一种具有提高细胞活力作用的组合物及其应用

摘要

本发明涉及生物医学技术领域，具体公开了一种具有提高细胞活力作用的组合物及其应用。所述的具有提高细胞活力作用的组合物，其包含活性肽以及酰胺类化合物；所述的活性肽选自具有式Ⅰ所示结构的活性肽；所述的酰胺类化合物选自具有式Ⅱ和/或Ⅲ所示结构的酰胺类化合物。研究表明，所述的组合物具有提高细胞活力的作用；可以用于制备提高皮肤活力的化妆品、护肤品、食品、保健品或药物。

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种具有提高细胞活力作用的组合物及其应用。

背景技术

皮肤是覆盖于人体表面的保护器官，UVB因可以穿过表皮到达真皮上层而被认为是阳光对皮肤最有害的成分，通过与皮肤中的水反应增加表皮细胞内活性氧(ROS)水平，降低抗氧化酶的活性。当UVB被表皮吸收时会形成环丁烷嘧啶二聚体和嘧啶酮光产物造成DNA损伤，诱导皮肤细胞氧化损伤，导致细胞凋亡、基因突变和皮肤老化，同时UVB通过促进促炎细胞因子的产生和释放来诱导炎症反应。

皮肤作为人体最外面的器官，对环境因素起着免疫屏障的作用，长时间暴露于环境中的污染物会受到严重的损伤。此外，多环芳烃、微小颗粒物、臭氧以及挥发性有机物等环境污染物直接被皮肤吸收或者通过毛囊和皮脂腺吸收也会引起氧化应激，产生自由基和活性氧，它们进一步的与富含脂质的质膜相互作用会引发脂质过氧化反应级联反应，抵消皮肤的抗氧化防御能力，从而对皮肤产生有害影响，导致外在性皮肤衰老，炎症或过敏性疾病。此外，有研究表明，皮肤固有的免疫反应可通过调节皮肤微生物群发挥保护皮肤的作用。

皮肤表面会有灰尘、皮肤排泄物以及微生物等致病因素粘附，因此清洁皮肤对于自身健康至关重要，但不良的清洁习惯会破坏皮肤屏障，导致表皮细胞损伤和促炎性介质释放，可能会引起急慢性皮肤炎和潜在皮肤疾病的加重。尤其是，不合适的、pH值过高或者过低的清洁剂对皮肤细胞的损伤极大，长期使用会破坏皮肤微生物群，导致肌肤表层微生态破坏；更严重的会导致严重的皮肤炎症。

综上所述，UVB、多环芳烃、微小颗粒物、臭氧以及挥发性有机物等环境污染物以及pH值等因素都会损害皮肤，导致皮肤细胞活力降低。因此，开发一种具有提高皮肤细胞活力的有效成分，对于开发具有提高细胞活力作用的产品具有重要的应用价值。

发明内容

鉴于此，本发明首先提供一种全新的组合物，所述的组合物具有提高细胞活力作用。

本发明的详细技术方案如下：

本发明的第一方面，提供一种具有提高细胞活力作用的组合物，其包含活性肽以及酰胺类化合物；所述的活性肽选自具有式Ⅰ所示结构的活性肽；所述的酰胺类化合物选自具有式Ⅱ和/或Ⅲ所示结构的酰胺类化合物；

在本发明中，式Ⅰ所示结构的活性肽命名为滨海刺芹寡肽-β(简写为BP-1)其氨基酸序列为Trp-Glu-His-Lys-His-Ala(SEQ ID No.1)。

在本发明中，式Ⅱ所示结构的酰胺类化合物命名为双歧杆菌酰胺衍生物-α(简写为SD-1)；式Ⅲ所示结构的酰胺类化合物命名为啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ(简写为PP-1)。

发明人在研究中发现，滨海刺芹寡肽-β(简写为BP-1)、双歧杆菌酰胺衍生物-α(简写为SD-1)以及啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ(简写为PP-1)可以提高皮肤细胞活力。因此，将滨海刺芹寡肽-β(简写为BP-1)、双歧杆菌酰胺衍生物-α(简写为SD-1)和/或啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ(简写为PP-1)进行组合后得到的组合同样能提高皮肤细胞活力。

