约束结构。例如，在还原环境中，二硫键可能易于降解并导致活性或其他所需肽拮抗剂性质的丧失。在一些实施方案中，胱硫醚连接或至少两个C
在一些实施方案中，链中的两个氨基酸通过连接接合在一起以产生大环结构。在一些实施方案中，连接模拟肽中的发夹转角。在一些实施方案中，连接包含规范或非规范氨基酸之间的共价键，如胱硫醚连接、内酰胺桥或硫醚桥(例如，羊毛硫氨酸连接)。在一些实施方案中，连接包含二肽。在一些实施方案中，连接包含规范或非规范氨基酸之间的共价键，如羊毛硫氨酸或甲基羊毛硫氨酸连接。在一些实施方案中，连接包含至少一个芳族或非芳族环。在一些实施方案中，连接包含至少一个环烷基环。在一些实施方案中，连接包含至少一个杂环。在一些实施方案中，连接包含至少两个杂环。在一些实施方案中，连接包含至少一个含氮杂环烷基环。
在一些实施方案中，连接包含结构
在一些实施方案中，连接包含吡咯烷、哌啶、脱氢吡咯烷、脱氢哌啶、氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、噁唑烷或噻唑烷。在一些实施方案中，连接包含两个C
在一些实施方案中，连接包含D-脯氨酸和L-脯氨酸，或其衍生物。在一些实施方案中，此类衍生物包含脯氨酸的吡咯烷环的取代。在一些实施方案中，连接包含选自3-氟脯氨酸、4-氟脯氨酸、3-羟脯氨酸、4-羟脯氨酸、3-氨基脯氨酸、4-氨基脯氨酸、3,4-脱氢脯氨酸、氮杂环丙烷-2-羧酸、氮杂环丁烷-2-羧酸、哌可酸(pipecolic acid)、4-氧杂-脯氨酸、3-硫杂脯氨酸或4-硫杂脯氨酸的非规范氨基酸残基。在一些实施方案中，连接包含两个选自脯氨酸、3-氟脯氨酸、4-氟脯氨酸、3-羟脯氨酸、4-羟脯氨酸、3-氨基脯氨酸、4-氨基脯氨酸、3,4-脱氢脯氨酸、氮杂环丙烷-2-羧酸、氮杂环丁烷-2-羧酸、哌可酸、4-氧杂-脯氨酸、3-硫杂脯氨酸或4-硫杂脯氨酸的氨基酸。
在一些实施方案中，连接包含规范或非规范氨基酸内酰胺桥之间的共价键。在一些实施方案中，连接包含结构：
在一些实施方案中，连接包含规范或非规范氨基酸硫醚桥之间的共价键。在一些实施方案中，连接包含结构
些和类似的约束结构可用来连接肽中末端和/或非末端位置的残基。在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂的Xaa3和Xaa8连接在一起。在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂的Xaa4和Xaa14连接在一起。在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂的Xaa3和Xaa8以及Xaa4和Xaa14连接在一起。
在一些实施方案中，基于所得到的受约束残基之间的空间间隔来选择本文所述的约束结构。在一些实施方案中，空间间隔影响如上所述的肽拮抗剂性质。本发明的肽拮抗剂可包含约束结构，其在两个连接的氨基酸残基的α-碳之间或两个连接的残基(例如氨基酸衍生物)的几何中心之间赋予约3.5至约10埃的空间间隔。在一些实施方案中，两个连接的氨基酸残基的α-碳之间的空间间隔，或两个连接的残基的几何中心之间的空间间隔为约3.5埃至约10埃。在一些实施方案中，两个连接的氨基酸残基的α-碳之间的空间间隔，或两个连接的残基的几何中心之间的空间间隔为至少约3.5埃。在一些实施方案中，两个连接的氨基酸残基的α-碳之间的空间间隔，或两个连接的残基的几何中心之间的空间间隔为至多约10埃。在一些实施方案中，两个连接的氨基酸残基的α-碳之间的空间间隔，或两个连接的残基的几何中心之间的空间间隔为约3.5埃至约4.5埃、约3.5埃至约5埃、约3.5埃至约5.5埃、约3.5埃至约6埃、约3.5埃至约6.5埃、约3.5埃至约7埃、约3.5埃至约7.5埃、约3.5埃至约8埃、约3.5埃至约8.5埃、约3.5埃至约9埃、约3.5埃至约10埃、约4.5埃至约5埃、约4.5埃至约5.5埃、约4.5埃至约6埃、约4.5埃至约6.5埃、约4.5埃至约7埃、约4.5埃至约7.5埃、约4.5埃至约8埃、约4.5埃至约8.5埃、约4.5埃至约9埃、约4.5埃至约10埃、约5埃至约5.5埃、约5埃至约6埃、约5埃至约6.5埃、约5埃至约7埃、约5埃至约7.5埃、约5埃至约8埃、约5埃至约8.5埃、约5埃至约9埃、约5埃至约10埃、约5.5埃至约6埃、约5.5埃至约6.5埃、约5.5埃至约7埃、约5.5埃至约7.5埃、约5.5埃至约8埃、约5.5埃至约8.5埃、约5.5埃至约9埃、约5.5埃至约10埃、约6埃至约6.5埃、约6埃至约7埃、约6埃至约7.5埃、约6埃至约8埃、约6埃至约8.5埃、约6埃至约9埃、约6埃至约10埃、约6.5埃至约7埃、约6.5埃至约7.5埃、约6.5埃至约8埃、约6.5埃至约8.5埃、约6.5埃至约9埃、约6.5埃至约10埃、约7埃至约7.5埃、约7埃至约8埃、约7埃至约8.5埃、约7埃至约9埃、约7埃至约10埃、约7.5埃至约8埃、约7.5埃至约8.5埃、约7.5埃至约9埃、约7.5埃至约10埃、约8埃至约8.5埃、约8埃至约9埃、约8埃至约10埃、约8.5埃至约9埃、约8.5埃至约10埃或约9埃至约10埃。在一些实施方案中，两个连接的氨基酸残基的α-碳之间的空间间隔，或两个连接的残基的几何中心之间的空间间隔为约3.5埃、约4.5埃、约5埃、约5.5埃、约6埃、约6.5埃、约7埃、约7.5埃、约8埃、约8.5埃、约9埃或约10埃。在实施例中，使用本领域已知的连接体或间隔分子实现特定的空间间隔。
本发明考虑在本发明的任何肽拮抗剂中使用任何氨基酸的氨基酸衍生物或类似物。在一些实施方案中，可以使用任何已知方法化学地进行氨基酸修饰。选择性蛋白质修饰在文献中有所描述，例如，Spicer和Davis,2014,“Selective chemical proteinmodification,”Nature Communications 5:4740，通过引用并入本文。
在一些实施方案中，氨基酸衍生物是非规范氨基酸。在一些实施方案中，非规范氨基酸在α位置处具有(S)构型。在一些实施方案中，非规范氨基酸在α位置处具有(R)构型。在一些实施方案中，非规范氨基酸是α氨基酸。在一些实施方案中，非规范氨基酸是β或γ氨基酸。在一些实施方案中，非规范氨基酸选自：芳族侧链氨基酸；非芳族侧链氨基酸；脂肪族侧链氨基酸；侧链酰胺氨基酸；侧链酯氨基酸；杂芳族侧链氨基酸；侧链硫醇氨基酸；β氨基酸；和骨架修饰的氨基酸。在一些实施方案中，非规范氨基酸是酪氨酸、组氨酸、色氨酸或苯丙氨酸的衍生物。在一些实施方案中，氨基酸的衍生物包含该氨基酸的酯、酰胺、二硫化物、氨基甲酸酯、脲、磷酸酯、醚。在一些实施方案中，非芳族侧链氨基酸是丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸或亮氨酸的衍生物。在一些实施方案中，非规范氨基酸选自2-氨基己二酸；3-氨基己二酸；β-丙氨酸；β-氨基丙酸；2-氨基丁酸；4-氨基丁酸；哌啶酸(piperidinic acid)；6-氨基己酸；2-氨基庚酸；2-氨基异丁酸；3-氨基异丁酸；2-氨基庚二酸；2,4-二氨基丁酸；锁链素；2,2'-二氨基庚二酸；2,3-二氨基丙酸；N-乙基甘氨酸；N-乙基天冬酰胺；羟赖氨酸；别羟赖氨酸；3-羟脯氨酸；4-羟脯氨酸；异锁链素；别异亮氨酸；N-甲基甘氨酸；肌氨酸；n-甲基异亮氨酸；6-N-甲基赖氨酸；N-甲基缬氨酸；正缬氨酸；正亮氨酸；和鸟氨酸。在一些实施方案中，非规范氨基酸是脯氨酸衍生物。在一些实施方案中，脯氨酸衍生物是3-氟脯氨酸、4-氟脯氨酸、3-羟脯氨酸、4-羟脯氨酸、3-氨基脯氨酸、4-氨基脯氨酸、3,4-脱氢脯氨酸、氮杂环丙烷-2-羧酸、氮杂环丁烷-2-羧酸、哌可酸、4-氧杂-脯氨酸、3-硫杂脯氨酸或4-硫杂脯氨酸。在一些实施方案中，非规范氨基酸包含脂质。
在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂包含一个或多个氨基酸衍生物或类似物，例如本领域技术人员已知的和文献或本文中描述的。在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、1-2、1-3、1-4、1-5、1-6、1-7、1-8、1-9、1-10、1-11、1-12或1-13个氨基酸衍生物。
在一些实施方案中，非规范氨基酸选自：芳族侧链氨基酸；非芳族侧链氨基酸；脂肪族侧链氨基酸；侧链酰胺氨基酸；侧链酯氨基酸；杂芳族侧链氨基酸；侧链硫醇氨基酸；β氨基酸；和骨架修饰的氨基酸。
根据段落1-25中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中所述肽中的一个或多个氨基酸具有D-氨基酸构型，并且所述肽中的其余氨基酸具有L-氨基酸构型。
在一些实施方案中，非规范氨基酸是脯氨酸衍生物。在一些实施方案中，脯氨酸衍生物在吡咯烷环上包含一个或多个取代。在一些实施方案中，脯氨酸衍生物在吡咯烷环上包含一个或多个取代，其中取代包含卤素、烷氧基、氨基、羟基、烷基(甲基、乙基)、巯基或烷硫基。在一些实施方案中，脯氨酸衍生物在吡咯烷环上包含一个或多个取代，其中取代包含卤素或烷基(甲基、乙基)。在一些实施方案中，脯氨酸衍生物在吡咯烷环上包含一个或多个取代，其中取代包含卤素。在一些实施方案中，脯氨酸衍生物在吡咯烷环上包含一个或多个取代，其中取代包含烷氧基、羟基、氨基。在一些实施方案中，脯氨酸衍生物在吡咯烷环上包含一个或多个取代，其中取代包含卤素、烷氧基、烷基(甲基、乙基)、巯基或烷硫基。
在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂包含促进肽拮抗剂示踪的示踪氨基酸衍生物。在测定期间或将肽组合物施用于受试者或患者之后检测肽拮抗剂中存在的非规范示踪氨基酸可以提供关于肽拮抗剂性质的有用信息，例如药代动力学性质(包括但不限于吸收、生物利用度、分布、代谢和排泄)、药效学性质(包括但不限于：受体结合特性，例如结合半衰期；受体后效应；和化学相互作用)、增强的活性(例如，由IC50表示)、稳定性(例如，由半衰期表示)、可溶性(例如，在制剂中)或渗透性(例如，含有肽拮抗剂的制剂对皮肤的穿透性)。
在一些实施方案中，使用任何适用于检测肽拮抗剂中存在的特定示踪氨基酸衍生物的测定来检测包含示踪氨基酸衍生物的肽。在一些实施方案中，色氨酸衍生物是示踪氨基酸。在一些实施方案中，该测定包括光谱学或放射性标记检测方法。在一些实施方案中，该测定测量药代动力学或药效学肽拮抗剂性质。
