包含亲水性第一嵌段、疏水性第二嵌段和能够与硫醇特异性结合的官能团的嵌段共聚物

摘要

本发明涉及一种嵌段共聚物，其包含亲水性第一嵌段、疏水性第二嵌段和能够与硫醇特异性结合的官能团。

说明书

技术领域

本发明涉及一种嵌段共聚物，其包含亲水性第一嵌段、疏水性第二嵌段和能够与硫醇特异性结合的官能团。

背景技术

众所周知，抗癌化学疗法和放射疗法是治疗癌症的治疗方法，癌症是现代人的一种典型的难治性疾病，而抗癌化学疗法和放射疗法在患者整个体内引起非特异性药理作用，因此存在治疗效率低下和在患者中引起各种副作用的问题。

为了解决这些问题，近来出现了基于人体免疫反应的新型治疗方法。其中，T细胞和自然杀伤细胞具有精确识别和攻击癌细胞的特定机制，因此与传统的抗癌化学/放射疗法不同，其具有在不损害正常细胞的情况下治疗癌症的潜力。

然而，由于癌细胞通过遗传变异而获得免疫逃避、单个免疫细胞缺乏毒性等原因，免疫细胞独自难以完全治愈癌症。

因此，为了解决这些问题，需要一种通过允许抗癌化学药物与免疫细胞同时作用于癌症来提高治疗效率的方法，并且还需要开发智能药物递送系统，以防止抗癌化学药物作用于正常组织。

发明内容

技术问题

为了解决上述问题，本发明人制备了嵌段共聚物，该嵌段共聚物包含：亲水性第一嵌段；疏水性第二嵌段，该疏水性第二嵌段包含在pH 4.5至7的条件下分解为或变为阳离子的单元；以及能够与硫醇特异性结合的官能团，并且已经确定该嵌段共聚物可以附着至免疫细胞表面上存在的硫醇，并且可以携带药物以及仅在酸性条件下释放该药物，因此增强了免疫细胞的作用，从而完成了本发明。

因此，本发明的目的是提供一种嵌段共聚物，其允许其携带的药物与免疫细胞同时作用，从而能够预防或治疗癌症疾病或癌症病症，或各种感染。

解决方案

为了实现上述目的，根据本发明的一个实施方式，提供一种嵌段共聚物，其包含亲水性第一嵌段；疏水性第二嵌段；以及能够与硫醇特异性结合的官能团，其中该疏水性第二嵌段：在其主链中包括在pH 4.5至7的条件下分解的单元；在其主链或侧链中包括在pH 4.5至7的条件下变为阳离子的单元；或同时包含上述两种单元。

根据本发明的另一个实施方式，提供一种纳米颗粒，其包含该嵌段共聚物。

根据本发明的又一个实施方式，提供一种药物递送载体，其包含该纳米颗粒和药物。

根据本发明的又一个实施方式，提供一种经修饰的细胞，其包含该药物递送载体和免疫细胞。

根据本发明的又一个实施方式，提供一种用于抗癌用途的药物组合物，其包含该嵌段共聚物和抗癌药。

此外，根据本发明的又一个实施方式，提供一种用于抗癌用途或用于预防或治疗感染的药物组合物，其包含该嵌段共聚物、药物和免疫细胞。

发明的有益效果

根据本发明的嵌段共聚物可与免疫细胞表面上存在的硫醇特异性结合，并且仅在由免疫细胞诱导的酸性条件下才能发生结构变化，从而释放药物。因此，嵌段共聚物可通过化学疗法增强免疫细胞抗癌能力或对感染的预防或治疗能力，同时抑制其所携带药物的非特异性副作用。

附图说明

图1示出了在将嵌段共聚物给药至体内的情况下模拟由根据本发明的一个实施方式的嵌段共聚物引起的响应的图；

图2示出了用于在根据本发明实施方式的嵌段共聚物中合成亲水性第一嵌段的反应方案；

图3示出了在根据本发明实施方式的嵌段共聚物中的亲水性第一嵌段的合成中的中间体化合物和最终化合物的1H-NMR谱；

图4示出了用于在根据本发明实施方式的嵌段共聚物中合成疏水性第二嵌段的反应方案；

图5示出了在根据本发明实施方式的嵌段共聚物中的疏水性第二嵌段的合成中的中间体化合物和最终化合物的1H-NMR谱；

图6示出了显示出根据本发明的一个实施方式的药物递送载体的依赖于pH条件的平均水合尺寸的图；

图7示出了用于根据本发明实施方式的药物递送载体的取决于pH条件的透射电子显微镜图像；

图8示出了显示出根据本发明实施方式的药物递送载体的取决于pH条件的释药行为的图；

图9示出了附着在细胞上的根据本发明实施方式的药物递送载体的荧光图像；

图10和图11示出了当根据本发明实施方式的药物递送载体附着于自然杀伤细胞并且自然杀伤细胞识别并攻击癌细胞时所拍摄的荧光图像；

图12示出了通过评估根据本发明实施方式的药物递送载体的细胞毒性而获得的结果；

图13示出了显示出根据本发明实施方式的药物递送载体的癌细胞杀伤作用的图；

图14示出了在将根据本发明实施方式的药物递送载体给药至动物癌症模型的情况下，通过测量IFN-γ水平而获得的图；

图15至图19示出了在将药物递送系统给药至动物癌症模型的情况下，通过评估根据本发明实施方式的药物递送系统的转移性致瘤性抑制作用而获得的结果。

实施发明的最佳方式

在本发明的一个方面，提供在低pH下发生结构变化的嵌段共聚物。

在本发明的一个实施方式中，提供一种嵌段共聚物，其包含亲水性第一嵌段；疏水性第二嵌段；以及能够与硫醇特异性结合的官能团，其中该疏水性第二嵌段：在其主链中包括在pH 4.5至7的条件下分解的单元；在其主链或侧链中包括在pH 4.5至7的条件下变为阳离子的单元；或同时包含上述两种单元。

在本发明的一个实施方式中，亲水性第一嵌段可以指在水中具有高溶解度的聚合物。例如，在室温，亲水性第一嵌段作为聚合物溶解在水中的情况下可能不会显示出浑浊。此外，亲水性第一嵌段可以包括聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、聚恶唑啉、或聚醚、或其共聚物。特别地，亲水性第一嵌段是聚醚，并且可以包括聚乙二醇、葡聚糖、甘露聚糖、支链淀粉、或纤维素、或其共聚物。更特别地，亲水性第一嵌段可以包括聚乙二醇。