发明人在经大量的实验研究中发现，滨海刺芹寡肽-β(简写为BP-1)同时与双歧杆菌酰胺衍生物-α(简写为SD-1)以及啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ(简写为PP-1)组合后其对皮肤细胞的活力的提高程度明显大于单独使用滨海刺芹寡肽-β(简写为BP-1)、双歧杆菌酰胺衍生物-α(简写为SD-1)或啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ(简写为PP-1)，这说明滨海刺芹寡肽-β(简写为BP-1)、双歧杆菌酰胺衍生物-α(简写为SD-1)以及啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ(简写为PP-1)三者组合后发挥协同作用，从而导致其更好的发挥提高细胞活力。有意思的是，滨海刺芹寡肽-β(简写为BP-1)与双歧杆菌酰胺衍生物-α(简写为SD-1)的组合以及滨海刺芹寡肽-β(简写为BP-1)与啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ(简写为PP-1)组合，其对皮肤细胞的活力的提高程度并无表现出协同作用。也就说，就目前的研究而言，仅仅发现滨海刺芹寡肽-β(简写为BP-1)同时与双歧杆菌酰胺衍生物-α(简写为SD-1)以及啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ(简写为PP-1)组合后才表现出协同提高皮肤细胞活性的作用。

优选地，式Ⅰ所示结构的活性肽以及具有式Ⅱ和Ⅲ所示结构的酰胺类化合物。

更优选地，所述的式Ⅰ所示结构的活性肽、式Ⅱ所示结构的酰胺类化合物以及式Ⅲ所示结构的酰胺类化合物的摩尔比为1～10:1～10:1～10。

进一步优选地，式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的化合物的摩尔比为1～3:1～3:1～3。

最优选地，式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的化合物的摩尔比为1:1:1。

优选地，所述的组合物还包含载体，其中，式Ⅰ所示结构的活性肽、式Ⅱ所示结构的酰胺类化合物以及式Ⅲ所示结构的酰胺类化合物在组合物中所占的质量分数为10％～85％。

进一步优选地，式Ⅰ所示结构的活性肽、式Ⅱ所示结构的酰胺类化合物以及式Ⅲ所示结构的酰胺类化合物在组合物中所占的质量分数为10％～70％、15～55％或20～70％。

进一步优选地，所述的载体包括溶剂、聚合物和脂质体中的至少一种。

进一步优选地，所述溶剂包括但不限于水、生理盐水，以及其它非水性溶剂。

进一步优选地，所述聚合物可以但不限于为聚赖氨酸、聚乙烯亚胺及其改性物、壳聚糖、聚乳酸、明胶。

进一步优选地，所述脂质体可以但不限于为胆固醇、豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂。进一步可选的，所述载体还包括稀释剂和赋形剂中的一种或多种。

优选地，所述的细胞为皮肤细胞。

本发明的第二方面，提供一种上述化合物或组合物在制备具有提高细胞活力作用的产品中的应用。

优选地，所述的细胞为皮肤细胞。

优选地，所述的产品为化妆品、护肤品、食品、保健品或药物。

进一步优选地，所述化妆品或护肤品包括乳液、霜膏、凝胶、水剂、油剂、粉剂或面膜。

进一步优选地，所述食品、保健品或药物的形式包括片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、丸剂、糖浆剂、溶液剂、混悬剂或气雾剂。

