一种阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法

摘要

本发明公开了一种阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法，通过对待测阿莫西林胶囊和参比制剂的晶型比对和杂质比对，系统全面地考察评价了仿制药待测阿莫西林胶囊与原研药参比制剂之间的一致性。根据待测阿莫西林胶囊的晶型特性进行选择相应的扫描速度和强度，对待测阿莫西林胶囊与参比制剂的晶型特征峰检测比较灵敏，准确检测出两种药物的晶型衍射角。采用流动相为磷酸二氢钾溶液与乙腈溶液、甲酰胺溶液或异丙醇溶液中一种或多种组合的溶液进行梯度洗脱，使得洗脱效果更好，提高检测结果的准确性和灵敏度。本发明用以解决现有对于阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法准确性和灵敏度不高，检测不全面的技术问题。

说明书

技术领域

本发明属于药物制剂技术领域，尤其涉及一种阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法。

背景技术

阿莫西林(Amoxicillin，Amixil，羟氨苄青霉素)为青霉素类抗生素，对肺炎链球菌、溶血性链球菌等链球菌属、不产青霉素酶葡萄球菌、粪肠球菌等需氧革兰阳性球菌，大肠埃希菌、奇异变形杆菌、沙门菌属、流感嗜血杆菌和淋病奈瑟菌等需氧革兰阴性菌的不产β内酰胺酶菌株及幽门螺杆菌具有良好的抗菌活性。阿莫西林通过抑制细菌细胞壁合成而发挥杀菌作用，可使细菌迅速成为球状体而溶解、破裂。

应国家要求药品生产企业对已经批准上市的仿制药，按与原研药品质量和疗效一致的原则，仿制药品进行质量一致性评价，不达标的进行生产工艺改进，以提高药品质量和疗效，造福老百姓。因此，需要研究一种生产工艺从而制备出一种与其原研产品质量与疗效一致的阿莫西林胶囊刻不容缓。目前，对于阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法检测方法准确性和灵敏度不高，检测不全面，对于阿莫西林胶囊和原研药的一致性判断存在偏差。

发明内容

本发明提供了一种阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法，用以解决现有对于阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法准确性和灵敏度不高，检测不全面的技术问题。

有鉴于此，本发明提供的一种阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法，包括将待测阿莫西林胶囊和参比制剂进行晶型比对和杂质比对；

晶型比对包括采用X射线衍射法检测待测阿莫西林胶囊和参比制剂的晶型，晶型比对测试前设置参数为：X光管管电压为37kV、管电流为22mA和扫描速度为0.3deg./min，比对晶型谱图的特征峰和衍射角是否一致；

杂质比对包括采用高效液相色谱法检测待测阿莫西林胶囊和参比制剂中的杂质，高效液相色谱法包括以流动相A与流动相B进行梯度洗脱，流动相A为磷酸二氢钾溶液；流动相B为乙腈溶液、甲酰胺溶液或异丙醇溶液中的一种或多种的组合，比对两种药物中杂质的种类和含量是否一致；

当测得待测阿莫西林胶囊和参比制剂的晶型谱图的特征峰和衍射角相同，两种药物中杂质的种类和含量相同，判定待测阿莫西林胶囊与参比制剂的结构和性状具有一致性。

可选地，参比制剂为AMOXICILLIN，剂型为胶囊剂，规格为500mg。

可选地，X射线衍射法采用DX-2500型X射线衍射仪。

可选地，DX-2500型X射线衍射仪配DWS-3型弯曲石墨晶体单色器。

可选地，流动相B为90％乙腈溶液和10％甲酰胺溶液的混合溶液。

可选地，梯度洗脱顺序和流动相A与流动相B的比例如下：

采用流动相A与流动相B的体积比为98:2进行第0～10分钟的第一次洗脱；流动相A与流动相B的体积比为85:15进行第10～30分钟的第二次洗脱；流动相A与流动相B的体积比为70:30进行第30～37分钟的第三次洗脱；流动相A与流动相B的体积比为98:2进行第37～45分钟的第四次洗脱。