在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂的N末端氨基被修饰(N末端修饰)。在一些实施方案中，肽拮抗剂的N末端没有用另外的氨基酸或氨基酸衍生物修饰。在一些实施方案中，未修饰的N末端包含氢。在一些实施方案中，N末端修饰包含C
在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂的C末端酸基团被修饰(C末端修饰)。在一些实施方案中，C末端没有用另外的氨基酸或氨基酸衍生物修饰。在一些实施方案中，C末端没有用甘氨酸残基修饰。在一些实施方案中，未修饰的C末端包含-OH。在一些实施方案中，C末端修饰包含氨基，其中该氨基任选地被取代。在一些实施方案中，C末端修饰包含氨基，其中该氨基是未取代的(-NH
在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂的N末端氨基和C末端酸基团都被修饰。在一些实施方案中，本文所述的肽，例如具有表1中所列氨基酸序列的任何肽(不考虑表中所示的N和C末端)，具有独立地选自本文所述的任何N和C末端。在一些实施方案中，本文所述的肽，例如具有表1中所列氨基酸序列的任何肽(不考虑表中所示的N和C末端)，具有独立地选自Ac、NH
在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂包含脂质部分。在一些实施方案中，脂质部分共价连接至肽中的氨基酸。在一些实施方案中，脂质连接至N末端。在一些实施方案中，脂质连接至肽拮抗剂的半胱氨酸、丝氨酸、赖氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基(本文中也分别称为“cys-脂质”、“ser-脂质”、“lys-脂质”、“thr-脂质”或“tyr-脂质”)。在一些实施方案中，脂质共价连接至肽拮抗剂的半胱氨酸或赖氨酸残基。在一些实施方案中，脂质连接至非规范氨基酸。在一些实施方案中，脂质包含疏水性基团。在一些实施方案中，脂质包含脂肪酸基团。在一些实施方案中，脂质包含C
在一些实施方案中，所述脂质是通过棕榈酰化添加的半胱氨酸的共价修饰。在一些实施方案中，通过棕榈酰化添加的脂质是C
在一些实施方案中，所述脂质是通过异戊二烯化添加的半胱氨酸的共价修饰。在一些实施方案中，通过异戊二烯化添加的脂质是C
在一些实施方案中，cys-脂质具有结构I或II。
结构I：
结构II：
在一些实施方案中，测定本发明的肽拮抗剂以评价一种或多种肽性质，包括但不限于药代动力学性质(例如吸收、生物利用度、分布、代谢、排泄等)、药效学性质(包括：受体结合特性，例如结合半衰期；受体后效应；化学相互作用等)、增强的活性(例如，由IC
已经鉴定了天然肌肉型nAChR拮抗剂，例如来自银环蛇(Bungarus multicinctus)的α-芋螺毒素(描述于，例如，美国专利8,735,541，“α-Conotoxin peptides”，通过引用并入本文)、α-银环蛇毒素(描述于，例如，Albuquerque等人,2009，通过引用并入本文)、来自灰蓝扁尾海蛇(Laticauda colubrina)的神经毒素LC-a(描述于，例如，Kim和Tamiya,1982,Biochem.J.207:215-223，通过引用并入本文)和来自白头蝰(Azemiops feae)的神经毒素azemiopsin(描述于，例如，Utkin等人,2012,Azemiopsin from Azemiops feae ViperVenom,a Novel Polypeptide Ligand of Nicotinic Acetylcholine Receptor,J.ofBiol.Chem.287(32):27079-27086，通过引用并入本文)。
在一些实施方案中，本领域已知的适用于测试潜在肽拮抗剂对离子通道蛋白的影响的任何体内或体外测定被考虑用于评价本发明的肽拮抗剂。在一些实施方案中，例如在竞争性结合测定中测定肽拮抗剂与肌肉nAChr受体的结合。在一些实施方案中，使用基于通量的测定来评估离子通道活性的变化。在一些实施方案中，使用电生理学测定通过在小膜片内提供单个单元或单通道水平的离子通道功能数据来测量肽拮抗剂-通道相互作用的效力。在一些实施方案中，电生理学测定是自动化测定。在一些实施方案中，该自动化测定使用可商购获得的平台，例如PatchXpress and IonFlux(Molecular Devices,LLC,Sunnyvale,CA,USA)、QPatch HT/HTX(Sophion,Copenhagen)或Patchliner andSynchroPatch(Nanion Technologies GmbH,Munich)。在一些实施方案中，基于荧光的测定测量荧光的膜电位依赖性或离子浓度依赖性变化。在一些实施方案中，使用电压敏感染料测定，使用电位依赖性积累和再分布来测量跨细胞膜的电压变化。在一些实施方案中，在测量细胞内离子浓度或荧光共振能量转移(FRET)机制的测定中使用离子特异性荧光探针。在一些实施方案中，该测定是高通量测定。
可用于评价本发明肽拮抗剂的性质的其他测定包括例如皮肤和组织渗透测定。在一些实施方案中，测定测量受试者的表观治疗效果，例如皮肤皱纹的潜在减少的评估可用来评价肽拮抗剂。用于评价本发明肽拮抗剂的具体示例性测定在本文的实施例中详细描述。
在一些实施方案中，在测定中将肽拮抗剂与对照进行比较。在一些实施方案中，对照是阴性对照，例如随机肽。在一些实施方案中，对照是阳性对照。在一些实施方案中，对照是本领域已知的任何肌肉nAChR肽拮抗剂。在一些实施方案中，对照是本领域已知的具有表征的活性水平的任何肌肉nAChR肽拮抗剂。在实施方案中，对照肽是如SEQ ID NO:1-3和53-59中的任一个所示的肽。在实施方案中，对照是，例如，Glu-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Gly-Arg-His-Tyr-Ser-Cys(SEQ ID NO:1)；Glu-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Gly-Lys-His-Phe-Ser-Cys(SEQ ID NO:2)；或Gly-Arg-Cys-Cys-His-Pro-Ala-Cys-Gly-Lys-Asn-Tyr-Ser-Cys(SEQ ID NO:3)或其灭活的或毒性较低的形式。在一些实施方案中，有用的对照是如美国专利9,550,808(参见，例如，其中的图2)和国际公开文本WO 2017/102588,“NovelUse”中描述的肽，各自通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，对照肽具有氨基酸序列Trp-Tyr-Pro-Lys-Pro(SEQ ID NO:53)，描述于美国专利9,550,808，Gly-Pro-Arg-Pro-Ala(SEQ ID NO:54)(
在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂相对于神经元nAChR优先抑制肌肉nAChR。
在一些实施方案中，所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂选择性地抑制肌肉型烟碱乙酰胆碱受体。在相关实施方案中，所述肽拮抗剂的IC
在一些实施方案中，IC
在一些实施方案中，所述肽拮抗剂的IC50为约25纳摩尔至约150纳摩尔。在一些实施方案中，所述肽拮抗剂的IC50为至少约25纳摩尔。在一些实施方案中，所述肽拮抗剂的IC50为至多约150纳摩尔。在一些实施方案中，所述肽拮抗剂的IC50为约25纳摩尔至约35纳摩尔、约25纳摩尔至约40纳摩尔、约25纳摩尔至约45纳摩尔、约25纳摩尔至约50纳摩尔、约25纳摩尔至约60纳摩尔、约25纳摩尔至约70纳摩尔、约25纳摩尔至约75纳摩尔、约25纳摩尔至约100纳摩尔、约25纳摩尔至约110纳摩尔、约25纳摩尔至约125纳摩尔、约25纳摩尔至约150纳摩尔、约35纳摩尔至约40纳摩尔、约35纳摩尔至约45纳摩尔、约35纳摩尔至约50纳摩尔、约35纳摩尔至约60纳摩尔、约35纳摩尔至约70纳摩尔、约35纳摩尔至约75纳摩尔、约35纳摩尔至约100纳摩尔、约35纳摩尔至约110纳摩尔、约35纳摩尔至约125纳摩尔、约35纳摩尔至约150纳摩尔、约40纳摩尔至约45纳摩尔、约40纳摩尔至约50纳摩尔、约40纳摩尔至约60纳摩尔、约40纳摩尔至约70纳摩尔、约40纳摩尔至约75纳摩尔、约40纳摩尔至约100纳摩尔、约40纳摩尔至约110纳摩尔、约40纳摩尔至约125纳摩尔、约40纳摩尔至约150纳摩尔、约45纳摩尔至约50纳摩尔、约45纳摩尔至约60纳摩尔、约45纳摩尔至约70纳摩尔、约45纳摩尔至约75纳摩尔、约45纳摩尔至约100纳摩尔、约45纳摩尔至约110纳摩尔、约45纳摩尔至约125纳摩尔、约45纳摩尔至约150纳摩尔、约50纳摩尔至约60纳摩尔、约50纳摩尔至约70纳摩尔、约50纳摩尔至约75纳摩尔、约50纳摩尔至约100纳摩尔、约50纳摩尔至约110纳摩尔、约50纳摩尔至约125纳摩尔、约50纳摩尔至约150纳摩尔、约60纳摩尔至约70纳摩尔、约60纳摩尔至约75纳摩尔、约60纳摩尔至约100纳摩尔、约60纳摩尔至约110纳摩尔、约60纳摩尔至约125纳摩尔、约60纳摩尔至约150纳摩尔、约70纳摩尔至约75纳摩尔、约70纳摩尔至约100纳摩尔、约70纳摩尔至约110纳摩尔、约70纳摩尔至约125纳摩尔、约70纳摩尔至约150纳摩尔、约75纳摩尔至约100纳摩尔、约75纳摩尔至约110纳摩尔、约75纳摩尔至约125纳摩尔、约75纳摩尔至约150纳摩尔、约100纳摩尔至约110纳摩尔、约100纳摩尔至约125纳摩尔、约100纳摩尔至约150纳摩尔、约110纳摩尔至约125纳摩尔、约110纳摩尔至约150纳摩尔或约125纳摩尔至约150纳摩尔。在一些实施方案中，所述肽拮抗剂的IC50为约25纳摩尔、约35纳摩尔、约40纳摩尔、约45纳摩尔、约50纳摩尔、约60纳摩尔、约70纳摩尔、约75纳摩尔、约100纳摩尔、约110纳摩尔、约125纳摩尔或约150纳摩尔。
在一些实施方案中，IC
在一些实施方案中，使用本发明的肽拮抗剂观察到的IC
在一些实施方案中，对照肽是芋螺毒素GI(CGI，SEQ ID NO:1)。在一些实施方案中，对照肽是芋螺毒素MI(CMI，SEQ ID NO:3)。在一些实施方案中，本发明的肽拮抗剂的IC
在一些实施方案中，相对于使用本领域已知的不同肌肉nAChR肽拮抗剂在相同或相当的测定中所测量的，在本文描述的或本领域已知的活性测定中测量的本发明肽拮抗剂的性质得到改善。在一些实施方案中，改善是约2x至约10x，或更多。