有益效果：本发明发现了滨海刺芹寡肽-β(简写为BP-1)、双歧杆菌酰胺衍生物-α(简写为SD-1)以及啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ(简写为PP-1)具有提高皮肤细胞活力的新的用途；因此，进一步提供了一种由滨海刺芹寡肽-β(简写为BP-1)与双歧杆菌酰胺衍生物-α(简写为SD-1)和/或啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ(简写为PP-1)组成的具有提高细胞活力作用的组合物；进一步研究表明滨海刺芹寡肽-β(简写为BP-1)、双歧杆菌酰胺衍生物-α(简写为SD-1)以及啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ(简写为PP-1)三者组合后可以发挥协同提高细胞活力的作用；由此可见，本发明所述的组合物可以用于制备提高皮肤活力的化妆品、护肤品、食品、保健品或药物；此外，滨海刺芹寡肽-β(简写为BP-1)、双歧杆菌酰胺衍生物-α(简写为SD-1)以及啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ(简写为PP-1)均为小分子活性肽或小分子化合物，其制备工艺简单、操作方便，有利于其在食品、药品、保健品和化妆品中的应用。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例的附图，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是双歧杆菌酰胺衍生物-α(SD-1)的

图2是滨海刺芹寡肽-β(BP-1)的质谱图。

图3是啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ(PP-1)的

图4是SD-1、BP-1、PP-1及其组合对HaCaT细胞活力的影响结果图。

图5是SD-1、BP-1、PP-1及其组合对HaCaT细胞SOD活性的影响结果图。

图6是SD-1、BP-1、PP-1及其组合对HaCaT细胞内ROS含量的影响结果图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1滨海刺芹寡肽-β(简写为BP-1)的制备

取100mg Fmoc-Trp Wang Resin置于固相合成管中，加入N，N-二甲基甲酰胺(DMF)后静置30分钟使树脂充分溶胀，滤去溶剂，再加入哌啶DMF溶液，振荡后滤出溶剂。将Fmoc-Glu-OH、1-羟基苯并三唑、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯溶于DMF中，在加入N,N-二异丙基乙胺混匀后避光即已被活化，并加入树脂中，25℃下氮气吹动搅拌2小时，经抽滤后用DMF和二氯甲烷依次洗涤并抽干溶剂。重复上述步骤，将活化好的Fmoc-His-OH、Fmoc-Lys-OH、Fmoc-His-OH、Fmoc-Ala-OH依次加入树脂中，25℃下氮气吹动搅拌，反应完全后洗涤树脂，将得到的滤液进行旋蒸并得到沉淀，经冷冻干燥后即可得到滨海刺芹寡肽-β(BP-1)，其氨基酸序列为Trp-Glu-His-Lys-His-Ala。

滨海刺芹寡肽-β(式Ⅰ所示结构)的质谱数据(见图2)：808.3939为[M+H]

实施例2双歧杆菌酰胺衍生物-α(简写为SD-1)以及啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ(简写为PP-1)的合成

称取反应底物3,4,5-三甲氧基苯甲酸(2.23g)于100mL干净的圆底烧瓶中，放入磁子，加入50mL无水二氯甲烷，搅拌下加入缬氨酸甲酯(1.85g),三乙胺(3.3mL)，5分钟后加入HATU(4.67)。加料结束后，于室温下继续反应4小时，TLC监测反应原料消失。停止搅拌，将反应体系减压蒸除溶剂，残留物经硅胶柱层析(200-300目)，纯化得白色固体3.0g，经鉴定为(3,4,5-三甲氧基苯甲酰基)缬氨酸甲酯。

将(3,4,5-三甲氧基苯甲酰基)缬氨酸甲酯(1.9g)加入到100mL圆底烧瓶中，放入磁子，取甲醇：水(4:1)40mL倒入反应瓶中，室温搅拌下加入氢氧化锂(0.69g)，接着在室温下搅2小时，,TLC监测直至反应转化完全。将反应体系甲醇减压蒸除，调节PH至6-7，有白色固体析出，过滤干燥得(3,4,5-三甲氧基苯甲酰基)缬氨酸2.1g。

称取反应原料(3,4,5-三甲氧基苯甲酰基)缬氨酸(1.2g)于100mL干净的圆底烧瓶中，放入磁子，加入35mL干燥的二氯甲烷，搅拌下加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(776mg),1-羟基苯并三唑(533mg)及N,N-二异丙基乙胺(1.43g)。加料结束后，反应体系置于室温下搅10分钟，接着加入另一底物苯丙氨酸甲酯盐酸盐(880mg)。室温下继续反应3小时，TLC监测反应原料消失停止搅拌，将反应体系减压蒸除溶剂，残留物经硅胶柱层析(200-300目)，纯化得白色固体1.01g，经鉴定为(3,4,5-三甲氧基苯甲酰基)缬氨酸苯基丙氨酸甲酯。