另外，亲水性第一嵌段可以包括式1表示的单元、基本上由式1表示的单元组成或由式1表示的单元组成。

[式1]

在该式中，D

同时，在本发明的一个实施方式中，疏水性第二嵌段可以指在水中具有低溶解度的聚合物。例如，在室温，疏水性第二嵌段溶解在水中的情况下可以显示出浑浊。另外，疏水性第二嵌段可以：在其主链中包括在pH 4.5至7的条件下分解的单元；在其主链或侧链中包括在pH 4.5至7的条件下变为阳离子的单元；或包括上述两种单元。

特别地，疏水性第二嵌段可以：在其主链中包括在pH 5.8至6.8的条件下分解的单元；在其主链或侧链中包括在pH 5.8至6.8的条件下变为阳离子的单元；或包括上述两种单元。本文中，在酸性条件下，例如在pH 4.5至7.0或pH 5.8至6.8的条件下变为阳离子的单元可以是其共轭酸具有4.5至7.0或5.8至6.8的pKa的单元。同样在本文中，在酸性条件下分解或变成阳离子的单元可以是在非酸性条件下，例如大于pH 7.0或大于pH 6.8的条件下，不分解或不变成阳离子的单元。

由于包含在酸性条件下分解为或变为阳离子的这种单元，因此在疏水性基团在酸性条件(例如pH 4.5至7.0或pH 5.8至6.8的条件)下变为阳离子的情况下由于亲水/疏水平衡被破坏，或由于疏水基团被分解，本发明的嵌段共聚物可能发生结构变化。因此，在携带药物的情况下，本发明实施方式的嵌段共聚物可以具有在酸性条件下选择性释放药物的特征。特别地，在给药至对象的情况下，嵌段共聚物可以与已经存在于对象中的免疫细胞结合，或者与另外添加至对象中的免疫细胞结合，并因此可以在免疫细胞发挥作用时形成的酸性环境中选择性释放药物。这样，本发明的嵌段共聚物可以增强免疫细胞的能力，同时抑制其所携带的药物的非特异性副作用。

特别地，在疏水性第二嵌段中，包括在酸性条件下(例如pH 4.5至7.0或pH 5.8至6.8的条件)下分解的单元的聚合物可以包括聚丙交酯、聚乙交酯、聚缩醛、聚缩酮、或聚氨基酯、或其共聚物。另外，包括在酸性条件下(例如pH 4.5至7.0或pH 5.8至6.8)变为阳离子的单元的聚合物可以包括聚乙烯亚胺、聚丙烯亚胺、聚氨基酯、聚酰胺基胺、聚(甲基丙烯酸二甲氨基乙基酯)、聚赖氨酸、壳聚糖、或明胶、或其共聚物。更特别地，疏水性第二嵌段可以包括作为聚合物的聚氨基酯，聚氨基酯包括在酸性条件下分解的单元和在酸性条件下变为阳离子的单元。更特别地，疏水性第二嵌段可以包括式2表示的单元、基本上由式2表示的单元组成或由式2表示的单元组成。

[式2]

在该式中，A

更特别地，在该式中，A

更特别地，在该式中，A

在本发明的一个实施方式中，能够与硫醇特异性结合的官能团可以为，例如，二硫化物基、马来酰亚胺基、烯基基团、或炔基基团、或其组合。可选择地，官能团可以是二硫化物基的衍生物、马来酰亚胺基的衍生物、烯基基团的衍生物、或炔基基团的衍生物、或其组合。在本文中，二硫化物基的衍生物可以指通过将保护基与二硫化物基结合而形成的官能团。在本文中，除非另有说明，否则烯基基团或炔基基团可以分别表示，但不限于，具有2至60个碳原子、具有双键或三键并且包括直链或支链基团的官能团。能够与硫醇特异性结合的官能团可以特别地为马来酰亚胺基或其衍生物。

更特别地，本发明实施方式的嵌段共聚物可以包括作为亲水性第一嵌段的聚醚，包括作为疏水性第二嵌段的聚氨基酯，并且包括能够与硫醇特异性结合的官能团。

更特别地，本发明实施方式的嵌段共聚物可以包括包含由式1表示的单元的亲水性第一嵌段，包括包含由式2表示的单元的疏水性第二嵌段，并且包括能够与硫醇特异性结合的官能团。

例如，嵌段共聚物由式3表示，并且可以包括能够与硫醇特异性结合的官能团。

[式3]

在该式中，A

另一方面，接头L

[式4]

式中，B

能够与胺反应的官能团的实例可以包括烯基基团、炔基基团或丙烯酸酯基，衍生自能够与胺反应的官能团的单元的实例可以包括*-C

可选择地，例如，嵌段共聚物由式5表示并且可以包括能够与硫醇特异性结合的官能团。

[式5]

在该式中，A

另一方面，与L

[式6]

在该式中，B

能够与胺反应的官能团的实例可以包括烯基基团、炔基基团或丙烯酸酯基，衍生自能够与胺反应的官能团的单元的实例可以包括*-C

根据本发明的一个实施方式的嵌段共聚物可以由式7具体表示。

[式7]

在该式中，p和r可以各自独立地为1至100的整数、5至100的整数、5至90的整数、10至80的整数、20至65的整数或30至60的整数，以及q可以为1至60的整数、1至45的整数、1至30的整数、5至45的整数或5至30的整数。

同时，在根据本发明实施方式的嵌段共聚物中，基于嵌段共聚物的总重量，亲水性第一嵌段的含量可以为1wt％至99wt％、1wt％至80wt％或20wt％至60wt％。特别地，亲水性第一嵌段的含量可以为，但不限于，20wt％至55wt％、25wt％至60wt％、25wt％至55wt％、25wt％至50wt％、30wt％至55wt％、30wt％至50wt％、30wt％至45wt％、35wt％至50wt％或35wt％至45wt％。此外，基于嵌段共聚物的总重量，疏水性第二嵌段的含量可以为1wt％至99wt％、10wt％至90wt％或40wt％至80wt％，并且含量可以特别地为40wt％至75wt％、45wt％至80wt％、45wt％至75wt％、45wt％至70wt％、50wt％至75wt％、50wt％至70wt％、50wt％至65wt％、55wt％至70wt％或55wt％至65wt％。在另一方面，基于嵌段共聚物的总重量，能够与硫醇特异性结合的官能团的含量可以为0.01wt％至10wt％或0.01wt％至5wt％，并且含量可以特别地为0.05wt％至5wt％、0.1wt％至5wt％、0.5wt％至5wt％或1wt％至4wt％。