考虑将本发明的肽拮抗剂用于受试者的化妆品用途，其适应症包括但不限于：预防或暂时改善皮肤皱纹、皮肤松弛、与皱眉肌和/或降眉间肌活动相关的中度至重度眉间纹、与眼轮匝肌活动相关的中度至重度外眦线(鱼尾纹)以及与额肌活动相关的中度至重度前额线中的一种或多种的外观。
在一些实施方案中，考虑将本发明的肽拮抗剂用于onabotulinum毒素A(BTX-A)已被监管机构批准的任何美容适应症。目前批准的onabotulinum毒素A化妆品的适应症可从美国食品和药品管理局(10903New Hampshire Avenue,Silver Spring,MD 20993)获得。
考虑将本发明的肽拮抗剂用于受试者的药物用途，其适应症包括但不限于：预防或暂时改善皮肤皱纹(例如在面部)、皮肤松弛、与皱眉肌和/或降眉间肌活动相关的中度至重度眉间纹、与眼轮匝肌活动相关的中度至重度外眦线(鱼尾纹)以及与额肌活动相关的中度至重度前额线中的一种或多种的外观；治疗膀胱过度活动症(OAB)；治疗尿失禁；预防头痛；治疗痉挛；治疗颈肌张力障碍；治疗多涎(也称为涎分泌过多或流涎)；治疗与肌张力障碍相关的眼睑痉挛；以及治疗斜视。
在一些实施方案中，受试者是哺乳动物。在特定实施方案中，该哺乳动物是人。在一些实施方案中，该人类受试者是任何年龄的儿科或成年受试者。
本发明的肽拮抗剂可以以化妆品或药物组合物的形式提供。在一些实施方案中，本发明的化妆品或药物组合物：使用对角质组织例如皮肤无毒并且在美容、药学和/或皮肤病学上可接受的赋形剂或载体来配制；并且在包含亚免疫学剂量的组合物的治疗中施用。
预期向受试者施用本发明的制剂，例如化妆品或药物组合物，不会导致不良反应，即使在重复和经常施用时，例如，如本文所述。在实施方案中，不良反应很小、很少或不存在。局部应用的不良反应可包括例如轻度至重度皮肤疼痛、发红、灼痛、瘙痒、刺激或通常与局部组合物相关的其他任何副作用。本发明的制剂避免的更严重的反应可包括与产品标签中描述的可注射神经毒素相关的副作用，例如，如本文所提及的。
本发明包括包含本发明的肽拮抗剂的化妆品组合物。在一些实施方案中，所述化妆品组合物被配制用于局部施用。在一些实施方案中，所述化妆品组合物被配制用于以乳膏、香膏、凝胶、溶液、精华素、化妆品、液体、洗剂、软膏、乳液、乳、喷雾剂、面膜等形式局部施用。
在一些实施方案中，局部化妆品或药物组合物包含赋形剂或载体或2、3种或更多种赋形剂或载体的合适组合。在一些实施方案中，任何合适的赋形剂或载体或多种赋形剂和/或载体的组合选自本领域技术人员已知的和文献中描述的赋形剂，例如在局部制剂中有用的赋形剂。在一些实施方案中，在局部制剂中有用的赋形剂或载体选自：惰性赋形剂或载体、缓冲液、吸收促进剂(渗透剂)和稳定性增强剂。在一些实施方案中，惰性赋形剂或载体是水、异丙醇、气态碳氟化合物、乙醇、聚乙烯吡咯烷酮、丙二醇、香料、产凝胶材料、硬脂醇、硬脂酸、鲸蜡、失水山梨醇单油酸酯或甲基纤维素。在一些实施方案中，赋形剂是无机化合物。在一些实施方案中，赋形剂是碳水化合物。在一些实施方案中，赋形剂是二氨基丁酰基苄基酰胺、二乙酸盐、甘油、树胶、亲水胶体或衍生物、纤维素衍生物、乳化剂、脂肪醇、丙烯酸衍生物、矿物质、表面活性剂、脂肪、油、防腐剂、单糖、双糖、多糖、糖胺聚糖或螯合剂。
在一些实施方案中，所述吸收促进剂选自：脂质体递送系统、传递体递送系统、醇质体递送系统、短链醇、长链醇、多元醇、尿素、氨基酸、氨基酸酯、胺、酰胺、氮杂环化合物(例如，1-十二烷基氮杂环庚-2-酮
在一些实施方案中，所述稳定性增强剂是小分子肽。在一些实施方案中，所述小分子肽选自：三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、乙酰基六肽-3Cosmetic Topical Peptide、美拉诺坦II、ACVR2B(ACE-031)、
在一些实施方案中，所述化妆品组合物进一步包含一种或多种附加活性成分。在一些实施方案中，所述一种或多种附加活性成分选自：第二种不同的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂、抗皱纹剂、视黄醇类、抗氧化剂、类视黄醇、生长因子、胶原蛋白刺激肽、载体肽、抑制tTAT-超氧化物歧化酶的肽、抑制蛋白酶的肽、刺激透明质酸合酶2的肽和基于角蛋白的肽。
在一些实施方案中，所述化妆品组合物包含脂质体递送系统。在一些实施方案中，该脂质体递送系统可包括例如水包油乳液、胶束、混合胶束或脂质体。在一些实施方案中，胶体系统是脂质体或微球。在一些实施方案中，组合物被配制为聚(D,L)交酯微球。在一些实施方案中，化妆品组合物被配制为包含如下所述的特征，以用于药物组合物。
在一些实施方案中，使用本领域技术人员已知的方法选择赋形剂和/或脂质体递送系统以实现所需的渗透程度，例如实现基本上局部递送。
本发明还包括包含本发明的肽拮抗剂的药物组合物。在一些实施方案中，该药物组合物如上文对于包含本发明的肽拮抗剂的化妆品组合物所述进行配制。在一些实施方案中，该药物组合物被配制用于局部注射，例如皮内、逼尿肌内或皮下注射。在一些实施方案中，该药物组合物可包含生理学相容的盐水溶液。在一些实施方案中，可注射药物组合物可包含本领域技术人员已知的和文献中描述的任何一种或多种合适的赋形剂、载体、添加剂等。
在一些实施方案中，所述组合物被包封在适合局部注射的缓释递送媒介物中，例如胶体分散系统或聚合物稳定的晶体中。胶体分散系统可包括例如纳米胶囊、微球、珠和基于脂质的系统。基于脂质的系统(脂质体递送系统)包括例如水包油乳液、胶束、混合胶束和脂质体。在一些实施方案中，胶体系统是脂质体或微球。在一些实施方案中，组合物被配制为聚(D,L)交酯微球。
在一些实施方案中，本发明的化妆品或药物组合物使用任何适合于给药途径的赋形剂、载体或添加剂来配制，如在例如最新版本的Remington:The Science and Practiceof Pharmacy,L.Allen,ed.,第22版，和美国专利9,815,875，“Postsynaptically targetedchemodenervation agents and their methods of use”中所描述的，均通过引用并入本文。
本发明还涉及使用包含本发明的肽拮抗剂的化妆品或药物组合物的方法。在一些实施方案中，本发明涉及使用所述化妆品或药物组合物预防或暂时改善受试者皮肤皱纹(例如在面部)、皮肤松弛、与皱眉肌和/或降眉间肌活动相关的中度至重度眉间纹、与眼轮匝肌活动相关的中度至重度外眦线(鱼尾纹)以及与额肌活动相关的中度至重度前额线中的一种或多种的外观的方法，其包括向所述受试者的皮肤应用有效量的所述化妆品或药物组合物。
在一些实施方案中，将所述化妆品或药物组合物局部应用于受试者。本文提及的局部应用可指应用到一个或多个表面上，例如，角质组织上。局部应用可涉及直接应用到所需区域。当作为液体或气雾剂组合物存在时，局部化妆品或药物组合物或制品可以通过例如倾倒、滴落或喷雾来应用；当作为软膏、洗剂、乳膏、凝胶或类似组合物的形式时，通过抹平、刮擦、涂抹等来应用；当作为粉末时，通过喷粉来应用；或者通过其他任何适当的手段来应用。
在一些实施方案中，在用可注射神经毒素例如onabotulinum毒素A治疗之间的时间段期间，用有效量的局部化妆品或药物组合物治疗受试者，其中可注射神经毒素治疗旨在预防或暂时改善受试者中一种或多种特征的外观，包括皮肤皱纹(例如在面部)、皮肤松弛、与皱眉肌和/或降眉间肌活动相关的中度至重度眉间纹、与眼轮匝肌活动相关的中度至重度外眦线(鱼尾纹)以及与额肌活动相关的中度至重度前额线。在这些实施方案中，用本发明的局部化妆品或药物组合物进行的治疗实际上延长了由onabotulinum毒素A治疗赋予的预防或暂时改善一种或多种特征的外观的时间。在一些实施方案中，从用可注射神经毒素治疗后第二天、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26周开始，定期用本发明的局部化妆品或药物组合物治疗受试者。
在一些实施方案中，通过在治疗过程中局部应用有效量的化妆品或药物组合物一次或多次来治疗受试者，例如每天1-3次、每周1-21次、每天1次、每天2次或每天3次。在一些实施方案中，受试者用有效量的化妆品或药物组合物治疗约1次/周至约12次/周。在一些实施方案中，受试者用有效量的化妆品或药物组合物治疗至少约1次/周。在一些实施方案中，受试者用有效量的化妆品或药物组合物治疗至多约12次/周。在一些实施方案中，受试者用有效量的化妆品或药物组合物治疗约1次/周至约2次/周、约1次/周至约3次/周、约1次/周至约4次/周、约1次/周至约5次/周、约1次/周至约6次/周、约1次/周至约7次/周、约1次/周至约8次/周、约1次/周至约9次/周、约1次/周至约10次/周、约1次/周至约11次/周、约1次/周至约12次/周、约2次/周至约3次/周、约2次/周至约4次/周、约2次/周至约5次/周、约2次/周至约6次/周、约2次/周至约7次/周、约2次/周至约8次/周、约2次/周至约9次/周、约2次/周至约10次/周、约2次/周至约11次/周、约2次/周至约12次/周、约3次/周至约4次/周、约3次/周至约5次/周、约3次/周至约6次/周、约3次/周至约7次/周、约3次/周至约8次/周、约3次/周至约9次/周、约3次/周至约10次/周、约3次/周至约11次/周、约3次/周至约12次/周、约4次/周至约5次/周、约4次/周至约6次/周、约4次/周至约7次/周、约4次/周至约8次/周、约4次/周至约9次/周、约4次/周至约10次/周、约4次/周至约11次/周、约4次/周至约12次/周、约5次/周至约6次/周、约5次/周至约7次/周、约5次/周至约8次/周、约5次/周至约9次/周、约5次/周至约10次/周、约5次/周至约11次/周、约5次/周至约12次/周、约6次/周至约7次/周、约6次/周至约8次/周、约6次/周至约9次/周、约6次/周至约10次/周、约6次/周至约11次/周、约6次/周至约12次/周、约7次/周至约8次/周、约7次/周至约9次/周、约7次/周至约10次/周、约7次/周至约11次/周、约7次/周至约12次/周、约8次/周至约9次/周、约8次/周至约10次/周、约8次/周至约11次/周、约8次/周至约12次/周、约9次/周至约10次/周、约9次/周至约11次/周、约9次/周至约12次/周、约10次/周至约11次/周、约10次/周至约12次/周或约11次/周至约12次/周。在一些实施方案中，受试者用有效量的化妆品或药物组合物治疗约1次/周、约2次/周、约3次/周、约4次/周、约5次/周、约6次/周、约7次/周、约8次/周、约9次/周、约10次/周、约11次/周、约12次/周、约13次/周或约14次/周。