(3,4,5-三甲氧基苯甲酰基)缬氨酸苯基丙氨酸甲酯(0.53g)加入到100mL圆底烧瓶中，放入磁子，取甲醇：水(4:1)30mL倒入反应瓶中，室温搅拌下加入氢氧化锂(159mg),接着在室温下搅2小时，TLC监测直至反应转化完全。将反应体系甲醇减压蒸除，调节PH至6-7，有白色固体析出，过滤干燥得双歧杆菌酰胺衍生物-α。

称取反应原料(3,4,5-三甲氧基苯甲酰基)缬氨酸(1.12g)于150mL干净的圆底烧瓶中，放入磁子，加入45mL干燥的二氯甲烷，搅拌下加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(754mg),1-羟基苯并三唑(534mg)及N,N-二异丙基乙胺(1.44g)。加料结束后，反应体系置于室温下搅10分钟，接着加入另一底物脯氨酸甲酯盐酸盐(645mg)，并于室温下继续反应4小时，TLC监测反应原料消失停止搅拌，将反应体系减压蒸除溶剂，残留物经硅胶柱层析(200-300目)，纯化得白色固体1.12g，经鉴定为啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ。

双歧杆菌酰胺衍生物-α(式Ⅱ所示结构)的氢谱及碳谱数据如下(见图1)：

啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ(式Ⅲ所示结构)的氢谱及碳谱数据如下(见图3)：

实验例

为了评估滨海刺芹寡肽-β(简写为BP-1)同时与双歧杆菌酰胺衍生物-α(简写为SD-1)、啤酒酵母菌酰胺衍生物-γ(简写为PP-1)及其组合物SBP-1(SBP-1为BP-1、与SD-1以及PP-1按摩尔比1:1:1组成的组合物)的效果，进行如下效果实施例。

永生化角质形成细胞系HaCaT细胞培养于细胞培养箱中，37℃、5％CO

结果如下：

将Control组细胞活力设为100％，其它实验组细胞活力为相对值。最终，实验结果显示，SD-1、BP-1、PP-1及SBP-1均能提高HaCaT细胞活力。SD-1、BP-1、PP-1及SBP-1作用后，CCK8检测细胞活力，SD-1、BP-1、PP-1及SBP-1组细胞活力分别为106.4％，108.2％，107.5％及117.8％。由此可见，与Control组相比，SBP-1活性最强(图4)，其活性均大于单独使用SD-1、BP-1、PP-1的活性。

将Control组细胞SOD活力设为1，其它实验组细胞SOD活力为相对值。与Control组相比，SD-1、BP-1、PP-1及SBP-1作用后，细胞SOD活力具有一定的提高。相比于Control组SOD活力分别提高13.9％，25.5％，12.7％及40.4％。类似的，与Control组相比，SBP-1表现出最佳的提升SOD活性(图5)。

将Control组细胞内ROS设为1，其它实验组细胞ROS含量为相对值。与Control组相比，SD-1、BP-1、PP-1及SBP-1作用后，细胞ROS含量具有一定的降低。相比于Control组ROS含量分别降低6.34％，9.57％，6.71％及21.22％。与Control组相比，SBP-1表现出最佳的抑制ROS生成的活性(图6)。

本研究发现，相同剂量条件下，SD-1、BP-1、PP-1组合物的活性大于SD-1、BP-1、PP-1单独用药。我们推测，三者联合用药具有一定的协同作用，能够更好地发挥提高细胞活力，诱导SOD分泌及降低ROS含量。

以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。

序列表

<110> 深圳海创生物科技有限公司

<120> 一种具有提高细胞活力作用的组合物及其应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Trp Glu His Lys His Ala

1 5