例如，在根据本发明实施方式的嵌段共聚物中，基于嵌段共聚物的总重量，作为亲水性第一嵌段的聚醚或由式1表示的单元的含量可以为1wt％至99wt％、1wt％至80wt％或20wt％至60wt％，并且含量可以特别地为20wt％至55wt％、25wt％至60wt％、25wt％至55wt％、25wt％至50wt％、30wt％至55wt％、30wt％至50wt％、30wt％至45wt％、35wt％至50wt％或35wt％至45wt％。在根据本发明实施方式的嵌段共聚物中，基于嵌段共聚物的总重量，作为疏水性第二嵌段的聚氨基酯或由式2表示的单元的含量可以为1wt％至99wt％、10wt％至90wt％或40wt％至80wt％，并且含量可以特别地为40wt％至75wt％、45wt％至80wt％、45wt％至75wt％、45wt％至70wt％、50wt％至75wt％、50wt％至70wt％、50wt％至65wt％、55wt％至70wt％或55wt％至65wt％。此外，在根据本发明实施方式的嵌段共聚物中，基于嵌段共聚物的总重量，作为能够与硫醇特异性结合的官能团的二硫化物基、马来酰亚胺基、烯基基团或炔基基团的含量可以为0.01wt％至10wt％或0.01wt％至5wt％，并且含量可以特别地为0.05wt％至5wt％、0.1wt％至5wt％、0.5wt％至5wt％或1wt％至4wt％。

此外，在包含在根据本发明实施方式的嵌段共聚物中的亲水性第一嵌段中，基于亲水性第一嵌段的总重量，聚醚或由式1表示的单元的含量可以为10wt％至100wt％，并且含量可以特别地为30wt％至100wt％、50wt％至100wt％、60wt％至100wt％、70wt％至100wt％、80wt％至100wt％或90wt％至100wt％。

在另一方面，在包含在根据本发明实施方式的嵌段共聚物中的疏水性第二嵌段中，基于疏水性第二嵌段的总重量，聚氨基酯或由式2表示的单元的含量可以为10wt％至100wt％，并且含量可以特别地为30wt％至100wt％、50wt％至100wt％、60wt％至100wt％、70wt％至100wt％、80wt％至100wt％或90wt％至100wt％。

同时，在根据本发明实施方式的嵌段共聚物中，亲水性第一嵌段的总重量与疏水性第二嵌段的总重量的比可以为(1:20)至(20:1)，并且可以特别地为(1:10)至(10:1)、(1:10)至(5:1)、(1:5)至(5:1)、(1:5)至(3:1)、(1:5)至(2:1)或(1:5)至(1:1)。

另外，根据本发明实施方式的嵌段共聚物可以是包括一个亲水性嵌段和一个疏水性嵌段的双嵌段共聚物，或者可以是包括两个或更多个亲水性嵌段或疏水性嵌段的三嵌段共聚物、四嵌段共聚物或五嵌段共聚物。例如，嵌段共聚物可以具有亲水性第一嵌段-疏水性第二嵌段的结构，或者具有亲水性第一嵌段-疏水性第二嵌段-亲水性第一嵌段的结构或疏水性第二嵌段-亲水性第一嵌段-疏水性第二嵌段的结构。

在另一方面，在根据本发明实施方式的嵌段共聚物中，能够与硫醇特异性结合的官能团可以直接或经由接头连接至嵌段共聚物的主链、侧链、或末端、或其组合。特别地，能够与硫醇特异性结合的官能团可以经由接头连接至嵌段共聚物的末端，例如，作为亲水性第一嵌段的聚醚的醚基或作为疏水性第二嵌段的聚氨基酯的胺基或酯基。

根据本发明实施方式的嵌段共聚物的总分子量可以为1000Da至50000Da，并且总分子量可以特别地为2000Da至45000Da、3000Da至40000Da、4000Da至30000Da或5000Da至20000Da。

在本发明的另一个方面，提供一种纳米颗粒，其包含上述嵌段共聚物。

在本发明的一个实施方式中，嵌段共聚物可以通过疏水性嵌段的自组装形成具有胶束结构的纳米颗粒，并且包括亲水性嵌段和疏水性嵌段，使得疏水性嵌段可自组装以在对象中或在水中形成核，而亲水性嵌段可形成与水接触的表面。胶束是以一定浓度或更高浓度聚积的分子的聚集体，并且可以表示其中两亲性分子以均匀的大小和形状聚集的结构体。纳米颗粒或胶束可以具有各种形状，例如球形、椭圆形、圆柱体、环形和薄层状。

此外，在本发明的另一个方面中，提供一种药物递送载体，其包含上述纳米颗粒和药物。该纳米颗粒可以具有由嵌段共聚物形成的胶束结构，并且可以在由疏水性嵌段的聚集形成的胶束核中携带疏水药物。

药物递送载体可以具有50nm至1000nm的平均粒径，并且更特别地，可以具有100nm至200nm的平均粒径。然而，本发明不限于此。例如，在药物递送载体中含有多柔比星(doxorubicin)的情况下，药物递送载体在中性pH下的平均粒径可以为20nm至400nm，更特别地，平均粒径可以为100nm至200nm。然而，本发明不限于此。具有相应的平均粒径范围的药物递送载体可以容易地附着于细胞表面，而不会在给药至对象并流过血流时分解或破坏其纳米颗粒结构或胶束结构。

在本文中，对药物没有限制，只要其具有足够的亲水/疏水性质，以被携带在包含上述嵌段共聚物的纳米颗粒的内芯上即可。这种药物可以是疏水的或弱亲水的，并且可以例如在室温、在水中具有20mg/mL或更低的溶解度。在本文中，药物可以选自但不限于：抗癌剂、抗增殖或化学治疗药、止痛剂、抗炎剂、抗寄生虫剂、抗心律失常剂、抗细菌剂、抗病毒剂、抗凝剂、抗抑郁剂、抗糖尿病药、抗癫痫剂、抗真菌剂、抗痛风剂、抗高血压剂、抗疟疾药、抗偏头痛药、抗毒蕈剂、抗肿瘤剂、抗勃起功能障碍剂、免疫抑制剂、抗原生动物剂、抗甲状腺剂、抗焦虑剂、镇静剂、催眠药、神经松驰剂、β受体阻滞剂、强心剂、皮质类固醇、利尿药、抗帕金森氏病剂、肠胃病剂、组胺受体拮抗剂、角质层分离剂、脂质调节剂、心绞痛药、Cox-2抑制剂、白三烯抑制剂、大环内酯类、肌肉松弛剂、营养素、麻醉止痛剂、蛋白酶抑制剂、性激素、兴奋剂、肌肉松弛剂、抗渗透剂、抗肥胖药、认知增强剂、尿失禁药、良性前列腺药、必需脂肪酸、非必需脂肪酸及其组合。