在一些实施方案中，将本发明的药物组合物施用于受试者，其适应症包括但不限于：预防或暂时改善皮肤皱纹(例如在面部)、皮肤松弛、与皱眉肌和/或降眉间肌活动相关的中度至重度眉间纹、与眼轮匝肌活动相关的中度至重度外眦线(鱼尾纹)以及与额肌活动相关的中度至重度前额线中的一种或多种的外观；治疗膀胱过度活动症(OAB)；治疗尿失禁；预防头痛；治疗痉挛；治疗颈肌张力障碍；治疗多涎(也称为涎分泌过多或流涎)；治疗与肌张力障碍相关的眼睑痉挛；以及治疗斜视。本发明组合物的施用可针对具体治疗适当地进行，例如通过局部注射。在一些实施方案中，本发明组合物通过例如皮内、逼尿肌内或皮下注射来施用。
在一些实施方案中，本发明的局部化妆品组合物是自应用的或由患者施用。在一些实施方案中，本发明的化妆品或药物组合物由医学专业人员例如在医疗办公室环境中应用或施用。
概要段落
1.一种肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其包含氨基酸序列：Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14
其中：
Xaa1不存在或选自Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa2不存在或选自：Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu、Ile，以及Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa3和Xaa8形成连接Xaa3-Xaa8；
Xaa4和Xaa14形成连接Xaa4-Xaa14；
Xaa5选自：Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His、Lys，以及Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa6选自：Pro及其衍生物；
Xaa7选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa9选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa10选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa11选自：Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His、Lys，以及Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa12选自：Phe、Trp、Tyr，以及Phe、Trp或Tyr的衍生物；
Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Ser、Thr、Arg、His、Lys，以及Cys、Met、Sec、Ser、Thr、Arg、His或Lys的衍生物；
N末端任选地被修饰；并且
C末端任选地被修饰。
2.根据段落1所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中：Xaa1不存在；
Xaa2不存在；
Xaa3-Xaa8连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；
Xaa4-Xaa14连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；
Xaa5选自：Asn、Asp、Gln、Glu，以及Asn、Asp、Gln或Glu的衍生物；
Xaa6选自：Pro及其衍生物；
Xaa7选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa9选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa10选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa11选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa12选自：Phe、Trp、Tyr，以及Phe、Trp或Tyr的衍生物；并且
Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Ser、Thr，以及Cys、Met、Sec、Ser或Thr的衍生物。
3.根据段落1所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中：Xaa1不存在；
Xaa2不存在；
Xaa3-Xaa8连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；
Xaa4-Xaa14连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；
Xaa5选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa6选自：Pro及其衍生物；
Xaa7选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa9选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa10选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa11选自：Asn、Asp、Gln、Glu，以及Asn、Asp、Gln或Glu的衍生物；
Xaa12选自：Phe、Trp、Tyr，以及Phe、Trp或Tyr的衍生物；并且
Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Ser、Thr，以及Cys、Met、Sec、Ser或Thr的衍生物。
4.根据段落1所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中：Xaa1不存在；
Xaa2选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa3-Xaa8连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；
Xaa4-Xaa14连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；
Xaa5选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa6选自：Pro及其衍生物；
Xaa7选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa9选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa10选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa11选自：Asn、Asp、Gln、Glu，以及Asn、Asp、Gln或Glu的衍生物；
Xaa12选自：Phe、Trp、Tyr，以及Phe、Trp或Tyr的衍生物；并且
Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Ser、Thr，以及Cys、Met、Sec、Ser或Thr的衍生物。
5.根据段落1所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中：Xaa1不存在；
Xaa2不存在；
Xaa3-Xaa8连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；
Xaa4-Xaa14连接选自：Cys-Cys连接、Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；
Xaa5选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa6选自：Pro及其衍生物；
Xaa7选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa9选自：Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa10选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa11选自：Arg、His、Lys，以及Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa12选自：Phe、Trp、Tyr，以及Phe、Trp或Tyr的衍生物；并且
Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Ser、Thr，以及Cys、Met、Sec、Ser或Thr的衍生物。
6.根据段落1-5中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中：
Xaa1不存在或选自Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa2不存在或选自：Asn、Asp、Gln、Arg、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu、Ile，以及Asn、Asp、Gln、Arg、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa3-Xaa8连接选自：Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；
Xaa4-Xaa14连接选自：Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；
Xaa5选自：Asp、Gln、Glu、Arg、His、Lys，以及Asp、Gln、Glu、Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa6选自：Pro及其衍生物；