可选地，高效液相色谱法的检测波长为254nm；流速为1.5mL/min；柱温为35℃；进样量为10μL。

可选地，还包括溶出曲线比对，取待测阿莫西林胶囊与参比制剂，分别以水、pH4.5醋酸盐缓冲溶液、pH6.8磷酸盐缓冲液和0.1mol/L盐酸溶液为溶出介质，设置转速为每分钟100转，选择不同的取样时间取样分别测得待测阿莫西林胶囊与参比制剂在不同溶出介质中的溶出度，以溶出度为纵坐标，取样时间为横坐标绘图得到溶出曲线。

可选地，取样时间为5min、10min、15min、20min和30min。

可选地，取样包括取待测溶液10ml用0.45μm滤膜滤过，及时补充10ml溶出介质，并精密移取滤液5ml置10ml量瓶中，再用0.1mol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取20μl，注入高效液相色谱仪。

从以上技术方案可以看出，本发明实施例具有以下优点：

本发明中提供了一种阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法，通过对待测阿莫西林胶囊和参比制剂的晶型比对和杂质比对，系统全面地考察评价了仿制药待测阿莫西林胶囊与原研药参比制剂之间的一致性。根据待测阿莫西林胶囊的晶型特性进行选择相应的扫描速度和强度，对待测阿莫西林胶囊与参比制剂的晶型特征峰检测比较灵敏，准确检测出两种药物的晶型衍射角。晶型对于药物的溶解性和生物利用度有很大的影响，因此当待测阿莫西林胶囊和参比制剂的晶型谱图的特征峰和衍射角一致时，说明溶解度和生物利用度的效果也一致。

采用流动相A与流动相B进行梯度洗脱，流动相A为磷酸二氢钾溶液，流动相B为乙腈溶液、甲酰胺溶液或异丙醇溶液中的一种或多种的组合，使得洗脱效果更好，提高检测结果的准确性和灵敏度。当参比制剂与待测阿莫西林胶囊中的杂质种类一致时，说明这两种药物的工艺合成路线相同；杂质含量一致时，说明这两种药物的选择的工艺和工艺参数具有一致性，因此参比制剂与待测阿莫西林胶囊的产品质量具有一致性。

本发明提供的一种阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法，用以解决现有对于阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法准确性和灵敏度不高，检测不全面的技术问题。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例中提供的待测阿莫西林胶囊与参比制剂的晶型比对谱图；

图2为本发明实施例中提供的对比例1和参比制剂标准品的晶型比对图；

图3为本发明实施例中提供的待测阿莫西林胶囊杂质B、C和D的结构示意图；

图4为本发明实施例中提供的待测阿莫西林胶囊杂质E、G、I和J的结构示意图；

图5为本发明实施例中提供的待测阿莫西林胶囊在不同溶出介质中的溶出曲线示意图。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。

实施例1

本发明提供的一种阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法的一个实施例，包括将待测阿莫西林胶囊和参比制剂进行晶型比对和杂质比对；

晶型比对包括采用X射线衍射法检测待测阿莫西林胶囊和参比制剂的晶型，晶型比对测试前设置参数为：X光管管电压为37kV、管电流为22mA和扫描速度为0.3deg./min，比对晶型谱图的特征峰和衍射角是否一致；

杂质比对包括采用高效液相色谱法检测待测阿莫西林胶囊和参比制剂中的杂质，高效液相色谱法包括以流动相A与流动相B进行梯度洗脱，流动相A为磷酸二氢钾溶液；流动相B为乙腈溶液、甲酰胺溶液或异丙醇溶液中的一种或多种的组合，比对两种药物中杂质的种类和含量是否一致；

当测得待测阿莫西林胶囊和参比制剂的晶型谱图的特征峰和衍射角相同，两种药物中杂质的种类和含量相同，判定待测阿莫西林胶囊与参比制剂的结构和性状具有一致性。

需要说明的是，本发明所采用的的参比制剂为AMOXICILLIN，剂型为胶囊剂，规格为500mg。

本发明中提供了一种阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法，通过对待测阿莫西林胶囊和参比制剂的晶型比对和杂质比对，系统全面地考察评价了仿制药待测阿莫西林胶囊与原研药参比制剂之间的一致性。根据待测阿莫西林胶囊的晶型特性进行选择相应的扫描速度和强度，对待测阿莫西林胶囊与参比制剂的晶型特征峰检测比较灵敏，准确检测出两种药物的晶型衍射角。晶型对于药物的溶解性和生物利用度有很大的影响，因此当待测阿莫西林胶囊和参比制剂的晶型谱图的特征峰和衍射角一致时，说明溶解度和生物利用度的效果也一致。

