通过对CD163靶向灭活来改善猪类健康的方法

摘要

本发明涉及用于在动物（包括猪种群的动物）中预防猪繁殖和呼吸障碍综合症（PRRSv）的方法和组合物。本发明教导涉及其中CD163基因的至少一个等位基因已失活的猪，以及用于在基因编辑中失活CD163基因的具体方法和核酸序列。CD163基因的两个等位基因均失活的猪，对猪繁殖和呼吸障碍综合症（PRRSv）具有抵抗力。包含纯合CD163编辑基因的优良系保留了它们的优异特性。

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求第63/020,128号、申请日为2020年5月5日的美国临时专利申请和第63/021,370号、申请日为2020年5月7日的美国临时专利申请的权益和优先权。第63/020,128号和第63/021,370号申请分别借引用全文并入于此。

对以电子方式提交的序列表的引用

序列表的正式副本通过EFS-Web以ASCII格式电子提交，该文件的文件名为“RD-12-2020-US2-SEQLST”，创建日期为2021年3月10日，大小为137058字节，与专利说明书同时提交。该ASCII格式文件所包含的序列表系专利说明书的一部分并在此通过引用方式完整纳入本申请。

技术领域

本发明涉及改善猪类健康的方法。具体而言，本发明涉及通过对CD163进行靶向多核苷酸编辑来使猪类(

背景技术

病毒感染是畜牧业发病率和死亡率的主要来源。具体而言，猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是猪共患的感染性疾病，对世界各地的猪产业造成重大经济损失。PRRS出现在所有年龄的猪身上但是主要导致母猪的晚期流产和死产以及小猪的呼吸系统疾病。该疾病的致病物为正链RNA PRRS病毒（PRRSv）。PRRS是北美、欧洲和亚洲最影响经济的家猪疾病，使北美的养猪者每年花费超过6亿美元在该疾病上。

目前没有针对急性PRRS的有效治疗方案。这就导致在农场发现PRRS病例时必须利用清群、充分的清洁/消毒以及适当的尸体处理来消灭病毒。在更极端的情况下，整群清群-复育已经被记录为消灭地方性感染种群的PRRSv的有效方法；但是，该方法会导致重大损失。

PRRSv疫苗的确存在；但是这些疫苗无法控制该疾病，主要是因为该病毒的结构蛋白质中的基因多样性。因此，防止感染在目前是最好的控制手段。作为预防措施，存在PRRSv的农村或地区的农场必须采用严格的控制手段，包括评估后备母猪和公猪的健康状况以及对新增家畜进行45-60天的隔离和适应。

近年来，CD163在PRRS发生中可能起到的作用上得到了更多的关注。尽管PRRSv菌株具有显著的异质性，PRRSv菌株全都拥有对CD163阳性细胞的趋性。虽然CD163是病毒受体，但是CD163清道夫受体也参与了单核细胞粘着至内皮细胞。CD163的功能和详细说明已在Onofre, Gabriela等人 ACTA MEDICA, 2009, 52, 57-61中提供。

CD163是一种130 kDa的1型膜蛋白，被认为是PRRS病毒的融合受体；它定位于猪的染色体5。该基本转录物编码具有1076个氨基酸的蛋白。据报告CD163具有五个异构体；这些异构体中的三个显示它们的胞质区具有不同的剪接形式。但是CD163的基因组分子序列一般包括17个为编码肽信号序列的外显子、9个清道夫受体半胱氨酸富集(SRCR)域、2个脯氨酸丝氨酸苏氨酸(PST)连接体域、胞质域和短胞质尾。CD163已经被描述为PRRSv受体。蛋白质的5域(SRCR5)是病毒的作用位点。CD163的外显子7编码作为体外PRRSv作用位点的SRCR5域(SRCR5) 。Burkard (Burkard, C., PLoS Pathog. 2017, 23, 13, e1006206.) 证明了移除CD163外显子7为猪巨噬细胞赋予了PRRSv抗性。但是该工作中所使用的向导(陈述为包括SEQ ID NOs: 272和273中的PAM的靶向序列)可能缺少足够的活性或基因编辑特异性来作为商业性育种项目的一部分。Whitworth及其同事的深入工作包括使用SEQ ID NO: 354和SEQ ID NO: 211中所列向导（包括PAM），在外显子7中创建123 bp缺失（Whitworth，K.M.,Biol. Reprod., 2014, 91, 1-13）。Whitworth等人(Whitworth, K.M., NatureBiotechnology, 2016, 34, 20-22)报告了通过敲除CD163的功能来获取具有PRRSv抗性的猪。

基因组编辑包括通过删除、插入或替换特定核酸序列来改变基因组。改变可以具有基因特异性或位置特异性。基因组编辑可以利用位点指向(site-directed)核酸酶，例如Cas蛋白质和它们的同源多核苷酸。

成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)和CRISPR相关蛋白质(Cas)构成了CRISPR-Cas系统。

Cas9是示例性的II型CRISPR Cas蛋白质。Cas9是可被tracrRNA/crRNA编译来利用两个不同的核酸内切酶域(HNH和类RuvC/RNase H域)以位点特异性的方式切割DNA靶序列(参见2014年3月6日公布的公布号为2014-0068797的美国专利申请；亦见Jinek, M.,等人,

前述的CD163编辑虽然展示了针对PRRSv的一些效用证明，但是无法与本发明所公布的编辑一样精确而高效。利用向导编辑CD163基因以获得更好的编辑活性和更少的意外编辑以改善猪群的健康并赋予其PRRSv抗性是有需求的。

发明内容

本专利说明书提供并包括经编辑的CD163基因，这些基因赋予包括经编辑基因的猪PRRSv抗性。

在一些具体实施方式中，本发明提供并包括赋予猪PRRSv抗性的经编辑的CD163基因，其中该编辑切除了外显子7，并且经编辑的基因可包括SEQ ID NOs: 426-458和520-555中任一项所列的经修复的基因组序列。在一些构型中，经编辑的基因可包括选自由SEQ IDNOs: 426-458组成的组的经修复的基因组序列。在各种构型中，经修复的基因序列可包括SEQ ID NO: 426、SEQ ID NO: 427、 SEQ ID NO: 428、 SEQ ID NO: 429、 SEQ ID NO:430、 SEQ ID NO: 431、 SEQ ID NO: 432、 SEQ ID NO: 433、 SEQ ID NO: 434、 SEQ IDNO: 435、 SEQ ID NO: 436、 SEQ ID NO: 437、 SEQ ID NO: 438、 SEQ ID NO: 439、 SEQID NO: 440、 SEQ ID NO: 441、 SEQ ID NO: 442、 SEQ ID NO: 443、 SEQ ID NO: 444、SEQ ID NO: 445、 SEQ ID NO: 446、 SEQ ID NO: 447、 SEQ ID NO: 448、 SEQ ID NO:449、 SEQ ID NO: 450、 SEQ ID NO: 451、 SEQ ID NO: 452、 SEQ ID NO: 453、 SEQ IDNO: 454、 SEQ ID NO: 455、 SEQ ID NO: 456、 SEQ ID NO: 457、 SEQ ID NO: 458、 SEQID NO: 520、 SEQ ID NO: 521、 SEQ ID NO: 522、 SEQ ID NO: 523、 SEQ ID NO: 524、SEQ ID NO: 525、 SEQ ID NO: 526、 SEQ ID NO: 527、 SEQ ID NO: 528、 SEQ ID NO:529、 SEQ ID NO: 530、 SEQ ID NO: 531、 SEQ ID NO: 532、 SEQ ID NO: 533、 SEQ IDNO: 534、 SEQ ID NO: 535、 SEQ ID NO: 536、 SEQ ID NO: 537、 SEQ ID NO: 538、 SEQID NO: 539、 SEQ ID NO: 540、 SEQ ID NO: 541、 SEQ ID NO: 542、 SEQ ID NO: 543、SEQ ID NO: 544、 SEQ ID NO: 545、 SEQ ID NO: 546、 SEQ ID NO: 547、 SEQ ID NO:548、 SEQ ID NO: 549、 SEQ ID NO: 550、 SEQ ID NO: 551、 SEQ ID NO: 552、 SEQ IDNO: 553、 SEQ ID NO: 554或SEQ ID NO: 555。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 229和256、SEQ ID NOs: 230和256、SEQ IDNOs: 231和256、SEQ ID NOs: 237和256、SEQ ID NOs: 241和256、SEQ ID NOs: 229和258、SEQ ID NOs: 230和258、SEQ ID NOs: 231和258、SEQ ID NOs: 237和258、SEQ ID NOs:241和258、SEQ ID NOs: 229和261、SEQ ID NOs: 230和261、SEQ ID NOs: 231和261、SEQID NOs: 237和261、SEQ ID NOs: 241和261、SEQ ID NOs: 219和256、SEQ ID NOs: 221和256、SEQ ID NOs: 224和256、SEQ ID NOs: 227和256、SEQ ID NOs: 219和258、SEQ IDNOs: 221和258、SEQ ID NOs: 224和258、SEQ ID NOs: 227和258、SEQ ID NOs: 219和261、SEQ ID NOs: 221和261、SEQ ID NOs: 224和261、SEQ ID NOs: 227和261、SEQ ID NOs:249和256、SEQ ID NOs: 250和256、SEQ ID NOs: 249和258、SEQ ID NOs: 250和258、SEQID NOs: 249和261或SEQ ID NOs: 250和261。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 229和256、SEQ ID NOs: 230和256、SEQ IDNOs: 231和256、SEQ ID NOs: 241和256、SEQ ID NOs: 229和258、SEQ ID NOs: 231和258、SEQ ID NOs: 241和258、SEQ ID NOs: 219和256、SEQ ID NOs: 221和256、SEQ ID NOs:224和256、SEQ ID NOs: 227和256、SEQ ID NOs: 227和258、SEQ ID NOs: 221和261、SEQID NOs: 249和256、SEQ ID NOs: 250和256、SEQ ID NOs: 249和258或SEQ ID NOs: 249和261。

在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQID NOs: 229和256。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 230和256。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 231和256。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 237和256。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 241和256。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 229和258。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 230和258。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 231和258。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ IDNOs: 237和258。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 241和258。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 229和261。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 230和261。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 231和261。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 237和261。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 241和261。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 219和256。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 221和256。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ IDNOs: 224和256。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 227和256。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 219和258。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 221和258。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 224和258。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 227和258。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 219和261。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 221和261。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 224和261。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ IDNOs: 227和261。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 249和256。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 250和256。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 249和258。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 250和258。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 249和261。在各种构型中，该编辑可利用成对的gRNAs来创建，其中成对的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 250和261。在各种构型中，经修复的基因组序列可以包括SEQ ID NO: 453，该编辑可利用SEQ ID NOs: 249和256中列出的序列来创建。

在各种构型中，本发明提供并包括可包括根据当前教导的CD163基因的猪细胞。在一些构型中，本发明进一步提供和包括可包括复数个所述猪细胞的细胞系。在一些构型中，该细胞系可以为成纤维细胞系。在各种构型中，所述细胞、所述复数个细胞，或细胞系可衍生自PIC系2、PIC系3、PIC系15、PIC系19、PIC系27、PIC系62或PIC系65。本发明进一步提供了可包括复数个所述细胞的胚胎、小猪或成熟的成年猪。

本发明还提供了赋予猪PRRSv抗性的经编辑的CD163基因，其中所述编辑创建了终止密码子，这导致了预期的外显子7氨基酸序列，所述外显子7氨基酸序列可选自由506-517组成的组。在各种构型中，该氨基酸序列可被描述在SEQ ID NO: 506、SEQ ID NO: 507、SEQID NO: 508、SEQ ID NO: 509、SEQ ID NO: 510、SEQ ID NO: 511、SEQ ID NO: 512、SEQ IDNO: 513、SEQ ID NO: 514、SEQ ID NO: 515、SEQ ID NO: 516或SEQ ID NO: 517中。在各种构型中，预期的外显子7氨基酸序列可以在SEQ ID NO: 513中列出。在一些构型中，该编辑可利用gRNAs来创建，该gRNAs选自以下序列组成的组：SEQ ID NOs: 351和365、SEQ IDNOs: 351和387、SEQ ID NOs.: 348和390、SEQ ID NOs: 348和388、SEQ ID NOs: 348和395、SEQ ID NOs: 352和365、SEQ ID NOs: 352和387、SEQ ID NOs: 352和399、SEQ IDNOs: 353和365、SEQ ID NOs: 353和387、SEQ ID NOs: 353和399、SEQ ID NOs: 354和390、SEQ ID NOs: 354和388、SEQ ID NOs: 354和395、SEQ ID NOs: 358和361、SEQ ID NOs:358和362、SEQ ID NOs: 358和368、SEQ ID NOs: 358和384、SEQ ID NOs: 358和394、SEQID NOs: 358和399、SEQ ID NOs: 359和390、SEQ ID NOs: 359和388、SEQ ID NOs: 359和395、SEQ ID NOs: 360和368、SEQ ID NOs: 360和384、SEQ ID NOs: 360和389、SEQ IDNOs: 360和394、SEQ ID NOs: 360和397、SEQ ID NOs: 361和365、SEQ ID NOs: 361和387、SEQ ID NOs: 362和390、SEQ ID NOs: 362和388、SEQ ID NOs: 362和395、SEQ ID Nos:364和365、SEQ ID NOs: 364和387、SEQ ID NOs: 364和399、SEQ ID NOs: 365和368、SEQID NOs: 365和384、SEQ ID NOs: 365和389、SEQ ID NOs: 365和394、SEQ ID NOs: 365和397、SEQ ID NOs: 366和368、SEQ ID NOs: 366和384、SEQ ID NOs: 366和389、SEQ IDNOs: 366和394、and SEQ ID NOs: 366和397。在各种构型中，该编辑可利用gRNAs来创建，该gRNAs选自以下序列组成的组： SEQ ID NOs: 351和365、SEQ ID NOs: 348和390、SEQ IDNOs: 348和388、SEQ ID NOs: 354和390、SEQ ID NOs: 358和394、SEQ ID NOs: 362和390,和SEQ ID NOs: 366和394。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 351和365。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 351和387。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 348和390。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 348和388。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ IDNOs: 348和395。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 352和365。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 352和387。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 352和399。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 353和365。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 353和387。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 353和399。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 354和390。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 354和388。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ IDNOs: 354和395。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 358和361。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 358和362。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 358和368。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 358和384。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 358和394。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 358和399。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 359和390。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 359和388。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ IDNOs: 359和395。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 360和368。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 360和384。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 360和389。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 360和394。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 360和397。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 361和365。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 361和387。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 362和390。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ IDNOs: 362和388。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 362和395。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 364和365。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 364和387。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 364和399。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 365和368。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 365和384。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 365和389。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 365和394。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ IDNOs: 365和397。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 366和368。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 366和384。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 366和389。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 366和394。在各种构型中，用于创建编辑的gRNAs可以为SEQ ID NOs: 366和397。

在各种构型中，经编辑的CD163基因可具有选自由SEQ ID NOs: 459-504组成的组的核酸序列。在各种构型中，经修复的基因可具有以下序列中描述的核酸序列 ：SEQ IDNO: 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 472,473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 486, 487,488, 489, 490, 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499, 500, 501, 502,503或504。在各种构型中，经修复的基因可具有SEQ ID NO: 489中列出的核酸序列。在各种构型中，预期的外显子7氨基酸序列可以在SEQ ID NO: 513中列出。在各种构型中，该基因的预期氨基酸序列可以是SEQ ID NO: 513，经修复的基因可具有SEQ ID NO: 489中列出的核酸序列，该编辑可利用中SEQ ID NOs: 362和390列出的序列来创建。

本发明提供并包括可包括包括上述的外源终止密码子的经编辑的CD163基因的猪细胞。本发明还提供了可包括复数个包括外源终止密码子的经编辑的CD163基因的细胞的细胞系。在一些构型中，该细胞系可为成纤维细胞系。在各种构型中，该细胞可衍生自PIC系2、PIC系3、PIC系15、PIC系19、PIC系27、PIC系62或PIC系65。本发明还提供并包括胚胎、小猪或成熟的成年猪，这些胚胎、小猪或成熟的成年猪包括可包括包括外源终止密码子的经编辑的CD163基因的复数个细胞。

在各种具体实施方式中，本发明提供并包括用于编辑猪CD163基因的成对的gRNAs，该成对的gRNAs具有下列序列号中列出的序列：SEQ ID NOs: 229和256、SEQ IDNOs: 230和256、SEQ ID NOs: 231和256、SEQ ID NOs: 237和256、SEQ ID NOs: 241和256、SEQ ID NOs: 229和258、SEQ ID NOs: 230和258、SEQ ID NOs: 231和258、SEQ ID NOs:237和258、SEQ ID NOs: 241和258、SEQ ID NOs: 229和261、SEQ ID NOs: 230和261、SEQID NOs: 231和261、SEQ ID NOs: 237和261、SEQ ID NOs: 241和261、SEQ ID NOs: 219和256、SEQ ID NOs: 221和256、SEQ ID NOs: 224和256、SEQ ID NOs: 227和256、SEQ IDNOs: 219和258、SEQ ID NOs: 221和258、SEQ ID NOs: 224和258、SEQ ID NOs: 227和258、SEQ ID NOs: 219和261、SEQ ID NOs: 221和261、SEQ ID NOs: 224和261、SEQ ID NOs:227和261、SEQ ID NOs: 249和256、SEQ ID NOs: 250和256、SEQ ID NOs: 249和258、SEQID NOs: 250和258、SEQ ID NOs: 249和261、SEQ ID NOs: 250和261、SEQ ID NOs: 351和365、SEQ ID NOs: 351和387、SEQ ID NOs: 348和390、SEQ ID NOs: 348和388、SEQ IDNOs: 348和395、SEQ ID NOs: 352和365、SEQ ID NOs: 352和387、SEQ ID NOs: 352和399、SEQ ID NOs: 353和365、SEQ ID NOs: 353和387、SEQ ID NOs: 353和399、SEQ ID NOs:354和390、SEQ ID NOs: 354和388、SEQ ID NOs: 354和395、SEQ ID NOs: 358和361、SEQID NOs: 358和362、SEQ ID NOs: 358和368、SEQ ID NOs: 358和384、SEQ ID NOs: 358和394、SEQ ID NOs: 358和399、SEQ ID NOs: 359和390、SEQ ID NOs: 359和388、SEQ IDNOs: 359和395、SEQ ID NOs: 360和368、SEQ ID NOs: 360和384、SEQ ID NOs: 360和389、SEQ ID NOs: 360和394、SEQ ID NOs: 360和397、SEQ ID NOs: 361和365、SEQ ID NOs:361和387、SEQ ID NOs: 362和390、SEQ ID NOs: 362和388、SEQ ID NOs: 362和395、SEQID NOs: 364和365、SEQ ID NOs: 364和387、SEQ ID NOs: 364和399、SEQ ID NOs: 365和368、SEQ ID NOs: 365和384、SEQ ID NOs: 365和389、SEQ ID NOs: 365和394、SEQ IDNOs: 365和397、SEQ ID NOs: 366和368、SEQ ID NOs: 366和384、SEQ ID NOs: 366和389、SEQ ID NOs: 366和394，或SEQ ID NOs: 366和397。在一些构型中，成对的gRNAs可以具有下列序列号中列出的序列：SEQ ID NOs: 229和256、SEQ ID NOs: 230和256、SEQ ID NOs:231和256、SEQ ID NOs: 241和256、SEQ ID NOs: 229和258、SEQ ID NOs: 231和258、SEQID NOs: 241和258、SEQ ID NOs: 219和256、SEQ ID NOs: 221和256、SEQ ID NOs: 224和256、SEQ ID NOs: 227和256、SEQ ID NOs: 227和258、SEQ ID NOs: 221和261、SEQ IDNOs: 249和256、SEQ ID NOs: 250和256、SEQ ID NOs: 249和258、SEQ ID NOs: 249和261、SEQ ID NOs: 351和365、SEQ ID NOs: 348和390、SEQ ID NOs: 348和388、SEQ ID NOs:354和390、SEQ ID NOs: 358和394、SEQ ID NOs: 362和390、或SEQ ID NOs: 366和394。在各种构型中，成对的gRNAs可以具有SEQ ID NOs: 249和256中列出的序列。在各种构型中，成对的gRNAs可以具有SEQ ID NOs: 362和390中列出的序列。

本发明提供并包括用于编辑猪CD163 基因的CRISPR复合体，其包括本发明中的成对的gRNAs。

本发明提供并包括一种用于编辑猪CD163 基因的方法，该方法包括使用CRISPR-CAS复合体，该CRISPR-CAS复合体包括本发明中的成对的gRNAs。

本发明提供并包括一种通过使用CRISPR-CAS复合体来制备PRSSV抗性猪细胞的方法，该CRISPR-CAS复合体包含本发明中的成对的gRNAs。

本发明提供并包括一种生产PRSSv抗性猪类动物的方法，包括a) 使用包含本发明中的成对的gRNAs的CRISPR复合体，编辑一个或复数个猪细胞的CD163基因；以及b)用所述一个或复数个细胞生产动物。

本发明提供并包括根据本发明的细胞系在生产PRRSv抗性动物中的用途。

本发明还提供并包括了包括复数个根据本发明的细胞的胚胎、小猪或成熟的成年猪。

在各种具体实施方式中，本发明提供并包括一种确定是否存在与SEQ ID NO: 453中所列的序列具有90%或95%同一性的经编辑的序列的方法，该方法包含使用以下项进行实时PCR：a) SEQ ID NO: 564和SEQ ID NO: 558或561中所列的序列的差异标记探针；b) SEQID NOs: 562和563中所列的引物对；以及c) SEQ ID NOs: 556和557或SEQ ID NOs: 559和560中所列的引物对。在一些构型中，经编辑的序列可以与SEQ ID NO: 453中所列的序列具有100%同一性。在一些构型中，经编辑的序列可以与SEQ ID NO: 453中所列的序列具有90%同一性。在一些构型中，经编辑的序列可以与SEQ ID NO: 453中所列的序列具有95%同一性。

在各种具体实施方式中，本发明提供并包括选自由以下序列组成的组的PCR引物：SEQ ID NO: 556、SEQ ID NO: 557、SEQ ID NO: 559、SEQ ID NO: 560、SEQ ID NO: 562，和SEQ ID NO: 563。在一些构型中，PCR引物可以具有SEQ ID NO: 556中所列的序列。在各种构型中，PCR引物可以具有SEQ ID NO: 557中所列的序列。在各种构型中，PCR引物可以具有SEQ ID NO: 559中所列的序列。在各种构型中，PCR引物可以具有SEQ ID NO: 560中所列的序列。在各种构型中，PCR引物可以具有SEQ ID NO: 562中所列的序列。在各种构型中，PCR引物可以具有SEQ ID NO: 563中所列的序列。

在一些具体实施方式中，本发明提供并包括选自由以下序列组成的组的实时PCR探针：SEQ ID NO: 558、SEQ ID NO: 561，和SEQ ID NO: 564。在一些构型中，探针具有SEQID NO: 558中所列的序列。在各种构型中，探针具有SEQ ID NO: 561中所列的序列。在各种构型中，探针具有SEQ ID NO: 564中所列的序列。

在各种具体实施方式中，本发明提供并包括下列序列中列出的PCR引物在确定是否存在SEQ ID NO: 453中所列的经编辑的基因组序列中的用途：a) SEQ ID NOs: 556和557以及SEQ ID NOs: 562和563或b) SEQ ID NOs: 559和560以及SEQ ID NOs: 562和563。

在各种具体实施方式中，本发明提供并包括下列序列中列出的PCR探针在确定是否存在SEQ ID NO: 453中所列的经编辑的基因组序列中的用途：a) SEQ ID NOs: 558和564或b) SEQ ID NOs: 561和564。

在各种具体实施方式中，本发明提供并包括一种创建PRRSv抗性猪的方法，该方法包含编辑猪基因组以包含SEQ ID NO: 453中所列的基因组序列。在一些构型中，编辑猪基因组可以包括施用具有SEQ ID NOs: 249和256中所列序列的gRNAs。在各种构型中，施用包括向受精卵、胚胎或MII 卵母细胞注射包括gRNAs和CAS蛋白的预形成RNP复合体。在各种构型中，猪为PIC™系2（猪改良有限公司，贝辛斯托克，英国）、PIC™系3、PIC™系15、PIC™系19、PIC™系27、PIC™系62或PIC™系65的猪。

在各种具体实施方式中，本发明提供并包括一种猪类动物，其包括赋予猪PRRSv抗性的经编辑的基因，其中编辑切除了外显子7，且经编辑的基因包含SEQ ID NO: 453中所列的经修复的基因组序列。在一些构型中，编辑可以使用具有SEQ ID NOs: 249和256中所列序列的向导RNAs (gRNAs)进行。在各种构型中，该动物可以是PIC™系2、PIC™系3、PIC™系15、PIC™系19、PIC™系27、PIC™系62或PIC™系65的经编辑的动物。在各种构型中，本发明提供并包括从本发明的动物制备的细胞。在各种构型中，本发明提供并包括从根据本发明的细胞制备的细胞系。在一些构型中，该细胞系可以是成纤维细胞系。

在一些具体实施方式中，本发明提供并包括一种被编辑以赋予猪PRRSv抗性的CD163基因，其中编辑切除了外显子7，并且经编辑的基因包括SEQ ID NO: 453中所列的经修复的基因组序列。在一些构型中，该编辑的创建使用了SEQ ID NOs: 249和256中所列序列。在各种构型中，本发明提供了包含根据本发明的CD163基因的猪细胞。在一些构型中，本发明提供了包含复数个根据本发明的细胞的细胞系。在一些构型中，该细胞系可以是成纤维细胞系。在各种构型中，细胞可以分离自PIC系2、PIC系3、PIC系15、PIC系19、PIC系27、PIC系62或PIC系65。

在各种具体实施方式中，本发明提供并包括用于编辑猪CD163基因的成对的gRNAs，其包括SEQ ID NOs: 249和256中所列的向导序列。

在各种具体实施方式中，本发明提供并包括一种创建PRRSv抗性猪的方法，该方法包含编辑猪的基因组以包括SEQ ID NO: 453中所列的基因组序列。在一些构型中，编辑猪基因组可以包含施用具有SEQ ID NOs: 249和256中所列序列的gRNAs。在一些构型中，施用可以包括向受精卵、胚胎或MII 卵母细胞注射包括gRNAs和CAS蛋白的预形成RNP复合体。在各种构型中，猪可以是PIC™系2、PIC™系3、PIC™系15、PIC™系19、PIC™系27、PIC™系62或PIC™系65的猪。

具体实施方式

本发明的各个方面包括但不限于通过靶向灭活CD163来改善猪类健康的特定方法，它是可变的并为本领域的技术人员所理解。应当被进一步理解的是本发明所用的所有术语都仅仅是为了描述特定方面，而不是为了以任何方式或范围进行限制。举例而言，在说明书和权利要求中使用时，单数形式“a” “an” 和“the”可指代复数，除非上下文以其他方式明确的注明。另外，所有的单位、前缀和符号都可以用它们的SI接受形式(SI acceptedforms)来表示。说明书内描述的数字范围包括限定该范围的数字并包括所定义的范围内的每一个整数。

为了使本申请更加容易被理解，首先对某些术语进行定义。除非另有限定，本发明所使用的所有技术和科学术语的含义与本申请相关的领域内普通技术人员一般理解的含义相同。与本发明所述的方法和材料相似、修改过或等同的许多方法和材料可被用于实施本申请的各个方面，而无需进行过度的实验。本发明已经描述了优选的材料和方法。在描述和主张本申请的各个方面时，下述的术语经从下文的定义。

在本发明中，“动物细胞”意为包括但不限于体细胞、培养细胞、配子细胞、血细胞、受精卵和胚胎细胞的细胞。这些动物细胞可以为生殖细胞或非生殖细胞。在本发明中，细胞可以从动物或胚胎中分离并被在组织培养中保持。还包括混合培养物，该混合培养物可包括根据本说明书的基因编辑细胞以及非基因编辑支持细胞或饲养细胞。