Xaa7选自：Gly、Val、Leu、Ile以及Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa9选自：Ala、Val、Leu、Ile以及Ala、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa10选自：His、Lys，以及His或Lys的衍生物；
Xaa11选自：Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、Lys，以及Asn、Asp、Gln、Glu、Arg或Lys的衍生物；
Xaa12选自：Phe、Trp、Tyr，以及Phe或Trp的衍生物；并且
Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Thr、Arg、His、Lys，以及Cys、Met、Sec、Thr、Arg、His或Lys的衍生物；
7.根据段落1-5中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中：
Xaa1不存在或选自Ala、Gly、Val、Leu、Ile以及Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa2不存在或选自：Asn、Asp、Gln、Arg、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu、Ile，以及Asn、Asp、Gln、Arg、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa3-Xaa8连接选自：Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；
Xaa4-Xaa14连接选自：Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；
Xaa5选自：Asp、Gln、Glu、Arg、Lys，以及Asp、Gln、Glu、Arg或Lys的衍生物；
Xaa6选自：Pro及其衍生物；
Xaa7选自：Gly、Val、Leu、Ile以及Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa9选自：Ala、Val、Leu、Ile以及Ala、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa10选自：Arg、His，以及Arg或Lys的衍生物；
Xaa11选自：Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、Lys，以及Asn、Asp、Gln、Glu、Arg或Lys的衍生物；
Xaa12选自：Trp、Tyr，以及Trp或Tyr的衍生物；并且
Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Thr、Arg、His、Lys，以及Cys、Met、Sec、Thr、Arg、His或Lys的衍生物；
8.根据段落1-5中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中：
Xaa1不存在或选自Ala、Val、Leu、Ile以及Ala、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa2不存在或选自：Asn、Asp、Gln、Glu、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu、Ile，以及Asn、Asp、Gln、Glu、His、Lys、Phe、Trp、Tyr、Ala、Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa3-Xaa8连接选自：Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；
Xaa4-Xaa14连接选自：Sec-Sec连接、胱硫醚连接、内酰胺桥、硫醚连接和二碳连接；
Xaa5选自：Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、Lys，以及Asn、Asp、Gln、Glu、Arg或Lys的衍生物；
Xaa6选自：Pro及其衍生物；
Xaa7选自：Gly、Val、Leu、Ile以及Gly、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa9选自：Ala、Val、Leu、Ile以及Ala、Val、Leu或Ile的衍生物；
Xaa10选自：Arg、His，以及Arg或His的衍生物；
Xaa11选自：Asp、Gln、Glu、Arg、His、Lys，以及Asp、Gln、Glu、Arg、His或Lys的衍生物；
Xaa12选自：Phe、Trp，以及Phe或Trp的衍生物；并且
Xaa13选自：Cys、Met、Sec、Thr、Arg、His、Lys，以及Cys、Met、Sec、Thr、Arg、His或Lys的衍生物；
9.根据段落1所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中所述Xaa3-Xaa8连接和Xaa4-Xaa14连接独立地选自：
(vii)Cys-Cys连接；
(viii)Sec-Sec连接；
(ix)胱硫醚连接；
(x)内酰胺桥，
(xi)硫醚连接，和(xii)二碳连接。
10.根据段落9所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中所述硫醚连接是羊毛硫氨酸连接。
11.根据段落1-10中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中Xaa3与Xaa8之间的连接在Xaa3和Xaa8各自的α碳或几何中心之间的空间间隔为约3.5至约10埃，其中Xaa4与Xaa14之间的连接在Xaa4和Xaa14各自的α碳或几何中心之间的空间间隔为约3.5至约10埃，或两者兼具。
12.根据段落1-11中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中N末端被修饰为包含C1-C6酰基、C1-C8烷基、C6-C12芳烷基、C5-C10芳基、C4-C8杂芳基、甲酰基或脂质。
13.根据段落1-12中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中N末端没有被氨基酸或氨基酸的衍生物修饰。
14.根据段落1-13中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中C末端被修饰为包含NH
15.根据段落1-14中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体大环肽拮抗剂，其中C末端没有被氨基酸或氨基酸的衍生物修饰。
16.根据段落1-15中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中脂质共价连接至半胱氨酸、丝氨酸、赖氨酸、苏氨酸或酪氨酸。
17.根据段落16所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中所述脂质共价连接至半胱氨酸或赖氨酸。
18.根据段落1-17中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中所述脂质包含C6-C20烷基、C6-C20烯基、C6-C20炔基或C6-C20酰基。
19.根据段落1-17中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中所述脂质包含牻牛儿基、法呢基或牻牛儿基牻牛儿基。
20.根据段落1-17中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中所述脂质包含十一碳酰基、月桂酰基、十三碳酰基、肉豆蔻酰基、棕榈酰基或硬脂酰基。
21.根据段落1-17中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中所述脂质是通过棕榈酰化或异戊二烯化添加的Cys的共价修饰。
22.根据段落1-21中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其包含至少一种衍生物，该衍生物是选自下组的非规范氨基酸：芳族侧链氨基酸；非芳族侧链氨基酸；脂肪族侧链氨基酸；侧链酰胺氨基酸；侧链酯氨基酸；杂芳族侧链氨基酸；侧链硫醇氨基酸；β氨基酸；和骨架修饰的氨基酸。
23.根据段落22所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中所述芳族侧链氨基酸是酪氨酸、组氨酸、色氨酸或苯丙氨酸的衍生物。
24.根据段落22所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中所述非芳族侧链氨基酸是丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸或亮氨酸的衍生物。
25.根据段落1-22中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其包含作为选自下组的非规范氨基酸的衍生物：2-氨基己二酸；3-氨基己二酸；β-丙氨酸；β-氨基丙酸；2-氨基丁酸；4-氨基丁酸；哌啶酸(piperidinic acid)；6-氨基己酸；2-氨基庚酸；2-氨基异丁酸；3-氨基异丁酸；2-氨基庚二酸；2,4-二氨基丁酸；锁链素；2,2'-二氨基庚二酸；2,3-二氨基丙酸；N-乙基甘氨酸；N-乙基天冬酰胺；羟赖氨酸；别羟赖氨酸；3-羟脯氨酸；4-羟脯氨酸；异锁链素；别异亮氨酸；N-甲基甘氨酸；肌氨酸；n-甲基异亮氨酸；6-N-甲基赖氨酸；N-甲基缬氨酸；正缬氨酸；正亮氨酸；和鸟氨酸。
26.根据段落1-25中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中所述肽中的一个或多个氨基酸具有D-氨基酸构型，并且所述肽中的其余氨基酸具有L-氨基酸构型。
27.根据段落1-26中任一项所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中所述拮抗剂选择性地抑制肌肉型烟碱乙酰胆碱受体。
28.根据段落27所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中IC50为约1毫摩尔至约1皮摩尔。
