脂肪细胞介导的抗癌治疗剂的递送

摘要

本文公开了与脂肪细胞用于抗癌治疗剂的缓释和癌症治疗的用途有关的组合物和方法。一方面，本文公开了工程化脂肪细胞，其包含抗癌前药(诸如，例如阿霉素前药)和共轭脂肪酸(诸如，例如共轭亚油酸的一种或多种异构体，包括但不限于9cis、11trans、10trans和/或12cis)。

说明书

本申请要求2018年11月1日提交的美国临时申请号62/754,280的权益，该美国临时申请全文以引用方式并入本文。

背景技术

癌细胞通过募集非恶性细胞来产生支持性微环境，以用于肿瘤发展。最近，肿瘤相关的脂肪细胞(TAA)已被认为是内分泌细胞和炎性细胞，其通过分泌包括激素、生长因子和细胞因子在内的脂肪因子促进血管生成。这些脂肪因子导致淋巴细胞和巨噬细胞募集并在肿瘤中浸润，因此产生慢性低度炎症。在这种肿瘤微环境中，脂肪细胞的脂质小滴中的脂肪酸可通过脂肪酸结合蛋白4(FABP4)为癌细胞提供能量，所述脂肪酸结合蛋白4是肿瘤组织中脂解作用增强所致。此外，癌周脂肪组织促进募集源自循环单核细胞的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)，随后诱导TAM转变为M2表型。因此，在调节与肿瘤微环境具有高度相容性的肿瘤生长方面，脂肪细胞表现出了高潜力。所需要的是能够靶向脂肪细胞微环境并利用触发脂解作用的癌组织提供治疗剂释放的新型治疗剂。

发明内容

本文公开了方法和组合物，所述方法和组合物涉及与脂肪细胞用于抗癌治疗剂的缓释和癌症治疗的用途有关的组合物和方法。

一方面，本文公开了工程化脂肪细胞，其包含抗癌前药(诸如，例如阿霉素前药)和共轭脂肪酸(诸如，例如共轭亚油酸的一种或多种异构体，包括但不限于9cis、11trans、10trans和/或12cis)。一方面，前药可以经由环境反应性接头(诸如，例如pH敏感性、酶促性和/或活性氧应答性接头)与共轭脂肪酸缀合。一方面，共轭脂肪酸包括瘤胃酸(9cis、11trans亚油酸)。因此，一方面，是任何前述方面的工程化脂肪细胞，其中所述抗癌前药包括阿霉素前药和瘤胃酸。

本文还公开了任何前述方面的脂肪细胞，其进一步包含脂质转运蛋白(诸如，例如)脂肪酸结合蛋白4(FABP4)。

一方面，本文公开了治疗、抑制、减少和/或预防受试者中的癌症或转移的方法，其包括向受试者施用任何前述方面的工程化脂肪细胞。

本文还公开了向肿瘤提供抗癌剂的缓释的方法，其包括将所述抗癌剂与共轭脂肪酸缀合，将所述缀合的抗癌剂封装在脂肪细胞中以制成工程化脂肪细胞，并将所述工程化脂肪细胞递送至肿瘤。

附图说明

并入本说明书中并构成本说明书的一部分的附图阐明几个实施例，并且与说明一起阐明所公开的组合物和方法。

图1A、1B、1C、1D、1E、1F、1G、1H、1I、1J和1K示出了RA逆转了脂肪细胞的恶性作用。总体项目方案。图1A示出了pDox和RA被封装到脂肪细胞中，并进一步进行肿瘤内或术后注射。图1B示出了Dox前药和瘤胃酸的结构。图1C示出了pDox+RA@脂肪细胞与肿瘤细胞之间的串扰。图1D示出了pDox+RA@脂肪细胞的治疗效果。图1E、1F、1G和1H示出了正常脂肪细胞可以在Transwell系统中促进肿瘤细胞生长，其包括B16F10(1E)、A375(1F)、E0771(1G)和MCF-7(1H)。图1I和IJ示出了在分化期间添加RA或CLA时，新的脂肪细胞可以抑制B16F10(1I)和E0771(1J)细胞生长。图1K示出了通过蛋白质印迹法测定了在同一Transwell系统中B16F10的PD-L1表达。所有条形表示平均值±s.d.(n＝3)。执行未配对的学生t检验。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