例如，药物可以是疏水性或弱亲水性抗癌药，并且可以包括：多柔比星、顺铂、依托泊苷、紫杉醇、多西他赛、喜树碱、鬼臼毒素、环磷酰胺、放线菌素、甲氨蝶呤、沙利度胺、埃罗替尼、吉非替尼、喜树碱、它莫西芬、阿那曲唑、氟他胺、唑来膦酸盐(zoledronate)、长春新碱、视黄酸、苯丁酸氮芥、长春花碱(vinblastin)、泼尼松、睾丸素、布洛芬、萘普生、吲哚美辛、苯基丁氮酮、地塞米松、塞来昔布、伐地昔布、尼美舒利、皮质类固醇或其组合。

药物递送载体可包括非天然存在载体。另外，药物递送载体还可以包括生物活性物质，从而在治疗与癌症相关的疾病中表现出更高的作用。这种生物活性物质意指用于对疾病进行治疗、治愈、预防、诊断等的物质，其实例可以包括细胞、蛋白质或肽(例如生长因子和激素)、核酸、细胞外基质物质和具有药用治疗功能的药物。

作为携带在药物递送载体上的生物活性物质的药物的实例可以包括抗生素、抗炎剂、抗病毒剂和抗细菌剂。抗生素的示例可以是选自以下的衍生物和混合物的抗生素：四环素、米诺环素、强力霉素、氧氟沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、克拉霉素、红霉素、头孢克洛、头孢噻肟、亚胺培南、青霉素、庆大霉素、链霉素、万古霉素等。抗炎剂的示例可以是选自以下的衍生物和混合物的抗炎剂：吲哚美辛、布洛芬、酮洛芬、吡罗昔康、氟比洛芬、双氯芬酸等。抗病毒剂的示例可以是选自阿昔洛韦、洛巴芬(robavin)等的衍生物和混合物的抗病毒剂。抗细菌剂的示例可以是选自酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、两性霉素B、灰黄霉素等的衍生物和混合物的抗细菌剂。

另外，可以被携带或结合到药物递送载体上并递送到活体内的蛋白质或肽的示例可以是用于治疗或预防疾病目的的各种生物活性肽，例如激素、细胞因子、酶、抗体、生长因子、转录调节因子、血因子、疫苗、结构蛋白、配体蛋白、多糖和受体、细胞表面抗原、受体拮抗剂、及其衍生物和类似物。特别地，蛋白质或肽的示例可以是：骨生长因子、肝脏生长激素、生长激素释放激素和肽、干扰素和干扰素受体(例如，干扰素-α、干扰素-β和干扰素-γ、可溶性I型干扰素受体等)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、胰高血糖素样肽(GLP-1等)、G蛋白偶联受体、白介素(例如，白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-8、白介素-9等)和白介素受体(例如，IL-1受体、IL-4受体等)、酶(例如，葡萄糖脑苷脂酶、艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶、α-半乳糖苷酶-A、阿糖苷酶-α(agalsidase-alpha)和阿糖苷酶-β(agalsidase-beta)、α-L-艾杜糖醛酸酶、几丁质酶、丁酰胆碱酯酶、脂肪酶、谷氨酸脱羧酶、伊米苷酶、尿酸酶、血小板活化因子乙酰水解酶、中性内肽酶、髓过氧化物酶等)，白介素和细细胞因子结合蛋白(例如，IL-18bp、TNF结合蛋白等)、巨噬细胞激活剂、巨噬细胞肽、B细胞因子、T细胞因子、蛋白A、过敏性抑制剂、肿瘤坏死因子(TNF)α抑制剂、细胞坏死糖蛋白、免疫毒素、淋巴毒素、肿瘤坏死因子、肿瘤抑制因子、转移生长因子、α-1抗胰蛋白酶、白蛋白、α-乳清蛋白、载脂蛋白-E、促红细胞生成素、高糖化促红细胞生成素、血管生成素、血红蛋白、凝血酶、凝血酶受体激活肽、血栓调节蛋白、血因子、血因子a，血因子XIII、纤溶酶原激活剂、纤维蛋白结合肽、尿激酶、链激酶、水蛭素、蛋白C、C反应蛋白、肾素抑制剂、胶原酶抑制剂、超氧化物歧化酶、瘦素、血小板衍生生长因子、上皮生长因子、表皮生长因子、血管抑素、血管紧张素、成骨生长因子、骨形态发生蛋白、降钙素、胰岛素、心房肽、软骨诱导物、依降钙素、结缔组织激活剂、组织因子途径抑制剂、卵泡刺激激素、叶黄素形成激素、黄体激素释放激素、神经生长因子类(例如，神经生长因子、睫状神经营养因子、轴突生长因子-1、脑钠肽、神经胶质细胞源性神经营养因子、轴突导向因子、中性粒细胞抑制因子、神经营养因子和神经营养素)、甲状旁腺素、松弛素、促胰液素、生长调节素、胰岛素样生长因子、肾上腺皮质激素、胰高血糖素、胆囊收缩素、胰多肽、胃泌素释放肽、促肾上腺皮质激素释放因子、促甲状腺激素、自分泌运动因子、乳铁蛋白、肌肉抑制素、受体(例如，TNFR(P75)、TNFR(P55)、IL-1受体、VEGF受体、B细胞活化剂受体等)、受体拮抗剂(例如，IL1-Ra)、细胞表面抗原(例如，CD 2、CD 3、CD 4、CD 5、CD 7、CD 11a、CD 11b、CD 18、CD 19、CD 20、CD 23、CD 25、CD 33、CD 38、CD 40、CD 45、CD69)、单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段(例如，scFv、Fab、Fab'、F(ab')2和Fd)以及病毒衍生疫苗抗原。

可以被物理携带在或化学结合到药物递送载体上并递送到活体内的核酸的示例可以是DNA、RNA、PNA和寡核苷酸。

可以与生物活性物质一起被物理携带在药物递送载体上并递送到活体内的细胞的示例可以有：干细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞、平滑肌细胞、神经元、软骨细胞、骨细胞、皮肤细胞和施旺(Schwann)细胞。