29.根据段落28所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中IC50是通过活性测定确定的。
30.根据段落29所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其中所述活性测定是竞争性结合测定或抑制乙酰胆碱受体离子通道传导的测定。
31.一种化妆品组合物，其包含段落1-30和55中任一项的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，用于预防或暂时改善受试者中皮肤皱纹、皮肤松弛、与皱眉肌和/或降眉间肌活动相关的中度至重度眉间纹、与眼轮匝肌活动相关的中度至重度外眦线以及与额肌活动相关的中度至重度前额线中的一种或多种的外观。
32.根据段落31所述的化妆品组合物，其被配制用于局部使用。
33.根据段落32所述的化妆品组合物，其包含一种或多种选自下组的赋形剂：水、缓冲液、吸收促进剂、稳定性增强剂、二氨基丁酰基苄基酰胺、二乙酸盐、甘油、树胶、亲水胶体或衍生物、纤维素衍生物、乳化剂、脂肪醇、丙烯酸衍生物、矿物质、表面活性剂、脂肪、油、防腐剂、单糖、双糖、多糖、糖胺聚糖和螯合剂。
34.根据段落33所述的化妆品组合物，其中所述吸收促进剂选自：脂质体递送系统、传递体递送系统、醇质体递送系统、短链醇、长链醇、多元醇、尿素、氨基酸、氨基酸酯、胺、酰胺、1-十二烷基氮杂环庚-2-酮
35.根据段落34所述的化妆品组合物，其中所述稳定性增强剂是小分子肽。
36.根据段落35所述的化妆品组合物，其中所述小分子肽选自：三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、乙酰基六肽-3Cosmetic Topical Peptide、美拉诺坦II、ACVR2B(ACE-031)、
37.根据段落31-36中任一项所述的化妆品组合物，其进一步包含一种或多种其他活性成分。
38.根据段落37所述的化妆品组合物，其中所述一种或多种其他活性成分选自：第二种不同的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂、抗氧化剂、类视黄醇、生长因子、胶原蛋白刺激肽、载体肽、抑制tTAT-超氧化物歧化酶的肽、抑制蛋白酶的肽、刺激透明质酸合酶2的肽和基于角蛋白的肽。
39.根据段落31-37中任一项所述的化妆品组合物，其包含脂质体递送系统。
40.根据段落31-39中任一项所述的化妆品组合物，其中所述化妆品组合物是乳膏、香膏、凝胶、溶液、精华素、化妆品、液体、洗剂、软膏、乳液、乳、喷雾剂、面膜等。
41.根据段落31-39中任一项所述的化妆品组合物，其包含约0.01％至约5％w/w的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂。
42.一种药物组合物，其包含段落1-30和55中任一项的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，用于：预防或暂时改善受试者中皮肤皱纹、皮肤松弛、与皱眉肌和/或降眉间肌活动相关的中度至重度眉间纹、与眼轮匝肌活动相关的中度至重度外眦线以及与额肌活动相关的中度至重度前额线中的一种或多种的外观；治疗膀胱过度活动症(OAB)；治疗尿失禁；预防头痛；治疗痉挛；治疗颈肌张力障碍；治疗多涎；治疗与肌张力障碍相关的眼睑痉挛；或治疗斜视。
43.根据段落42所述的药物组合物，其被配制用于皮内、皮下、肌肉内或逼尿肌内给药。
44.根据段落43所述的药物组合物，其包含一种或多种赋形剂。
45.一种预防或暂时改善受试者皮肤皱纹、皮肤松弛、与皱眉肌和/或降眉间肌活动相关的中度至重度眉间纹、与眼轮匝肌活动相关的中度至重度外眦线以及与额肌活动相关的中度至重度前额线中的一种或多种的外观的方法，其包括向所述受试者的皮肤应用有效量的段落31-40中任一项的化妆品组合物。
46.根据段落45所述的方法，其中所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂以一剂或多剂化妆品组合物应用。
47.根据段落46所述的方法，其中约每小时一次至约每两周一次应用一剂化妆品组合物。
48.根据段落47所述的方法，其中约每天一次应用一剂化妆品组合物。
49.根据段落45-48中任一项所述的方法，其中所述化妆品组合物可以无限期地应用，而没有不良反应。
50.根据段落45-49中任一项所述的方法，其中所述化妆品组合物的剂量是亚免疫剂量。
51.一种预防或暂时改善受试者中皮肤皱纹、皮肤松弛、与皱眉肌和/或降眉间肌活动相关的中度至重度眉间纹、与眼轮匝肌活动相关的中度至重度外眦线以及与额肌活动相关的中度至重度前额线中的一种或多种的外观；治疗膀胱过度活动症(OAB)；治疗尿失禁；预防头痛；治疗痉挛；治疗颈肌张力障碍；治疗多涎；治疗与肌张力障碍相关的眼睑痉挛；或治疗斜视的方法，其包括向所述受试者施用有效量的段落42-44中任一项的药物组合物。
52.根据段落51所述的方法，其中所述肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂在一次或多次采用药物组合物的治疗中施用。
53.根据段落52所述的方法，其中每次治疗的施用包括通过向一个或多个治疗部位注射来注射所述药物组合物。
54.根据段落51-53中任一段所述的方法，其中每次治疗包括亚免疫剂量的所述药物组合物。
55.一种肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其包含SEQ ID NO:4-52和60-79中任一个所示的氨基酸序列。
56.根据段落55所述的肌肉型烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂，其包含SEQ ID NO:60、61、62、73和78中任一个所示的氨基酸序列。
实施例
实施例1.使用拮抗剂放射性配体竞争测定评价肌肉型nAChR肽拮抗剂与nAChR(α1)人离子通道的结合
在竞争测定中评价本发明的肌肉型nAChR肽拮抗剂与nAChR的α1亚单位的结合。使用人横纹肌肉瘤细胞在pH 7.4的林格氏溶液中制备烟碱乙酰胆碱银环蛇毒素敏感性肌膜。对于乙酰胆碱位点竞争结合测定，富含nAChR的膜(240mg/mL)的悬浮液与0.6nM[
使用该测定，将本发明的肽拮抗剂与nAChR的α1亚单位的结合与对照肽，例如具有SEQ ID NO:53所示氨基酸序列的肽，或具有SEQ ID NO:1-3和53-59中任一个所示序列的肽进行比较。
实施例2.使用基于nAChR(α/β/δ/ε)人离子通道细胞的拮抗剂IonFlux测定评价肌肉型nAChR肽拮抗剂对离子通道活性的影响：与CGI的比较
使用Fluxion Bioscience IonFlux HT(Molecular Devices)Automated PatchClamp微流体设计进行离子通道记录(Eurofins)。将表达人nAChR的细胞(MilliporePrecisIONTM hnAChRα1/β1/γ/ε-HEK 293重组细胞系，目录号CYL3052)在含有DMEM/F12glutamax、胎牛血清、非必需氨基酸、遗传霉素和潮霉素B的培养基中在37℃和5％CO
使用该测定，将表1中所示的代表性肽拮抗剂的作用与具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的阳性对照肽(芋螺毒素GI，也称为CGI)的作用进行比较。肽由AnaSpec(Fremont,CA)合成。基于相对于激动剂的传导抑制百分比，确定了IC
表3.肽拮抗剂对离子通道活性的影响
实施例3.使用动态通量测定评价肽拮抗剂对人皮肤的渗透
在体外用Franz扩散池在动态通量测定中测试本发明的肽拮抗剂的皮肤渗透和穿透。使用人表皮膜和
使用该测定，将本发明的肽拮抗剂的皮肤渗透与具有SEQ ID NO:53所示氨基酸序列的肽，或具有SEQ ID NO:1-3和53-59中任一个所示序列的肽进行比较。
实施例4.与安慰剂相比，肌肉型nAChR肽拮抗剂治疗面部皱纹的安全性和有效性评价
在一项随机化、双盲人类临床试验中，与安慰剂相比，测试了本发明的肌肉型nAChR肽拮抗剂在治疗面部皱纹(皮肤皱纹)和眉间皱眉纹方面的安全性和有效性。患者(每组50人)在第1天用注射到双侧前额和皱眉纹区域的一定量的肌肉型nAChR肽拮抗剂或安慰剂(生理盐水)治疗。
在第30天，使用采用Photonumeric Guide(FWS)的4分面部皱纹量表：0＝无，1＝轻度，2＝中度，或3＝重度，评估患者前额线在最大眉毛抬高时的严重程度。确定评分为无或轻度的参与者的百分比。
同样在第30天，患者使用采用Photonumeric Guide(FWS)的4分面部皱纹量表：0＝无，1＝轻度，2＝中度，或3＝重度，评估其前额线在最大眉毛抬高时的严重程度，并确定评分为无或轻度的参与者的百分比。
次要结局指标：通过受试者对前额线外观满意度的评估(参与者评估)，获得满意或非常满意的参与者百分比。
在第30天，参与者使用5分量表：1＝非常不满意，2＝不满意，3＝一般，4＝满意，或5＝非常满意，对其前额线区域外观的总体满意度进行评级。确定评级为满意或非常满意的参与者的百分比。
次要结局指标：研究者评估的静止时前额线FWS比基线改善＝1级的参与者的百分比。
在基线时和第30天，研究者使用4分FWS：0＝无，1＝轻度，2＝中度，或3＝重度，评估患者静止时前额线的严重程度。确定比基线时改善＝1级的参与者的百分比。
次要结局指标：受试者评估的静止时前额线FWS比基线改善＝1级的参与者的百分比。
在基线时和第30天，参与者使用4分FWS：0＝无，1＝轻度，2＝中度，或3＝重度，评估其静止时前额线的严重程度。确定比基线时改善＝1级的参与者的百分比。
实施例5.使用基于nAChR(α1/β1/δ/ε)人离子通道细胞的拮抗剂IonFlux测定评价肌肉型nAChR肽拮抗剂对离子通道活性的影响：与CMI的比较
进一步使用实施例2中描述的测定评价如表1中所列的肽，包括如实施例2中所述测试的肽，以及具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的阳性对照肽(芋螺毒素MI，也称为CMI)。基于例如计算的IC
虽然本文已经显示并描述了本发明的优选实施方案，但是对于本领域技术人员显而易见的是，这些实施方案仅以示例的方式提供。在不脱离本发明的情况下，本领域技术人员现将想到许多变化、改变和替换。应当理解，在实施本发明的过程中可以采用本文所述的本发明实施方案的各种替代方案。旨在以所附权利要求书限定本发明的范围，由此涵盖在这些权利要求范围内的方法和结构及其等同物。