采用流动相A与流动相B进行梯度洗脱，流动相A为磷酸二氢钾溶液，流动相B为乙腈溶液、甲酰胺溶液或异丙醇溶液中的一种或多种的组合，使得洗脱效果更好，提高检测结果的准确性和灵敏度。当参比制剂与待测阿莫西林胶囊中的杂质种类一致时，说明这两种药物的工艺合成路线相同；杂质含量一致时，说明这两种药物的选择的工艺和工艺参数具有一致性，因此参比制剂与待测阿莫西林胶囊的产品质量具有一致性。

本发明提供的一种阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法，用以解决现有对于阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法准确性和灵敏度不高，检测不全面的技术问题。

实施例2

本发明提供的一种阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法的一个实施例，X射线衍射法采用DX-2500型X射线衍射仪，配DWS-3型弯曲石墨晶体单色器，晶型比对测试前设置参数为：X光管管电压为37kV、管电流为22mA和扫描速度为0.3deg./min。

需要根据待测阿莫西林胶囊的晶型特性进行选择相应的扫描速度和强度。待测阿莫西林胶囊与参比制剂的晶型比对谱图如图1所示，晶型比对结果如下所示：

由图1和上表可知，待测阿莫西林胶囊和参比制剂的X射线衍射图中特征峰峰值和衍射角均一致，晶型一致。

对比例1

本发明提供的一种阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法的一个对比例，X射线衍射法采用DX-2500型X射线衍射仪，配DWS-3型弯曲石墨晶体单色器，晶型比对测试前设置参数为：X光管管电压为45kV、管电流为35mA和扫描速度为0.8deg./min，测定参比制剂晶型特征峰谱图。

由图2可知，与现有已知的参比制剂谱图对比，本对比例做晶型比对试验前所设置的参数导致谱图特征峰位置发生明显偏移，部分区域线形发生畸变。与图1相比，参比制剂谱图与参比制剂标准品的特征峰位基本相同，说明实施例2检测出的谱图更加准确。

实施例3

本发明提供的一种阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法的一个实施例，高效液相色谱法的检测波长为254nm；流速为1.5mL/min；柱温为35℃；进样量为10μL。高效液相色谱法包括以流动相A与流动相B进行梯度洗脱，流动相A为磷酸二氢钾溶液，可选浓度为0.05mol/L，pH值为5；流动相B为乙腈溶液、甲酰胺溶液或异丙醇溶液中的一种或多种的组合，优选流动相B为90％乙腈溶液和10％甲酰胺溶液的混合溶液，使得洗脱效果更好，提高检测结果的准确性和灵敏度。

为了加快检测的速度和加强洗脱效果，选择梯度洗脱顺序和流动相A与流动相B的比例如下：

采用流动相A与流动相B的体积比为98:2进行第0～10分钟的第一次洗脱；流动相A与流动相B的体积比为85:15进行第10～30分钟的第二次洗脱；流动相A与流动相B的体积比为70:30进行第30～37分钟的第三次洗脱；流动相A与流动相B的体积比为98:2进行第37～45分钟的第四次洗脱。

待测阿莫西林胶囊和参比制剂的杂质检测结果如下所示：

杂质B、C、D、E、G、I和J的结构如图3和图4所示，由上表可知，待测阿莫西林胶囊和参比制剂的杂质种类和含量都具有一致性。

对比例2

本发明提供的一种阿莫西林胶囊的一致性评价检测方法的一个对比例，采用2015版中国药典二部中对阿莫西林有关物质的检查方法进行检测，选择流动相A为0.05mol/l磷酸二氢钾溶液与乙腈体积比为99:1的混合溶液，流动相B为0.05mol/l磷酸二氢钾溶液与乙腈体积比为80:20的混合溶液，0.05mol/l磷酸二氢钾溶液，用2mol/l氢氧化钾溶液调PH5.0，流速为1.0ml/min，波长为254nm，柱温为25℃，进样量为20ul。梯度洗脱按以下表格进行：