根据本发明的实施方式的药物递送载体可以具有25nm至400nm或50nm至200nm的平均直径。例如，在通过使多柔比星作为药物携带在包含由式4或式5表示的嵌段共聚物的纳米颗粒上而形成药物递送载体的情况下，纳米颗粒的平均直径可以为100nm至200nm，并且基于纳米颗粒的总重量，多柔比星的包合率可高达5wt％至10wt％。

将参照图1更详细地描述根据本发明的实施方式的药物递送载体的示例性作用。如图1所示，携带了抗癌药的包括一个实施方式的嵌段共聚物的药物递送载体(以胶束的形式)，经由嵌段共聚物中所含的能够与硫醇基特异性结合的官能团(未示出)附着至自然杀伤细胞(为免疫细胞)的表面，从而增强了免疫细胞；并且在增强的免疫细胞识别并开始攻击癌细胞的情况下，其周围环境变成酸性，并使药物传递载体发生结构变化，从而使胶束上携带的抗癌药可以释放以诱导癌细胞死亡。

这样，根据本发明实施方式的药物递送载体可以在癌细胞附近精确地递送高毒性抗癌药，这使得利用具有大的抗癌作用但由于其非特异性毒性引起的大的副作用而具有局限性的化学抗癌药成为可能，并且还允许了使抗癌治疗效率和要发挥的能力最大化的作用。另外，虽然根据实施方式的药物递送载体附着至免疫细胞并流经血流，但是由于药物递送载体周围的中性环境而抑制了药物释放，这使得可以避免由其携带的抗癌药引起的全身性毒性。

在本发明的又一个方面，提供一种经修饰的细胞，其通过使包含上述嵌段共聚物和药物的药物递送载体结合至免疫细胞的表面而获得。经修饰的细胞还可以包含如上所述的非天然存在载体和/或生物活性物质。

另外，免疫细胞可以选自，例如，T细胞、自然杀伤细胞、树突细胞(DC)、巨噬细胞、小胶质细胞及其组合。另外，免疫细胞可以在其表面上包含硫醇基，因此在与实施方式的嵌段共聚物结合的情况下可以具有增强的作用，这种结合是通过包含在嵌段共聚物中的能够与硫醇基特异性结合的官能团来进行的。特别地，像T细胞和自然杀伤细胞一样，免疫细胞可以形成免疫突触并释放裂解性颗粒以执行细胞杀伤作用。另外，免疫细胞可以具有在攻击癌细胞的同时在免疫突触附近被酸化的特征。由于免疫细胞的这一特征，响应于癌细胞周围的酸性环境，该实施方式的嵌段共聚物的疏水性第二嵌段可以分解为或变为阳离子，从而释放携带在嵌段共聚物上的药物。

在本发明的另一个方面，提供用于抗癌用途的药物组合物，其包含上述嵌段共聚物和抗癌药。另外，在本发明的又一个方面，提供一种用于抗癌用途或用于预防或治疗感染的药物组合物，其包含上述嵌段共聚物、药物和免疫细胞。

癌可以选自：结肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头癌、宫颈癌、皮肤黑色素瘤、眼内黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、胃癌、肛周癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌腺癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性白血病、急性白血病、淋巴细胞淋巴瘤、膀胱癌、肾癌、输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌和中枢神经系统(CNS)肿瘤。然而，癌不特别限于此。

在本发明的一个实施方式中，药物组合物意指出于特定目的而给药的组合物。为了本发明的目的，本发明的药物组合物可以用于预防或治疗癌症疾病或癌症病症或感染的目的，并且可以包括其中所涉及的蛋白质和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。另外，本发明的药物组合物还可以包含如上所述的非天然存在载体和/或生物活性物质。

药学上可接受的载体或赋形剂是用于脊椎动物、尤其是人类的经政府监管部门批准的药学上可接受的载体或赋形剂，或在政府批准的药典或其他公认的药典中列出的药学上可接受的载体或赋形剂。

为了适合于肠胃外给药，可以将药物组合物制成具有油性或水性载体的混悬剂、溶液剂或乳剂的形式，可以将药物组合物制成固体或半固体的形式，并且可以包括配制剂，例如悬浮剂、稳定剂、增溶剂和/或分散剂。该形式可以是无菌的并且可以是液体。该药物组合物在制备和储存条件下可以是稳定的，并且可以被保存以抵抗例如细菌或真菌的微生物的污染作用。或者，药物组合物可以是无菌粉末形式，以便在使用前与合适的载体重构。药物组合物可以以单位剂量形式，在微针贴剂中、在安瓿中或在其他单位剂量容器中或在多剂量容器中。或者，可以将药物组合物以冻干(冷冻干燥)状态储存，该状态仅需要在使用前添加无菌液体载体，例如注射用水。即用注射剂和悬浮剂可以用无菌粉末、颗粒或片来制备。

在一些非限制性实施方式中，本发明的药物组合物可以配制成液体或以微球形式包含在液体中。在某些非限制性实施方式中，本发明的药物组合物包含浓度为0.001U/kg至100000U/kg的药学上可接受的化合物和/或混合物。另外，在某些非限制性实施方式中，适用于本发明药物组合物的赋形剂包括防腐剂、悬浮剂、稳定剂、染料、缓冲剂、抗细菌剂、抗真菌剂和等渗剂，例如糖或氯化钠。稳定剂是指为了增加其储存寿命而任选地用于本发明的药物组合物中的化合物。在非限制性实施方式中，稳定剂可以是糖、氨基酸、化合物或聚合物。药物组合物可以包含一种或多种药学上可接受的载体。该载体可以是溶剂或分散介质。药学上可接受的载体的非限制性实例包括：水、盐水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)、油及其合适的混合物。另外，肠胃外制剂可以被灭菌。灭菌技术的非限制性实例包括：通过细菌保留过滤器的过滤、最终灭菌、掺入无菌制剂、辐射灭菌、无菌气体辐照、加热、真空干燥和冻干。

在本发明的一个实施方式中，术语“给药”是指通过任何合适的方法将本发明的组合物引入患者体内。本发明的组合物可以通过任何一般途径给药，只要该途径允许本发明的组合物到达靶组织即可。本发明的组合物可以口服给药、腹膜内给药、静脉内给药、肌内给药、皮下给药、皮内给药、鼻内给药、肺内给药、直肠内给药、腔内给药或鞘内给药。然而，在包括根据本发明的药物递送载体的药物组合物的情况下，由于药物递送载体必须附着于细胞以进行化学疗法和免疫疗法，因此药物组合物优选肠胃外给药并且可以以注射剂的形式给药。