在本发明中，术语“基因被编辑”、“被基因编辑”和“被基因组编辑”是指利用自然发生或人工设计的核酸内切酶(常常被称为“归巢内切酶”或“靶向内切酶”)实施归巢技术。“基因组编辑”和“基因编辑”是指通过删除、插入或替换具体核酸序列来改变基因组。这种改变可以具有基因或位置特异性，但是无需改变基因序列本身。基因组编辑可使用核酸内切酶(如CRISPR系统)来切核酸，从而生成改变位点。别的核酸内切酶也可以利用并适于使用；但是脱位(off-site)切除和特异性可能是重大问题。在类似CRISPR的系统以及其它系统中，核酸酶可通过与多核苷酸(在此称为“靶序列”)复合以被指引向目标位点，从而导入位点特异性DSB。不受理论的限制，DSB可被内源性非同源性末端接合(NHEJ)机制修复。

很多已知的核酸内切酶都适于并已经被适用于基因编辑。基因编辑方法在本领域是已知的，包括成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)系统(如CRISPR/Cas9系统)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)以及包括锌指核酸酶(ZFNs)在内的基因编辑核酸酶。基因被编辑的动物与转基因动物可通过外源性DNA序列-特别是与来自后者中外来物种的序列具有同一性的序列-的并入来辨别。在此，该术语包括并提供引入不超过10个核苷酸的小型删除和插入。该术语还涵盖动物后代，例如通过对初代基因被编辑的动物进行有性杂交或无性繁殖获得的动物后代。

在本发明中，术语“修复模板”或“修复序列”是指被导入正在基因组的核酸酶靶向位置进行DSB修复的细胞以引导修复并实现准确和选择性编辑的多核苷酸。修复模板可被用于选择性改变或删除位于具有DSB的基因座的序列并一般包括5’基因组杂交区和3’基因组杂交区。在一个方面，5’基因组杂交区和3’基因组杂交区具有至少80%的同源性。在一个方面，5’基因组杂交区和3’基因组杂交区具有同一性。下文提供了对根据本发明的修复模板的进一步说明。对于删除模板，基因组的连续区域可通过删除一个或一个以上核苷酸来分开。单独碱基的靶向编辑可利用包括基因组连续区域并具有一个或一个以上碱基变化的修复模板来制备，包括添加终止密码子。修复模板与基因组连续区域百分比同一性可利用无缝对齐达到80%至100%之间。在本发明中，修复模板内同一性的核心区的侧翼可以是与目标染色体区域具有80%至100%同源性的侧翼同源区。不受理论限制，核心区同一性可提升修复过程的精确度，而两侧的同源扩展区提升了效率并允许为了编辑进行细胞间基因型变异。

在本发明中，术语“野生型”或“WT”是指主导自然猪群或猪系的表型、基因型或基因。当用于比较基因被编辑的细胞和特定系的动物的表型和基因型时，术语“野生型”是指基因未编辑的细胞以及同一系的动物。在一个方面，本发明提供了对类似品种并具有类似基因背景的经编辑的猪和未编辑的猪的比较。在一个方面，本发明提供了对相同种系的经编辑的猪和未经编辑的猪的比较。

在本发明中，术语“敲除”是指通过减少或移除其表达来干扰基因功能。可通过在染色体中创造双链断裂(DSB) 来实现敲除，双链断裂然后可利用非同源性末端接合(NHEJ)或通过同源介导修复(HDR)进行DNA修复模板或靶向载体的同源性重组来修复。不受理论限制，HDR敲除可通过微同源介导的末端连接提供修复模板来插入、删除或编辑基因组序列来实现。还可以通过替换载体 或“打完即走”(hit-and-run)载体或随机插入基因捕获载体导致完全、部分或有条件丧失基因功能来实现敲除。

本发明对在核苷酸序列中跨越一定范围的删除的引用包括所列范围内的所有核苷酸。举例而言，从核苷酸”a”到核苷酸“e”中删除5碱基对意为核苷酸“a”、“b”、“c”、“d”和“e”中的每一个都已被删除(“b”“c”“d”位于“a”和“e”之间)。

在本发明中，术语“编辑”包括多核苷酸的核苷酸序列(如例如基因、编码DNA序列(CDS)或非编码DNA序列)中相对于野生型序列的改变。术语“编辑”可包括插入、删除、剪接供体位点编辑、点编辑及类似操作。

在本发明中，术语“成簇规律间隔短回文重复序列”或“CRISPR”指代利用基因材料的CRISPR片段及其产生的RNA片段和酶来识别和修改其它有机体的基因组中的特定DNA序列的基因编辑系统。CRISPR系统包括I型、II型和III型CRISPR系统。在本发明中，术语“CRISPR相关蛋白质”或“Cas”指代可与CRISPR要素严格相关并总是靠近CRISPR片段的重复簇出现的蛋白质家族。举例而言，Cas蛋白质可包括但不限于Cas9家族成员蛋白质、Cas6家族成员蛋白质(例如Csy4和Cas6)以及Cas5家族成员蛋白质。Cas蛋白质家族和识别它们的方法的实施例已公开在Haft, Daniel H.,等人,

虽然不受任何特定科学理论的限制，CRISPR核酸酶可与向导RNA(gRNA)形成复合体，向导RNA其与互补目标核酸分子杂交从而引导CRISPR核酸酶前往目标核酸分子。crRNA包括重复序列和可与侵入的病原体中的特定前间隔序列互补的间隔序列。间隔序列可被设计为与真核生物基因组中的靶序列互补。在激活型中，CRISPR核酸酶可与它们各自的crRNAs相关联。本说明书提供并包括crRNA，该crRNA可包括RNA间隔序列，该RNA间隔序列包括 SEQ ID NOs: 22至271和347至425中的每一个的前20个核苷酸。在本发明中，SEQ IDNOs: 22至271和347至425中的每一个，用尿苷替代胸苷并用核糖替代脱氧核糖，提供并包括对应的RNA序列。并且，如本文中所用，SEQ ID NOs包括靶向的基因组序列中存在的PAM（见下文）。本领域的技术人员将认识到靶向该序列的gRNA将不包括PAM，因而也将认识到具有这些SEQ ID NOs中所列序列的gRNA将仅包括前20个核苷酸，因此排除了PAM。

一些CRISPR核酸酶，如CasX和Cas9，会需要另一个未编码RNA成分-称为反式激crRNA(tracrRNA)-从而具有功能活性。包含间隔序列的crRNA可以共价连接至tracrRNA的5’端成为一个核酸分子，我们称之为“单一向导RNA”(sgRNA)，其中间隔序列包括选自由SEQID NOs: 22至271中每一个的前20个核苷酸和SEQ ID NOs: 347至425中每一个的前20个核苷酸组成的组，如Jinek等人,

对于用来切割双链DNA靶序列的Cas9蛋白质/tracrRNA/crRNA复合体，DNA靶序列可与同源前间区序列邻近基序(PAM)邻近。通过将crRNA设计为具有适当的间隔序列，复合体可被靶向以在关注基因座(例如希望进行序列修改的基因座)进行切除。

各种II型CRISPR-Cas系统crRNA和tracrRNA序列以及相关的预期二级结构在本领域内是已知的(

II型CRISPR-Cas系统的间隔物可根据所使用的Cas蛋白质与位于PAM的5’或3’的核酸靶序列杂交。PAM基于所使用的Cas多肽可有所不同。举例而言，如果使用来自酿脓链球菌(

其它的Cas蛋白质识别其它的PAM，而本领域的技术人员可以确定用于任何特定Cas蛋白质的PAM。本领域内适于与根据本说明书的靶向序列一起使用的已知CAS蛋白质和系统越来越多。参见 Shah

标1: 示例性CRISPR/Cas系统

依靠任意CRISPR/CAS系统的方法可具有下文为酿脓链球菌序列提供的NRR(例如NGG和NAA)PAM序列或可具有为嗜热链球菌序列提供的NGGNG的PAM序列。表3和序列表提供了靶向序列和染色体位置。本领域的技术人员应当理解具有不同PAM要求的已知CAS系统可被设计以识别和利用本发明公开的靶序列。修改的实施例已经呈现在表1中。

术语“CRISPR/CasN或“CRISPR/CasN系统”指代用于基因编辑的可设计核酸酶系统，该系统包括CasN (例如Cas2, Cas5, Cas6, Cas9等)蛋白质或其衍生物以及可为CasN提供CRISPR RNA(crRNA)和反式激活RNA(tracrRNA)功能的一个或一个以上非编码RNA。crRNA和tracrRNA可被单独或组合使用以生成“向导RNA”(gRNA)。crRNA或gRNA可提供与基因组目标互补的序列。

术语 “Cpf1”或“CAS12”指代另一个可设计的2类CRISPR-Cas系统的 RNA引导核酸内切酶，其被描述和用于基因编辑(Zetsche等人,

在本发明中，术语“转录激活因子样效应物核酸酶”或“TALENS”指代被设计为实现给定DNA序列靶向修改的核酸酶。TALENs可包括与TALE DNA结合域融合的非特异性DNA切割核酸酶，TALE DNA结合域可被设计以允许靶向基因编辑。“TALE DNA结合域”或“TALE”可为包括一个或一个以上TALE重复域/单元的多肽。重复域可参与TALE与其同源目标DNA序列的结合。单一“重复单元”(亦称为“重复”)的长度可为33-35个氨基酸并表现出与自然生成的TALE蛋白质内的其它TALE重复序列的至少一些序列同源性。“被设计的”DNA结合蛋白质可以为非自然产生的蛋白质，其设计/组成主要是理性规范的结果。TALENS已在Joung等人,

“抗性”或“抗病性”指代有机体抵御和/或承受病原体攻击并保持不受影响的程度。有机体可展现完全的抗性，是指它几乎不受病原体的影响。或者，有机体可展现部分抗性，其中病原体影响有机体的程度小于无抗性的对照有机体。抗性可能来自有机体的特定性质，使有机体避免有机体-病原体相互作用的后果。可通过有机体能够避免与病原体相关的疾病症状、或减少临床征象的发生/严重程度、或减少与病原体相关的临床症状来证明抗性。

术语“抗性提高”或“易感性降低”指代与给定病原体感染相关的临床征象或临床症状的发生率和/或严重程度的数据的显著降低。举例而言，术语“抗性提高”或“易感性降低”指代相对于具有未修改染色体序列的对照动物、与在CD163基因蛋白质中包括已删除或灭活的染色体序列的动物身上PRRSv感染相关的临床征象或临床症状的发生率和/或严重程度的数据的显著降低。术语“临床症状数据显著降低”意为但不限于受试者中修改组的至少一个临床症状的发生频率以及在某些方面在接受感染剂后临床症状比未修改对照组在数据上至少降低了80%。

在本发明中，术语“临床征象的发生和/或严重程度降低”或“临床症状减少”意为相对于其它方面基因背景相似的野生型感染减少组中受感染受试者的数量、减少或消除显示感染临床征象的受试者的数量或降低一个或多个受试者存在的任意临床征象的严重程度。举例而言，这些术语涵盖在与其它方面相似的背景对比时的任意感染临床征象、肺部病变、病毒血症、抗体生成、病原体负荷降低、病原体脱落、病原体转移减少或PRRS的任意临床征象。未经编辑的CD163猪和经CD163编辑的猪的临床征象的对比可以单独或成群进行。在一个方面，单独的猪没有呈现临床征象。在一个方面，经CD163编辑的猪群呈现更少的临床征象。在一个方面，畜群的规模可以为至少100只动物。在一个方面，根据本说明书的经CD163编辑的猪可具有更少的繁殖综合征的临床征象。在一个方面，经CD163编辑的猪群的早产仔猪数量减少、死胎或僵死小猪数量减少、PRRSv阳性小猪数量减少或者母猪回归工作的延迟缩短。在一个方面，根据本说明书的经CD163编辑的猪中的母猪和后备母猪的临床征象可以更少，包括但不限于更少的厌食症、更少的发烧、更少的嗜睡、更少的肺炎、更少的乳泌缺乏以及更少的皮下及后肢水肿。在一个方面，根据本说明书进行CD163编辑的后备母猪和母猪可具有更少的耳朵及外阴红蓝褪色。在一个方面，经CD163编辑的母猪可显示断奶后更快地回到发情期。本说明书提供并包括经CD163编辑的后备母猪和母猪群的死亡率更低。本说明书还提供和包括肥育猪的临床征象减少。在一个方面经CD163编辑的肥育猪群呼吸系统的临床征象减少，这些临床征象选自发烧、打喷嚏、呼吸增强、呼吸困难、咳嗽、肺炎、嗜睡、眼周水肿以及眼鼻分泌物组成的组。优选地，相对于没有在CD163基因中进行修改并且具有相似背景并且被感染的受试者 ，这些临床征象在根据本发明的一种或一种以上动物身上减少了至少10%。在一个方面，临床征象在根据本发明的受试者身上减少了至少80%。在另一个方面，临床征象在根据本发明的猪身上减少了至少85%。在又一个方面，临床征象在根据本发明的猪身上减少了至少90%。 在再一个方面，临床征象在根据本发明的猪身上减少了至少95%。在根据本发明的各个方面，相对于未编辑CD163的猪，临床征象可被减少80%至100%。

本发明中的术语“育种”指代包括选择优秀的雄性动物和优秀的雌性动物用于繁殖下一代后裔的过程。该过程进一步包括结合雄性和雌性配偶子以进行受精。此类结合可通过配对(交配)或通过体外或体内人工方法来发生。 此类人工方法可包括但不限于人工授精、手术辅助的人工授精、体外受精、卵母细胞胞浆内单精子注射、透明带钻孔法、受精的卵母细胞体外培养、卵巢转移以及卵巢分割。本发明中所用的术语“育种”还可包括将受精的卵母细胞移入雌性动物的生殖系统以为特定的精英雌性获得更多的后代。

在本发明中，“参考序列”是用作序列对比基础的限定序列。参考序列可以为整个指定序列的子集；例如，作为完整长度的启动子序列的片段或整个启动子序列。在一个方面，参考序列可以为 Sscrofa11.1参考基因组(基因库存取号：GCA_000003025.6)。

本发明所用的与两个或两个以上核苷酸或蛋白质序列相关的术语“同一性百分比”或“相同百分比”是通过以下方式来计算的：(i)在比较窗口期比较两个对得最齐的序列(核苷酸或蛋白质)，(ii)确定(核苷酸序列的)相同核酸碱基或(蛋白质的)氨基酸残基发生在两个序列中的位置的数量以生成匹配位置的数量，(iii)将匹配位置的数量除以比较窗口期位置的总数量，以及然后(iv)将该商乘以100%以得到同一性百分比。如果“同一性百分比”是结合参考序列来计算而没有指定特定的比较窗口期，那么同一性百分比可通过将对齐区域的匹配位置的数量除以参考序列的总长度来确定。相应的，为了实现本申请的目的，当两个序列(待查和目标)对得最齐(对齐时允许存在间隙)时，待查序列的“同一性百分比”可等于两个序列之间相同位置的数量除以整个查询序列(或比较窗口期)位置的总数，然后乘以100%。当序列同一性的百分比被用于蛋白质时，识别到不相同的残基位置的差别常常是保守性氨基酸替换，其中氨基酸残基可被替换为具有相似化学性质的其它氨基酸残基(例如电荷或疏水性)并因此不会改变分子的功能特性。当序列的差别在于保守型替换时，序列同一性百分比可向上调整以校正替换的保守性质。差别在于此类保守型替换的序列被叫做具有“序列相似性”或“相似性”。

为了将序列对得最齐以计算它们的同一性百分比，各种成对或多序列对齐算法和程序在本领域内都是已知的，例如ClustalW或基本局部对齐检索工具(BLAST

本发明所使用的与序列的同一性可表达为根据两个序列的对齐确定的这两个序列之间的同一性百分比。本说明书提供了可与基因组连续区域具有至少80%同一性的修复模板序列。在一个方面，修复模板可具有与基因组的连续区域具有至少80%同一性的5’区域和3’区域以及与位于目标基因编辑位点侧翼的染色体序列具有同一性的核心区域。

本说明书提供并包括但不限于与选自SEQ ID NOs: 22至271和347至425组成的组的靶序列100%相同的靶序列。这些靶序列可包括PAM序列，如表1所列的PAM序列。相应的，当并入向导RNA时，在一个方面间隔区域可与选自SEQ ID NOs: 22至271中每一个的前20个核苷酸和SEQ ID NOs: 347至425中每一个的前20个核苷酸组成的组的序列具有100%的同一性。还包括可具有SEQ ID NOs: 22至271中每一个的15至20个核苷酸和SEQ ID NOs: 347至425中每一个的15至20个核苷酸的间隔序列(该序列的剩余部分可包括可存在于基因组中但不存在于gRNA分子中的PAM序列)。还包括并提供了可具有靶序列的一个或一个以上错配的向导RNA间隔序列。在一个方面，错配可位于序列靶序列的远端以确保保持核酸内切酶切割位点的同一性。一般地，错配可相对于3’端的核酸酶位点发生在靶序列的5’端。在一个方面，靶序列或自其制备的向导RNA的间隔序列可具有单一错配。在另一个方面，靶序列或自其制备的向导RNA的间隔序列可具有两(2)个错配。在另一个方面，序列或自其制备的向导RNA的间隔序列可具有三(3)个错配。在另一个方面，序列或自其制备的向导RNA的间隔序列可具有四(4)个错配。在某些方面，错配区域可局限于远离PAM序列和切割位点的终端核苷酸。

在一个方面，靶序列和gRNA向导的间隔序列与选自由SEQ ID NOs: 22至271中每一个的前20个核苷酸和SEQ ID NOs: 347至425中每一个的前20个核苷酸组成的组的序列具有至少90%的同一性。在另一个方面，RNA向导在序列的3’端的15个核苷酸可具有至少90%的同一性和100%的同一性。在一个方面，靶序列和RNA向导可具有至少95%的同一性。在另一个方面，RNA向导在序列的3’端的15个核苷酸可具有至少95%的同一性或100%的同一性。在一个方面，靶序列和RNA向导可具有至少96%的同一性。在另一个方面，RNA向导在序列的3’端的15个核苷酸可具有至少96%的同一性或100%的同一性。在一个方面，靶序列和RNA向导可具有至少97%的同一性。在另一个方面，RNA向导在序列的3’端的15个核苷酸可具有至少97%的同一性或100%的同一性。在一个方面，靶序列和RNA向导可具有至少98%的同一性。在另一个方面，RNA向导在序列的3’端的15个核苷酸可具有至少98%的同一性或100%的同一性。在一个方面，靶序列和RNA向导可具有至少99%的同一性。在另一个方面，RNA向导在序列的3’端的15个核苷酸可具有至少99%的同一性或100%的同一性。 在一个方面，靶序列和RNA向导可具有至少100%的同一性。本说明书还包括和提供了可包括SEQ ID NOs: 22至271中每一个的前15个核苷酸或SEQ ID NOs: 347至425中每一个的前15个核苷酸的间隔序列。在一个方面，该间隔序列可包括SEQ ID NOs: 22至271中每一个的前16个核苷酸或SEQ IDNOs: 347至425中每一个的前16个核苷酸。在一个方面，该间隔序列可包括SEQ ID NOs: 22至271中每一个的前17个核苷酸或SEQ ID NOs: 347至425中每一个的前17个核苷酸。在一个方面，该间隔序列可包括SEQ ID NOs: 22至271中每一个的前18个核苷酸或SEQ ID NOs:347至425中每一个的前18个核苷酸。在一个方面，该间隔序列可包括SEQ ID NOs: 22至271中每一个的前19个核苷酸或SEQ ID NOs: 347至425中每一个的前19个核苷酸。

本发明在提及猪育种时所使用的“受精”的优选含义涵盖生产可用胚胎的任意技术。受精既可包括对母猪授精，也包括体外或离体受精。存在三种常用的为母猪授精的方法，即传统人工授精(AI)、宫腔内授精(IUI)和深度宫腔内授精(DIUI)。这些技术全都依赖于提供通常是新鲜未冷冻的一定剂量的精液来进行授精。体外受精(IVF)可以为收取未受精卵母细胞，然后在体外(即在实验室中)而不是在体内(即在活的动物体内；授精已在上文进行了讨论)用精液使这些卵母细胞受精，如同在进行标准胚胎移植(ET)。受精的卵母细胞或来自卵母细胞贡献者的胚胎然后可被移植入另一个雌性体内(胚胎接收者)。胚胎移植可以为从一个雌性(胚胎贡献者)收取受精的卵母细胞或胚胎并将这些胚胎移植至繁殖状态与贡献者同步的另一个雌性体内(胚胎接收者) 。

如Cameron等人(

举例而言，II型CRISPR系统，其衍生自酿脓链球菌(

本说明书提供并包括可具有在CD163的两个等位基因中进行灭活编辑并可抵抗PRRSv感染的猪。本发明所公开的CD163猪进一步不包括新的序列或多肽，也不包括源自移码或错义突变导致的非本体氨基酸。

本发明公开的基因编辑允许保护CD163阳性胎儿(例如具有一个或两个野生型CD163等位基因的胎儿)。只要母兽在她的CD163等位基因中拥有灭活编辑，CD163阳性胎儿在子宫中就可免受PRRSv感染(PCT/US2018/027944)。举例而言，CD163基因的两个等位基因总都具有灭活编辑的母兽可与具有两个野生型CD163等位基因的雄性交配，而所得的杂合胎儿将在子宫内免受PRRSv感染。

在一个方面，在CD163的一个等位基因中具有灭活编辑的猪可利用根据本说明书的方法来获得。这些具有杂合CD163等位基因(一个被编辑，另一个是野生型)的猪可与也具有杂合CD163等位基因或纯合编辑CD163等位基因的别的猪育种，而从该育种获得的具有纯合编辑CD163等位基因的后代可被选定具备PRRSv感染抗性。本发明还提供和包括猪类动物和族群以及创造或改进猪类动物和族群的方法，其中动物可被纯合以获得一个或一个以上特定遗传标记或等位基因。在各种方面，本发明提供并包括动物以及创造或改进杂交猪类动物和族群的方法，该方法通过生成能纯合以获得一个或一个以上特定遗传标记或等位基因并将所述动物与被纯合以获得一个或一个以上特定遗传标记或等为基因的其它动物杂交以生产可被纯合以获得一个或一个以上特定遗传标记或等位基因的动物。在一些方面，可能需要多轮杂交和/或回交来获得纯合度以获得每一个特定遗传标记和等位基因。在别的方面，单次杂交就可能足以获得纯合度。

本领域内已知的各种技术都可以被用于对基因灭活以创造敲除动物和/或将经编辑基因导入动物以生产创始动物并创建动物系，其中敲除或核酸构建体可被整合入基因组。此类技术可包括但不限于原核基因微注射法(美国专利号：4,873,191)、逆转录病毒介导基因转移进入生殖细胞系(Van der Putten等人,

在胚胎/受精卵微注射方面，核酸构建体、mRNA、蛋白质、多核苷酸或其组合可被导入受精卵。在一个方面，可使用一个或两个细胞受精卵。一个和两个细胞受精卵可提供含有来自原生质内的精核和卵子的遗传材料的可见核结构。在一个方面，原核阶段受精卵可体外或体内(即通过手术从供体动物的输卵管回收)获得。在另一个方面，体外受精卵利用本领域已知的方法从例如收集的猪卵巢吸取卵泡来生产，参见例如Agung等人,

本说明书进一步提供了成熟卵母细胞的体外受精。在一个方面，卵母细胞可如上文所述体外成熟。在另一个方面，可从后备母猪收集成熟卵母细胞。根据已确立的方法来进行体外受精。参见Appeltant等人,

可通过人工授精和冲洗来获得受精卵或胚胎用于生殖细胞系编辑。收集的受精卵或胚胎然后可利用本发明提供的方法来编辑。在一个方面，线性化核酸构建体、mRNA、蛋白质、多核苷酸或其组合可通过例如电穿孔被注射或以其它方式导入原核之一或受精后受精卵或胚胎的细胞质或受精前的配子细胞。在一个方面，包括Cas核酸酶蛋白和向导RNA的预形成RNP复合体可被制备并注射入胚胎、受精卵或卵母细胞，该向导RNA包括SEQ ID NO: 19的主链和选自SEQ ID NOs: 22至271和347至425中任一的靶向序列。在另一个方面，包括Cas核酸酶和向导RNA的预形成RNP复合体可被制备并与包括表6所列的SEQ ID NOs: 1至13的修复模板一起注射入胚胎、受精卵或卵母细胞，该向导RNA包括SEQ ID NO: 19的主链和选自SEQ ID NOs: 22至271中每一个的前20个核苷酸和SEQ ID NOs: 347至425中每一个的前20个核苷酸组成的组的序列的RNA序列的间隔序列。本说明书还包括并提供可具有表6所述的SEQ ID NOs: 1至13的序列的间隔序列和修复模板的组合。在一个方面，注入的受精卵或胚胎可被转移至雌性受体(例如进入雌性受体的输卵管)并允许在雌性受体体内发育以生产转基因或基因编辑动物。在一个方面，该方法进一步提供了体外或体内受精受精卵或胚胎，其可以在15,000 x g条件下被离心机分离5分钟以沉积脂质，实现对原核的查看。可利用EPPENDORF

在一个方面，CRISPR/Cas编辑系统和gRNA可作为核酸结构来提供。在另一方面中，Cas核酸酶可作为mRNA、并与包含主链序列和导向序列的向导RNA一起提供，导向序列选自由每个SEQ ID NOs: 22至271的前20个核苷酸和每个SEQ ID NOs: 347至425的前20个核苷酸组成的组。在另一方面中，Cas核酸酶可作为mRNA、并与包含主链序列和导向序列的向导RNA以及表6中列出的修复模板一起提供，导向序列选自由每个SEQ ID NOs: 22至271的前20个核苷酸组成的组，修复模板选自由SEQ ID NOs: 1至13组成的组。在又一方面中，基因靶向复合物可通过显微注射编码Cas核酸酶的可转录DNA和包含主链序列和导向序列的向导RNA来提供，导向序列选自由每个SEQ ID NOs: 22至271的前20个核苷酸和每个SEQ IDNOs: 347至425的前20个核苷酸组成的组。在根据本说明书的方面中，主链序列可以是SEQID NO: 19的序列。本说明书还包括并提供了导向序列和修复模板的组合，修复模板可具有SEQ ID NOs: 1至13中列出的序列之一。本领域技术人员将理解，可以将核酸酶、gRNA和（可选择地）修复模板序列的各种组合引入卵母细胞、受精卵、囊胚和胚胎中，以实现本发明方法的目标。还应理解，其他主链序列可与SEQ ID NOs: 22至271和SEQ ID NOs: 347至425的导向序列连同使用，以与其他Cas核酸酶一起使用。任意具有NGG或NGGNG的PAM序列的Cas核酸酶可适于制备用于与本说明书的导向序列组合的主链序列。在各个方面中，所需的编辑可具有SEQ ID NOs: 426至505的最终基因组序列。在一些配置中，所需的编辑缺少外显子7，且可具有如SEQ ID NOs: 426至458中所述的最终核苷酸序列。在各种配置中，最终基因组序列可包括外源性终止密码子，且可具有如SEQ ID NOs: 459-504中所述的最终基因组序列。在各种配置中，这些部分CD163基因可以具有如SEQ ID NOs: 506至517中所述的外显子7氨基酸序列。

在一方面中，经注射的受精卵或胚胎可被移植到受体雌性（例如，移植到受体雌性的输卵管中），并被允许在受体雌性中发育，以繁育转基因或基因编辑的动物。在一方面中，该方法进一步提供体外或体内受精的受精卵或胚胎，其可在15000×g下用离心机分离5分钟以沉积脂质，从而允许原核的显色。受精卵或胚胎可使用例如EPPENDORF

