一种依利格鲁司特中间体的酶催化合成方法

摘要

本发明涉及生物制药技术领域，尤其是一种依利格鲁司特中间体的酶催化合成方法，以化合物II为底物，在羰基还原酶、辅酶、酶循环氢供体、辅酶循环酶、助溶剂和缓冲液的存在下，进行生物催化反应生成依利格鲁司特中间体，即化合物I；具体合成路线如下：本发明的合成方法操作简便，对环境友好，实现了手性中间体的高效合成。

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，具体领域为一种依利格鲁司特中间体的酶催化合成方法。

背景技术

伊利格鲁司特(Eliglustat)于2014年获得FDA审批通过，为长期治疗1型戈谢病的一线用药，原研是密歇根大学，后许可给赛诺菲(Sanofi)旗下健赞(Genzyme)公司，商品名为Cerdelga。戈谢病发生在不能产生足够的一种酶被称为葡糖脑苷脂酶的人体中，该酶缺乏会导致在脾、肝和骨髓收集脂肪物质。其主要体征包括肝和脾肿大、低红细胞计数(贫血)、低血小板计数和骨问题。Cerdelga是一种明胶胶囊，口服制剂靶向葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase,GCS)，能够降低葡萄糖神经酰胺的产生。在美国估计1型戈谢病影响约6,000人。

伊利格鲁司特作为罕见遗传病的治疗药物，国内研究较少。原研路线中，其中间体的合成主要通过化学法制备，化合物II

发明内容

本发明的目的在于提供一种依利格鲁司特中间体的酶催化合成方法，利用酶催化方法进行不对称还原反应制备R构型手性醇。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种依利格鲁司特中间体的酶催化合成方法，以化合物II为底物，在羰基还原酶、辅酶、酶循环氢供体、辅酶循环酶、助溶剂和缓冲液的存在下，进行生物催化反应生成依利格鲁司特中间体，即化合物I；具体合成路线如下：

其中，所述羰基还原酶为冻干粉。

其中，所述的辅酶为NAD+、NADH、NADP+或NADPH中的至少一种。

其中，所述的辅酶循环酶为葡糖脱氢酶、异丙醇脱氢酶或甲酸脱氢酶中的至少一种。

其中，所述辅酶循环氢供体为葡糖、异丙醇或甲酸中的至少一种。

其中，所述助溶剂选自异丙醇、DMSO或乙醇中的至少一种。

其中，所述化合物II与所述羰基还原酶的质量比为1:0.1～1。

其中，所述化合物II与所述助溶剂的质量体积比为1g：10～50mL。

其中，所述缓冲液为PB缓冲液，其浓度为0.2mM，pH为7.5。

一种依利格鲁司特中间体前体的酶催化合成方法，将上述方法中的底物化合物II替换为

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

与现有技术中采用纯化学路线合成依利格鲁司特中间体(化合物I)的方法相比，本发明方法不需要高温高压等极端催化环境，同时可以减少使用对人及环境有危害的催化剂，降低了废物的产生，环境友好。而且，因为酶具有优异的立体选择性，可以有效提高产率和产品的光学纯度，具有极好的产业化潜力。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1依利格鲁司特中间体的制备

于250ml锥形瓶中，加入60ml PB缓冲液(0.2mM，pH7.5)，依次溶解800mg市购羰基还原酶A(商品酶，商品编号P1B02，来源Codexis公司)，200mg异丙醇脱氢酶酶粉(商品酶，商品编号WT2302，购买公司：宿迁阿尔法科技有限公司)，10mgNADP+。1g底物化合物II溶于40ml异丙醇(作为辅酶循环氢供体及助溶剂)中，加入反应器，220rpm搅拌，于30℃下反应16h，得到化合物I。反应结果经HPLC检测，转化率为93％，纯度98.68％，ee值99.9％。

实施例2依利格鲁司特中间体的制备

于250ml锥形瓶中，加入60ml PB缓冲液(0.2mM，pH7.5)，依次溶解800mg市购羰基还原酶B(商品酶，商品编号P1B10，来源Codexis公司)，200mg异丙醇脱氢酶酶粉(商品酶，商品编号WT2302，购买公司：宿迁阿尔法科技有限公司)，10mgNADP+。1g底物化合物II溶于40ml异丙醇(作为辅酶循环氢供体及助溶剂)中，加入反应器，220rpm搅拌，于30℃下反应16h，得到化合物I。反应结果经HPLC检测，转化率为91％，纯度96.77％，ee值95.5％。

实施例3依利格鲁司特中间体的制备

于250ml锥形瓶中，加入60ml PB缓冲液(0.2mM，pH7.5)，依次溶解800mg市购羰基还原酶C(商品酶，商品编号KRED130，来源Codexis公司)，200mg异丙醇脱氢酶酶粉(商品酶，商品编号WT2302，购买公司：宿迁阿尔法科技有限公司)，10mgNADP+。1g底物化合物II溶于40ml异丙醇(作为辅酶循环氢供体及助溶剂)中，加入反应器，220rpm搅拌，于30℃下反应16h，得到化合物I。反应结果经HPLC检测，转化率为89％，纯度95.68％，ee值91.5％。

实施例4化合物I类似物(依利格鲁司特中间体前体)：化合物III的制备

于500ml锥形瓶中，加入60ml PB缓冲液(0.2mM，pH7.5)，依次溶解800mg市购羰基还原酶A(商品酶，商品编号P1B02，来源Codexis公司)，200mg异丙醇脱氢酶酶粉(商品酶，商品编号WT2302，购买公司：宿迁阿尔法科技有限公司)，10mgNADP+。1g底物化合物IV溶于60ml异丙醇(作为辅酶循环氢供体及助溶剂)中，加入反应器，220rpm搅拌，于30℃下反应18h，得到化合物III。反应结果经HPLC检测，转化率为89％，纯度96.89％，ee值99.3％。

实施例5化合物I类似物(依利格鲁司特中间体前体)：化合物V的制备

于500ml锥形瓶中，加入60ml PB缓冲液(0.2mM，pH7.5)，依次溶解800mg市购羰基还原酶A(商品酶，商品编号P1B02，来源Codexis公司)，200mg异丙醇脱氢酶酶粉(商品酶，商品编号WT2302，购买公司：宿迁阿尔法科技有限公司)，10mgNADP+。1g底物化合物VI溶于60ml异丙醇(作为辅酶循环氢供体及助溶剂)中，加入反应器，220rpm搅拌，于30℃下反应22h，得到化合物V。反应结果经HPLC检测，转化率为86％，纯度92.89％，ee值98.9％。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。