在本发明的又一个方面，提供一种用于预防或治疗癌症疾病或癌症病症的方法，该方法包括向对象给药上述嵌段共聚物和抗癌药。预防或治疗方法可以通过将药学上有效量的、包含上述嵌段共聚物和药物的药物组合物同时给药至对象来进行。或者，可以通过在一定时间间隔内向对象给药嵌段共聚物和药物来执行预防或治疗方法。

在本发明的又一个方面，提供一种用于预防或治疗癌症疾病或癌症病症、或感染的方法，其包括给药上述嵌段共聚物、药物和免疫细胞。该预防或治疗方法可以包括将药学上有效量的、包含上述嵌段共聚物、药物和免疫细胞的药物组合物同时给药至对象来进行。或者，可以通过在一定时间间隔内向对象给药嵌段共聚物、药物和免疫细胞来执行预防或治疗方法。

在本发明中，可以根据各种因素来调节有效量，包括：癌症疾病的类型；疾病的严重程度；组合物中所含的活性成分和其他成分的类型和数量；制剂的类型；以及患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药时间；给药途径；和组合物的分泌率；治疗时间；以及同时使用的药物。

在本发明中，术语“对象”可以指人和哺乳动物，包括牛、马、绵羊、猪、山羊、骆驼、羚羊、狗等，并且可以指除人以外的哺乳动物。

另一方面，在本发明的又一方面，提供一种用于制备上述嵌段共聚物的方法。

用于制备嵌段共聚物的方法可以包括以下步骤：S1)使包括亲水性第一嵌段的亲水性聚合物与包括疏水性第二嵌段的疏水性聚合物反应；以及S2)使亲水性聚合物或疏水性聚合物与包括能够与硫醇基特异性结合的官能团的化合物反应。制备方法的各个步骤在其顺序方面可以改变。

步骤S1可以通过包含以下步骤来进行：将第一诱导官能团引入亲水性聚合物和疏水性聚合物中的一个的步骤；和使引入了第一诱导官能团的亲水性聚合物和疏水性聚合物中的一个与疏水性聚合物和亲水性聚合物中的另一个反应的步骤。

此外，步骤S2以通过包含以下步骤来进行：将第二诱导官能团引入亲水性聚合物和疏水性聚合物中的一个的步骤；和使引入了第二诱导官能团的亲水性聚合物和疏水性聚合物中的一个与包括能够与硫醇基特异性结合的官能团的化合物反应的步骤。这里，引入第二诱导官能团的步骤可以在步骤S1之前进行。另外，步骤S2还可以包括将第三诱导官能团引入到包括能够与硫醇基特异性结合的官能团的化合物的步骤。

特别地，用于制备根据实施方式的嵌段共聚物的方法可以包括以下步骤：S1-1)将第一诱导官能团和第二诱导官能团引入包含亲水性第一嵌段的亲水性聚合物中；S1-2)使包括第一诱导官能团和第二诱导官能团的亲水性聚合物与包括疏水性第二嵌段的疏水性聚合物反应，其中该反应通过第一诱导官能团进行；S2-1)将第三诱导官能团引入包括能够与硫醇基特异性结合的官能团的化合物中；以及S2-2)使亲水性聚合物、疏水性聚合物或其组合与引入了第三诱导官能团的包括能够与硫醇基特异性结合的官能团的化合物反应，其中该反应通过第三诱导官能团进行。制备方法的各个步骤在其顺序方面可以改变。例如，步骤S2-1可以在步骤S1-1之前进行。

亲水性聚合物是指包括上述亲水性第一嵌段并且是亲水性的聚合物。亲水性聚合物的数均分子量(Mn)没有特别限制，可以为500g/mol至5000g/mol，特别地为1000g/mol至3000g/mol或1500g/mol至2500g/mol。在亲水性聚合物的数均分子量小于500g/mol或大于5000g/mol的情况下，在特定的pH条件下，亲水性聚合物可能难以通过由亲水/疏水平衡引起的自组装来形成胶束；或即使形成了胶束，胶束也可能因溶于水而分解或可能沉淀。亲水性聚合物可以是，例如基于聚乙二醇的聚合物。

疏水性聚合物是指包括上述疏水性第二嵌段并且是疏水性的聚合物。疏水性聚合物的数均分子量(Mn)同样没有特别限制，可以为1500g/mol至27000g/mol、3000g/mol至13000g/mol、3000g/mol至10000g/mol或4500g/mol至8500g/mol。疏水性聚合物可以是，例如聚氨基酯、聚酰胺基胺或聚(氨基酯)(酰胺基胺)。由于这些聚合物具有如下性质：由于存在于其中的胺基，因此它们在水中的溶解度根据pH条件而变化，因此根据pH条件的变化，胶束结构可能形成或可能分解。疏水性聚合物可以根据本领域公知的方法来制备，并且可以例如通过，通过迈克尔(Michael)反应使双丙烯酸酯化合物或双丙烯酰胺化合物与基于胺的化合物进行聚合而获得。

包括能够与硫醇基特异性结合的官能团的化合物是指包括上述能够与硫醇基特异性结合的官能团的化合物。特别地，包括能够与硫醇基特异性结合的官能团的化合物可以是二硫化物、马来酰亚胺、烯烃、炔烃等。更特别地，该化合物可以是马来酰亚胺或马来酰亚胺炔，但不特别限于此。

第一诱导官能团是指用于引入亲水性聚合物或疏水性聚合物中以使亲水性聚合物和疏水性聚合物彼此连接的官能团，并且该第一诱导官能团可以根据存在于亲水性聚合物或疏水性聚合物中的官能团的类型来适当地选择。例如，在亲水性聚合物包括羟基基团并且疏水性聚合物包括胺基的情况下，烯基基团、炔基基团或丙烯酸酯基作为第一诱导官能团可以引入到亲水性聚合物的羟基基团位置，使得第一诱导官能团可以与疏水性聚合物的胺基反应，其中这种第一诱导官能团能够通过自由基聚合使亲水性聚合物和疏水性聚合物连接/共聚。另外，考虑到溶剂的选择、聚合温度等，第一诱导官能团，例如烯基基团、炔基基团或丙烯酸酯基，在亲水性聚合物和疏水性聚合物中可以容易地引入亲水性聚合物中。