本说明书提供并包括具有一个或多个胚胎的受体母猪。根据本发明，可向其胚胎注射CRISPR/Cas/gRNA组合。在一方面中，可提供包含Cas核酸酶和向导RNA的预制RNP复合物，其中的向导RNA包含SEQ ID NO: 19的主链及选自由每个SEQ ID NOs: 22至271中的前20个核苷酸及每个SEQ ID NOs: 347至425中的前20个核苷酸组成的组的间隔区序列。在各种方面中，可以提供两种预形成RNP复合体，其包含Cas核酸酶和向导RNA，其中的向导RNA包含SEQ ID NO: 19的主链，每个向导RNA包含选自由SEQ ID NOs: 22至271中每一个的前20个核苷酸和SEQ ID NOs: 347至425中每一个的前20个核苷酸组成的组的不同的间隔序列。本发明还提供和包括了可具有一个或多个胚胎的受体母猪，其胚胎注射有预制RNP复合物，该预制RNP复合物可包含Cas核酸酶和向导RNA，向导RNA包含选自由每个SEQ ID NOs: 22至271中的前20个核苷酸及每个SEQ ID NOs: 347至425中的前20个核苷酸组成的组的导向序列。在一方面中，可制备预制RNP复合物合物，并将其与表6中所列的修复模板（SEQ ID NOs:1至13）一起注射到胚胎、受精卵或卵母细胞中。在一方面中，受体母猪可以是与供体胚胎不同系的母猪。

胚胎或受精卵可以手术移植到同步受体的子宫中。通常情况下，可以通过使用导管，将100-200（或150-200）个胚胎或受精卵置入输卵管的壶腹部峡部连接处。术后，可进行实时超声妊娠检查。在一方面，本说明书可包括具有1至100个，但更典型地为30至60个经CRISPR/Cas/gRNA组合处理的胚胎的受体母猪，其中该胚胎可包含经基因编辑的CD163基因，该经基因编辑的CD163基因包含SEQ ID NOs: 1至18或426至505的序列。在一方面中，移植的胚胎可包含经编辑细胞的嵌合体。本发明还包括了CD163基因编辑的胚胎，其可以是非嵌合体。

改善家畜或家畜群健康的方法可包括修改动物细胞基因组中的靶序列，以形成截短的CD163多肽。本发明还提供并包括可具有截短的CD163多肽的改良动物。在某些方面，预期的截短多肽不包括非天然氨基酸。不受理论限制，截短的基因产物可以在体内被细胞蛋白酶快速消化。在本说明书的一方面中，截短的CD163可导致蛋白质的完全消除。在另一方面中，在体内，截短的CD163可以是不可检测的。在一个方面中，使用免疫荧光标记和FACS分析时，截短的CD163可以是不可检测的。在又一方面中，当使用说明书中提供的任何表达分析方法（包括实施例5中提供的方法）时，截短的CD163可以是不可检测的。在又一方面中，当使用说明书中提供的任何表达分析方法（包括实施例8中提供的方法）时，截短的CD163可以是不可检测的。

在另一方面中，经基因编辑的CD163猪可以包含具有不多于25个非天然氨基酸的截短的CD163基因。不受理论的限制，截短的CD163蛋白质可以是不稳定的，并可以在细胞内被靶向降解。相应地，包含非天然氨基酸的CD163蛋白质序列和CD163多肽可以是不可检测的。在另一方面中，预期的截短的CD163蛋白质可包含不多于211个天然蛋白质氨基酸。在一方面中，截短的CD163蛋白质可被预期为包含不多于144个天然蛋白质氨基酸。在一方面中，截短的CD163蛋白质可被预期为包含不多于133个天然蛋白质氨基酸。在又一方面中，截短的CD163蛋白质可被预期为包含不多于129个天然蛋白质氨基酸。在一方面中，截短的CD163蛋白质可被预期为包含不多于113个天然蛋白质氨基酸。在又一个方面中，截短的CD163蛋白质可被预期为包含不多于108个天然蛋白质氨基酸。在另一方面中，截短的CD163蛋白质可被预期为包含不多于93个天然蛋白质氨基酸。在又一个方面中，截短的CD163蛋白质可被预期为包含不多于74个天然蛋白质氨基酸。如本文所提供，截短的CD163蛋白质可包含32至211个天然CD163多肽序列的氨基酸和不多于25个非天然氨基酸，并且在细胞和细胞提取物中可以是不可检测的。

在其他方面中，经改变的CD163蛋白质可以具有带有单一氨基酸取代的截短。在某些方面中，经改变的CD163蛋白质可具有不多于1010个氨基酸的预期氨基酸序列。

本说明书提供并包括可具有CD163蛋白质的截短的基因编辑CD163猪（例如，CD163参考序列NP_999141的氨基酸1至40）。不受理论限制，信号肽（也称为信号序列）内的截短被相信可导致蛋白质不能转运到细胞膜，多肽随后在细胞内降解。相应地，具有信号肽截短的CD163蛋白质可导致对PRRSv感染具有抵抗力的CD163无效动物。在一方面中，具有在信号序列中截短的蛋白质的经基因编辑的CD163动物可包含不多于25个非天然氨基酸序列的氨基酸。在一方面中，经基因编辑的猪可以包含不多于天然CD163蛋白质的前39个氨基酸。在一方面中，经基因编辑的猪可以包含不多于天然CD163蛋白质的前39个氨基酸和不多于15个非天然氨基酸。本说明书还包括和提供了可被预期为包含不多于天然CD163蛋白质的前38个氨基酸的经基因编辑的猪。在一方面中，经基因编辑的猪可以包含不多于天然CD163蛋白质的前38个氨基酸和不多于15个非天然氨基酸。本说明书还包括和提供了可被预期为包含不多于天然CD163蛋白质的前36个氨基酸的经基因编辑的猪。在一方面中，经基因编辑的猪可以包含不多于天然CD163蛋白质的前36个氨基酸和不多于15个非天然氨基酸。使用本领域技术人员已知的方法时，截短的蛋白质可以是不可检测的。

在一方面中，经基因编辑的猪可以被预期为包含不多于天然CD163蛋白质的前34个氨基酸和不多于15个非天然氨基酸。在一方面中，经基因编辑的猪可以被预期为包含不多于天然CD163蛋白质的前32个氨基酸和不多于15个非天然氨基酸。使用本领域技术人员已知的方法时，截短的蛋白质可以是不可检测的。

此外，本发明提供并包括了CD163蛋白质的截短，其可包括外显子7的缺失（SEQ IDNOs: 426-458），外源性终止密码子被引入外显子7的序列（SEQ ID NOs: 459-504）。这些截短可以包括包含不多于1010个氨基酸的CD163蛋白质。

育种技术可用于从最初的纯合子或杂合子建立者或其他杂合子动物中创造灭活基因的纯合子动物。可以产生纯合子动物。本文所述的经基因编辑的猪可与其他关注的经编辑的猪或野生型猪一起繁殖，以最终产生经编辑的基因的纯或杂合子猪。在一方面中，纯合子动物可以是通过与PIC

基因编辑已经被用来解决包括PRRS在内的各种猪的疾病。在过去的15年中，几种基因编辑技术已经有所发展，这些平台通常可以被设计成在基因组的特定区域引入双链断裂。然后引入的断裂可以由细胞自身的机制来修复。

一种修复途径，也就是非同源末端连接（NHEJ），其在所有界的生物中，在进化上是保守的，也是哺乳动物细胞中主要的双链断裂修复途径。该修复过程可导致核苷酸在切割位点处的随机插入或缺失。实际上，可以通过反式提供DNA修复模板，来有利地利用这种不完整的保真度。在一个方面中，可以一起递送携带靶位点的替代等位基因（例如，单碱基多态性，或单碱基或多碱基插入或缺失）的DNA修复模板与基因编辑试剂，通过利用细胞的同源重组机制，该DNA修复模板可以指导修复，产生新的等位基因。在根据本说明书的方面中，可以基于CRISPR/CAS切割的高效部位（例如，表3中的高编辑频率）和引入可导致仅包含野生型序列的截短蛋白质的缺失的能力，来设计和选择DNA修复模板。修复模板可以提高基因编辑的效率和准确性。适用于本申请方法的DNA修复模板可包括SEQ ID NOs: 1至13。在一方面中，DNA修复模板可以与如下表6所列的向导序列配对。与转基因不同，根据本说明书进行的基因组编辑不会导致在基因组中引入外源DNA序列。

但是，由于这些外源添加的DNA修复模板具有在基因组中随机整合的可能性，因此识别并使用向导对也是有利的，向导对会导致DNA序列的缺失，从而使连接的末端可以在连接的末端处导致框内转译终止密码子的产生；当两个向导的切割位点被NHEJ端对端修复，这种新DNA序列在被转录成mRNA并转译成蛋白质时，会终止CD163蛋白质的产生。尽管会丧失这种终止的CD163蛋白质的功能，常常但并非总是如此，但蛋白质合成的过早终止会带来不稳定的多肽，这种多肽会被降解，且不能通过普通方法检测。切割CD163基因的外显子7以使连接的末端形成外源性终止密码子的向导对可包括SEQ ID NOs: 351和365，SEQ IDNOs: 351和387，SEQ ID NOss: 348和390，SEQ ID NOs: 348和388，SEQ ID NOs: 348和395，SEQ ID NOs: 352和365，SEQ ID NOs: 352和387，SEQ ID NOs: 352和399，SEQ IDNOs: 353 和365，SEQ ID NOs: 353和387，SEQ ID NOs: 353和399，SEQ ID NOs: 354和390，SEQ ID NOs: 354和388，SEQ ID NOs: 354和395，SEQ ID NOs: 358和361，SEQ IDNOs: 358和362，SEQ ID NOs: 358和368，SEQ ID NOs: 358和384，SEQ ID NOs: 358和394，SEQ ID NOs: 358和399，SEQ ID NOs: 359和390，SEQ ID NOs: 359和388，SEQ ID NOs:359和395，SEQ ID NOs: 360和368，SEQ ID NOs: 360和384，SEQ ID NOs: 360和389，SEQID NOs: 360和394，SEQ ID NOs: 360和397，SEQ ID NOs: 361和365，SEQ ID NOs: 361和387，SEQ ID NOs: 362和390，SEQ ID NOs: 362和388，SEQ ID NOs: 362和395，SEQ IDNOs: 364和365，SEQ ID NOs: 364和387，SEQ ID NOs: 364和399，SEQ ID NOs: 365和368，SEQ ID NOs: 365和384，SEQ ID NOs: 365和389，SEQ ID NOs: 365和394，SEQ ID NOs:365和397，SEQ ID NOs: 366和368，SEQ ID NOs: 366和384，SEQ ID NOs: 366和389，SEQID NOs: 366和394，以及 SEQ ID NOs: 366和397。

在一方面中，本发明可涉及在优良猪中的简单、精确且可再生的单一CD163功能缺失编辑，使得该编辑发生在CD163基因的前段。可以基于以下几点考虑和方法，选择单一向导RNA-Cas蛋白质组合和DNA修复模板，来指导优良猪中的特定基因编辑：靠近组织培养物中CD163基因5'端的高效切割，生物信息学检查识别猪基因组中很少错配的向导，生物化学预筛选确定的在靶切割的高特异性，以及在猪胚胎状细胞中的预期位点靶向特定基因编辑的能力。下面详细讨论CD163的特定基因编辑的示例。在一方面中，根据本说明书的特定基因编辑可包括CD163基因，该CD163基因包含选自由SEQ ID NOs: 1至18及426至505组成的组的序列。在一方面中，包含经编辑的CD163基因的细胞可包含至少一个等位基因，该等位基因具有选自由SEQ ID NOs: 1至18及426至505组成的组的序列。在一方面中，包含CD163基因的两个基因编辑的等位基因的细胞可以在两个等位基因处包含选自由SEQ ID NOs: 1至18和426至505组成的组的序列。在一方面中，两个经基因编辑的CD163基因可包含选自由SEQ ID NOs: 1至18和426至505组成的组的同一序列（例如，SEQ ID NO: 1的两个等位基因或SEQ ID NO: 2的两个等位基因，等等）。在一方面中，细胞的基因组可包含经基因编辑的CD163基因，该经基因编辑的CD163基因，每个包含选自由SEQ ID NOs: 1至18和426-505组成的组的序列中的一个（例如，SEQ ID NO: 1的一个等位基因带有SEQ ID NO: 2的一个等位基因，及其所有组合）。

本发明还提供并包括了细胞混合物，其可以包含CD163编辑的细胞和非基因编辑的细胞。在一个方面中，混合物可以是胚胎。在另一个方面中，混合物可以是细胞培养物。在又一方面中，细胞混合物不包含生殖细胞。在一方面中，本说明书可提供并包括CD163编辑细胞的组织培养物以及制备这种培养物的方法。根据本说明书的培养物可以包括CD163编辑的细胞的混合物（例如，具有SEQ ID NO: 1等位基因的细胞与具有SEQ ID NO: 2等位基因的细胞，具有SEQ ID NO: 1等位基因的细胞与具有SEQ ID NO: 3的等位基因，及其所有组合）。在一方面中，非生殖细胞的组织培养物可包括包含单个CD163编辑的细胞。在另一方面中，培养物中的单个CD163编辑的细胞可以包含一个或两个编辑的等位基因。表2列出了可用于本发明下的产品和方法的核酸内切酶和向导RNA主链序列的具体示例。

表2：核酸内切酶和向导主链序列

可以对优良猪细胞核系进行测序，并与CD163基因的公共参考进行比对。这些数据可用于开发抗PRRS项目的基因编辑试剂。可以扫描这些序列，以发现保守的RNA向导的CRISPR-Cas9识别位点，该识别位点可分别由3个核苷酸或5个核苷酸的基序，nGG（AGG、CGG、TGG、GGG），nGGnG（AGGTG、CGGTG、TGGTG、GGGTG、AGGGG、CGGGG、TGGGG、GGGGG、AGGAG、CGGAG、TGGAG、GGGAG、AGGCG、CGGCG、TGGCG、GGGCG）构成。这种称为PAM序列的基序可以邻近具有20个核苷酸的间隔区序列的3'端，该间隔区序列可用于与RNA进行碱基配对。可以识别合适的位点，并可以制备crRNA向导或单个向导序列，并在下面的表3中显示。

尽管不限于任何特定的理论，但当形成复合物时，向导RNA-Cas9蛋白质可以识别供切割的DNA位点，然后可以通过非同源末端连接（随机修复）或DNA模板修复途径（同源定向修复，HDR）来用细胞成分将其修复。

可以跨CD163的外显子1至外显子7生成向导RNAs（gRNA）。CD163蛋白质的病毒结合域（域5）中的编辑可以抑制病毒与该蛋白质结合的能力，从而防止病毒被吸收到猪肺巨噬细胞中。当CD163中的编辑在猪中是纯合的时，该动物可以对PRRS感染有抵抗力。本说明书提供并包括gRNA序列，其包括表3中列出的crRNA序列，crRNA序列可以选自由每个SEQ IDNOs: 22至271和347至425的前20个核苷酸组成的组。SEQ ID NOs: 22至271和347至425显示为DNA序列。相应的RNA对应物，以及一般不包括在gRNAs中的PAM基序的存在，对于本领域技术人员将是显而易见的。本文还提供了可以包含选自由每个SEQ ID NOs: 22至271和347至425的前20个核苷酸组成的组的序列的RNA序列。SEQ ID NOs: 22至271和347至425可以与gRNA主链序列结合并表达为RNA，该RNA用于制备gRNA，然后与Cas核酸酶混合以制备活性核糖核苷酸蛋白复合物（sgRNP）。然后，可以将sgRNP复合物单独或与选自由SEQ ID NOs: 1至13组成的组的修复模板一起注入成熟的卵母细胞、受精卵或早期胚胎中。在切割和模板指导下的修复之后，可以编辑CD163基因以并入修复模板序列，CD163基因编辑的细胞的经编辑的基因组可以包含选自由SEQ ID NOs: 1至13组成的组的序列。

在一方面中，本发明可包括在优良猪中的简单、精确且可再生的单一CD163功能缺失编辑，使得该编辑发生在CD163基因的前段（外显子1-7）。在一方面中，猪可以具有CD163基因，该CD163基因包含选自由SEQ ID NOs: 1至18和426至505组成的组的序列。还包括并提供了可以在包含表8中标志物的基因组区域中包含SEQ ID NOs: 1至18和425至505的猪。还包括并提供了可以在包含表8中标志物的基因组区域中包含SEQ ID No.：2的猪。还包括并提供了可以在包含表8中标志物的基因组区域中包含SEQ ID NOs: 426-458的猪。还包括并提供了可以在包含表8中标志物的基因组区域中包含SEQ ID NOs: 459-504的猪。使用源自这些优良猪的猪胚胎成纤维细胞系，可以测试250种向导RNA和Cas9蛋白质组合，以识别在CD163基因中高效切割并产生编辑的基因编辑对。表3列出了所选择的特定向导和核酸内切酶蛋白质组合，以及靶点的部位，其核酸内切酶活性（平均编辑频率）以及编辑在CD163上的位置。优选较高平均编辑频率的组合，因为它们具有更有效的编辑活性。平均编辑频率大于1的组合是期望的。在一方面中，组合可以具有大于5的平均编辑频率。在另一方面中，组合可以具有大于10的平均编辑频率。在又一方面中，组合可以具有大于15的平均编辑频率。本发明提供并包括可以具有平均编辑频率大于20的组合。在一方面中，组合可以具有大于25的平均编辑频率。在又一方面中，组合可以具有大于30的平均编辑频率。

如表3所示，靶序列之间的平均编辑频率差异很大。而且，靶向重叠序列的序列依Cas蛋白质来源导致不同的编辑频率。例如，SEQ ID NOs: 24和25靶向重叠部位，在编辑频率上有10倍的差异。在该位点上，使用这些序列，酿脓链球菌提供了提高近20倍的编辑频率。相反，引入SEQ ID NOs: 33和34的RNP，导致Cas蛋白质之间的平均编辑频率无法区分。尽管引入来自酿脓链球菌的Cas9核酸酶的RNP可以提供更优的平均编辑频率，但也并非总是如此。如针对SEQ ID NOs: 60和61所示，并入来自嗜热链球菌的Cas9蛋白质的RNP导致更优的编辑频率（例如，3.9对22.0）。相应地，本说明书提供了使用CRISPR / Cas系统靶向CD163的高效向导RNA序列或高效导向序列。在一方面中，RNP可以包含选自由每个SEQ IDNOs: 22至271和347至425中的前20个核苷酸组成的组的序列。

本文中所有位置名称均参考Sscrofa11.1参考基因组（GenBank编号：GCA_000003025.6）。

靶位点序列SEQ ID NOs: 22至271和347至425可以是猪CD163基因内的编辑靶序列。在每个靶位点序列中，前20个核苷酸可以对应于向导RNA间隔区，剩余的3个或5个核苷酸可以分别是针对酿脓链球菌或嗜热链球菌的PAM序列。SEQ ID NOs: 22至271和347至425的前20个碱基对应于DNA等价向导RNA序列，通过适当的脱氧核糖核酸酶碱基代替核糖核酸酶碱基，也可以使用DNA碱基代替RNA碱基用作向导。向导RNA序列可以与酿脓链球菌或嗜热链球菌核酸内切酶配对，以指导猪基因组中CD163基因编码或非编码区内的DNA断裂，这可以导致DNA缺失和/或DNA核苷酸插入。依照表3中公开的靶位点的部位，可以选择成对的向导/核酸内切酶组合，以删除成对的向导/核酸内切酶组合之间的CD163基因区域。

靶位点序列SEQ ID NOs: 212至271和347至425是可用于设计用于删除CD163基因的外显子7的向导的导向序列。使用酿脓链球菌，配对内含子6靶向向导SEQ ID NOs: 212至253和262至271与内含子7靶向向导SEQ ID NOs: 254至261，可在CD163基因上造成两个双链断裂，从而导致第7外显子的切除。靶向向导SEQ ID NOs: 249和256的配对也可以导致外显子7的切除。一些向导的配对可以将终止密码子引入外显子7中，这些序列包括SEQ IDNOs: 351和365，SEQ ID NOs: 351和387，SEQ ID NOs: 348和390，SEQ ID NOs: 348和388，SEQ ID NOs: 348和498，SEQ ID NOs: 352 和365，SEQ ID NOs: 352和387，SEQ ID NOs:352和399，SEQ ID NOs: 353和365，SEQ ID NOs: 353和387，SEQ ID NOs: 353和399，SEQID NOs: 354和390，SEQ ID NOs: 354和388，SEQ ID NOs: 354和395，SEQ ID NOs: 358和361，SEQ ID NOs: 358和362，SEQ ID NOs: 358和368，SEQ ID NOs: 358和384，SEQ IDNOs: 358和394，SEQ ID NOs: 358和399，SEQ ID NOs: 359和390，SEQ ID NOs: 359和388，SEQ ID NOs: 359和395，SEQ ID NOs: 360和368，SEQ ID NOs: 360和384，SEQ ID NOs:360和389，SEQ ID NOs: 360和394，SEQ ID NOs: 360和397 ，SEQ ID NOs: 361和365，SEQID NOs: 361和387，SEQ ID NOs: 362和390，SEQ ID NOs: 362和388，SEQ ID NOs: 362和395，SEQ ID NOs: 364和365，SEQ ID NOs: 364和387，SEQ ID NOs: 364和399，SEQ IDNOs: 365和368，SEQ ID NOs: 365和384，SEQ ID NOs: 365和389，SEQ ID NOs: 365和394，SEQ ID NOs: 365和397，SEQ ID NOs: 366和368，SEQ ID NOs: 366和384，SEQ ID NOs:366和389，SEQ ID NOs: 366 和394，或SEQ ID NOs: 366和397。

针对每个导向序列，表3列出了其SEQ ID NO.，使用的CAS9核酸酶归巢臂的种群，导向序列在猪（Sus scrofa）基因组（包括PAM序列）上的部位，针对胎儿成纤维细胞检测中特定向导的、以平均编辑分数测量的编辑效率，以及靶向CD163上的外显子。

表3：靶序列和在猪胎儿成纤维细胞中编辑活性表

选择在CD163基因的前段（外显子1-4）切割位点的高效向导RNA-Cas9对，并进一步筛查其中的猪基因组内潜在的脱靶结合。

一些实例中，已经观察到使用向导RNA和核酸内切酶可导致DNA在基因组中非预期部位切割。由于dsDNA断裂的修复过程可能是随机的，脱靶切割事件可能在基因组中编码区或调控区导致发生不良变化。因此，在数个单个或成对的向导可以采用相似编辑频率来执行预期编辑的情况下，在选择用于编辑实验的向导或向导对时考虑脱靶切割是有利的。

数种用来阐明脱靶的计算方法和生化学方法已经有所发展。计算方法可包括但不限于Cas-OFFinder（Bae, S., 等人，Bioinformatics, 2014, 30, 1473-1475），CRISPR-offinder（Zhao, C., 等人，, Int.J.Biol.Sci, ，2017, 13, 1470-1478）和CRISPR-OFF（Alkan, F.等人, Genome Biol., 2018, 19, 177）。对本领域技术人员来说，其他计算方法是容易获取的。生化方法可包括但不限于GUIDE-Seq（Tsai, SQ等人, Nat Biotechnol.,2015, 33, 187-197），SITE-SEQ

使用SITE-SEQ

在经编辑的猪成纤维细胞中以及随后在注射的胚胎中筛查生化识别的脱靶位点。在用于生成经编辑的猪时，不优先考虑具有经过验证的脱靶编辑的向导。使用上文概述的策略，可以查询使用具有已知脱靶的向导生成的动物是否存在脱靶编辑。可以将确实含有脱靶编辑的动物从育种体系中移除，也可以通过育种将脱靶编辑移除。该筛查可以包括生物信息学方法，例如BLAST

表4：错配检测

导致在这些脱靶位点切割的因素之一可能是基因编辑成分是以DNA载体还是RNA-蛋白质复合物的形式传递。当Cas9和向导RNA可以作为单个向导核糖核苷酸蛋白复合物（sgRNP）递送而不是通过DNA载体递送时，可以准确地将可能具有少至1或2个碱基错配的位点与预期的靶位点区分。

最大化Cas9向导RNA试剂特异性的第二点考虑因素是使用体外生化方法预筛查向导RNA-蛋白质对。一些实验室已经公布了筛查脱靶编辑位点的方法。这些生化方法可以识别纯化的基因组DNA中潜在的脱靶Cas9切割位点。使用这些检测方法，可以用一定范围的sgRNP浓度（从检出限到饱和）消化基因组DNA，从而实现高切割敏感性脱靶位点和低切割敏感性脱靶位点。参见例如，Cameron等人，SITE-SEQ

通过脱靶筛查识别的脱靶位点，可用于指导对细胞中可能的脱靶位点进行的仔细全面的检查，测量编辑频率和功能性细胞结果。可以筛查几个所选择的向导RNA-Cas蛋白质对，且该筛查可以证明：1）更靠近CD163基因5'端的高效切割，以及2）通过生物信息学方法确定的错配序列很少。

使用此向导选择标准，基于猪无精生殖生物中的切割活性，可以选择几个向导RNA-Cas蛋白质对。可以使用电流加倍猪卵母细胞，向其注入向导RNA-Cas蛋白质，使其发育7天，然后收集，并在预期的靶位点进行DNA测序。可以识别出几种向导RNA-Cas蛋白质对，以高频率对无精生殖生物进行编辑。选择该几种向导RNA-Cas蛋白质对，供进一步发育。

本说明书提供并包括用于识别和选择最佳靶位点的方法，该最佳靶位点用于CRISPR/Cas介导的切割和基因编辑。在一个方面中，该方法可以包含识别用于编辑的基因组的靶区域；识别靶区域中的所有20个核苷酸序列；进行生物信息学筛查，以识别和移除与猪基因组中非靶位点匹配的序列，该序列含有1至4个错配并具有基于Cas蛋白质的合适PAM序列；制备包含向导RNA主链和靶序列的CRISPR/Cas RNP复合物，将CRISPR/Cas RNP复合物引入培养物中的猪细胞，确定向导RNA/Cas组合的平均编辑频率。在一方面中，确定向导RNA/Cas组合的平均编辑频率，可包含通过PCR扩增靶位点周围的区域，进行扩增子深度测序，并将其与未经处理的细胞比较。在一方面中，该方法提供选择优选的靶序列，其可以具有至少15的平均编辑频率。还提供了为CRISPR/Cas介导的切割和基因编辑识别和选择最佳靶位点的方法，其中可以将向导RNA和Cas蛋白质作为表达载体或载体的部分提供。本领域技术人员已知合适的细胞，其可以包括但不限于预期的猪育种系的原代胎儿成纤维细胞。

可以设计多个修复模板，以生成框内终止密码子。所列的修复模板在与核酸内切酶系统中的适当向导RNA一起使用时，可在修复后产生框内终止密码子（TAA、TGA、TAG）。可以使用不同长度的修复模板，在编辑位点的任一侧具有序列一致性。在一方面中，修复模板可以在CRISPR/Cas核酸内切酶切割位点的任一侧共享至少15个核苷酸（例如，15至15个核苷酸）。在其他方面，修复模板可以在编辑位点的任一侧共享100个以上的核苷酸（例如，>100~>100）。修复模板可以是互补DNA（使用末端的突出端）的单链、双链或交错链。此外，这些模板不仅限于DNA，还可以是RNA，或经修饰的核苷酸（例如，肌苷），或这些碱基的混合物，且其5'和或3'端受保护，以防降解。因为存在从末端切割核苷酸的核酸外切酶，所以用经修饰的碱基保护末端可以在细胞中防止核酸外切酶消化DNA和RNA。不受理论的限制，增加编辑位点两侧的一致性区域的长度，可以提高修复过程的效率和特异性（例如“同源臂”）。本说明书包括并提供了可以针对编辑位点的两侧上的至少25个核苷酸具有100％一致性的修复模板。该核心一致性区域确保了期望的编辑（例如，SEQ ID NOs: 1至13的缺失）准确高效。在一个方面中，核心一致性区域可以是编辑位点侧翼的至少40个核苷酸。在又一个方面中，核心一致性区域可以是编辑位点两侧上的至少50个核苷酸。在一个方面中，侧翼核心区域可以包含100%一致性的60个核苷酸。一方面中还包括修复模板，其可以与编辑位点侧翼的染色体区域相比具有70个一致的核苷酸。在一个方面中，核心一致性区域可以与编辑位点侧翼的染色体区域相比具有75个一致性核苷酸。在一个方面中，核心一致性区域可以包含25至40个侧翼核苷酸。在又一个方面中，核心一致性区域可以包含40至75个侧翼核苷酸。