表4：列出的序列表
序列表
<110> 格罗制药有限责任公司
<120> 烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂芋螺毒素组合物及相关方法
<130> 54780-703.601
<140>
<141>
<150> 62/867,128
<151> 2019-06-26
<150> 62/746,398
<151> 2018-10-16
<160> 79
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 13
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列的描述：合成
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列的描述：合成
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Arg Xaa Xaa His Pro Ala Xaa Gly Lys Asn Tyr Ser Xaa
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<210> 28
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
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<221> MOD_RES
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<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
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Arg Xaa Xaa His Pro Ala Xaa Gly Lys Asn Tyr Ser Xaa
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 29
Arg Cys Cys His Pro Ala Cys Gly Lys Asn Tyr Ser Cys
1 5 10
<210> 30
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cyt
<400> 30
Arg Cys Xaa Lys Pro Ala Cys Gly Lys Asn Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 31
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cyt
<400> 31
Arg Cys Xaa His Pro Ala Cys Gly Lys Asn Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 32
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cyt
<400> 32
Arg Xaa Cys His Pro Ala Xaa Gly Arg Asn Tyr Ser Cys
1 5 10
<210> 33
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cyt
<400> 33
Arg Xaa Xaa Arg Pro Ala Xaa Gly Lys Asn Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 34
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cyt
<400> 34
Arg Xaa Xaa His Pro Ala Xaa Gly His Asn Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 35
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cyt
<400> 35
Arg Xaa Xaa Arg Pro Ala Xaa Gly Lys Asn Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 36
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Sec
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Sec
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Sec
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Sec
<400> 36
Arg Xaa Xaa His Pro Ala Xaa Gly Lys Asn Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 37
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cyt
<400> 37
Lys Xaa Xaa His Pro Ala Xaa Gly Lys Asn Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 38
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cyt
<400> 38
Lys Xaa Xaa His Pro Ala Xaa Gly Arg Asn Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 39
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 39
Xaa Xaa His Pro Ala Xaa Gly Arg His Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 40
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 40
Cys Cys Lys Pro Ala Cys Gly Arg His Tyr Ser Cys
1 5 10
<210> 41
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 41
Cys Xaa His Pro Ala Cys Gly Arg His Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 42
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 42
Cys Xaa His Pro Ala Cys Gly Arg His Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 43
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 43
Xaa Xaa His Pro Ala Xaa Gly Lys His Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 44
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 44
Xaa Xaa His Pro Ala Xaa Gly Arg His Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 45
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 45
Xaa Xaa His Pro Ala Xaa Gly Lys His Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 46
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<400> 46
Xaa Cys His Pro Ala Xaa Gly Arg Lys Tyr Ser Cys
1 5 10
<210> 47
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<400> 47
Xaa Cys His Pro Ala Xaa Gly Arg Lys Tyr Ser Cys
1 5 10
<210> 48
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<400> 48
Xaa Cys His Pro Ala Xaa Gly Arg Lys Tyr Ser Cys
1 5 10
<210> 49
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 49
Xaa Xaa His Pro Ala Xaa Gly Arg His Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 50
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 50
Xaa Xaa Lys Pro Ala Xaa Gly Arg His Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 51
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Sec
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Sec
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 51