第二诱导官能团是指用于引入亲水性聚合物或疏水性聚合物中以使亲水性聚合物或疏水性聚合物与包括能够与硫醇基特异性结合的官能团的化合物连接的官能团，并且该第二诱导官能团可以根据存在于亲水性聚合物或疏水性聚合物中的官能团的类型以及能够与硫醇基特异性结合的官能团的类型来适当地选择。例如，在亲水性聚合物包括羟基基团的情况下，可以将叠氮化物基作为第二诱导官能团引入到亲水性聚合物的羟基基团位置。

第三诱导官能团是指用于引入包括能够与硫醇基特异性结合的官能团的化合物中以使亲水性聚合物或疏水性聚合物与包括能够与硫醇基特异性结合的官能团的化合物连接的官能团，并且该第三诱导官能团可以根据存在于亲水性聚合物或疏水性聚合物中的官能团的类型以及能够与硫醇基特异性结合的官能团的类型来适当地选择。例如，在亲水性聚合物或疏水性聚合物中存在叠氮化物基的情况下，可以将烯基基团、炔基基团、丙烯酸酯基或二硫化物基作为第三诱导官能团引入包括能够与硫醇基特异性结合的官能团的化合物中。其中，烯基基团和叠氮化物基的优点在于，由于它们非常简单的反应条件，因此可以允许通过简单的方法容易地进行反应，例如通过点击化学进行反应。然而，本发明不特别限于此。

在步骤S1中，亲水性聚合物与疏水性聚合物的反应重量比可以为(1:20)至(20:1)，特别地为(1:10)至(10:1)、(1:10)至(5:1)、(1:5)至(5:1)、(1:5)至(3:1)、(1:5)至(2:1)或(1:5)至(1:1)。在反应重量比不在该范围内的情况下，最终嵌段共聚物中的疏水性嵌段太少会阻止胶束形式形成，并且可能导致亲水性聚合物和疏水性聚合物以溶解状态存在，或者太多的疏水性嵌段可能会阻止胶束形式形成，并可能导致亲水性聚合物和疏水性聚合物沉淀。此外，亲水性聚合物与疏水性聚合物的反应摩尔比可以为(1:5)至(5:1)，特别地为(1:4)至(4:1)、(1:3)至(3:1)、(1:2)至(3:1)或(1:1)至(3:1)。通过调节反应摩尔比，可以形成各种嵌段形式，包括双嵌段共聚物、三嵌段共聚物或高级嵌段共聚物。

对根据制备方法制备的共聚物的分子量范围没有特别限制，可以为1000g/mol至50000g/mol，并且特别地为2000g/mol至45000g/mol、3000g/mol至40000g/mol、4000g/mol至30000g/mol或5000g/mol至20000g/mol。在分子量小于1000g/mol的情况下，不仅嵌段共聚物难以在特定pH下形成胶束，而且即使形成了胶束，该胶束也会溶解在水中并且容易分解。另外，在分子量超过50000g/mol的情况下，由于亲水/疏水平衡的破坏，可能不会形成胶束并且在特定的pH下可能沉淀。

同时，在本发明的又一个实施方式中，提供一种用于制备包括上述嵌段共聚物的纳米颗粒的方法，该方法包括制备嵌段共聚物的步骤；以及混合该嵌段共聚物、溶剂和水溶液以形成纳米颗粒的步骤。例如，可以通过首先将嵌段共聚物和溶剂混合，然后使混合物与水溶液混合从而形成胶束，来进行纳米颗粒形成步骤。

对于溶剂，可以使用甲苯、氯仿、四氢呋喃、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、二氯甲烷等。另外，在胶束形成步骤中，可以单独或组合使用诸如搅拌、加热、超声扫描、使用乳化的溶剂蒸发、基质形成或使用有机溶剂进行透析的方法。

在本发明的又一个实施方式中，提供一种用于制备包括上述嵌段共聚物和药物的药物递送载体的方法，该方法包括：制备嵌段共聚物的步骤；以及将嵌段共聚物和药物混合以形成药物递送载体的步骤。例如，可以通过首先将嵌段共聚物、药物和溶剂混合以制备混合物，然后向混合物中添加水溶液以形成胶束，来进行药物递送载体形成步骤。溶剂和胶束形成方法如上所述。

另外，在本发明的又一个实施方式中，提供一种用于产生包括上述药物递送载体和免疫细胞的经修饰的细胞的方法，该方法包括：制备上述嵌段共聚物的步骤；以及将嵌段共聚物、药物和免疫细胞混合以形成经修饰的细胞的步骤。例如，可以通过形成包括嵌段共聚物和药物的纳米颗粒，然后使该纳米颗粒与免疫细胞混合来进行经修饰的细胞形成步骤。经修饰的细胞可以通过使免疫细胞表面上存在的硫醇基与特异性结合至纳米颗粒表面上暴露的硫醇基的官能团结合而形成。溶剂和纳米颗粒形成方法如上所述。

发明的实施方式

在下文中，提供了优选的实施例以帮助理解本发明。然而，对于本领域技术人员显而易见的是，以下实施例仅用于举例说明本发明，并且在本发明的范围和精神内可以做出各种改变和修改；并且显而易见的是，这种改变和修改属于所附权利要求的范围内。

实施例1.嵌段共聚物和药物递送载体的合成及其性能评价

实施例1.1.嵌段共聚物中包含亲水性第一嵌段的亲水性聚合物的合成

为了合成包括亲水性第一嵌段、疏水性第二嵌段和能够与硫醇特异性结合的官能团的嵌段共聚物，以与图2相同的方式首先合成用作包括亲水性嵌段的亲水性聚合物的丙烯酸酯-PEG-N

最后，将如此获得的HO-PEG-N

化合物1至化合物3的

实施例1.2.嵌段共聚物中包含疏水性第二嵌段的疏水性聚合物的合成

为了连续合成嵌段共聚物，以与图4相同的方式合成分子量为10000Da的Mal-PEG-PBAE-PEG-Mal，其用作包括疏水性第二嵌段的疏水性聚合物。

首先，将4,4'-三亚甲基二哌啶(TMDP)(M1，0.542g；2.578mmol)和1,6-己二醇二丙烯酸酯(HDDA)(M2，0.500g；2.210mmol)溶于10mL无水CH