在一些方面中，核心一致性区域可以进一步有靶位点的附加同源性区域（“侧翼同源性区域”）位于其侧翼。如本文所述，在一方面中，侧翼同源性区域可以包含与靶位点的100％一致性。作为示例，如在第2、3、15、19、27、62或65系中发现的，SEQ ID NOs: 1至13与靶向编辑位点的任一侧上的CD163区域共享100％的同源性（例如，在核心区域和侧翼同源区域中的100％的同源性）。还包括可以包含SEQ ID NOs: 1至13的修复模板，其中核心一致性区域可以包含与预期编辑（例如，碱基50至100）的任一侧上的基因组的25个核苷酸的100％一致性，且核心一致性区域可以有核心区域（例如，SEQ ID NOs: 1至18的核苷酸1至49和101至150）任一侧上的基因组的至少80％一致性位于其侧翼。在另一方面中，核心区域可以具有100％的同源性，而侧翼同源性区域可以共享85％的同源性。在又一方面中，核心区域可以具有100％的同源性，而侧翼同源性区域可以共享90％的同源性。在再一方面中，核心区域可以具有100％的同源性，而侧翼同源性区域可以共享95％的同源性。一方面中还包括修复模板，其可以具有100％同源性的核心区域和共享97％同源性的侧翼同源性区域。在一些方面中，侧翼同源性区域可以共享99％同源性。不受理论的限制，增加侧翼同源性区域的长度，被认为可以无需进一步修饰基因组就将预期的CD163编辑引入相关动物。即，特别包括并提供了在其他猪的CD163基因组中引入多态性或变化的特定修复序列。

本说明书包括并提供了侧翼同源性区域，其在编辑位点的每侧可具有多于50个核苷酸。在一个方面中，侧翼同源性区域在编辑位点的每侧可具有多于75个核苷酸。在一个方面中，侧翼同源性区域在编辑位点的每侧可具有多于100个核苷酸。还包括了在编辑位点的每侧可具有多于200个核苷酸的侧翼同源性区域。在一些方面中，侧翼同源性区域在编辑位点的每侧可具有30至1000个核苷酸。

本说明书包括并提供了位于修复模板的5'和3'端的附加修饰。修复模板不仅限于DNA，还可以是RNA，或经修饰的核苷酸（例如，肌苷），或这些碱基的混合物，且其5'和或3'端受保护，以防降解。因为存在从末端切割核苷酸的核酸外切酶，所以用经修饰的碱基保护末端可以在细胞中防止核酸外切酶消化DNA和RNA。相应地，如本文所述，可以修饰包含侧翼同源性区域的修复模板的5'和3'端，以防止降解。

本说明书提供并包括核糖核蛋白（RNP）复合物，其可以包含向导多核苷酸和Cas蛋白质。在一个方面中，Cas蛋白质可以是

本说明书中还提供并包括分离的向导RNA，该分离的向导RNA可以包含选自由每个SEQ ID NOs: 22至271中的前20个核苷酸和每个SEQ ID NOs: 347至425中的前20个核苷酸组成的组的间隔区。在一方面中，Cas蛋白质可以是包含SEQ ID NOs: 20或21的蛋白质。

本说明书还包括并提供了DNA载体，该DNA载体可编码用于CRISPR/Cas RNP的制备的向导RNA。通常，编码向导RNA的载体可包含选自由每个SEQ ID NOs: 22至271或SEQ IDNOs: 347至425中的前20个核苷酸组成的组的序列，以及以顺式并作为单个转录单位的部分而布置的向导RNA主链。在合适的细胞中表达后，DNA载体可以产生本说明书中的sgRNA。本领域技术人员普遍知晓合适的表达载体主链，包括启动子、可选择的标志物以及复制起点。在实践中，这20个核苷酸和向导RNA主链可以是DNA（当从启动子表达，在体内（细胞内）或体外（通过T7聚合酶）被转录）以形成RNA向导，或者主链可以是化学合成的双 （crRNA和trRNA）向导或单向导RNA。

通过使用配对的向导RNA删除位于那些向导之间的基因段，可以配对特定的向导RNA，以切除CD163基因的部分。表5提供了示例性的向导RNA对（列为DNA序列）。列出的不包含外显子7氨基酸序列的向导对移除整个外显子。这些缺失的完整氨基酸序列在SEQ IDNO: 553中列出。表5中的所有向导可以通过切除两个向导之间的DNA和在切割位点之间进行NHEJ修复即可创造预期序列，无需使用DNA修复模板。导致产生SEQ ID NOs: 506-517中列出的氨基酸序列的向导对可以在由该向导引入的DNA的切割端引入外源性终止密码子。

表5 示例性向导RNA对

在一些方面中，向导RNA-Cas蛋白质对可进一步包含DNA修复模板。表6列出了创建终止密码子的示例性向导和修复模板。这些和其他向导可以与其他修复模板配对，示例性地，以生成框内终止密码子，或扰乱、干预、或消除外显子剪接，以干扰CD163 mRNA的转译或处理。其他示例可包括但不限于消除起始ATG密码子，或在使用向导RNA对时编程修复结果，其中当核酸酶对去除CD163中的外显子（例如，对应于域5的外显子7的缺失）后，与随机非同源末端连接相比，修复模板可以提升单个修复结果。不受理论的限制，分析揭示了PAM（nGGnG）中包括了额外的nG，生物信息学错配可持续减少，，且体外和体内的脱靶切割减少。错配的减少可以包括那些从校准角度来看的错配（无论DNA序列是否与RNA向导序列错配）。见表4。错配可能不是脱靶编辑（分别在体外或体内切割或存在插入缺失），但是脱靶编辑可能是由错配造成得。在最优选的方面中，本文公开的方法不在猪中产生脱靶编辑，并且本文公开的猪的基因组中不具有脱靶编辑。

表6：用于编辑CD163的外显子2的向导RNA和修复模板

非同源末端连接（NHEJ）修复的随机自然细胞修复过程有时涉及在双链断裂处插入或删除单个或多个核苷酸。作为该修复过程的结果，如果在基因的编码区域中发生双链断裂，则可导致被编码的mRNA的转译阅读框发生移位，直到框内终止密码子终止蛋白质转译为止。尽管相对于未修饰版本的蛋白质产物而言，这种自然且偶然突变的基因的转译可以产生缩短的蛋白质，但是这种新编码的多肽的氨基酸序列将是唯一的，这可能会降低或甚至改良靶标生物内细胞的适应性。在一个方面中，为了阻止移码突变的产生和这组不良多肽的转译，可以筛查经编辑的猪在核酸内切酶切割位点处或其附近的框内转译终止密码子的形成，这是单独且自然发生的NHEJ修复的结果。

通过连同使用两个基因内向导RNA和核酸内切酶的切除基因组DNA序列，可以通过NHEJ修复来完成，该NHEJ修复包括但不限于核酸酶切割位点的端对端连接。由于内含子是非编码的，NHEJ修复结果（包括核酸酶切割位点周围的插入缺失）可以完成对DNA预期区域的切除，而该区域可以包括内含子和/或外显子序列。由于某些NHEJ修复结果的发生频率比其他结果高，因此在选择用于基因编辑实验的向导RNA对时考虑修复结果的频率是有利的。SEQ ID NOs: 520-555说明了表7所列向导对在囊胚中观察到的外显子7切除的修复结果。表5列出了这些向导对的计划修复结果。

表7 囊胚中观察到的修复结果

在另一方面中，在基因编辑期间，可以通过包括DNA修复模板与向导RNA-Cas蛋白质对，产生不导致添加新氨基酸的框内终止密码子。在一个方面中，DNA修复模板可以是dsDNA。在另一个方面中，DNA修复模板可以是ssDNA。共引入双链或单链DNA修复模板可用于删除或插入DNA核苷酸，以在核酸内切酶引发的双链断裂位点处或其附近形成框内转译终止密码子（TAA、TGA、TAG）。DNA修复模板可以进一步包含多核苷酸修饰模板，该多核苷酸修饰模板与天然序列相比含有几点核苷酸变化。该多核苷酸修饰模板可以直接编辑靶DNA序列，并且可以与核酸内切酶编辑试剂共转染，以生成具有框内终止密码子的经编辑的CD163基因 。在一个方面中，当被转录为mRNA继而转译为蛋白质时，这些经基因编辑的CD163基因中的被编码的蛋白质只能合成缩短且无功能形式的CD163多肽。不受理论的限制，具有更长序列同源性区域的DNA修复模板可以更高效。在某些实施方案中，DNA修复模板可以在DNA修复模板内含有序列一致性（同源臂）的区域，其可以位于序列变化的侧翼，且其范围可以在从少于50个核苷酸到大于1000个核苷酸之间。

表6显示了Cas9-蛋白质/向导RNA组合以及DNA修复模板的几个方面。如表6所示，几种Cas9-蛋白质/向导RNA组合可以与DNA修复模板配对，该DNA修复模板在靶缺失（ 50个核心同源性碱基和任一侧侧翼同源性区域的50个）的每一侧具有但不限于序列同源性的75个碱基。在一方面中，可以将蛋白质-向导RNA复合物和模板组合转染到细胞中。不受理论的限制，使用DNA修复模板修复双链断裂，可指导框内转译终止密码子的形成，这是断裂位点处或其邻近处的单个或多个核苷酸缺失的结果。通过这种方法获取的动物和细胞证明，可以使用共引入的DNA修复模板来修复猪CD163基因上的核酸内切酶-引导的双链断裂。如本文所述，具有序列SEQ ID NOs: 1至13的修复模板可以在外显子2中引入框内转译终止密码子，从而产生缩短且无功能的CD163蛋白质。

根据本说明书的DNA修复模板的使用不限于废除CD163的功能。本说明书进一步包括并提供了一种修复模板，其可以指导核苷酸从基因的移除或向基因的添加。在一个方面中，可通过根据本发明方法的编辑，来调节经编码的CD163 mRNA的稳定性或半衰期调节。在又一方面中，可以移除或替换编码负责结合PRRS病毒的成熟蛋白质的氨基酸的DNA序列。在一方面中，CD163的表达和或活性可以被降低至少90％，但不废除。在本发明的一个方面中，本领域技术人员将考虑到一起使用上述间隔区序列和其他修复模板，以允许通过移除碱基和引入碱基或其组合来形成框内终止密码子。

本说明书包括并提供衍生自优良猪系，并包含经编辑的CD163基因的猪。在一些方面中，优良猪系可以是PIC™系15、PIC™系17、PIC™系27、PIC™系65、PIC™系14、PIC™系62、PIC337、PIC800、PIC280、PIC327、PIC408、PIC™399、PIC410、PIC415、PIC359、PIC380、PIC837、PIC260、PIC265、PIC210、PIC™系2、PIC™系3、PIC™系4、PIC™系5、PIC™系18、PIC™系19、PIC™系92、PIC95、PIC™ CAMBOROUGH

每个表均显示在该系中是纯合子的等位基因，并提供该系的区别基因特征及其独特的基因组编辑区域。所有基因特征均基于Sscrofa11.1参考基因组（GenBank编号：GCA_000003025.6）。相应地，经编辑的CD163系的传播可以被追踪，包含从该系获取的经编辑的CD163基因的动物也可以被识别。与表8至表14中的系相比，其他系的猪在多个等位基因上是杂合的或具有相反基因型。以这种方式，每个系中基因特征的组合可用于区分属于特定系的猪和不属于特定系的猪。在一方面中，基因特征提供了一代又一代地育种和跟踪CD163经编辑的基因组的方法。在一方面中，可以制备包含具有根据表8至表14的基因特征的CD163经编辑的基因组的后代。

表8：系2基因特征

表9：系3基因特征

表10：系15基因特征

表11：系19基因特征

表12：系27基因特征

表13：系62基因特征

表14：系65基因特征

优良PIC™系2、3、15、19、27、62和65是为优异的商业表型选择的系。在一个方面中，经CD163基因编辑的细胞和动物可以不含野生种群和许多商品畜群中存在的有害等位基因。在某些方面中，经CD163基因编辑的细胞和动物可以不含选自由以下各项组成的组合一种或多种有害等位基因：上皮细胞生成不良、黑色素皮肤肿瘤、增殖性皮肤病、异常乳房、脊柱缩短、尾巴怪异、尾巴未充分发育、乏毛症、乏毛症（2）、羊毛状毛、脑积水、Tassels、无腿、三条腿、并趾、多趾、 Pulawska因子、虹膜异色、先天性震颤A III、先天性震颤A IV、先天性共济失调、后腿瘫痪、屈膝腿、巨腿症、恶性高热、血友病（von Willebrand病）、白血病、溶血性疾病、水肿、急性呼吸窘迫（“barker”）、佝偻病、25例肾发育不良、肾囊肿、子宫发育不全、猪应激综合症（PSS）、氟烷（HAL）、肩下沉（弓背、曲背、脊柱后凸症）、骨质增生、乳腺发育不良，以及和未充分发育的乳房。如本文所述，制备经CD163基因编辑的动物的改良方法可以避免在有害基因座引入新的突变，或避免在非靶位点生成新的无效等位基因、亚效等位基因、超效等位基因、新效等位基因、反效等位基因突变。后面的这些变化在优良系中可能是特别不受欢迎的，因为它们可以干扰优良性状所涉的基因，这些基因可以由多个基因座在种群中以连续、定量的方式控制。许多这样的数量性状基因座（QTL）是已知的，其通常可以通过钟形曲线来表征，可以用性状值与观察到的动物数量作图。此类性状多基因遗传特征在公认具有商业重要性的性状（例如但不限于背膘、平均日采食量、终生日增重和眼肌深度）中是常见的。

类似地，与繁殖力相关联的性状可以是多基因的，并可以由多个QTL控制。这些性状通常通过目视检查来测定，但是目前方法可以包括超声，来测定背膘厚度（bfp）、眼肌深度（ldp）和肌内脂肪（uip）。如表15所示，优良系可以具有期望的表型性状，其包括高背膘和眼肌深度，同时还具有高的终生日增重。类似地，优良系的母猪可以多产、产仔量大、死产少，并有足够的乳头来哺育仔猪。

表15：期望的表型性状

本说明书提供并包括所选优良系的基因编辑猪，其针对CD163敲除编辑可以是纯合的（CD163

如本文所述，系2、3、15、19、27、62和65的经基因编辑的CD163

如本文所述，系2、3、15、19、27、62和65的经基因编辑的CD163

在一个方面中，系2的经基因编辑的CD163

在一个方面中，系3的经基因编辑的CD163

在一个方面中，系15的经基因编辑的CD163

在一个方面中，系19的经基因编辑的CD163

在一个方面中，系27的经基因编辑的CD163

在一个方面中，系62的经基因编辑的CD163

在一个方面中，系65的经基因编辑的CD163

在一个方面中，系2的经基因编辑的CD163

在一个方面中，系3的经基因编辑的CD163

在一个方面中，系15的经基因编辑的CD163

在一个方面中，系19的经基因编辑的CD163

在一个方面中，系27的经基因编辑的CD163

在一个方面中，系62的经基因编辑的CD163

在一个方面中，系65的经基因编辑的CD163

本说明书提供并包括CD163经编辑的动物，其包含以下各项的种质：PIC™系15、PIC™系17、PIC™系27、PIC™系65、PIC™系14、PIC™系62、PIC337、PIC800、PIC280、PIC327、PIC408、PIC™ 399、PIC410、PIC415、PIC359、PIC380、PIC837、PIC260、PIC265、PIC210、PIC™系2、PIC™系3、PIC™系4、PIC™系5、PIC™系18、PIC™系19、PIC™系92、PIC95、PIC™ CAMBOROUGH

本说明书提供并包括CD163经编辑的动物，其包含以下各项的种质：PIC™系2、系3、系15、系19、系27、系62或系65。经编辑的种质可以包含具有SEQ ID NOs: 426至505中任一的经编辑的基因组序列的编辑。经编辑的种质可以包含具有以下序列中任一的经编辑的基因组序列的编辑：SEQ ID NOs: 426、427、428、429、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499、500、501、502、503、504或505。经编辑的种质可以包含具有SEQ IDNO: 453中所列的经编辑的基因组序列的编辑。经编辑的种质可以包含与PIC™系2 的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ ID NO: 453的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系3的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQID NO: 453的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系15的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ ID NO: 453的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系19 的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ IDNO: 453的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系27的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ ID NO: 453的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系62 的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ IDNO: 453的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系65 的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ ID NO: 453的CD163经编辑序列的基因组。

经编辑的种质可以包含具有SEQ ID NO: 489中所列的经编辑的基因组序列的编辑。经编辑的种质可以包含与PIC™系2的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ ID NO: 489的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系3的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ ID NO: 489的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系15的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQID NO: 489的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系19的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ ID NO: 489的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系27的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ IDNO: 489的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系62的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ ID NO: 489的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系65的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ IDNO: 489的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以具有SEQ ID NOs: 506-517中任一的预期的外显子7氨基酸序列。经编辑的种质可以具有SEQ ID NO: 513中所列的预期的外显子7氨基酸序列。

经编辑的种质可以包含具有SEQ ID NO: 505中所列的经编辑的基因组序列的编辑。经编辑的种质可以包含与PIC™系2的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ ID NO: 505的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系3的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ ID NO: 505的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系15的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQID NO: 505的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系19的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ ID NO: 505的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系27的相似度或同一性为80%、85%、90%、95% 且带有包含SEQ IDNO: 505的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系62的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ ID NO: 505的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以包含与PIC™系65的相似度或同一性为80%、85%、90%、95%且带有包含SEQ IDNO: 505的CD163经编辑序列的基因组。经编辑的种质可以具有SEQ ID NO: 518中所列的预期的外显子7氨基酸序列。

本说明书还提供并包括PIC™系2、系3、系15、系19、系27、系62或系65的细胞。在一些具体实施方式中，PIC™系2的细胞可以包含SEQ ID NOs: 426至505中任一的经编辑的基因组序列。PIC™系2的细胞可以包含SEQ ID NO: 453中所列的经编辑的基因组序列。在一些具体实施方式中，PIC™系3的细胞可以包含SEQ ID NOs: 426至505中任一的经编辑的基因组序列。PIC™系3的细胞可以包含SEQ ID NO: 453中所列的经编辑的基因组序列。在一些具体实施方式中，PIC™系15的细胞可以包含SEQ ID NOs: 426至505中任一的经编辑的基因组序列。PIC™系15的细胞可以包含SEQ ID NO: 453中所列的经编辑的基因组序列。在一些具体实施方式中，PIC™系19的细胞可以包含SEQ ID NOs: 426至505中任一的经编辑的基因组序列。PIC™系19的细胞可以包含SEQ ID NO: 453中所列的经编辑的基因组序列。在一些具体实施方式中，PIC™系27的细胞可以包含SEQ ID NOs: 426至505中任一的经编辑的基因组序列。PIC™系27的细胞可以包含SEQ ID NO: 453中所列的经编辑的基因组序列。在一些具体实施方式中，PIC™系62的细胞可以包含SEQ ID NOs: 426至505中任一的经编辑的基因组序列。PIC™系62的细胞可以包含SEQ ID NO: 453中所列的经编辑的基因组序列。在一些具体实施方式中，PIC™系65的细胞可以包含SEQ ID NOs: 426至505中任一的经编辑的基因组序列。PIC™系65的细胞可以包含SEQ ID NO: 453中所列的经编辑的基因组序列。经编辑的种质可以具有SEQ ID NO: 513中所列的预期的外显子7氨基酸序列。

本说明书提供并包括可包含杂种动物，其可包含以SEQ ID NOs: 1至18和426至505为表征的CD163基因编辑。在一些构型中，基因编辑可以包含SEQ ID NO: 453。在一方面中，杂种动物可以是CAMBOROUGH

本说明书进一步提供并包括用于制备CD163基因编辑的杂种动物的方法。在一个方面中，第一亲本可以包含PIC

在一方面中，本说明书提供了系2、3、15和65（分别是表8、表9、表10，和表14）的杂合猪，其可具有在敲除编辑中成功编辑的CD163基因的至少一个拷贝。这些经编辑的猪可以表现出健康的表型，并且没有由编辑带来的明显有害影响。在另一方面中，说明书提供系19、27和62（分别是表11、表12，和表13）的猪，可以使用本文公开的方法编辑上述猪，以生成具有健康表型的经编辑的猪。可以将杂合猪与相应系的未经编辑的动物杂交，以产生F1杂合猪。在一个实施方案中，系2、3、15和65的杂合猪可以与系2、3、15和65的第二杂合猪杂交，并且可以用孟德尔（Mendelian）比例生产纯合的经CD163编辑的猪。值得注意的是，基因编辑可以是唯一的，并且可以使用SEQ ID NOs: 1至18和426至505对其进行识别，且基因编辑共享包含表8至表14中至少90％的基因型标记的基因特征，从而实现任何后代中的CD163基因编辑的基因组的检测和育种。在一方面中，基因特征可以共享表8至表14的95％或更多的基因型标记。在另一方面中，基因特征可以共享表8至表14的97％或更多的基因型标记。还包括了可以共享表8至表14的98％或更多的基因型标记的基因特征。重要的是，C利用表8至表14的基因型标记进行的D163编辑与可识别的基因组区域的结合，可以实现具有期望编辑的任何子代动物的制备以及在任意数量的后代中进行的经编辑区域的跟踪。在根据本说明书的方面中，本说明书中的杂合猪和纯合猪可以没有脱位突变。

本说明书提供并包括可从猪优良系获得的胚胎或受精卵。在一个方面中，胚胎或受精卵可获自选自由PIC

本说明书提供并包括可以是CD163

本说明书提供并包括包含本发明的经编辑CD163基因的杂种猪系。在一些方面中，该杂种猪系可以通过杂交经编辑的PIC™系和至少一个其他经编辑的PIC™系来生产。在一些方面中，该猪系可以通过连续杂交以引入三个或更多个猪系的种质来生产。在一个方面中，该系可以是PIC™系15、PIC™系17、PIC™系27、PIC™系65、PIC™系14、PIC™系62、PIC337、PIC800、PIC280、PIC327、PIC408、PIC™ 399、PIC410、PIC415、PIC359、PIC380、PIC837、PIC260、PIC265、PIC210、PIC™系2、PIC™系3、PIC™系4、PIC™系5、PIC™系18、PIC™系19、PIC™系92、PIC95、PIC™ CAMBOROUGH

在各种方面中，PIC™系65以商品名PIC337销售。在各种方面中，PIC™系62以商品名PIC408销售。在各种方面中，通过杂交PIC™系15和17所得的杂交猪以商品名PIC800或PIC280销售。在各种方面中，PIC™系27以商品名PIC327销售。在各种方面中，通过杂交PIC™系65和PIC™系62创造的杂种动物以商品名PIC399、PIC410或PIC415销售。在各种方面中，通过杂交PIC™系65和PIC

在各种方面中，本发明提供并包括包含经编辑的CD163基因的猪，该经编辑的CD163基因包含SEQ ID NOs: 453、489或505中所列的经编辑序列，其中该猪可以是以下系的猪：PIC™系15、PIC™系17、PIC™系27、PIC™系65、PIC™系14、PIC™系62、PIC™系2、PIC™系3、PIC™系4、PIC™系5、PIC™系18、PIC™系19、PIC™系92，或可以是两个或更多个上述系的杂交。在各种方面中，杂交猪可以是PIC™系15和PIC™系17、PIC™系65和PIC™系62、PIC™系65和PIC™系27的杂交，PIC™系15和PIC™系17的连续杂交，其中杂交后代接着杂交至PIC™系65，PIC™系14和PIC™系65、PIC™系2和PIC™系3、PIC™系3和PIC™系92、PIC™系19和PIC™系3、PIC™系18和PIC™系3的杂交，PIC™系2和PIC™系3的杂交猪与PIC™系19猪的连续杂交，PIC™系19和PIC™系3的杂交猪与PIC™系2猪的连续杂交，将PIC™系2和PIC™系3的杂种动物杂交至PIC™系18猪的连续杂交，或PIC™系4和PIC™系5的杂交。

在各种方面中，包含经编辑的CD163基因的杂交系可以通过杂交2、3、15、19、27、62或65中的两个或多个系来生产。在一些方面中，包含经编辑的CD163基因的杂交系可以是CAMBOROUGH

本说明书提供并包括杂种CD163

本说明书提供并包括杂种动物，其可包含以SEQ ID NOs: 1至18和426至505为表征的CD163基因编辑。在一方面中，包含CD163基因编辑的杂种动物可由SEQ ID NO: 2表征。在一方面中，包含CD163基因编辑的杂种动物可由SEQ ID NOs: 426-458表征。在一个方面中，包含CD163基因编辑的杂种动物可由SEQ ID NO: 453表征。在一方面中，包含CD163基因编辑的杂种动物可由SEQ ID NOs: 459-504表征。在一方面中，包含CD163基因编辑的杂种动物可由SEQ ID NO: 489表征。在一方面中，杂种动物可以是CAMBOROUGH

在各种方面中，杂种猪可包含根据表8的基因组区域中的SEQ ID NO: 2和根据表10的基因组区域中的SEQ ID NO: 2。在一个方面中，杂种猪可包含根据表8的基因组区域中的SEQ ID NO: 453和根据表10的基因组区域中的SEQ ID NO: 453。在一个方面中，杂种猪可包含根据表8的基因组区域中的SEQ ID NO: 489和根据表10的基因组区域中的SEQ IDNO: 489。在一方面中，杂种CD163

在一方面中，杂种动物可以是CAMBOROUGH

在各种方面，PIC™系2、PIC™系3、PIC™系15、PIC™系19、PIC™系27、PIC™系62或PIC™系65的经编辑猪可以具有包含SEQ ID NO: 518中所列预期的氨基酸序列的CD163基因。在各种方面中，经编辑的CD163基因可以具有SEQ ID NO: 505中所列的123 bp缺失。在各种构型中，该缺失可以具有AHRKPRLV-----------------------------------------TVVSLLGGAHFGEGSGQIWAEEFQCEGHESHLSLCPVAPRPDGTCSHSRDVGVVCS (SEQ ID NO: 518)的外显子7氨基酸序列。在各种方面中，具有包含SEQ ID NO: 518中所列的氨基酸序列的经编辑CD163基因的猪可以是两个PIC™系之间的杂种后代。在各种方面中，该猪可以具有包含SEQID NO: 505中所列的核酸序列的经编辑CD163外显子7序列。在各种方面中，该猪可以是PIC™系2和PIC™系3之间杂交的后代。在根据本说明书的方面中，本说明书中的杂合猪和纯合猪可以没有脱位突变。

重要的是，本说明书中的CD163编辑猪和细胞保留了其理想的商业表型。经编辑的猪可以表现出健康的表型，并且没有由编辑带来的明显急性有害影响。在一个方面中，系2、3、15、19、27、62和65的猪可以保留如表15所示的商业上的理想表型。

