一种因毒性蛋白基因泄露表达克隆方法

摘要

本发明公开一种因毒性蛋白基因泄露表达克隆方法，包括如下步骤：步骤S1、将CcdB蛋白C端加SsrA多肽序列；步骤S2、通过PCR扩增方法得到基因片段，再利用Gibson重组到目标载体PUC57构建全序列；步骤S3、将目的基因序列连接克隆进入表达载体后，转化大肠杆菌，培养12‑16h，观察长斑情况以及进行PCR菌落筛选阳性克隆，同时抽提质粒测序，验证序列；可以在酵母中克隆，酵母属于真核生物，可以克隆绝大多数毒性蛋白，通过先在酵母中将基因克隆出，再抽提出酵母质粒，提高质粒浓度转化大肠杆菌进行质粒扩增，进行下游实验。