Xaa Xaa His Pro Ala Xaa Gly Lys His Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 52
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Sec
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Sec
<400> 52
Xaa Xaa His Pro Ala Xaa Gly Arg His Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 53
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 53
Trp Tyr Pro Lys Pro
1 5
<210> 54
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 54
Gly Pro Arg Pro Ala
1 5
<210> 55
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 55
Cys Lys Met Trp Ala Asp Ala Phe Thr Ser Ser Arg Gly Lys Val Val
1 5 10 15
Glu Cys Gly
<210> 56
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 56
Glu Cys Cys His Pro Ala Cys Gly Lys His Phe Ser Cys
1 5 10
<210> 57
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 57
Asp Asn Trp Trp Pro Lys Arg Pro His
1 5
<210> 58
<211> 74
<212> PRT
<213> 银环蛇（Bungarus multicinctus）
<400> 58
Ile Val Cys His Thr Thr Ala Thr Ser Pro Ile Ser Ala Val Thr Cys
1 5 10 15
Pro Pro Gly Glu Asn Leu Cys Tyr Arg Lys Met Trp Cys Asp Ala Phe
20 25 30
Cys Ser Ser Arg Gly Lys Val Val Glu Leu Gly Cys Ala Ala Thr Cys
35 40 45
Pro Ser Lys Lys Pro Tyr Glu Glu Val Thr Cys Cys Ser Thr Asp Lys
50 55 60
Cys Asn Pro His Pro Lys Gln Arg Pro Gly
65 70
<210> 59
<211> 69
<212> PRT
<213> 灰蓝扁尾海蛇(Laticauda colubrina)
<400> 59
Arg Ile Cys Tyr Leu Ala Pro Arg Asp Thr Gln Ile Cys Ala Pro Gly
1 5 10 15
Gln Glu Ile Cys Tyr Leu Lys Ser Trp Asp Asp Gly Thr Gly Phe Leu
20 25 30
Lys Gly Asn Arg Leu Glu Phe Gly Cys Ala Ala Thr Cys Pro Thr Val
35 40 45
Lys Pro Gly Ile Asp Ile Lys Cys Cys Ser Thr Asp Lys Cys Asn Pro
50 55 60
His Pro Lys Leu Ala
65
<210> 60
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 60
Cys Cys Asn Pro Ala Cys Gly Lys Asn Tyr Ser Cys
1 5 10
<210> 61
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 61
Cys Cys His Pro Ala Cys Gly Arg His Tyr Ser Cys
1 5 10
<210> 62
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 62
Cys Cys Asn Pro Ala Cys Gly Lys Asn Tyr Lys Cys
1 5 10
<210> 63
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 63
Xaa Xaa Asn Pro Ala Xaa Gly Lys Asn Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 64
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 64
Xaa Xaa His Pro Ala Xaa Gly Arg His Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 65
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 65
Xaa Xaa Asn Pro Ala Xaa Gly Lys Asn Tyr Lys Xaa
1 5 10
<210> 66
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 66
Cys Xaa Asn Pro Ala Cys Gly Lys Asn Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 67
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 67
Cys Xaa His Pro Ala Cys Gly Arg His Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 68
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 68
Cys Xaa Asn Pro Ala Cys Gly Lys Asn Tyr Lys Xaa
1 5 10
<210> 69
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<400> 69
Xaa Cys Asn Pro Ala Xaa Gly Lys Asn Tyr Ser Cys
1 5 10
<210> 70
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<400> 70
Xaa Cys His Pro Ala Xaa Gly Arg His Tyr Ser Cys
1 5 10
<210> 71
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<400> 71
Xaa Cys Asn Pro Ala Xaa Gly Lys Asn Tyr Lys Cys
1 5 10
<210> 72
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cyt
<400> 72
Arg Xaa Cys His Pro Ala Xaa Gly Lys Asn Tyr Ser Cys
1 5 10
<210> 73
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cyt
<400> 73
Arg Cys Xaa His Pro Ala Cys Gly Lys Asn Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 74
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 74
Arg Cys Cys His Pro Ala Cys Gly Lys Asn Tyr Ser Cys
1 5 10
<210> 75
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cyt
<400> 75
Arg Xaa Xaa His Pro Ala Xaa Gly Lys Asn Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 76
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 76
Cys Xaa His Pro Ala Cys Gly Lys Asn Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 77
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cyt
<400> 77
Xaa Xaa His Pro Ala Xaa Gly Lys Asn Tyr Ser Xaa
1 5 10
<210> 78
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 78
Cys Cys His Pro Ala Cys Gly Lys Asn Tyr Ser Cys
1 5 10
<210> 79
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Cyt
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cyt
<400> 79
Xaa Cys His Pro Ala Xaa Gly Lys Asn Tyr Ser Cys
1 5 10
机译： 烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂鉴别毒素组合物和相关方法
机译： 烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂鉴别毒素组合物和相关方法
机译： 烟碱乙酰胆碱受体肽拮抗剂芋头毒素组合物及相关方法