改善现有家畜群健康的方法可以包括使用上述方法修改CD163基因座。在一个方面中，该方法可包含将核酸内切酶或编码该核酸内切酶的多核苷酸，以及向导多核苷酸引入猪细胞，该向导多核苷酸包含选自由每个SEQ ID NOs: 22至271的前20个核苷酸或每个SEQ ID NOs: 347至425的前20个核苷酸组成的组的序列，在允许核酸内切酶作用于DNA的靶序列处或其附近条件下培养细胞，从而在靶位点处或其附近诱导重组、同源性定向修复或非同源性末端连接，识别在所述靶序列具有修饰的至少一个细胞，并用动物细胞产生动物。在本说明书的方面中，核酸内切酶可以是向导RNA和来自嗜热链球菌的Cas蛋白质的RNP复合物。在另一方面中，核酸内切酶可以是向导RNA和来自酿脓链球菌的Cas蛋白质的RNP复合物。

在一方面中，该方法可进一步包含向细胞提供修复向导，该修复向导包含选自由SEQ ID NOs: 1至13的核苷酸50至100组成的组的序列。在另一方面中，修复向导可包含选自由SEQ ID NOs: 1至13的核苷酸50至150组成的组的序列，还可相比SEQ ID NOs: 1至13的核苷酸1至49和101至150包含85%同源性。在一个方面中，修复向导可包含选自由SEQ IDNOs: 1至13组成的组的序列。如本文所述，用于改善现有畜群健康的方法保留了上述理想商业表型。在一方面中，理想商业表型可以是在具有相似遗传背景的未编辑猪群中观察到的表型的至少90%。

通过常规育种或包括人工授精的方法，将CD163基因编辑座引入畜群。为了制备纯合动物，可以在具有至少一个基因编辑的CD163基因座（包含SEQ ID NOs: 1到18或426到505的序列）的亲本之间进行杂交，并且可以选择纯合子代（以1:4孟德尔比率存在）。如本文所述，亲本和一个基因编辑的CD163基因座的组合可适用于改良畜群。进一步育种具有CD163基因编辑基因座的动物，可以改善畜群的健康，直到畜群中所有动物都包含所述CD163基因编辑基因座。值得注意的是，在将畜群完全育种为CD163基因编辑畜群之前，畜群的健康状况就可以得到显著改善。具体而言，如上所述，在抗PRRSv基因编辑的CD163母猪中，猪胎儿本身就针对PRRSv受保护。此外，本领域的普通技术人员将知晓，随着纯合CD163编辑动物的数量增加，传播PRRSv的合适猪载体将减少（例如，发展了群体免疫）。相应地，本发明方法可提供通过引入群体免疫来改善畜群。

检测所需编辑的一种有用方法是使用实时PCR。与关注区侧翼相接的PCR引物以及专门退火至关注区的探针。探针标记有荧光团和猝灭剂。在PCR反应中，引物和探针以取决于序列的方式杂交至关注区的互补DNA链。因为探针是完整的，荧光团和猝灭剂非常接近，猝灭剂吸收荧光团发出的荧光。聚合酶从引物向外延伸，开始DNA合成。聚合酶到达探针时，聚合酶的核酸外切酶活性切割杂交的探针。切割的结果是，荧光团与猝灭剂分离并发出荧光。该荧光由实时仪器检测。针对每个PCR循环重复这些步骤，实现特定产物的检测。

在本申请中，设计了单独的三组引物和探针。第一组引物(SEQ ID NOs: 556和557)与包含SEQ ID NO: 249的未经编辑的基因组序列侧翼相接，探针(SEQ ID NO: 558)与所述引物中间的未经编辑的基因组DNA结合。第二组引物(SEQ ID NOs: 559和560)与包含SEQ ID NO: 256的未经编辑的基因组序列侧翼相接，探针(SEQ ID NO: 561)所述引物中间的未经编辑的基因组DNA结合。最后一组引物(SEQ ID NO: 562和563)与期望的外显子7缺失编辑侧翼相接，该期望的外显子7缺失编辑通过切除SEQ ID NO: 249 和SEQ ID NO: 256的切割位点之间的序列来创建。探针(SEQ ID NO: 564)设计为在这些引物中间与期望的编辑结合。然后使用商业实时PCR试剂盒来探查各种动物中的期望编辑。存在各种商业实时PCR试剂盒，包括但不限于，例如IDT 的PRIMETIME

实施例

实施例1

本实施例说明了猪细胞中猪CD163基因敲除的靶位点选择。

使用链球菌Cas9/gRNA RNA引导的DNA核酸内切酶在猪CD163基因（Sscrofa11.1，GenBank编号：GCA_000003025.6）中生成DNA序列插入、缺失及其组合，借此单独或成对递送向导RNA和蛋白质组合，使得CD163基因中的序列改变减少或废除CD163信使RNA或蛋白质的功能、稳定性或表达。筛查从转译起始位点上游120个核苷酸（chr5:63300192）到CD163外显子7下游59个核苷酸（chr5:63323390）的CD163基因序列，以找出具有相邻nGG或nGGnG PAM序列的向导RNA结合位点，这些位点分别是源于酿脓链球菌或嗜热链球菌CRISPR3（嗜热链球菌CR3）的Cas9蛋白质切割所需的，Cas9蛋白质的序列在随本文提交的序列列表中，如表2所示。表3显示了用于编辑的靶位点的DNA序列、靶位点在CD163基因上的部位和编辑活性（按实施例3所述测定）。向导RNA分子与靶具有相同序列，向导RNA分子具有相应的RNA核苷酸，没有PAM序列（酿脓链球菌为nGG，嗜热链球菌为nGGnG）。向导多核苷酸分子也可以由DNA碱基或DNA和RNA碱基的混合物组成。靶位点序列在随本文提交的序列列表中列为SEQ IDNOs: 22至271和347至425。所示靶位点序列在猪种质中是保守的，并经过了DNA测序的筛查。

实施例2

本实施例说明了向猪胎儿成纤维细胞递送向导RNA/Cas9核酸内切酶的核转染。

为了测试活体细胞中产生经编辑的猪CD163等位基因的DNA切割活性，将靶向表3中所列的序列的CRISPR-Cas核酸内切酶和向导RNA核转染到猪胎儿成纤维细胞中。用28-35天大的胎儿制备猪胎儿成纤维细胞（PFF）细胞系，将3.2µg Cas9蛋白质（酿脓链球菌或嗜热链球菌）和2.2µg体外转录的单向导RNA在水中混合成总体积为2.23 µl，然后使用Lonza电转化仪将其核转染到PFF细胞中。在核转染的制备中，使用胰蛋白酶表达（重组胰蛋白酶）收集PFF细胞。在此基础上，从细胞中移出培养基，用HBSS或DPBS洗涤培养基一次，并在38.5℃下在有胰蛋白酶的情况下培养3-5分钟。然后用完全培养基收集细胞。通过离心（300 x g室温下五分钟）将细胞造粒，丢弃上清液，然后将细胞重新悬浮在10 mL PBS中得到单细胞悬浮液，使用台盼蓝染色法获得计数细胞。

通过离心（300 x g室温下五分钟）将适当量的细胞造粒，弃去上清液，将细胞以7.5 x 10

实施例3

此实施例说明定向至猪CD163的向导RNA/Cas9组合的编辑频率。

通过将与向导RNAs复合的Cas9蛋白质递送至胎儿成纤维细胞，将核苷酸序列改变引入猪CD163基因，如实施例2中所述。

为了评估由向导RNA/Cas核酸内切酶系统介导的在猪CD163基因组靶位点处的DNA双链切割，通过PCR扩增靶位点周围约250 bp的基因组DNA区域，然后通过扩增子深度测序检查PCR产物是否存在编辑。转染3次后，提取PFF基因组DNA，如实施例2中所述。用NEB Q5聚合酶对预期靶位点周围的区域进行PCR扩增，并添加扩增子特异性条形码所需的序列，通过两轮PCR，使用尾引物进行ILLUMINA

实施例4

本实施例说明了使用DNA修复模板生成框内终止密码子。

在与Cas9蛋白质和向导RNA共递送时，DNA修复模板用于在猪CD163基因中引入终止密码子。生成表6中公开的核酸内切酶-向导复合物和修复模板，并将其用于编辑囊胚中的CD163基因。通过实施例5的方法验证碱基缺失。

实施例5

本实施例说明了经编辑的动物基因组的分子特征。

组织样本取自已经根据本文实施例编辑其基因组的动物。尾巴、耳朵切口或血液样本是适合的组织类型。在取样后1小时内，将组织样本在-20℃下冷冻，以保持组织样本中DNA的完整性。

经过裂解缓冲液中的蛋白酶K消化后，从组织样本提取DNA。在两个不同的序列平台上进行表征，短序列读长使用 ILLUMINA

对于短序列读长来说，采用两步PCR来扩增和测序相关区域。第一步是基因座特异性PCR，它使用与供应商特异性引物组合的基因座特异性引物，来扩增DNA样本中的相关基因座。第二步将测序索引和衔接子序列附接到第一步中的扩增子上，以便进行测序。

选择用于第一步PCR的基因座特异性引物，以便它们扩增<300bp的区域，使得ILLUMINA

对于长序列读长来说，采用两步PCR来扩增和测序相关区域。第一步是基因座特异性PCR，它使用与供应商特异性衔接子组合的基因座特异性引物，来扩增DNA样本中的相关基因座。第二步PCR将测序索引附接到第一步PCR中的扩增子上，以使DNA准备好制备测序库。第二步PCR产物借助供应商试剂盒经历了一系列化学反应，来处理DNA末端，并与含有运动蛋白质的衔接子连接，以允许进入孔进行基于DNA链的测序。

针对第一步PCR范围的基因座特异性引物被设计为扩增CD163基因的不同区域，经扩增的区域长度不同。然后将标准化的DNA与供应商提供的加样缓冲液混合，并将其加样到NANOPORE™流动池中。

虽然长序列读长的每碱基准确度低于短读长，但对于观察靶位点周围序列的长范围背景非常有用。

实施例6

本实施例说明了使猪具有经编辑CD163基因的方法，该经编辑CD163基因赋予PRRSv抵抗力。

分离猪卵母细胞，使其受精，然后编辑所得的受精卵，以生成经基因编辑的猪。

将CD163 RNP复合物显微注射到体内或体外受精的猪单细胞受精卵的细胞质中，接着孵化这些受精卵，以生成经编辑的多细胞胚胎，将其经标准方法移植至代孕后备母猪，以生产经基因编辑的猪。为了制备胚胎供体和代孕，PIC™系2、系3、系15和系65中的发育期后备母猪接受14日0.22%烯丙孕素溶液（20-36 mg/动物）疗法，使其发情期同步。在Matrix的最后一次给药后36小时施用PMSG来诱导卵泡生长，在PMSG施用后82小时施用hCG来诱导排卵。为了生成体内受精的受精卵，接着用来自相应PIC™系的公猪精液来人工授精（AI）静立反射状态下的雌性。人工授精后12-24小时，通过用补充有0.3% BSA (w/v)的无菌TL-HEPES培养基逆行冲洗输卵管，手术收回源自体内的受精卵。受精的受精卵接受单一的2-50微微升(pl) 的靶向CD163的Cas9蛋白质和向导RNA复合物（25-50 ng/µl和12.5-35 ng/µl）的细胞质注射，并在PZM5培养基中培养（Yoshioka，K.，等人，Biol. Reprod.， 2002，60：112-119；Suzuki，C.，等人，Reprod. Fertil.，Dev.，2006 18，789-795；Yoshioka，K.，J.Reprod. Dev. 2008，54，208-213）。注射的受精卵可以在全身麻醉下通过中线剖腹手术植入发情期同步、未交配的代孕雌性的输卵管（每个代孕接受20-60个注射胚胎）。

用于基因编辑的体外受精胚胎来自未受精的PIC™ 卵母细胞。从中等大小（3-6毫米）的卵泡收集发情期同步的PIC™后备母猪的未成熟卵母细胞。接着选择具有均匀的深色细胞质和完整的周围卵丘细胞的卵母细胞，以供成熟。将卵丘卵母细胞复合物置于含有500µl成熟培养基、带3.05 mM葡萄糖的TCM-199（Invitrogen）、0.91 mM丙酮酸钠、0.57 mM半胱氨酸、10 ng/ml EGF、0.5 µg/ml促黄体素（LH）、0.5 µg/ml FSH、10 ng/ml庆大霉素（Sigma）和10%卵泡液的孔中，在38.5℃下、5%的CO

为了确定猪胚胎中Cas9-向导RNA靶向基因编辑的频率，将未注射的对照受精卵和注射的体外受精生成的多余受精卵在PZM3或PZM5培养基中、在38.5˚ C下培育5-7天。在培育后第7天收集囊胚，分离基因组DNA，供下一代测序。

实施例7

本实施例说明了基因编辑猪的产生和特性。

通过实施例6中所述方法编辑PIC™系2、3、15和65的动物。使用实施例5中所述方法确认成功的编辑。成纤维细胞细胞系在经胶原酶处理的耳朵切口样本中生长，耳朵切口样本提取自经编辑的动物，并将成纤维细胞细胞系保藏在美国模式培养物保藏所（ATCC

表16：经验证的基因编辑动物

表16中的每只动物都表现出健康的表型，并缺失染色体5中的核苷酸63301999-63302005（在外显子2中）。

额外的细胞系在经胶原酶处理的耳朵切口样本中生长，耳朵切口样本来自PIC™系19/27和62的为编辑动物，并将额外的细胞系保藏在ATCC中。PIC

分析每个保藏的PIC™系（2、3、15、19、27、62和65）的CD163基因附近的单核苷酸多态性（SNP），选择能够区分各系的每个系的SNP曲线图。用于定义系特征的起始数据集是7个保藏的PIC™系中的330个全基因组测序动物的集合。提取以CD163基因为中心的染色体5的6 Mb区域以获取特征，并检查该区域中每个核苷酸的系内和系之间的差异，以识别共同形成该系的特征的相对少量的SNPs。

为了有望被纳入到给定系的特征中，对每个染色体位置实行以下标准： 序列覆盖须存在于该系中90％的动物中；7个系中的至少5个系须符合上述要求；且所有具有靶向系数据的动物都必须已经具有相同的纯合基因型。对于每个其他系来说，针对该系的所有测序动物计算出该基因型的基因型频率。对其他6个系中最高和最低每系基因型频率之间的差异实行至少30％截断（即，6个系内必须存在基因型频率的分布）。

用于区分能力和均匀分布的度量组合用于选择可以定义每系的基因型子集。表8至表14提供了染色体5上的SNPs位置，每个猪系中针对该位置的纯合等位基因是固定的。这些纯合等位基因组将每个猪系与其他系区分开。所列基因型表明哪个等位基因在每个位置是纯合的，如表8至表14所示。

实施例8

本实施例比较了从野生型和经基因编辑猪分离的免疫细胞对PRRSv的不同抵抗力水平。

根据先前实施例所述方法，对从经编辑的和野生型动物（每个有和没有CD163基因编辑）中回收的单核细胞源性巨噬细胞（MoMØs）进行CD163表面表达分析。测试的编辑显示在表17中。4个编辑包含如表所示的各种大小的缺失，第5个编辑包含2个碱基对插入；表15中的所有编辑都在外显子2中。所有缺失或插入导致截短的CD163多肽。使用克隆2A10/11（小鼠抗猪CD163单克隆抗体），通过免疫荧光标记和FACS分析，评估CD163表达。从细胞表面表达分析可以明显看出，经CD163编辑的细胞MoMØs在细胞表面缺乏功能性表位。

表17：针对蛋白质表达测试的CD163基因编辑

为了测试纯合编辑细胞中对CD163进行的两个碱基对的缺失编辑针对PRRSv的病毒性感染，用PRRSv 1型和2型感染MoMØs。感染后二十四（24）小时后，在显微镜视场中，对细胞进行计数，以确定含有复制PRRSv的细胞数。结果发现CD163纯合编辑的MoMØ细胞对PRRSv1型和2型均不受纳。

实施例9

本实施例说明了使用两个向导从猪成纤维细胞中猪CD163中去除外显子7。

为了去除编码成熟CD163多肽SRCR5的CD163外显子7 DNA序列，检查位于CD163外显子7上游450 bp和下游59 bp的内含子区域内的DNA序列，寻找酿脓链球菌（NGG）和嗜热链球菌（NGGNG） Cas9蛋白质和向导RNA识别位点。在内含子6的450bp内识别出48个位点，在内含子7的59bp内识别出10个位点。首次在猪胎儿成纤维细胞中使用单向导测试了这58个位点结合Cas9和向导RNAs以指导基因编辑的能力。这些单向导RNA-Cas9蛋白质的子集—在间隔区识别位点生成高频率编辑的向导RNA作为向导对被进一步测试，以检测它们去除CD163外显子7的能力。如实施例2所述，通过核转染将向导引入猪胎儿成纤维细胞：将每个向导制备为RNP，然后在转染前将两组复合物结合，总体积为2.23µl。如实施例3所述，确定向导对的编辑频率。NHEJ介导修复使核酸内切酶切割位点聚集到一起，导致CD163外显子7缺失，NHEJ介导修复的频率如表18所示。

表18 使用成对向导RNA在猪胎儿成纤维细胞中导致CD163外显子7缺失的端对端修复频率

对于期望的编辑切除向导的编辑频率范围广。

实施例10

本实施例说明了使用双向导RNA在猪囊胚中切除外显子7。附加测试在猪胎儿成纤维细胞中筛查的向导子集，测试它们从猪囊胚去除CD163外显子7的能力。对将在猪胚胎中测试的向导子集的选择基于以下两项的组合：它们在猪成纤维细胞中生成外显子7缺失的功效，配对中每个向导的少量脱靶编辑（参见具体实施方式）。如上所述，生成经编辑的猪胚胎。简而言之，如实施例6所述，对从屠宰场卵巢中回收的卵母细胞进行体外受精。在受精后4-5小时，使用FEMTOJET

表19 使用成对向导RNAs在猪胚胎中导致CD163外显子7缺失的端对端修复频率

本实施例表明，数个向导对可用于删除CD163外显子7，但其效率可因向导对和细胞类型不同大大不同。

实施例11

本实施例说明了使用两个向导将不成熟的终止密码子引入猪CD163的外显子7。

利用生物信息学方法筛查CD163外显子7内的向导，以筛查在NHEJ过程中这些向导产生的切割被连接在一起时上述向导生成框内终止密码子的能力。如实施例2所述，在猪胎儿成纤维细胞中测试生物信息学预测：在转染前，将向导单独复合，然后结合向导，总体积为2.23 µl。如实施例3所述，确定编辑频率。端对端NHEJ修复导致CD163外显子7中不成熟的终止密码子的引入，端对端NHEJ修复的频率如表20所示。

表20 在猪胎儿成纤维细胞中向CD163外显子7缺失引入终止密码子的端对端修复频率

本实施例说明了被设计用于引入终止密码子的向导对在猪成纤维细胞中具有多种编辑效率。

实施例12

本实施例说明了在猪囊胚中引入终止密码子的向导的编辑效率。

附加测试在猪胎儿成纤维细胞中筛查的向导子集，测试它们向猪胚胎的CD163外显子7引入不成熟的终止密码子的能力。对将在猪胚胎中测试的向导子集的选择基于以下两项的组合：它们向猪成纤维细胞的CD163外显子7引入不成熟的终止密码子的功效，上述配对中每个向导缺乏观察到的脱靶。如实施例3所述，确定编辑频率。端对端NHEJ修复导致CD163外显子7中不成熟的终止密码子的引入，端对端NHEJ修复的频率如表21所示。

表21 在猪囊胚中向CD163外显子7缺失引入终止密码子的端对端修复频率

本实施例说明可用于向CD163的外显子7引入不成熟的终止密码子的向导对具有多种编辑效率。

实施例13

本实施例说明了NHEJ修复的可变修复结果。

如实施例9所述，测试了被设计用于删除CD163外显子7的向导RNA子集，以测试其在猪囊胚中删除外显子7编码区和侧翼区的能力。如实施例3所述，确定囊胚的编辑频率。在本实施例中，针对5个向导RNA对表7显示了作为NHEJ介导修复的结果的在猪体内囊胚中观察到的DNA序列子集。已知除了更复杂的NHEJ介导修复DNA序列，简单的核苷酸缺失也会发生，更复杂的NHEJ介导修复DNA序列含有缺失、插入、重排、倒位及其任何组合。不受理论的限制，这些不同的修复结果也是猪囊胚中使用单个和成对向导对DNA进行核酸内切酶切割的结果。表7还显示与每个修复结果关联的观察到的DNA序列的频率在向导RNA对之间有所变化。在某些情况下，但并非所有情况下，与成对向导RNA切割位点的端对端连接关联的DNA序列频率是修复结果中最高的代表。对于一些向导RNA对，有单一的主导DNA修复结果，而对于其他向导RNA对，有发生频率相同的DNA修复结果。针对这5个向导RNA对显示的大多数DNA修复结果都导致与SRCR 5域相对应的CD163外显子7 DNA序列的缺失。因此，使用哪一向导RNA对来生成编辑猪的决定，在很大程度上取决于种群中对多个等位基因的耐受性。

本实施例表明，在使用两个内含子向导RNA删除基因组DNA时产生的NHEJ介导修复结果在向导RNA对之间有所变化，不仅表现在DNA断裂的连接方式上，还表现在这些连接的频率上。筛查成纤维细胞或胚胎中的向导RNA对，观察单或双向导RNA的DNA修复结果，有利于编辑动物的生成。

实施例14

本实施例说明用于认定细胞中是否存在SEQ ID NO: 249中所列间隔序列和/或期望的外显子7切除编辑的实时PCR检测。

为该检测设计了两组引物和两个探针。一组引物设计为与未经编辑的基因组中SEQ ID NO: 249中所列的间隔序列侧翼相接。这些引物的序列在SEQ ID NOs: 556和557中列出。序列为SEQ ID NO: 558的、标记有HEX荧光部分的探针被设计为退火至PCR引物中间的未经编辑的基因组。另一组引物具有SEQ ID NOs: 562和563中所列的序列，设计为与期望的编辑序列侧翼相接。具有SEQ ID NO: 564中所列序列、标记有FAM荧光部分的探针设计为，退火至涵盖编辑的连接区的核苷酸。实时PCR的执行使用两组引物和从具有已知等位基因地位（野生型、纯合子或杂合子）的猪的尾巴和/或耳朵样本提取的基因组DNA。混合5 µl的2x PRIMETIME

实施例15

本实施例说明用于认定细胞中是否存在SEQ ID NO: 256中所列间隔序列和/或期望的外显子7切除编辑的实时PCR检测。

为该检测设计了两组引物和两个探针。一组引物与SEQ ID NO: 256中所列的间隔序列侧翼相接。这些引物的序列在SEQ ID NOs: 559和560中列出。具有SEQ ID NO: 561中所列序列、标记有HEX荧光部分的探针设计为退火至间隔序列的未经编辑版本。另一组引物和探针设计为靶向期望的编辑，在实施例14中有所描述(SEQ ID NOs: 562-564)。按照实施例14所述执行实时PCR，但使用本实施例中的引物和探针。用图表记录荧光，正如预期，纯合子靠近y轴（代表FAM部分），杂合子靠近图表中心聚集，野生型猪靠近X轴聚集（代表HEX部分）。因此，该检测成功基于SEQ ID NO: 256中所列间隔序列检测了编辑。

实施例16

本实施例说明在先公开的向导对和本发明的向导对之间的细胞中CD163 CRISPR-CAS gRNA活性对比。

如实施例2所述，每对向导都在猪成纤维细胞中测试。并且，如实施例10所述，每对向导还在猪囊胚中测试。结果显示在下文表22中。

表22 猪细胞中的比较活性

这些数据说明，与在先文献中公开的向导相比，在具有期望编辑的细胞百分比方面，本发明的向导提供至少两倍的提升。因此，本发明的向导比在先文献中公开的向导更有效。

实施例17

本实施例说明受PRRSv I 型攻击的CD163经编辑的猪。

如实施例6所述，用SEQ ID NOs: 249和256中列出的向导来编辑PIC™系2的猪。如实施例5中所述确认编辑。接着杂交经编辑的猪，以创造针对编辑而言纯合的猪。向这些纯合的经编辑猪接种3 ml具有10

表23 I型 PRRSv攻击的实时PCR EU调整计数

整个实验过程中，经编辑动物的血清中没有检测到PRRSv。

还使用IDEXX PRRS X3抗体测试试剂盒对血清样本进行了ELISA测试；该测试由官方认可的兽医诊断实验室执行。结果显示为样本:阳性比例。大于等于0.40的比例被视为是阳性。表24显示了每个样本的比例。

表24 I型PRRSv攻击的ELISA S/P结果

经编辑的猪没有任何阳性比例。相比之下，到第21日为止，所有野生型猪均具有阳性比例。这进一步说明了经编辑猪的血清中没有PRRSv传播。

该实施例说明了用SEQ ID NOs: 249和256的向导编辑过的猪对PRRSv I型病毒感染具有抗性。

实施例18

本实施例说明受PRRSv II型攻击的CD163经编辑的猪。如实施例6中所述，用SEQID NOs: 249和256中列出的向导来编辑PIC™系2和3的猪。如实施例5中所述确认编辑。接着杂交经编辑的猪，以创造针对编辑而言纯合的猪。向这些纯合的经编辑猪接种3 ml具有10

表25 II型 PRRSv攻击的实时PCR NA调整计数

经编辑的猪相比野生型猪几乎没有病毒计数。

还使用IDEXX PRRS X3抗体测试试剂盒对血清样本进行了ELISA测试；该测试由官方认可的兽医诊断实验室执行。结果显示为样本:阳性比例。大于等于0.40的比例被视为是阳性。表26显示了每个样本的比例。

表26 II型PRRSv攻击的ELISA S/P比例

经编辑的猪不具有任何阳性比例。相比之下，到第10日为止，所有野生型猪均具有阳性比例。整体来说，这些数据说明了经编辑猪的血液中没有病毒传播。

该实施例说明了具有经过SEQ ID NOs: 249和256编辑的CD163基因的猪对PRRSvII型感染具有抗性。

每一上文中引用和应用的内容均通过引用全文并入于此。在详细描述了本发明之后，显而易见的是，在不脱离所附权利要求书中界定的教导之范围的情况下，可以进行修改和变化。

序列表

<110> 吉纳斯公司 (Genus Plc)