实施例1.3.嵌段共聚物的合成

然后，将实施例1.1中合成的丙烯酸酯-PEG-N

最后，通过铜介导的点击化学将炔-马来酰亚胺(0.032g；0.230mmol)附接至N

化合物5和化合物6的

实施例1.4.药物递送载体的形成

为了形成包括嵌段共聚物和药物的药物递送载体(ReMi)，将在实施例1.3中合成的100mg的Mal-PEG-PBAE-PEG-Mal共聚物(化合物6)溶解在4mL DMSO中，并且向其中加入浓度为50μg/mL的抗癌药多柔比星(DOX)。随后，在剧烈搅拌混合物的同时滴加20mL蒸馏水，然后再搅拌30分钟。通过大小为3500Da的透析膜将该溶液相对于蒸馏水透析。将由此获得的ReMi冻干并储存。

实施例1.5.荧光随着酸度增加而增加的指示珠的合成

将胺修饰的聚苯乙烯珠(200nm，5.68×10

实施例1.6.药物递送载体的特征分析

为了证实实施例1.4中形成的药物递送载体(ReMi)是否具有依赖于pH变化的刺激响应性，在pH 11、pH 7.5和pH 5.5的条件下、以及在pH 7.5放置3天的条件下，通过动态光散射(DLS)计算平均水合尺寸分布。结果在图6中示出。

如图6所示，证实了ReMi仅在酸性条件下分解，因此显示出水合尺寸减小，并且从即使放置3天后水合尺寸也保持不变来看，证实了ReMi在常规条件下是稳定的。该结果也通过图7所示的透射电子显微镜图像来证实。

实施例1.7.药物递送载体中药物释放控制的特征分析

为了证实在实施例1.4中形成的药物递送载体(ReMi)是否显示出依赖于pH变化的药物释放行为的变化，通过测量多柔比星(DOX)在特征荧光波长(ex＝495nm；ex＝595nm)下的荧光来检查ReMi随着pH的药物释放行为。将ReMi分别在设定为pH 7.5和pH 5.5的水溶液条件下给药，并且通过荧光光度计测量通过透析发出的DOX的荧光强度。结果在图8中示出。

从图8看出，在酸性环境下，在48小时内从ReMi释放了70％的药物，而在中性条件下，在相同时间内仅有约20％的药物释放到了外部。

实施例1.8.对药物递送载体的细胞附着的特征分析

为了证实实施例1.4中形成的药物递送载体(ReMi)是否可以成功地附着至免疫细胞上，将ReMi与自然杀伤细胞(NK细胞)一起孵育，然后在30分钟后收集细胞以制备显微镜样品。用荧光显微镜观察由此制备的显微镜样品。结果在图9中示出。

如图9所示，证实了ReMi成功地附着于免疫细胞的表面。

实施例2.鉴定在使用时药物递送载体是否识别并攻击癌细胞

将实施例1.4中形成的药物递送载体(ReMi)附着于自然杀伤细胞的表面，然后连续4小时拍摄荧光显微镜图像。其图像在图10和图11中示出。这里，用根据实施例1.5制备的、荧光强度随酸度的增加而增加的指示珠来修饰自然杀伤细胞的表面。

如图10所示，证实了在自然杀伤细胞攻击癌细胞的情况下，自然杀伤细胞的周围环境的酸度逐渐增加。

如图11所示，通过荧光显微镜连续观察了携带有抗癌药的ReMi 4小时，结果，通过增加的荧光强度，证实了当自然杀伤细胞开始识别并攻击癌细胞时，抗癌药多柔比星从ReMi中释放出来。

也就是说，已经确定，在免疫细胞识别并攻击癌细胞的情况下，免疫细胞周围的酸度增加，这使得药物从药物递送载体中释放出来。

实施例3.药物递送载体的稳定性评估

通过细胞毒性测定鉴定了药物递送载体的稳定性。将8000个A549-LUC细胞或24000个NK-92MI细胞分配到96孔细胞培养板中，然后孵育1天。随后，向每个孔中加入20μL携带有0.3μM多柔比星的ReMi并孵育12小时。然后，通过MTS细胞毒性测定检查细胞死亡，结果示于图12。

如图12所示，证实了ReMi本身并不破坏癌细胞和自然杀伤细胞。

实施例4.药物递送载体增强免疫细胞抗癌作用的鉴定

通过细胞毒性测定对由药物递送载体增强的免疫细胞的抗癌作用进行鉴定。将8000个A549-LUC细胞分配在96孔细胞培养板中，然后孵育1天。然后，以每孔1×10

[表1]

如图13所示，证实了在给药抑制自然杀伤细胞的裂解性颗粒形成的CiliobrevinD(CD)(NK+CD或ReNK+CD)的情况下，自然杀伤细胞的整体抗癌能力降低。这很好地说明了通过裂解性颗粒来实现药物递送的系统的必要性。另一方面，证实了ReNK显示出相当于70％的抗癌能力，这表明同时递送抗癌免疫疗法和抗癌化学疗法是有效的。还证实了在附着至自然杀伤细胞的状态下给药携带有药物的药物递送载体的情况下，可以同时实施免疫疗法和化学疗法的药物递送系统，从而表现出增加的抗癌作用。

实施例5.通过动物模型鉴定药物递送载体的抗癌作用

对雌性Balb/c-nu/nu小鼠以1×10

[表2]

如图14所示，在对已给予癌细胞的小鼠给药ReNK的情况下，发现IFN-γ水平显著升高，这意味着自然杀伤细胞的细胞毒性被积极地展现出来。另外，在该体内实验中，与实施例4的体外实验不同，与NK+DOX相比，ReNK表现出显著优异的结果，并且该结果理解为是由于以下事实：药物递送载体附着于自然杀伤细胞，自然杀伤细胞靶向癌细胞，从而释放药物。因此，证实了ReMi附着于自然杀伤细胞，从而增强了自然杀伤细胞并因此显示出显著提高的抗癌作用。

实施例6.通过动物模型鉴定药物递送载体的转移性致瘤性抑制作用

对雌性Balb/c-nu/nu小鼠以1×10

如图15和图16所示，发现与其他实验组相比，给药ReNK的实验组的癌的大小显著减小，这证实了显示出优异的转移性致瘤性抑制作用。

另外，如图17至图19所示，发现与其他实验组相比，给药ReNK的实验组的癌细胞发光也较低，这表明免疫细胞在体内和体外均被增强以抑制转移性致瘤性。

从实施例1至实施例6的结果证实了，本发明的药物递送载体以胶束结构附着在自然杀伤细胞的表面上，并且使自然杀伤细胞变成具有优异的癌细胞杀伤能力的强免疫细胞，并且发现这种强大的免疫细胞显示出优异的抗癌作用。