为了说明本发明的优势，分别对实施例3与对比例2进行回收试验。

按照《中国药典》(2015版)中的加标回收试验按实施例3中选用不同的流动相B和对比例2中的高效液相色谱法测定回收率，结果如下所示：

由上表可知，实施例3和对比例1的高效液相色谱法的平均回收率均在95％以上，说明其准确度均符合生产标准，RSD值也符合生产中对于精密度的要求。但实施例3比对比例1的高效液相色谱法的准确度更高，精密度更好，在生产中能很好地提升工作效率。其中，实施例3中的高效液相色谱法采用流动相B为90％乙腈溶液和10％甲酰胺溶液混合溶液进行检测的准确度和精密度最佳。

实施例4

本实施例还提供了一种待测阿莫西林胶囊的制备方法，包括以下步骤：

S1：准备原料和辅料，原料取250重量份的阿莫西林，辅料取1.25重量份二氧化硅、1重量份的硬脂酸镁和5重量份的羧甲淀粉钠；

S2：过筛，将二氧化硅、羧甲淀粉钠和硬脂酸镁分别过40目筛，温度为18℃～26℃，湿度为45％～65％；

S3：称量配料，按照处方量称量阿莫西林、二氧化硅、羧甲淀粉纳和硬脂酸镁，做好标记，温度为18℃～26℃，湿度为45％～65％；

S4：制粒，将原料阿莫西林加入干法制粒机中经0.8mm筛网进行制粒，得到阿莫西林颗粒，干法制粒机的压辊压力为8～10MPa，压辊间隙0.6～0.9mm；压辊转速15～20r/min；三元旋振筛转速为100～120r/min将整好的阿莫西林颗粒经真空上料机吸入三元旋振筛，利用20目的筛网去粗粒，利用60目的筛网去细粒，粗颗粒重复整粒，收得重粉颗粒，温度为18℃～26℃，湿度为45％～65％；

S5：混合，将原辅料按照阿莫西林颗粒、羧甲淀粉钠、二氧化硅、硬脂酸镁、阿莫西林颗粒的顺序加入混合机中，关闭加料口，设定混合时间为10分钟，以恒速进行混合，得到中间产品，温度为18℃～26℃，湿度为45％～65％；优选的，先加入的阿莫西林颗粒为处方量的一半，后加入的阿莫西林颗粒为处方量剩下的另一半；

S6：充填，根据充填装量生产指令控制全自动胶囊填充机制得待测阿莫西林胶囊，全自动胶囊填充机的填充速度在2000～2500粒/分，温度为18℃～26℃，湿度为45％～65％，制得待测阿莫西林胶囊。

实施例5

作为对实施例1的进一步改进，还包括溶出曲线比对，取待测阿莫西林胶囊与参比制剂，分别以水、pH4.5醋酸盐缓冲溶液、pH6.8磷酸盐缓冲液和0.1mol/L盐酸溶液为溶出介质，转速为每分钟100转，设置取样时间为5min、10min、15min、20min和30min进行取样，取待测溶液10ml用0.45μm滤膜滤过，及时补充10ml溶出介质，并精密移取滤液5ml置10ml量瓶中，再用0.1mol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取20μl，注入高效液相色谱仪分别测得待测阿莫西林胶囊与参比制剂在不同溶出介质中的溶出度，另取阿莫西林对照品56mg，精密称定，置100ml量瓶中，用介质溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算各时间点溶出度。以溶出度为纵坐标，取样时间为横坐标得到溶出曲线。待测阿莫西林胶囊和参比制剂的溶出度比对结果如下：

溶出度比对结果如上所示，可看出待测阿莫西林胶囊和参比制剂的溶出曲线具有一致性，说明其释药机制具有一致性，在人体内的作用效果也具有一致性。由图5可看出，待测阿莫西林胶囊在不同pH值的不同溶出介质中的溶出度也不同，因此待测阿莫西林胶囊在人体内的不同部位均有不同程度的溶解，符合人体对于此消炎药的需求。

以上所述，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。