<120> 通过对CD163靶向灭活来改善猪类健康的方法

<130> 820210177

<150> US63/020,128

<151> 2020-05-05

<150> US63/021,370

<151> 2020-05-07

<160> 564

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 1

tttcgcagac tttagaagat gttctgccca tttaagttcc ttcacttttg ctgtagtcgc 60

tgttctcagt gcctgactag ttctcttggt gagtactttg acaaatttac ttgtaaccta 120

gcccactgtg acaagaaaca ctgaaaagca 150

<210> 2

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 2

tttcgcagac tttagaagat gttctgccca tttaagttcc ttcacttttg ctgtagtcgc 60

tgttctcagt gcctgactag ttctcttggt gagtactttg acaaatttac ttgtaaccta 120

gcccactgtg acaagaaaca ctgaaaagca 150

<210> 3

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 3

gtggtgaaaa caagtgctct ggaagagtgg aggtgaaagt gcaggaggag tggggaactg 60

tgtgtaataa tggctgacat ggatgtggtc tctgttgttt gtaggcagct gggatgtcca 120

actgctatca aagccactgg atgggctaat 150

<210> 4

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 4

tggctgggac atggatgtgg tctctgttgt ttgtaggcag ctgggatgtc caactgctat 60

caaagccact ggatgaattt tagtgcaggt tctggacgca tttggatgga tcatgtttct 120

tgtcgaggga atgagtcagc tctctgggac 150

<210> 5

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 5

gtaggcagct gggatgtcca actgctatca aagccactgg atgggctaat tttagtgcag 60

gttctggacg catttgatgg atcatgtttc ttgtcgaggg aatgagtcag ctctctggga 120

ctgcaaacat gatggatggg gaaagcataa 150

<210> 6

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 6

taggcagctg ggatgtccaa ctgctatcaa agccactgga tgggctaatt ttagtgcagg 60

ttctggacgc atttgatgga tcatgtttct tgtcgaggga atgagtcagc tctctgggac 120

tgcaaacatg atggatgggg aaagcataac 150

<210> 7

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 7

gtccaactgc tatcaaagcc actggatggg ctaattttag tgcaggttct ggacgcattt 60

ggatggatca tgtttgaggg aatgagtcag ctctctggga ctgcaaacat gatggatggg 120

gaaagcataa ctgtactcac caacaggatg 150

<210> 8

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 8

ctggacgcat ttggatggat catgtttctt gtcgagggaa tgagtcagct ctctgggact 60

gcaaacatga tggatgaaag cataactgta ctcaccaaca ggatgctgga gtaacctgct 120

caggtaagac atacacaaat aagtcaagcc 150

<210> 9

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 9

tggacgcatt tggatggatc atgtttcttg tcgagggaat gagtcagctc tctgggactg 60

caaacatgat ggatgaaagc ataactgtac tcaccaacag gatgctggag taacctgctc 120

aggtaagaca tacacaaata agtcaagcct 150

<210> 10

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 10

ctctagatgg atctgattta gagatgaggc tggtgaatgg aggaaaccgg tgcttaggaa 60

gaatagaagt caaataagga cggtggggaa cagtgtgtga tgataacttc aacataaatc 120

atgcttctgt ggtttgtaaa caacttgaat 150

<210> 11

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 11

cttctgtggt ttgtaaacaa cttgaatgtg gaagtgctgt cagtttctct ggttcagcta 60

attttggaga aggttgacca atctggtttg atgatcttgt atgcaatgga aatgagtcag 120

ctctctggaa ctgcaaacat gaaggatggg 150

<210> 12

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 12

tgatgatctt gtatgcaatg gaaatgagtc agctctctgg aactgcaaac atgaaggatg 60

gggaaagcac aattgatgct gaggatgctg gagtgatttg cttaagtaag gactgacctg 120

ggtttgttct gttctccatg agagggcaaa 150

<210> 13

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 13

agacacgtgg ggcaccgtct gtgattctga cttctctctg gaggcggcca gcgtgctgtg 60

cagggaacta cagtgactgt ggtttccctc ctggggggag ctcactttgg agaaggaagt 120

ggacagatct gggctgaaga attccagtgt 150

<210> 14

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 14

agaagatgtt ctgcccattt aagttccttc acttttgctg tagtcgctgt tctcagtgcc 60

tgcttggtca ctagttcttg gtgagtactt tgacaaattt acttgtaacc tagcccactg 120

tgacaagaaa cactgaaaag caaataattc 150

<210> 15

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 15

gactttagaa gatgttctgc ccatttaagt tccttcactt ttgctgtagt cgctgttctc 60

agtgcctgct tggtcacttg taacctagcc cactgtgaca agaaacactg aaaagcaaat 120

aattctcctg aagtctagat agcatctaaa 150

<210> 16

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 16

gaagatgttc tgcccattta agttccttca cttttgctgt agtcgctgtt ctcagtgcct 60

gcttggtcac tagttctctc ttggtgagta ctttgacaaa tttacttgta acctagccca 120

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<210> 17

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 17

tttcgcagac tttagaagat gttctgccca tttaagttcc ttcacttttg ctgtagtcgc 60

tgttctcagt gcctgcttgg tgagtacttt gacaaattta cttgtaacct agcccactgt 120

gacaagaaac actgaaaagc aaataattct 150

<210> 18

<211> 150

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 18

tagaagatgt tctgcccatt taagttcctt cacttttgct gtagtcgctg ttctcagtgc 60

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<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

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<210> 20

<211> 1380

<212> PRT

<213> 酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)

<400> 20

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Leu Lys Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile

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Ser Phe Phe His Arg Leu Glu Glu Ser Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys

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Asp Ser Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala

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His Met Ile Lys Phe Arg Gly His Phe Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn

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Pro Asp Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr

180 185 190

Tyr Asn Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp

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Ala Lys Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu

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225 230 235 240

Asn Leu Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn

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Asp Asp Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala

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Ser Gln Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met

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<210> 21

<211> 1400

<212> PRT

<213> 酿脓链球菌(Streptococcus thermophilus)

<400> 21

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210 215 220

Lys Asp Arg Ile Leu Lys Leu Phe Pro Gly Glu Lys Asn Ser Gly Ile

225 230 235 240

Phe Ser Glu Phe Leu Lys Leu Ile Val Gly Asn Gln Ala Asp Phe Arg

245 250 255

Lys Cys Phe Asn Leu Asp Glu Lys Ala Ser Leu His Phe Ser Lys Glu

260 265 270

Ser Tyr Asp Glu Asp Leu Glu Thr Leu Leu Gly Tyr Ile Gly Asp Asp

275 280 285

Tyr Ser Asp Val Phe Leu Lys Ala Lys Lys Leu Tyr Asp Ala Ile Leu

290 295 300

Leu Ser Gly Phe Leu Thr Val Thr Asp Asn Glu Thr Glu Ala Pro Leu

305 310 315 320

Ser Ser Ala Met Ile Lys Arg Tyr Asn Glu His Lys Glu Asp Leu Ala

325 330 335

Leu Leu Lys Glu Tyr Ile Arg Asn Ile Ser Leu Lys Thr Tyr Asn Glu

340 345 350

Val Phe Lys Asp Asp Thr Lys Asn Gly Tyr Ala Gly Tyr Ile Asp Gly

355 360 365

Lys Thr Asn Gln Glu Asp Phe Tyr Val Tyr Leu Lys Asn Leu Leu Ala

370 375 380

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385 390 395 400

Phe Leu Arg Lys Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly Ser Ile Pro Tyr Gln

405 410 415

Ile His Leu Gln Glu Met Arg Ala Ile Leu Asp Lys Gln Ala Lys Phe

420 425 430

Tyr Pro Phe Leu Ala Lys Asn Lys Glu Arg Ile Glu Lys Ile Leu Thr

435 440 445

Phe Arg Ile Pro Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala Arg Gly Asn Ser Asp

450 455 460

Phe Ala Trp Ser Ile Arg Lys Arg Asn Glu Lys Ile Thr Pro Trp Asn

465 470 475 480

Phe Glu Asp Val Ile Asp Lys Glu Ser Ser Ala Glu Ala Phe Ile Asn

485 490 495

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500 505 510

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515 520 525

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530 535 540

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565 570 575

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580 585 590

Leu Ser Thr Tyr His Asp Leu Leu Asn Ile Ile Asn Asp Lys Glu Phe

595 600 605

Leu Asp Asp Ser Ser Asn Glu Ala Ile Ile Glu Glu Ile Ile His Thr

610 615 620

Leu Thr Ile Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile Lys Gln Arg Leu Ser Lys

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Phe Glu Asn Ile Phe Asp Lys Ser Val Leu Lys Lys Leu Ser Arg Arg

645 650 655

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660 665 670

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675 680 685

Gly Ile Ser Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu Ile His Asp Asp Ala Leu

690 695 700

Ser Phe Lys Lys Lys Ile Gln Lys Ala Gln Ile Ile Gly Asp Glu Asp

705 710 715 720

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805 810 815

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820 825 830

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835 840 845

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850 855 860

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885 890 895

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945 950 955 960

Arg Thr Val Lys Ile Ile Thr Leu Lys Ser Thr Leu Val Ser Gln Phe

965 970 975

Arg Lys Asp Phe Glu Leu Tyr Lys Val Arg Glu Ile Asn Asp Phe His

980 985 990

His Ala His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Ile Ala Ser Ala Leu Leu

995 1000 1005

Lys Lys Tyr Pro Lys Leu Glu Pro Glu Phe Val Tyr Gly Asp Tyr Pro

1010 1015 1020

Lys Tyr Asn Ser Phe Arg Glu Arg Lys Ser Ala Thr Glu Lys Val Tyr

1025 1030 1035 1040

Phe Tyr Ser Asn Ile Met Asn Ile Phe Lys Lys Ser Ile Ser Leu Ala

1045 1050 1055

Asp Gly Arg Val Ile Glu Arg Pro Leu Ile Glu Val Asn Glu Glu Thr

1060 1065 1070

Gly Glu Ser Val Trp Asn Lys Glu Ser Asp Leu Ala Thr Val Arg Arg

1075 1080 1085

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1125 1130 1135

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1140 1145 1150

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1155 1160 1165

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1170 1175 1180

Arg Ile Asn Tyr Arg Lys Asp Lys Leu Asn Phe Leu Leu Glu Lys Gly

1185 1190 1195 1200

Tyr Lys Asp Ile Glu Leu Ile Ile Glu Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe

1205 1210 1215

Glu Leu Ser Asp Gly Ser Arg Arg Met Leu Ala Ser Ile Leu Ser Thr

1220 1225 1230

Asn Asn Lys Arg Gly Glu Ile His Lys Gly Asn Gln Ile Phe Leu Ser

1235 1240 1245

Gln Lys Phe Val Lys Leu Leu Tyr His Ala Lys Arg Ile Ser Asn Thr

1250 1255 1260

Ile Asn Glu Asn His Arg Lys Tyr Val Glu Asn His Lys Lys Glu Phe

1265 1270 1275 1280

Glu Glu Leu Phe Tyr Tyr Ile Leu Glu Phe Asn Glu Asn Tyr Val Gly

1285 1290 1295

Ala Lys Lys Asn Gly Lys Leu Leu Asn Ser Ala Phe Gln Ser Trp Gln

1300 1305 1310

Asn His Ser Ile Asp Glu Leu Cys Ser Ser Phe Ile Gly Pro Thr Gly

1315 1320 1325

Ser Glu Arg Lys Gly Leu Phe Glu Leu Thr Ser Arg Gly Ser Ala Ala

1330 1335 1340

Asp Phe Glu Phe Leu Gly Val Lys Ile Pro Arg Tyr Arg Asp Tyr Thr

1345 1350 1355 1360

Pro Ser Ser Leu Leu Lys Asp Ala Thr Leu Ile His Gln Ser Val Thr

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<210> 22

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 22

gaagcctttc tgtatttttg tgg 23

<210> 23

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 23

atgattttta gaattcttag tgg 23

<210> 24

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 24

tcttagtggt tctcttcttc agg 23

<210> 25

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 25

tcttagtggt tctcttcttc aggag 25

<210> 26

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 26

ttcttcagga gaacatttct agg 23

<210> 27

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 27

tcttcaggag aacatttcta ggg 23

<210> 28

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 28

ataatacaag aagatttaaa tgg 23

<210> 29

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 29

atttaaatgg cataaaacct tgg 23

<210> 30

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 30

aatggcataa aaccttggaa tgg 23

<210> 31

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 31

ttctgagttt gtccattcca agg 23

<210> 32

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 32

tggaatggac aaactcagaa tgg 23

<210> 33

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 33

tggaatggac aaactcagaa tggtg 25

<210> 34

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 34

atggtgctac atgaaaactc tgg 23

<210> 35

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 35

catgaaaact ctggatctgc agg 23

<210> 36

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 36

aaaagtgaag gaacttaaat ggg 23

<210> 37

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 37

caaaagtgaa ggaacttaaa tgg 23

<210> 38

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 38

agcgactaca gcaaaagtga agg 23

<210> 39

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 39

cgctgttctc agtgcctgct tgg 23

<210> 40

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 40

aagagaacta gtgaccaagc agg 23

<210> 41

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 41

tgcttggtca ctagttctct tgg 23

<210> 42

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 42

tgcttggtca ctagttctct tggtg 25

<210> 43

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 43

tgttacagga ggaaaagaca agg 23

<210> 44

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 44

tgttacagga ggaaaagaca aggag 25

<210> 45

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 45

gaggaaaaga caaggagctg agg 23

<210> 46

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 46

agacaaggag ctgaggctaa cgg 23

<210> 47

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 47

gacaaggagc tgaggctaac ggg 23

<210> 48

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 48

gacaaggagc tgaggctaac gggtg 25

<210> 49

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 49

aaggagctga ggctaacggg tgg 23

<210> 50

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 50

aaggagctga ggctaacggg tggtg 25

<210> 51

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 51

ggtggtgaaa acaagtgctc tgg 23

<210> 52

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 52

aaacaagtgc tctggaagag tgg 23

<210> 53

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 53

aaacaagtgc tctggaagag tggag 25

<210> 54

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 54

caagtgctct ggaagagtgg agg 23

<210> 55

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 55

caagtgctct ggaagagtgg aggtg 25

<210> 56

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 56

aagagtggag gtgaaagtgc agg 23

<210> 57

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 57

aagagtggag gtgaaagtgc aggag 25

<210> 58

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 58

agtggaggtg aaagtgcagg agg 23

<210> 59

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 59

agtggaggtg aaagtgcagg aggag 25

<210> 60

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 60

aggtgaaagt gcaggaggag tgg 23

<210> 61

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 61

aggtgaaagt gcaggaggag tgggg 25

<210> 62

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 62

ggtgaaagtg caggaggagt ggg 23

<210> 63

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 63

gtgaaagtgc aggaggagtg ggg 23

<210> 64

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 64

tggggaactg tgtgtaataa tgg 23

<210> 65

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 65

gaactgtgtg taataatggc tgg 23

<210> 66

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 66

aactgtgtgt aataatggct ggg 23

<210> 67

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 67

gtgtaataat ggctgggaca tgg 23

<210> 68

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 68

taatggctgg gacatggatg tgg 23

<210> 69

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 69

atgtggtctc tgttgtttgt agg 23

<210> 70

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 70

ctctgttgtt tgtaggcagc tgg 23

<210> 71

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 71

tctgttgttt gtaggcagct ggg 23

<210> 72

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 72

ccagtggctt tgatagcagt tgg 23

<210> 73

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 73

ccaactgcta tcaaagccac tgg 23

<210> 74

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 74

ctgctatcaa agccactgga tgg 23

<210> 75

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 75

tgctatcaaa gccactggat ggg 23

<210> 76

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 76

actaaaatta gcccatccag tgg 23

<210> 77

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 77

ggatgggcta attttagtgc agg 23

<210> 78

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 78

gctaatttta gtgcaggttc tgg 23

<210> 79

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 79

gtgcaggttc tggacgcatt tgg 23

<210> 80

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 80

aggttctgga cgcatttgga tgg 23

<210> 81

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 81

atggatcatg tttcttgtcg agg 23

<210> 82

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 82

tggatcatgt ttcttgtcga ggg 23

<210> 83

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 83

gagggaatga gtcagctctc tgg 23

<210> 84

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 84

agggaatgag tcagctctct ggg 23

<210> 85

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 85

ctctgggact gcaaacatga tgg 23

<210> 86

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 86

gggactgcaa acatgatgga tgg 23

<210> 87

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 87

gggactgcaa acatgatgga tgggg 25

<210> 88

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 88

ggactgcaaa catgatggat ggg 23

<210> 89

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 89

gactgcaaac atgatggatg ggg 23

<210> 90

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 90

gcataactgt actcaccaac agg 23

<210> 91

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 91

tgtactcacc aacaggatgc tgg 23

<210> 92

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 92

tgtactcacc aacaggatgc tggag 25

<210> 93

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 93

aggttactcc agcatcctgt tggtg 25

<210> 94

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 94

aggttactcc agcatcctgt tgg 23

<210> 95

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 95

gatgctggag taacctgctc agg 23

<210> 96

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 96

tgtgtatgtc ttacctgagc agg 23

<210> 97

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 97

atggatctga tttagagatg agg 23

<210> 98

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 98

atctgattta gagatgaggc tgg 23

<210> 99

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 99

atctgattta gagatgaggc tggtg 25

<210> 100

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 100

ttagagatga ggctggtgaa tgg 23

<210> 101

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 101

ttagagatga ggctggtgaa tggag 25

<210> 102

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 102

gagatgaggc tggtgaatgg agg 23

<210> 103

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 103

ggctggtgaa tggaggaaac cgg 23

<210> 104

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 104

ggctggtgaa tggaggaaac cggtg 25

<210> 105

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 105

aatggaggaa accggtgctt agg 23

<210> 106

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 106

cttctattct tcctaagcac cgg 23

<210> 107

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 107

agaatagaag tcaaatttca agg 23

<210> 108

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 108

tagaagtcaa atttcaagga cgg 23

<210> 109

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 109

tagaagtcaa atttcaagga cggtg 25

<210> 110

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 110

aagtcaaatt tcaaggacgg tgg 23

<210> 111

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 111

aagtcaaatt tcaaggacgg tgggg 25

<210> 112

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 112

agtcaaattt caaggacggt ggg 23

<210> 113

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 113

gtcaaatttc aaggacggtg ggg 23

<210> 114

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 114

caacataaat catgcttctg tgg 23

<210> 115

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 115

ggaagtgctg tcagtttctc tgg 23

<210> 116

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 116

ttctctggtt cagctaattt tgg 23

<210> 117

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 117

ttctctggtt cagctaattt tggag 25

<210> 118

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 118

ggttcagcta attttggaga agg 23

<210> 119

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 119

gctaattttg gagaaggttc tgg 23

<210> 120

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 120

gagaaggttc tggaccaatc tgg 23

<210> 121

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 121

acaagatcat caaaccagat tgg 23

<210> 122

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 122

tttgatgatc ttgtatgcaa tgg 23

<210> 123

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 123

atggaaatga gtcagctctc tgg 23

<210> 124

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 124

ctctggaact gcaaacatga agg 23

<210> 125

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 125

ggaactgcaa acatgaagga tgg 23

<210> 126

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 126

ggaactgcaa acatgaagga tgggg 25

<210> 127

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 127

gaactgcaaa catgaaggat ggg 23

<210> 128

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 128

aactgcaaac atgaaggatg ggg 23

<210> 129

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 129

gcacaattgt gatcatgctg agg 23

<210> 130

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 130

tgtgatcatg ctgaggatgc tgg 23

<210> 131

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 131

tgtgatcatg ctgaggatgc tggag 25

<210> 132

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 132

agcagacctg aaactgagag tgg 23

<210> 133

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 133

catctaccac tctcagtttc agg 23

<210> 134

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 134

ctgaaactga gagtggtaga tgg 23

<210> 135

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 135

ctgaaactga gagtggtaga tggag 25

<210> 136

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 136

gatggagtca ctgaatgttc agg 23

<210> 137

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 137

cactgaatgt tcaggaagat tgg 23

<210> 138

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 138

agattggaag tgaaattcca agg 23

<210> 139

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 139

agattggaag tgaaattcca aggag 25

<210> 140

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 140

aagtgaaatt ccaaggagaa tgg 23

<210> 141

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 141

aagtgaaatt ccaaggagaa tgggg 25

<210> 142

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 142

agtgaaattc caaggagaat ggg 23

<210> 143

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 143

gtgaaattcc aaggagaatg ggg 23

<210> 144

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 144

agattgttcc ccattctcct tgg 23

<210> 145

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 145

tggggaacaa tctgtgatga tgg 23

<210> 146

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 146

gaacaatctg tgatgatggc tgg 23

<210> 147

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 147

aacaatctgt gatgatggct ggg 23

<210> 148

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 148

ggatagtgat gatgccgctg tgg 23

<210> 149

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 149

cagttgctta catgccacag cgg 23

<210> 150

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 150

cgctgtggca tgtaagcaac tgg 23

<210> 151

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 151

gctgtggcat gtaagcaact ggg 23

<210> 152

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 152

ccaatggcag tgacagcagt tgg 23

<210> 153

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 153

ccaactgctg tcactgccat tgg 23

<210> 154

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 154

actggcgtta actcgaccaa tgg 23

<210> 155

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 155

tggtcgagtt aacgccagtg agg 23

<210> 156

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 156

ggtcgagtta acgccagtga ggg 23

<210> 157

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 157

gttaacgcca gtgagggaac tgg 23

<210> 158

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 158

aatgtgtcca gttccctcac tggcg 25

<210> 159

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 159

aatgtgtcca gttccctcac tgg 23

<210> 160

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 160

gtgagggaac tggacacatt tgg 23

<210> 161

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 161

cttgacagtg tttcttgcca tgg 23

<210> 162

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 162

agagagcaga ctcgtgtcca tgg 23

<210> 163

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 163

atggacacga gtctgctctc tgg 23

<210> 164

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 164

ggcagtgtag acaccatgaa tgg 23

<210> 165

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 165

ggcagtgtag acaccatgaa tgggg 25

<210> 166

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 166

gcagtgtaga caccatgaat ggg 23

<210> 167

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 167

cagtgtagac accatgaatg ggg 23

<210> 168

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 168

aataatgctt tccccattca tggtg 25

<210> 169

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 169

aataatgctt tccccattca tgg 23

<210> 170

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 170

tgcaatcata atgaagatgc tgg 23

<210> 171

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 171

tgcaatcata atgaagatgc tggtg 25

<210> 172

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 172

gatgctggtg tgacatgttc tgg 23

<210> 173

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 173

ttttgcagat ggatcagatc tgg 23

<210> 174

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 174

gatctggaac tgagacttaa agg 23

<210> 175

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 175

gatctggaac tgagacttaa aggtg 25

<210> 176

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 176

ctggaactga gacttaaagg tgg 23

<210> 177

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 177

ctggaactga gacttaaagg tggag 25

<210> 178

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 178

gaactgagac ttaaaggtgg agg 23

<210> 179

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 179

cagccactgt gctgggacag tgg 23

<210> 180

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 180

cagccactgt gctgggacag tggag 25

<210> 181

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 181

cctccactgt cccagcacag tgg 23

<210> 182

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 182

ccactgtgct gggacagtgg agg 23

<210> 183

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 183

ccactgtgct gggacagtgg aggtg 25

<210> 184

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 184

ctgtgctggg acagtggagg tgg 23

<210> 185

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 185

ggaggtggaa attcagaaac tgg 23

<210> 186

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 186

gtggaaattc agaaactggt agg 23

<210> 187

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 187

gaaaagtgtg tgatagaagc tgg 23

<210> 188

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 188

gaaaagtgtg tgatagaagc tgggg 25

<210> 189

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 189

aaaagtgtgt gatagaagct ggg 23

<210> 190

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 190

aaagtgtgtg atagaagctg ggg 23

<210> 191

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 191

gggactgaaa gaagctgatg tgg 23

<210> 192

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 192

aagaagctga tgtggtttgc agg 23

<210> 193

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 193

tgatgtggtt tgcaggcagc tgg 23

<210> 194

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 194

gatgtggttt gcaggcagct ggg 23

<210> 195

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 195

gtttgcaggc agctgggatg tgg 23

<210> 196

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 196

tcaagtttat tccaaaacca agg 23

<210> 197

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 197

aaaccaaggc aacaaacaca tgg 23

<210> 198

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 198

cagccatgtg tttgttgcct tgg 23

<210> 199

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 199

ctgtttgtaa gcagctgtaa tgg 23

<210> 200

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 200

atggaaatga aacttctctt tgg 23

<210> 201

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 201

tggaaatgaa acttctcttt ggg 23

<210> 202

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 202

ctctttggga ctgcaagaat tgg 23

<210> 203

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 203

gggactgcaa gaattggcag tgg 23

<210> 204

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 204

gggactgcaa gaattggcag tgggg 25

<210> 205

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 205

ggactgcaag aattggcagt ggg 23

<210> 206

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 206

gactgcaaga attggcagtg ggg 23

<210> 207

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 207

gactgcaaga attggcagtg gggtg 25

<210> 208

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 208

tgcaagaatt ggcagtgggg tgg 23

<210> 209

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 209

cttacctgag caggtaattt tgg 23

<210> 210

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 210

ggtcgtgttg aagtacaaca tgg 23

<210> 211

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 211

ggaactacag tgcggcactg tgg 23

<210> 212

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 212

agaggcaatt caatttactt ggg 23

<210> 213

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 213

gagaggcaat tcaatttact tgg 23

<210> 214

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 214

gtttctttta acagactgag agg 23

<210> 215

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 215

ggttaagagt acaatcatca agg 23

<210> 216

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 216

tgatgattgt actcttaacc tgg 23

<210> 217

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 217

cagaaataaa gcagaagaca tgg 23

<210> 218

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 218

catgtcttct gctttatttc tgg 23

<210> 219

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 219

ctccagatta cagtaaatgg agg 23

<210> 220

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 220

gtcctccatt tactgtaatc tgg 23

<210> 221

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 221

gtaaatggag gactgagtat agg 23

<210> 222

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 222

taaatggagg actgagtata ggg 23

<210> 223

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 223

gggctaaaaa gtagagagaa tgg 23

<210> 224

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 224

gaatggatgc atattatctg tgg 23

<210> 225

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 225

tccaatgtga tgaatgaagt agg 23

<210> 226

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 226

gcctacttca ttcatcacat tgg 23

<210> 227

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 227

tgaagtaggc aaatactcaa agg 23

<210> 228

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 228

aaagcatgct ccaagaatta tgg 23

<210> 229

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 229

aagcatgctc caagaattat ggg 23

<210> 230

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 230

cttctggaac ccataattct tgg 23

<210> 231

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 231

caagaattat gggttccaga agg 23

<210> 232

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 232

aaagtcccag aattgtctcc agg 23

<210> 233

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 233

aagtcccaga attgtctcca ggg 23

<210> 234

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 234

ccttccctgg agacaattct ggg 23

<210> 235

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 235

cccagaattg tctccaggga agg 23

<210> 236

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 236

tccttccctg gagacaattc tgg 23

<210> 237

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 237

attgtctcca gggaaggaca ggg 23

<210> 238

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 238

gtctccaggg aaggacaggg agg 23

<210> 239

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 239

tagacctccc tgtccttccc tgg 23

<210> 240

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 240

aggacaggga ggtctagaat cgg 23

<210> 241

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 241

gaatcggcta agcccactgt agg 23

<210> 242

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 242

ttggtttttc tgcctacagt ggg 23

<210> 243

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 243

cttggttttt ctgcctacag tgg 23

<210> 244

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 244

ctgtaggcag aaaaaccaag agg 23

<210> 245

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 245

gaaaaaccaa gaggcatgaa tgg 23

<210> 246

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 246

gggaagccat tcatgcctct tgg 23

<210> 247

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 247

agagagtgaa aagtgagaaa ggg 23

<210> 248

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 248

cagagagtga aaagtgagaa agg 23

<210> 249

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 249

ctggcttact cctatcatga agg 23

<210> 250

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 250

cctatcatga aggaaaatat tgg 23

<210> 251

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 251

ccaatatttt ccttcatgat agg 23

<210> 252

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 252

aaaaaatagc atttcggtga ggg 23

<210> 253

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 253

gaaaaaatag catttcggtg agg 23

<210> 254

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 254

acaaagtgaa cacattccct ggg 23

<210> 255

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 255

aacaaagtga acacattccc tgg 23

<210> 256

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 256

tcccatgcca tgaagagggt agg 23

<210> 257

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 257

ccctaccctc ttcatggcat ggg 23

<210> 258

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 258

cccatgccat gaagagggta ggg 23

<210> 259

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 259

accctaccct cttcatggca tgg 23

<210> 260

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 260

gccatgaaga gggtagggtt agg 23

<210> 261

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 261

acctaaccct accctcttca tgg 23

<210> 262

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 262

cagaaataaa gcagaagaca tggag 25

<210> 263

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 263

catgtcttct gctttatttc tggtg 25

<210> 264

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 264

tgactccaga ttacagtaaa tggag 25

<210> 265

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 265

gtcctccatt tactgtaatc tggag 25

<210> 266

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 266

gcctacttca ttcatcacat tggag 25

<210> 267

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 267

cttctggaac ccataattct tggag 25

<210> 268

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 268

attgtctcca gggaaggaca gggag 25

<210> 269

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 269

tagacctccc tgtccttccc tggag 25

<210> 270

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 270

ccaatatttt ccttcatgat aggag 25

<210> 271

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 271

aaaaaatagc atttcggtga gggag 25

<210> 272

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 272

gaatcggcta agcccactgt agg 23

<210> 273

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 273

cccatgccat gaagagggta ggg 23

<210> 274

<211> 20

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 274

aagagaacta gtgaccaagc 20

<210> 275

<211> 20

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 275

tgcttggtca ctagttctct 20

<210> 276

<211> 20

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 276

gaactgtgtg taataatggc 20

<210> 277

<211> 20

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 277

tgctatcaaa gccactggat 20

<210> 278

<211> 20

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 278

gtgcaggttc tggacgcatt 20

<210> 279

<211> 20

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 279

gtgcaggttc tggacgcatt 20

<210> 280

<211> 20

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 280

atggatcatg tttcttgtcg 20

<210> 281

<211> 20

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 281

ggactgcaaa catgatggat 20

<210> 282

<211> 20

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 282

ggactgcaaa catgatggat 20

<210> 283

<211> 20

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 283

agtcaaattt caaggacggt 20

<210> 284

<211> 20

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 284

gctaattttg gagaaggttc 20

<210> 285

<211> 20

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 285

gcacaattgt gatcatgctg 20

<210> 286

<211> 20

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 286

ggaactacag tgcggcactg 20

<210> 287

<211> 20

<212> RNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 287

aagagaacua gugaccaagc 20

<210> 288

<211> 20

<212> RNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 288

ugcuugguca cuaguucucu 20

<210> 289

<211> 20

<212> RNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 289

gaacugugug uaauaauggc 20

<210> 290

<211> 20

<212> RNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 290

ugcuaucaaa gccacuggau 20

<210> 291

<211> 20

<212> RNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 291

gugcagguuc uggacgcauu 20

<210> 292

<211> 20

<212> RNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 292

gugcagguuc uggacgcauu 20

<210> 293

<211> 20

<212> RNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 293

auggaucaug uuucuugucg 20

<210> 294

<211> 20

<212> RNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 294

ggacugcaaa caugauggau 20

<210> 295

<211> 20

<212> RNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 295

ggacugcaaa caugauggau 20

<210> 296

<211> 20

<212> RNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 296

agucaaauuu caaggacggu 20

<210> 297

<211> 20

<212> RNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 297

gcuaauuuug gagaagguuc 20

<210> 298

<211> 20

<212> RNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 298

gcacaauugu gaucaugcug 20

<210> 299

<211> 20

<212> RNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 299

ggaacuacag ugcggcacug 20

<210> 300

<211> 157

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 300

tttcgcagac tttagaagat gttctgccca tttaagttcc ttcacttttg ctgtagtcgc 60

tgttctcagt gcctgcttgg tcactagttc tcttggtgag tactttgaca aatttacttg 120

taacctagcc cactgtgaca agaaacactg aaaagca 157

<210> 301

<211> 157

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 301

tttcgcagac tttagaagat gttctgccca tttaagttcc ttcacttttg ctgtagtcgc 60

tgttctcagt gcctgcttgg tcactagttc tcttggtgag tactttgaca aatttacttg 120

taacctagcc cactgtgaca agaaacactg aaaagca 157

<210> 302

<211> 152

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 302

gtggtgaaaa caagtgctct ggaagagtgg aggtgaaagt gcaggaggag tggggaactg 60

tgtgtaataa tggctgggac atggatgtgg tctctgttgt ttgtaggcag ctgggatgtc 120

caactgctat caaagccact ggatgggcta at 152

<210> 303

<211> 154

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 303

tggctgggac atggatgtgg tctctgttgt ttgtaggcag ctgggatgtc caactgctat 60

caaagccact ggatgggcta attttagtgc aggttctgga cgcatttgga tggatcatgt 120

ttcttgtcga gggaatgagt cagctctctg ggac 154

<210> 304

<211> 151

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 304

gtaggcagct gggatgtcca actgctatca aagccactgg atgggctaat tttagtgcag 60

gttctggacg catttggatg gatcatgttt cttgtcgagg gaatgagtca gctctctggg 120

actgcaaaca tgatggatgg ggaaagcata a 151

<210> 305

<211> 151

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 305

gtaggcagct gggatgtcca actgctatca aagccactgg atgggctaat tttagtgcag 60

gttctggacg catttggatg gatcatgttt cttgtcgagg gaatgagtca gctctctggg 120

actgcaaaca tgatggatgg ggaaagcata a 151

<210> 306

<211> 156

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 306

gtccaactgc tatcaaagcc actggatggg ctaattttag tgcaggttct ggacgcattt 60

ggatggatca tgtttcttgt cgagggaatg agtcagctct ctgggactgc aaacatgatg 120

gatggggaaa gcataactgt actcaccaac aggatg 156

<210> 307

<211> 153

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 307

ctggacgcat ttggatggat catgtttctt gtcgagggaa tgagtcagct ctctgggact 60

gcaaacatga tggatgggga aagcataact gtactcacca acaggatgct ggagtaacct 120

gctcaggtaa gacatacaca aataagtcaa gcc 153

<210> 308

<211> 153

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 308

ctggacgcat ttggatggat catgtttctt gtcgagggaa tgagtcagct ctctgggact 60

gcaaacatga tggatgggga aagcataact gtactcacca acaggatgct ggagtaacct 120

gctcaggtaa gacatacaca aataagtcaa gcc 153

<210> 309

<211> 153

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 309

ctctagatgg atctgattta gagatgaggc tggtgaatgg aggaaaccgg tgcttaggaa 60

gaatagaagt caaatttcaa ggacggtggg gaacagtgtg tgatgataac ttcaacataa 120

atcatgcttc tgtggtttgt aaacaacttg aat 153

<210> 310

<211> 153

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 310

cttctgtggt ttgtaaacaa cttgaatgtg gaagtgctgt cagtttctct ggttcagcta 60

attttggaga aggttctgga ccaatctggt ttgatgatct tgtatgcaat ggaaatgagt 120

cagctctctg gaactgcaaa catgaaggat ggg 153

<210> 311

<211> 155

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 311

tgatgatctt gtatgcaatg gaaatgagtc agctctctgg aactgcaaac atgaaggatg 60

gggaaagcac aattgcgatc atgctgagga tgctggagtg atttgcttaa gtaaggactg 120

acctgggttt gttctgttct ccatgagagg gcaaa 155

<210> 312

<211> 154

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 312

agacacgtgg ggcaccgtct gtgattctga cttctctctg gaggcggcca gcgtgctgtg 60

cagggaacta cagtgcggca ctgtggtttc cctcctgggg ggagctcact ttggagaagg 120

aagtggacag atctgggctg aagaattcca gtgt 154

<210> 313

<211> 28

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 313

Phe Arg Arg Cys Ser Ala His Leu Ser Ser Phe Thr Phe Ala Val Val

1 5 10 15

Ala Val Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr Ser Ser Leu

20 25

<210> 314

<211> 28

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 314

Phe Arg Arg Cys Ser Ala His Leu Ser Ser Phe Thr Phe Ala Val Val

1 5 10 15

Ala Val Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr Ser Ser Leu

20 25

<210> 315

<211> 50

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 315

Gly Glu Asn Lys Cys Ser Gly Arg Val Glu Val Lys Val Gln Glu Glu

1 5 10 15

Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp Asp Met Asp Val Val Ser Val

20 25 30

Val Cys Arg Gln Leu Gly Cys Pro Thr Ala Ile Lys Ala Thr Gly Trp

35 40 45

Ala Asn

50

<210> 316

<211> 51

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 316

Gly Trp Asp Met Asp Val Val Ser Val Val Cys Arg Gln Leu Gly Cys

1 5 10 15

Pro Thr Ala Ile Lys Ala Thr Gly Trp Ala Asn Phe Ser Ala Gly Ser

20 25 30

Gly Arg Ile Trp Met Asp His Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala

35 40 45

Leu Trp Asp

50

<210> 317

<211> 44

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 317

Pro Thr Ala Ile Lys Ala Thr Gly Trp Ala Asn Phe Ser Ala Gly Ser

1 5 10 15

Gly Arg Ile Trp Met Asp His Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala

20 25 30

Leu Trp Asp Cys Lys His Asp Gly Trp Gly Lys His

35 40

<210> 318

<211> 44

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 318

Pro Thr Ala Ile Lys Ala Thr Gly Trp Ala Asn Phe Ser Ala Gly Ser

1 5 10 15

Gly Arg Ile Trp Met Asp His Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala

20 25 30

Leu Trp Asp Cys Lys His Asp Gly Trp Gly Lys His

35 40

<210> 319

<211> 51

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 319

Pro Thr Ala Ile Lys Ala Thr Gly Trp Ala Asn Phe Ser Ala Gly Ser

1 5 10 15

Gly Arg Ile Trp Met Asp His Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala

20 25 30

Leu Trp Asp Cys Lys His Asp Gly Trp Gly Lys His Asn Cys Thr His

35 40 45

Gln Gln Asp

50

<210> 320

<211> 35

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 320

Gly Arg Ile Trp Met Asp His Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala

1 5 10 15

Leu Trp Asp Cys Lys His Asp Gly Trp Gly Lys His Asn Cys Thr His

20 25 30

Gln Gln Asp

35

<210> 321

<211> 35

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 321

Gly Arg Ile Trp Met Asp His Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala

1 5 10 15

Leu Trp Asp Cys Lys His Asp Gly Trp Gly Lys His Asn Cys Thr His

20 25 30

Gln Gln Asp

35

<210> 322

<211> 48

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 322

Gly Ser Asp Leu Glu Met Arg Leu Val Asn Gly Gly Asn Arg Cys Leu

1 5 10 15

Gly Arg Ile Glu Val Lys Phe Gln Gly Arg Trp Gly Thr Val Cys Asp

20 25 30

Asp Asn Phe Asn Ile Asn His Ala Ser Val Val Cys Lys Gln Leu Glu

35 40 45

<210> 323

<211> 50

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 323

Ser Val Val Cys Lys Gln Leu Glu Cys Gly Ser Ala Val Ser Phe Ser

1 5 10 15

Gly Ser Ala Asn Phe Gly Glu Gly Ser Gly Pro Ile Trp Phe Asp Asp

20 25 30

Leu Val Cys Asn Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp Asn Cys Lys His Glu

35 40 45

Gly Trp

50

<210> 324

<211> 36

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 324

Asp Asp Leu Val Cys Asn Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp Asn Cys Lys

1 5 10 15

His Glu Gly Trp Gly Lys His Asn Cys Asp His Ala Glu Asp Ala Gly

20 25 30

Val Ile Cys Leu

35

<210> 325

<211> 51

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 325

Asp Thr Trp Gly Thr Val Cys Asp Ser Asp Phe Ser Leu Glu Ala Ala

1 5 10 15

Ser Val Leu Cys Arg Glu Leu Gln Cys Gly Thr Val Val Ser Leu Leu

20 25 30

Gly Gly Ala His Phe Gly Glu Gly Ser Gly Gln Ile Trp Ala Glu Glu

35 40 45

Phe Gln Cys

50

<210> 326

<211> 21

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 326

Phe Arg Arg Cys Ser Ala His Leu Ser Ser Phe Thr Phe Ala Val Val

1 5 10 15

Ala Val Leu Ser Ala

20

<210> 327

<211> 21

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 327

Phe Arg Arg Cys Ser Ala His Leu Ser Ser Phe Thr Phe Ala Val Val

1 5 10 15

Ala Val Leu Ser Ala

20

<210> 328

<211> 24

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 328

Gly Glu Asn Lys Cys Ser Gly Arg Val Glu Val Lys Val Gln Glu Glu

1 5 10 15

Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly

20

<210> 329

<211> 24

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 329

Gly Trp Asp Met Asp Val Val Ser Val Val Cys Arg Gln Leu Gly Cys

1 5 10 15

Pro Thr Ala Ile Lys Ala Thr Gly

20

<210> 330

<211> 19

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 330

Pro Thr Ala Ile Lys Ala Thr Gly Trp Ala Asn Phe Ser Ala Gly Ser

1 5 10 15

Gly Arg Ile

<210> 331

<211> 19

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 331

Pro Thr Ala Ile Lys Ala Thr Gly Trp Ala Asn Phe Ser Ala Gly Ser

1 5 10 15

Gly Arg Ile

<210> 332

<211> 24

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 332

Pro Thr Ala Ile Lys Ala Thr Gly Trp Ala Asn Phe Ser Ala Gly Ser

1 5 10 15

Gly Arg Ile Trp Met Asp His Val

20

<210> 333

<211> 24

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 333

Gly Arg Ile Trp Met Asp His Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala

1 5 10 15

Leu Trp Asp Cys Lys His Asp Gly

20

<210> 334

<211> 24

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 334

Gly Arg Ile Trp Met Asp His Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala

1 5 10 15

Leu Trp Asp Cys Lys His Asp Gly

20

<210> 335

<211> 22

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 335

Gly Ser Asp Leu Glu Met Arg Leu Val Asn Gly Gly Asn Arg Cys Leu

1 5 10 15

Gly Arg Ile Glu Val Lys

20

<210> 336

<211> 24

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 336

Ser Val Val Cys Lys Gln Leu Glu Cys Gly Ser Ala Val Ser Phe Ser

1 5 10 15

Gly Ser Ala Asn Phe Gly Glu Gly

20

<210> 337

<211> 24

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 337

Asp Asp Leu Val Cys Asn Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp Asn Cys Lys

1 5 10 15

His Glu Gly Trp Gly Lys His Asn

20

<210> 338

<211> 24

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 338

Asp Thr Trp Gly Thr Val Cys Asp Ser Asp Phe Ser Leu Glu Ala Ala

1 5 10 15

Ser Val Leu Cys Arg Glu Leu Gln

20

<210> 339

<211> 24

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 339

Val Ala Val Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr Ser Ser Trp Arg Lys Arg

1 5 10 15

Gln Gly Ala Glu Ala Asn Gly Trp

20

<210> 340

<211> 20

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 340

Val Ala Val Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr Cys Asn Leu Ala His Cys

1 5 10 15

Asp Lys Lys His

20

<210> 341

<211> 20

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 341

Val Ala Val Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr Ser Ser Leu Leu Glu Glu

1 5 10 15

Lys Thr Arg Ser

20

<210> 342

<211> 14

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 342

Val Ala Val Leu Ser Ala Cys Leu Glu Glu Lys Thr Arg Ser

1 5 10

<210> 343

<211> 20

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 343

Val Ala Val Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr Arg Ser Thr Leu Thr Asn

1 5 10 15

Leu Leu Val Thr

20

<210> 344

<211> 33

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 344

agttctcttg gtgagtactt tgacaaattt act 33

<210> 345

<211> 16

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 345

cactagttct cttggt 16

<210> 346

<211> 10

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 346

ttctcttggt 10

<210> 347

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 347

atgctatttt ttcagcccac agg 23

<210> 348

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 348

tttcagccca caggaaaccc agg 23

<210> 349

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 349

agcccacagg aaacccaggc tgg 23

<210> 350

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 350

aaccagcctg ggtttcctgt ggg 23

<210> 351

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 351

caaccagcct gggtttcctg tgg 23

<210> 352

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 352

cacaggaaac ccaggctggt tgg 23

<210> 353

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 353

aggaaaccca ggctggttgg agg 23

<210> 354

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 354

ggaaacccag gctggttgga ggg 23

<210> 355

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 355

gaaacccagg ctggttggag ggg 23

<210> 356

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 356

atgtcccctc caaccagcct ggg 23

<210> 357

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 357

aatgtcccct ccaaccagcc tgg 23

<210> 358

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 358

ggaggggaca ttccctgctc tgg 23

<210> 359

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 359

acttcaacac gaccagagca ggg 23

<210> 360

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 360

tacttcaaca cgaccagagc agg 23

<210> 361

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 361

ggtcgtgttg aagtacaaca tgg 23

<210> 362

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 362

aagtacaaca tggagacacg tgg 23

<210> 363

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 363

agtacaacat ggagacacgt ggg 23

<210> 364

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 364

gtacaacatg gagacacgtg ggg 23

<210> 365

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 365

agagaagtca gaatcacaga cgg 23

<210> 366

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 366

ctgtgattct gacttctctc tgg 23

<210> 367

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 367

tgattctgac ttctctctgg agg 23

<210> 368

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 368

ttctgacttc tctctggagg cgg 23

<210> 369

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 369

aggcggccag cgtgctgtgc agg 23

<210> 370

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 370

ggcggccagc gtgctgtgca ggg 23

<210> 371

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 371

tagttccctg cacagcacgc tgg 23

<210> 372

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 372

ctgtgcaggg aactacagtg cgg 23

<210> 373

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 373

ggaactacag tgcggcactg tgg 23

<210> 374

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 374

cggcactgtg gtttccctcc tgg 23

<210> 375

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 375

ggcactgtgg tttccctcct ggg 23

<210> 376

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 376

gcactgtggt ttccctcctg ggg 23

<210> 377

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 377

cactgtggtt tccctcctgg ggg 23

<210> 378

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 378

actgtggttt ccctcctggg ggg 23

<210> 379

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 379

aaagtgagct ccccccagga ggg 23

<210> 380

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 380

caaagtgagc tccccccagg agg 23

<210> 381

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 381

ctcctggggg gagctcactt tgg 23

<210> 382

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 382

ctccaaagtg agctcccccc agg 23

<210> 383

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 383

gggggagctc actttggaga agg 23

<210> 384

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 384

gctcactttg gagaaggaag tgg 23

<210> 385

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 385

gagaaggaag tggacagatc tgg 23

<210> 386

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 386

agaaggaagt ggacagatct ggg 23

<210> 387

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 387

ggctgaagaa ttccagtgtg agg 23

<210> 388

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 388

gctgaagaat tccagtgtga ggg 23

<210> 389

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 389

ctgaagaatt ccagtgtgag ggg 23

<210> 390

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 390

gggactcgtg cccctcacac tgg 23

<210> 391

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 391

tactgggcag agtgaaaggt ggg 23

<210> 392

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 392

ctactgggca gagtgaaagg tgg 23

<210> 393

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 393

gtgctactgg gcagagtgaa agg 23

<210> 394

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 394

cgtcagggcg gggtgctact ggg 23

<210> 395

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 395

ccagtagcac cccgccctga cgg 23

<210> 396

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 396

ccgtcagggc ggggtgctac tgg 23

<210> 397

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 397

cagtagcacc ccgccctgac ggg 23

<210> 398

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 398

ctacatgtcc cgtcagggcg ggg 23

<210> 399

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 399

gctacatgtc ccgtcagggc ggg 23

<210> 400

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 400

ggctacatgt cccgtcaggg cgg 23

<210> 401

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 401

tgtggctaca tgtcccgtca ggg 23

<210> 402

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 402

ctgtggctac atgtcccgtc agg 23

<210> 403

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 403

acgggacatg tagccacagc agg 23

<210> 404

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 404

cgggacatgt agccacagca ggg 23

<210> 405

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 405

tgtagccaca gcagggacgt cgg 23

<210> 406

<211> 23

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 406

ctacgccgac gtccctgctg tgg 23

<210> 407

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 407

cacaggaaac ccaggctggt tggag 25

<210> 408

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 408

aggaaaccca ggctggttgg agggg 25

<210> 409

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 409

ggtcgtgttg aagtacaaca tggag 25

<210> 410

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 410

aagtacaaca tggagacacg tgggg 25

<210> 411

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 411

agagaagtca gaatcacaga cggtg 25

<210> 412

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 412

ctgtgattct gacttctctc tggag 25

<210> 413

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 413

tgattctgac ttctctctgg aggcg 25

<210> 414

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 414

cggcactgtg gtttccctcc tgggg 25

<210> 415

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 415

ggcactgtgg tttccctcct ggggg 25

<210> 416

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 416

gcactgtggt ttccctcctg ggggg 25

<210> 417

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 417

actgtggttt ccctcctggg gggag 25

<210> 418

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 418

ctcctggggg gagctcactt tggag 25

<210> 419

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 419

ctccaaagtg agctcccccc aggag 25

<210> 420

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 420

ggctgaagaa ttccagtgtg agggg 25

<210> 421

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 421

gtgctactgg gcagagtgaa aggtg 25

<210> 422

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 422

ctacatgtcc cgtcagggcg gggtg 25

<210> 423

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 423

ggctacatgt cccgtcaggg cgggg 25

<210> 424

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 424

tgtggctaca tgtcccgtca gggcg 25

<210> 425

<211> 25

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 425

tgtagccaca gcagggacgt cggcg 25

<210> 426

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 426

gaatgaagta ggcaaatact caaaggaaag agaaagcatg ctccaagaat ggtagggtta 60

ggtagtcaca gacatctttt taaagccctg tctccttcca 100

<210> 427

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 427

atgaatgaag taggcaaata ctcaaaggaa agagaaagca tgctccaaga ggtagggtta 60

ggtagtcaca gacatctttt taaagccctg tctccttcca 100

<210> 428

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 428

ggcaaatact caaaggaaag agaaagcatg ctccaagaat tatgggttcc ggtagggtta 60

ggtagtcaca gacatctttt taaagccctg tctccttcca 100

<210> 429

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 429

agaattatgg gttccagaag gcaaagtccc agaattgtct ccagggaagg ggtagggtta 60

ggtagtcaca gacatctttt taaagccctg tctccttcca 100

<210> 430

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 430

agaattgtct ccagggaagg acagggaggt ctagaatcgg ctaagcccac ggtagggtta 60

ggtagtcaca gacatctttt taaagccctg tctccttcca 100

<210> 431

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 431

gaatgaagta ggcaaatact caaaggaaag agaaagcatg ctccaagaat gtagggttag 60

gtagtcacag acatcttttt aaagccctgt ctccttccag 100

<210> 432

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 432

atgaatgaag taggcaaata ctcaaaggaa agagaaagca tgctccaaga gtagggttag 60

gtagtcacag acatcttttt aaagccctgt ctccttccag 100

<210> 433

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 433

ggcaaatact caaaggaaag agaaagcatg ctccaagaat tatgggttcc gtagggttag 60

gtagtcacag acatcttttt aaagccctgt ctccttccag 100

<210> 434

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 434

agaattatgg gttccagaag gcaaagtccc agaattgtct ccagggaagg gtagggttag 60

gtagtcacag acatcttttt aaagccctgt ctccttccag 100

<210> 435

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 435

agaattgtct ccagggaagg acagggaggt ctagaatcgg ctaagcccac gtagggttag 60

gtagtcacag acatcttttt aaagccctgt ctccttccag 100

<210> 436

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 436

gaatgaagta ggcaaatact caaaggaaag agaaagcatg ctccaagaat agagggtagg 60

gttaggtagt cacagacatc tttttaaagc cctgtctcct 100

<210> 437

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 437

atgaatgaag taggcaaata ctcaaaggaa agagaaagca tgctccaaga agagggtagg 60

gttaggtagt cacagacatc tttttaaagc cctgtctcct 100

<210> 438

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 438

ggcaaatact caaaggaaag agaaagcatg ctccaagaat tatgggttcc agagggtagg 60

gttaggtagt cacagacatc tttttaaagc cctgtctcct 100

<210> 439

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 439

agaattatgg gttccagaag gcaaagtccc agaattgtct ccagggaagg agagggtagg 60

gttaggtagt cacagacatc tttttaaagc cctgtctcct 100

<210> 440

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 440

agaattgtct ccagggaagg acagggaggt ctagaatcgg ctaagcccac agagggtagg 60

gttaggtagt cacagacatc tttttaaagc cctgtctcct 100

<210> 441

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 441

atgtcttctg ctttatttct ggtgtgcctt tgactccaga ttacagtaaa ggtagggtta 60

ggtagtcaca gacatctttt taaagccctg tctccttcca 100

<210> 442

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 442

ttatttctgg tgtgcctttg actccagatt acagtaaatg gaggactgag ggtagggtta 60

ggtagtcaca gacatctttt taaagccctg tctccttcca 100

<210> 443

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 443

tggaggactg agtatagggc taaaaagtag agagaatgga tgcatattat ggtagggtta 60

ggtagtcaca gacatctttt taaagccctg tctccttcca 100

<210> 444

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 444

atgcatatta tctgtggtct ccaatgtgat gaatgaagta ggcaaatact ggtagggtta 60

ggtagtcaca gacatctttt taaagccctg tctccttcca 100

<210> 445

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 445

atgtcttctg ctttatttct ggtgtgcctt tgactccaga ttacagtaaa gtagggttag 60

gtagtcacag acatcttttt aaagccctgt ctccttccag 100

<210> 446

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 446

ttatttctgg tgtgcctttg actccagatt acagtaaatg gaggactgag gtagggttag 60

gtagtcacag acatcttttt aaagccctgt ctccttccag 100

<210> 447

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 447

tggaggactg agtatagggc taaaaagtag agagaatgga tgcatattat gtagggttag 60

gtagtcacag acatcttttt aaagccctgt ctccttccag 100

<210> 448

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 448

atgcatatta tctgtggtct ccaatgtgat gaatgaagta ggcaaatact gtagggttag 60

gtagtcacag acatcttttt aaagccctgt ctccttccag 100

<210> 449

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 449

atgtcttctg ctttatttct ggtgtgcctt tgactccaga ttacagtaaa agagggtagg 60

gttaggtagt cacagacatc tttttaaagc cctgtctcct 100

<210> 450

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 450

ttatttctgg tgtgcctttg actccagatt acagtaaatg gaggactgag agagggtagg 60

gttaggtagt cacagacatc tttttaaagc cctgtctcct 100

<210> 451

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 451

tggaggactg agtatagggc taaaaagtag agagaatgga tgcatattat agagggtagg 60

gttaggtagt cacagacatc tttttaaagc cctgtctcct 100

<210> 452

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 452

atgcatatta tctgtggtct ccaatgtgat gaatgaagta ggcaaatact agagggtagg 60

gttaggtagt cacagacatc tttttaaagc cctgtctcct 100

<210> 453

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 453

catgaatggc ttccctttct cacttttcac tctctggctt actcctatca ggtagggtta 60

ggtagtcaca gacatctttt taaagccctg tctccttcca 100

<210> 454

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 454

ttccctttct cacttttcac tctctggctt actcctatca tgaaggaaaa ggtagggtta 60

ggtagtcaca gacatctttt taaagccctg tctccttcca 100

<210> 455

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 455

catgaatggc ttccctttct cacttttcac tctctggctt actcctatca gtagggttag 60

gtagtcacag acatcttttt aaagccctgt ctccttccag 100

<210> 456

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 456

ttccctttct cacttttcac tctctggctt actcctatca tgaaggaaaa gtagggttag 60

gtagtcacag acatcttttt aaagccctgt ctccttccag 100

<210> 457

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 457

catgaatggc ttccctttct cacttttcac tctctggctt actcctatca agagggtagg 60

gttaggtagt cacagacatc tttttaaagc cctgtctcct 100

<210> 458

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 458

ttccctttct cacttttcac tctctggctt actcctatca tgaaggaaaa agagggtagg 60

gttaggtagt cacagacatc tttttaaagc cctgtctcct 100

<210> 459

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 459

tattggaatc atattctccc tcaccgaaat gctatttttt cagcccacag gtgattctga 60

cttctctctg gaggcggcca gcgtgctgtg cagggaacta 100

<210> 460

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 460

tattggaatc atattctccc tcaccgaaat gctatttttt cagcccacag gtgaggggca 60

cgagtcccac ctttcactct gcccagtagc accccgccct 100

<210> 461

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 461

ggaatcatat tctccctcac cgaaatgcta ttttttcagc ccacaggaaa tgaggggcac 60

gagtcccacc tttcactctg cccagtagca ccccgccctg 100

<210> 462

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 462

ggaatcatat tctccctcac cgaaatgcta ttttttcagc ccacaggaaa tgaggggcac 60

gagtcccacc tttcactctg cccagtagca ccccgccctg 100

<210> 463

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 463

ggaatcatat tctccctcac cgaaatgcta ttttttcagc ccacaggaaa tgacgggaca 60

tgtagccaca gcagggacgt cggcgtagtc tgctcaagtg 100

<210> 464

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 464

attctccctc accgaaatgc tattttttca gcccacagga aacccaggct gtgattctga 60

cttctctctg gaggcggcca gcgtgctgtg cagggaacta 100

<210> 465

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 465

attctccctc accgaaatgc tattttttca gcccacagga aacccaggct gtgaggggca 60

cgagtcccac ctttcactct gcccagtagc accccgccct 100

<210> 466

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 466

attctccctc accgaaatgc tattttttca gcccacagga aacccaggct ctgacgggac 60

atgtagccac agcagggacg tcggcgtagt ctgctcaagt 100

<210> 467

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 467

ctccctcacc gaaatgctat tttttcagcc cacaggaaac ccaggctggt gtgattctga 60

cttctctctg gaggcggcca gcgtgctgtg cagggaacta 100

<210> 468

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 468

ctccctcacc gaaatgctat tttttcagcc cacaggaaac ccaggctggt gtgaggggca 60

cgagtcccac ctttcactct gcccagtagc accccgccct 100

<210> 469

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 469

ctccctcacc gaaatgctat tttttcagcc cacaggaaac ccaggctggt ctgacgggac 60

atgtagccac agcagggacg tcggcgtagt ctgctcaagt 100

<210> 470

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 470

tccctcaccg aaatgctatt ttttcagccc acaggaaacc caggctggtt tgaggggcac 60

gagtcccacc tttcactctg cccagtagca ccccgccctg 100

<210> 471

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 471

tccctcaccg aaatgctatt ttttcagccc acaggaaacc caggctggtt tgaggggcac 60

gagtcccacc tttcactctg cccagtagca ccccgccctg 100

<210> 472

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 472

tccctcaccg aaatgctatt ttttcagccc acaggaaacc caggctggtt tgacgggaca 60

tgtagccaca gcagggacgt cggcgtagtc tgctcaagtg 100

<210> 473

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 473

attttttcag cccacaggaa acccaggctg gttggagggg acattccctg acatggagac 60

acgtggggca ccgtctgtga ttctgacttc tctctggagg 100

<210> 474

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 474

attttttcag cccacaggaa acccaggctg gttggagggg acattccctg acgtggggca 60

ccgtctgtga ttctgacttc tctctggagg cggccagcgt 100

<210> 475

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 475

attttttcag cccacaggaa acccaggctg gttggagggg acattccctg aggcggccag 60

cgtgctgtgc agggaactac agtgcggcac tgtggtttcc 100

<210> 476

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 476

attttttcag cccacaggaa acccaggctg gttggagggg acattccctg aagtggacag 60

atctgggctg aagaattcca gtgtgagggg cacgagtccc 100

<210> 477

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 477

attttttcag cccacaggaa acccaggctg gttggagggg acattccctg agcaccccgc 60

cctgacggga catgtagcca cagcagggac gtcggcgtag 100

<210> 478

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 478

attttttcag cccacaggaa acccaggctg gttggagggg acattccctg ctgacgggac 60

atgtagccac agcagggacg tcggcgtagt ctgctcaagt 100

<210> 479

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 479

ttttttcagc ccacaggaaa cccaggctgg ttggagggga cattccctgc tgaggggcac 60

gagtcccacc tttcactctg cccagtagca ccccgccctg 100

<210> 480

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 480

ttttttcagc ccacaggaaa cccaggctgg ttggagggga cattccctgc tgaggggcac 60

gagtcccacc tttcactctg cccagtagca ccccgccctg 100

<210> 481

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 481

ttttttcagc ccacaggaaa cccaggctgg ttggagggga cattccctgc tgacgggaca 60

tgtagccaca gcagggacgt cggcgtagtc tgctcaagtg 100

<210> 482

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 482

tttttcagcc cacaggaaac ccaggctggt tggaggggac attccctgct aggcggccag 60

cgtgctgtgc agggaactac agtgcggcac tgtggtttcc 100

<210> 483

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 483

tttttcagcc cacaggaaac ccaggctggt tggaggggac attccctgct aagtggacag 60

atctgggctg aagaattcca gtgtgagggg cacgagtccc 100

<210> 484

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 484

tttttcagcc cacaggaaac ccaggctggt tggaggggac attccctgct gaggggcacg 60

agtcccacct ttcactctgc ccagtagcac cccgccctga 100

<210> 485

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 485

tttttcagcc cacaggaaac ccaggctggt tggaggggac attccctgct agcaccccgc 60

cctgacggga catgtagcca cagcagggac gtcggcgtag 100

<210> 486

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 486

tttttcagcc cacaggaaac ccaggctggt tggaggggac attccctgct gacgggacat 60

gtagccacag cagggacgtc ggcgtagtct gctcaagtga 100

<210> 487

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 487

cccaggctgg ttggagggga cattccctgc tctggtcgtg ttgaagtaca gtgattctga 60

cttctctctg gaggcggcca gcgtgctgtg cagggaacta 100

<210> 488

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 488

cccaggctgg ttggagggga cattccctgc tctggtcgtg ttgaagtaca gtgaggggca 60

cgagtcccac ctttcactct gcccagtagc accccgccct 100

<210> 489

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 489

ttggagggga cattccctgc tctggtcgtg ttgaagtaca acatggagac tgaggggcac 60

gagtcccacc tttcactctg cccagtagca ccccgccctg 100

<210> 490

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 490

ttggagggga cattccctgc tctggtcgtg ttgaagtaca acatggagac tgaggggcac 60

gagtcccacc tttcactctg cccagtagca ccccgccctg 100

<210> 491

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 491

ttggagggga cattccctgc tctggtcgtg ttgaagtaca acatggagac tgacgggaca 60

tgtagccaca gcagggacgt cggcgtagtc tgctcaagtg 100

<210> 492

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 492

ggaggggaca ttccctgctc tggtcgtgtt gaagtacaac atggagacac gtgattctga 60

cttctctctg gaggcggcca gcgtgctgtg cagggaacta 100

<210> 493

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 493

ggaggggaca ttccctgctc tggtcgtgtt gaagtacaac atggagacac gtgaggggca 60

cgagtcccac ctttcactct gcccagtagc accccgccct 100

<210> 494

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 494

ggaggggaca ttccctgctc tggtcgtgtt gaagtacaac atggagacac ctgacgggac 60

atgtagccac agcagggacg tcggcgtagt ctgctcaagt 100

<210> 495

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 495

ctgctctggt cgtgttgaag tacaacatgg agacacgtgg ggcaccgtct aggcggccag 60

cgtgctgtgc agggaactac agtgcggcac tgtggtttcc 100

<210> 496

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 496

ctgctctggt cgtgttgaag tacaacatgg agacacgtgg ggcaccgtct aagtggacag 60

atctgggctg aagaattcca gtgtgagggg cacgagtccc 100

<210> 497

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 497

ctgctctggt cgtgttgaag tacaacatgg agacacgtgg ggcaccgtct gaggggcacg 60

agtcccacct ttcactctgc ccagtagcac cccgccctga 100

<210> 498

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 498

ctgctctggt cgtgttgaag tacaacatgg agacacgtgg ggcaccgtct agcaccccgc 60

cctgacggga catgtagcca cagcagggac gtcggcgtag 100

<210> 499

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 499

ctgctctggt cgtgttgaag tacaacatgg agacacgtgg ggcaccgtct gacgggacat 60

gtagccacag cagggacgtc ggcgtagtct gctcaagtga 100

<210> 500

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 500

tgaagtacaa catggagaca cgtggggcac cgtctgtgat tctgacttct aggcggccag 60

cgtgctgtgc agggaactac agtgcggcac tgtggtttcc 100

<210> 501

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 501

tgaagtacaa catggagaca cgtggggcac cgtctgtgat tctgacttct aagtggacag 60

atctgggctg aagaattcca gtgtgagggg cacgagtccc 100

<210> 502

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 502

tgaagtacaa catggagaca cgtggggcac cgtctgtgat tctgacttct gaggggcacg 60

agtcccacct ttcactctgc ccagtagcac cccgccctga 100

<210> 503

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 503

tgaagtacaa catggagaca cgtggggcac cgtctgtgat tctgacttct agcaccccgc 60

cctgacggga catgtagcca cagcagggac gtcggcgtag 100

<210> 504

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 504

tgaagtacaa catggagaca cgtggggcac cgtctgtgat tctgacttct gacgggacat 60

gtagccacag cagggacgtc ggcgtagtct gctcaagtga 100

<210> 505

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 505

tccctcaccg aaatgctatt ttttcagccc acaggaaacc caggctggtt ctgtggtttc 60

cctcctgggg ggagctcact ttggagaagg aagtggacag 100

<210> 506

<211> 3

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 506

Ala His Arg

1

<210> 507

<211> 4

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 507

Ala His Arg Lys

1

<210> 508

<211> 7

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 508

Ala His Arg Lys Pro Arg Leu

1 5

<210> 509

<211> 8

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 509

Ala His Arg Lys Pro Arg Leu Val

1 5

<210> 510

<211> 13

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 510

Ala His Arg Lys Pro Arg Leu Val Gly Gly Asp Ile Pro

1 5 10

<210> 511

<211> 14

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 511

Ala His Arg Lys Pro Arg Leu Val Gly Gly Asp Ile Pro Cys

1 5 10

<210> 512

<211> 21

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 512

Ala His Arg Lys Pro Arg Leu Val Gly Gly Asp Ile Pro Cys Ser Gly

1 5 10 15

Arg Val Glu Val Gln

20

<210> 513

<211> 24

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 513

Ala His Arg Lys Pro Arg Leu Val Gly Gly Asp Ile Pro Cys Ser Gly

1 5 10 15

Arg Val Glu Val Gln His Gly Asp

20

<210> 514

<211> 25

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 514

Ala His Arg Lys Pro Arg Leu Val Gly Gly Asp Ile Pro Cys Ser Gly

1 5 10 15

Arg Val Glu Val Gln His Gly Asp Thr

20 25

<210> 515

<211> 29

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 515

Ala His Arg Lys Pro Arg Leu Val Gly Gly Asp Ile Pro Cys Ser Gly

1 5 10 15

Arg Val Glu Val Gln His Gly Asp Thr Trp Gly Thr Val

20 25

<210> 516

<211> 29

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 516

Ala His Arg Lys Pro Arg Leu Val Gly Gly Asp Ile Pro Cys Ser Gly

1 5 10 15

Arg Val Glu Val Gln His Gly Asp Thr Trp Gly Thr Val

20 25

<210> 517

<211> 34

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 517

Ala His Arg Lys Pro Arg Leu Val Gly Gly Asp Ile Pro Cys Ser Gly

1 5 10 15

Arg Val Glu Val Gln His Gly Asp Thr Trp Gly Thr Val Cys Asp Ser

20 25 30

Asp Phe

<210> 518

<211> 64

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 518

Ala His Arg Lys Pro Arg Leu Val Thr Val Val Ser Leu Leu Gly Gly

1 5 10 15

Ala His Phe Gly Glu Gly Ser Gly Gln Ile Trp Ala Glu Glu Phe Gln

20 25 30

Cys Glu Gly His Glu Ser His Leu Ser Leu Cys Pro Val Ala Pro Arg

35 40 45

Pro Asp Gly Thr Cys Ser His Ser Arg Asp Val Gly Val Val Cys Ser

50 55 60

<210> 519

<211> 1010

<212> PRT

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 519

Met Asp Lys Leu Arg Met Val Leu His Glu Asn Ser Gly Ser Ala Asp

1 5 10 15

Phe Arg Arg Cys Ser Ala His Leu Ser Ser Phe Thr Phe Ala Val Val

20 25 30

Ala Val Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr Ser Ser Leu Gly Gly Lys Asp

35 40 45

Lys Glu Leu Arg Leu Thr Gly Gly Glu Asn Lys Cys Ser Gly Arg Val

50 55 60

Glu Val Lys Val Gln Glu Glu Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp

65 70 75 80

Asp Met Asp Val Val Ser Val Val Cys Arg Gln Leu Gly Cys Pro Thr

85 90 95

Ala Ile Lys Ala Thr Gly Trp Ala Asn Phe Ser Ala Gly Ser Gly Arg

100 105 110

Ile Trp Met Asp His Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp

115 120 125

Asp Cys Lys His Asp Gly Trp Gly Lys His Asn Cys Thr His Gln Gln

130 135 140

Asp Ala Gly Val Thr Cys Ser Asp Gly Ser Asp Leu Glu Met Arg Leu

145 150 155 160

Val Asn Gly Gly Asn Arg Cys Leu Gly Arg Ile Glu Val Lys Phe Gln

165 170 175

Gly Arg Trp Gly Thr Val Cys Asp Asp Asn Phe Asn Ile Asn His Ala

180 185 190

Ser Val Val Cys Lys Gln Leu Glu Cys Gly Ser Ala Val Ser Phe Ser

195 200 205

Gly Ser Ala Asn Phe Gly Glu Gly Ser Gly Pro Ile Trp Phe Asp Asp

210 215 220

Leu Val Cys Asn Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp Asn Cys Lys His Glu

225 230 235 240

Gly Trp Gly Lys His Asn Cys Asp His Ala Glu Asp Ala Gly Val Ile

245 250 255

Cys Leu Asn Gly Ala Asp Leu Lys Leu Arg Val Val Asp Gly Val Thr

260 265 270

Glu Cys Ser Gly Arg Leu Glu Val Lys Phe Gln Gly Glu Trp Gly Thr

275 280 285

Ile Cys Asp Asp Gly Trp Asp Ser Asp Asp Ala Ala Val Ala Cys Lys

290 295 300

Gln Leu Gly Cys Pro Thr Ala Val Thr Ala Ile Gly Arg Val Asn Ala

305 310 315 320

Ser Glu Gly Thr Gly His Ile Trp Leu Asp Ser Val Ser Cys His Gly

325 330 335

His Glu Ser Ala Leu Trp Gln Cys Arg His His Glu Trp Gly Lys His

340 345 350

Tyr Cys Asn His Asn Glu Asp Ala Gly Val Thr Cys Ser Asp Gly Ser

355 360 365

Asp Leu Glu Leu Arg Leu Lys Gly Gly Gly Ser His Cys Ala Gly Thr

370 375 380

Val Glu Val Glu Ile Gln Lys Leu Val Gly Lys Val Cys Asp Arg Ser

385 390 395 400

Trp Gly Leu Lys Glu Ala Asp Val Val Cys Arg Gln Leu Gly Cys Gly

405 410 415

Ser Ala Leu Lys Thr Ser Tyr Gln Val Tyr Ser Lys Thr Lys Ala Thr

420 425 430

Asn Thr Trp Leu Phe Val Ser Ser Cys Asn Gly Asn Glu Thr Ser Leu

435 440 445

Trp Asp Cys Lys Asn Trp Gln Trp Gly Gly Leu Ser Cys Asp His Tyr

450 455 460

Asp Glu Ala Lys Ile Thr Cys Ser Gly Tyr Thr Gln Ile Arg Leu Val

465 470 475 480

Asn Gly Lys Thr Pro Cys Glu Gly Arg Val Glu Leu Asn Ile Leu Gly

485 490 495

Ser Trp Gly Ser Leu Cys Asn Ser His Trp Asp Met Glu Asp Ala His

500 505 510

Val Leu Cys Gln Gln Leu Lys Cys Gly Val Ala Leu Ser Ile Pro Arg

515 520 525

Gly Ala Pro Phe Gly Lys Gly Ser Glu Gln Val Trp Arg His Met Phe

530 535 540

His Cys Thr Gly Thr Glu Lys His Met Gly Asp Cys Ser Val Thr Ala

545 550 555 560

Leu Gly Ala Ser Leu Cys Ser Ser Gly Gln Val Ala Ser Val Ile Cys

565 570 575

Ser Gly Asn Gln Ser Gln Thr Leu Ser Pro Cys Asn Ser Ser Ser Ser

580 585 590

Asp Pro Ser Ser Ser Ile Ile Ser Glu Glu Asn Gly Val Ala Cys Ile

595 600 605

Gly Ser Gly Gln Leu Arg Leu Val Asp Gly Gly Gly Arg Cys Ala Gly

610 615 620

Arg Val Glu Val Tyr His Glu Gly Ser Trp Gly Thr Ile Cys Asp Asp

625 630 635 640

Ser Trp Asp Leu Asn Asp Ala His Val Val Cys Lys Gln Leu Ser Cys

645 650 655

Gly Trp Ala Ile Asn Ala Thr Gly Ser Ala His Phe Gly Glu Gly Thr

660 665 670

Gly Pro Ile Trp Leu Asp Glu Ile Asn Cys Asn Gly Lys Glu Ser His

675 680 685

Ile Trp Gln Cys His Ser His Gly Trp Gly Arg His Asn Cys Arg His

690 695 700

Lys Glu Asp Ala Gly Val Ile Cys Ser Glu Phe Met Ser Leu Arg Leu

705 710 715 720

Ile Ser Glu Asn Ser Arg Glu Thr Cys Ala Gly Arg Leu Glu Val Phe

725 730 735

Tyr Asn Gly Ala Trp Gly Ser Val Gly Arg Asn Ser Met Ser Pro Ala

740 745 750

Thr Val Gly Val Val Cys Arg Gln Leu Gly Cys Ala Asp Arg Gly Asp

755 760 765

Ile Ser Pro Ala Ser Ser Asp Lys Thr Val Ser Arg His Met Trp Val

770 775 780

Asp Asn Val Gln Cys Pro Lys Gly Pro Asp Thr Leu Trp Gln Cys Pro

785 790 795 800

Ser Ser Pro Trp Lys Lys Arg Leu Ala Ser Pro Ser Glu Glu Thr Trp

805 810 815

Ile Thr Cys Ala Asn Lys Ile Arg Leu Gln Glu Gly Asn Thr Asn Cys

820 825 830

Ser Gly Arg Val Glu Ile Trp Tyr Gly Gly Ser Trp Gly Thr Val Cys

835 840 845

Asp Asp Ser Trp Asp Leu Glu Asp Ala Gln Val Val Cys Arg Gln Leu

850 855 860

Gly Cys Gly Ser Ala Leu Glu Ala Gly Lys Glu Ala Ala Phe Gly Gln

865 870 875 880

Gly Thr Gly Pro Ile Trp Leu Asn Glu Val Lys Cys Lys Gly Asn Glu

885 890 895

Thr Ser Leu Trp Asp Cys Pro Ala Arg Ser Trp Gly His Ser Asp Cys

900 905 910

Gly His Lys Glu Asp Ala Ala Val Thr Cys Ser Glu Ile Ala Lys Ser

915 920 925

Arg Glu Ser Leu His Ala Thr Gly Arg Ser Ser Phe Val Ala Leu Ala

930 935 940

Ile Phe Gly Val Ile Leu Leu Ala Cys Leu Ile Ala Phe Leu Ile Trp

945 950 955 960

Thr Gln Lys Arg Arg Gln Arg Gln Arg Leu Ser Val Phe Ser Gly Gly

965 970 975

Glu Asn Ser Val His Gln Ile Gln Tyr Arg Glu Met Asn Ser Cys Leu

980 985 990

Lys Ala Asp Glu Thr Asp Met Leu Asn Pro Ser Gly Asp His Ser Glu

995 1000 1005

Val Gln

1010

<210> 520

<211> 101

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 520

ctcacttttc actctctggc ttactcctat caagagggta gggttaggta gtcacagaca 60

tctttttaaa gccctgtctc cttccaggat acacacaaat c 101

<210> 521

<211> 100

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 521

ctcacttttc actctctggc ttactcctat cagagggtag ggttaggtag tcacagacat 60

ctttttaaag ccctgtctcc ttccaggata cacacaaatc 100

<210> 522

<211> 98

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 522

ctcacttttc actctctggc ttactcctat cagggtaggg ttaggtagtc acagacatct 60

ttttaaagcc ctgtctcctt ccaggataca cacaaatc 98

<210> 523

<211> 108

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 523

ctcacttttc actctctggc ttactcctat catggcatgg gagggtaggg ttaggtagtc 60

acagacatct ttttaaagcc ctgtctcctt ccaggataca cacaaatc 108

<210> 524

<211> 72

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 524

ctcacttttc agggttaggt agtcacagac atctttttaa agccctgtct ccttccagga 60

tacacacaaa tc 72

<210> 525

<211> 90

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 525

ctcacttttc actctctggc ttactcctag ggttaggtag tcacagacat ctttttaaag 60

ccctgtctcc ttccaggata cacacaaatc 90

<210> 526

<211> 75

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 526

ctcacttttc actctctggc ttactcccca gacatctttt taaagccctg tctccttcca 60

ggatacacac aaatc 75

<210> 527

<211> 96

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 527

ctcacttttc actctctggc ttactccaga gggtagggtt aggtagtcac agacatcttt 60

ttaaagccct gtctccttcc aggatacaca caaatc 96

<210> 528

<211> 97

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 528

ctcacttttc actctctggc ttactcctat caggtagggt taggtagtca cagacatctt 60

tttaaagccc tgtctccttc caggatacac acaaatc 97

<210> 529

<211> 90

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 529

ctcacttttc actctctggc ttactcctag ggttaggtag tcacagacat ctttttaaag 60

ccctgtctcc ttccaggata cacacaaatc 90

<210> 530

<211> 99

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 530

ctcacttttc actctctggc ttactcctat caagggtagg gttaggtagt cacagacatc 60

tttttaaagc cctgtctcct tccaggatac acacaaatc 99

<210> 531

<211> 93

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 531

ctcacttttc actctctggc ttactcctat cagggttagg tagtcacaga catcttttta 60

aagccctgtc tccttccagg atacacacaa atc 93

<210> 532

<211> 92

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 532

ctcacttttc actctctggc ttactccggt agggttaggt agtcacagac atctttttaa 60

agccctgtct ccttccagga tacacacaaa tc 92

<210> 533

<211> 98

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 533

ctcacttttc actctctggc ttactcctat caaggtaggg ttaggtagtc acagacatct 60

ttttaaagcc ctgtctcctt ccaggataca cacaaatc 98

<210> 534

<211> 99

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 534

ctcacttttc actctctggc ttactcctat cacaggtagg gttaggtagt cacagacatc 60

tttttaaagc cctgtctcct tccaggatac acacaaatc 99

<210> 535

<211> 95

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 535

ctcacttttc actctctggc ttactcctat ggtagggtta ggtagtcaca gacatctttt 60

taaagccctg tctccttcca ggatacacac aaatc 95

<210> 536

<211> 125

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 536

gcaaagtccc agaattgtct ccagggaagg acagggaggt ctagaatcgg ctaagcccac 60

ggtagggtta ggtagtcaca gacatctttt taaagccctg tctccttcca ggatacacac 120

aaatc 125

<210> 537

<211> 124

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 537

gcaaagtccc agaattgtct ccagggaagg acagggaggt ctagaatcgg ctaagcccac 60

gtagggttag gtagtcacag acatcttttt aaagccctgt ctccttccag gatacacaca 120

aatc 124

<210> 538

<211> 123

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 538

gcaaagtccc agaattgtct ccagggaagg acagggaggt ctagaatcgg ctaagcccat 60

tagggttagg tagtcacaga catcttttta aagccctgtc tccttccagg atacacacaa 120

atc 123

<210> 539

<211> 114

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 539

gcaaagtccc agaattgtct ccagggaagg acagggaggt ctagaatcgg ctagggttag 60

gtagtcacag acatcttttt aaagccctgt ctccttccag gatacacaca aatc 114

<210> 540

<211> 123

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 540

gcaaagtccc agaattgtct ccagggaagg acagggaggt ctagaatcgg ctaagcccac 60

tagggttagg tagtcacaga catcttttta aagccctgtc tccttccagg atacacacaa 120

atc 123

<210> 541

<211> 116

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 541

gcaaagtccc agaattgtct ccagggaagg acagggaggt ctagaatcgg ctaagcccac 60

aggtagtcac agacatcttt ttaaagccct gtctccttcc aggatacaca caaatc 116

<210> 542

<211> 124

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 542

gcaaagtccc agaattgtct ccagggaagg acagggaggt ctagaatcgg ctaagcccag 60

gtagggttag gtagtcacag acatcttttt aaagccctgt ctccttccag gatacacaca 120

aatc 124

<210> 543

<211> 122

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 543

gcaaagtccc agaattgtct ccagggaagg acagggaggt ctagaatcgg ctaagcccat 60

ggggttaggt agtcacagac atctttttaa agccctgtct ccttccagga tacacacaaa 120

tc 122

<210> 544

<211> 113

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 544

gcaaagtccc agaattgtct ccagggaagg acagggaggt ctagaatcgg tagggttagg 60

tagtcacaga catcttttta aagccctgtc tccttccagg atacacacaa atc 113

<210> 545

<211> 113

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 545

atttctggtg tgcctttgac tccagattac agtaaatgga ggactgaggg tagggttagg 60

tagtcacaga catcttttta aagccctgtc tccttccagg atacacacaa atc 113

<210> 546

<211> 117

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 546

atttctggtg tgcctttgac tccagattac agtaaatgga ggactgagag agggtagggt 60

taggtagtca cagacatctt tttaaagccc tgtctccttc caggatacac acaaatc 117

<210> 547

<211> 106

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 547

atttctggtg tgcctttgac tccagattac agtaaatgga gggtagggtt aggtagtcac 60

agacatcttt ttaaagccct gtctccttcc aggatacaca caaatc 106

<210> 548

<211> 112

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 548

atttctggtg tgcctttgac tccagattac agtaaatgga ggactgaggg tgggttaggt 60

agtcacagac atctttttaa agccctgtct ccttccagga tacacacaaa tc 112

<210> 549

<211> 117

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 549

atttctggtg tgcctttgac tccagattac agtaaatgga ggactgagag aggatagggt 60

taggtagtca cagacatctt tttaaagccc tgtctccttc caggatacac acaaatc 117

<210> 550

<211> 90

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 550

gaaagagaaa gcatgctcca agaatggtag ggttaggtag tcacagacat ctttttaaag 60

ccctgtctcc ttccaggata cacacaaatc 90

<210> 551

<211> 89

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 551

gaaagagaaa gcatgctcca agaaggtagg gttaggtagt cacagacatc tttttaaagc 60

cctgtctcct tccaggatac acacaaatc 89

<210> 552

<211> 91

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 552

gaaagagaaa gcatgctcca agaatgggta gggttaggta gtcacagaca tctttttaaa 60

gccctgtctc cttccaggat acacacaaat c 91

<210> 553

<211> 87

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 553

gaaagagaaa gcatgctcca agagtagggt taggtagtca cagacatctt tttaaagccc 60

tgtctccttc caggatacac acaaatc 87

<210> 554

<211> 97

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 554

gaaagagaaa gcatgctcca agaatccaag agggtagggt taggtagtca cagacatctt 60

tttaaagccc tgtctccttc caggatacac acaaatc 97

<210> 555

<211> 92

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 555

gaaagagaaa gcatgctcca agaatagggt agggttaggt agtcacagac atctttttaa 60

agccctgtct ccttccagga tacacacaaa tc 92

<210> 556

<211> 21

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 556

ctaagcccac tgtaggcaga a 21

<210> 557

<211> 21

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 557

ctgggtttcc tgtgggctga a 21

<210> 558

<211> 24

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 558

tggcttactc ctatcatgaa ggaa 24

<210> 559

<211> 21

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 559

atgtagccac agcagggacg t 21

<210> 560

<211> 22

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 560

ccaagcggat ttgtgtgtat cc 22

<210> 561

<211> 28

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 561

ttcccatgcc atgaagaggg tagggtta 28

<210> 562

<211> 21

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 562

gctaagccca ctgtaggcag a 21

<210> 563

<211> 21

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 563

gcggatttgt gtgtatcctg g 21

<210> 564

<211> 24

<212> DNA

<213> 猪(Sus scrofa)

<400> 564

tggcttactc ctatcaggta gggt 24