图2A、2B、2C、2D、2E、2F、2G、2H、2I、2J、2K和2L示出了RA抑制B16F10肿瘤的肿瘤生长和术后复发。图2A、2B和2C示出在肿瘤内注射RA@脂肪细胞后监测肿瘤生长，如对照组和治疗组的个体(对照(2A)和RA@脂肪细胞(2B))以及平均(2C)肿瘤生长动力学所示。图2D、2E和2F示出通过流式细胞术测定了PD-L1表达(2D)、CD8 T细胞(2E)群体和Treg(2F)的群体。图2G、2H和2I示出了术后肿瘤的生长由个体(对照(2G)和RA@脂肪细胞(2H))和平均(2I)肿瘤生长动力学指示。图2J、2K和2L示出通过流式细胞术测定了PD-L1表达(2J)、CD8 T细胞(2K)群体和Treg(2L)的群体；2c、2i条形表示平均值±s.e.m.(n＝6)。进行了双因素ANOVA分析来做所述分析。2d、2e、2f、2j、2k、2l条形表示平均值±s.d.(n＝3)。执行未配对的学生t检验。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

图3A、3B、3C、3D、3E和3F示出了在肿瘤内模型中RA@脂肪细胞的抗肿瘤作用。图3A示出了对照组和RA@脂肪细胞治疗组中的B16F10肿瘤的体内生物发光成像。图3B示出了对照组和RA@脂肪细胞治疗组的体重。图3C示出了对照组和RA@脂肪细胞治疗组的存活曲线。用于PD-L1阴性细胞(3D)、CD8 T细胞(3E)和Treg(3F)的流式细胞术的代表图形。

图4A、4B、4C、4D、4E和4F示出了对照组和RA@脂肪细胞治疗组中B16F10肿瘤的(4A)体内生物发光成像。图4B示出了对照组和RA@脂肪细胞治疗组的存活曲线。图4C示出了对照组和RA@脂肪细胞治疗组的体重。用于PD-L1阴性细胞(4D)、CD8 T细胞(4E)和Treg(4F)的流式细胞术的代表图形。

图5示出了阿霉素前药的合成。

图6A、6B、6C、6D、6E、6F、6G、6H、6I、6J、6K、6L和6M示出了用于基于脂肪细胞的递送系统的阿霉素前药的表征。a，模拟pDox与FABP4结合。b、c，通过荧光偏振测定Dox(b)与pDox(c)的结合亲和力。d-g，在B16F10(d)、A375(e)、E0771(f)和MCF-7(g)细胞系中测定了与Dox相比的pDox的细胞毒性。h-j，将pDox和Dox进一步封装到脂肪细胞中，并在B16F10(h)和E0771(i)细胞系中评估了这些载药的脂肪细胞的抗癌作用，而使用B16F10细胞系(j)评估了FABP4抑制剂对pDox的作用。k，通过油红染色确定Dox和pDox对脂质蓄积的抑制作用。l，通过荧光显微镜(比例尺：20μM)确定pDox的定位。m，在Transwell系统中共培养B16F10细胞和pDox@脂肪细胞后，通过流式细胞术测定pDox在癌细胞中的摄取效力。所有条形均表示平均值±s.d(n＝3)。执行未配对的学生t检验。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

图7A、7B、7C、7D、7E、7F、7G、7H、7I和7J示出了RA和pDox对癌症疗法的联合作用。a、b，在B16F10(a)和E0771(b)细胞系中确定了RA和Dox或pDox联合疗法的抗癌作用。c，通过油红染色评估脂肪细胞中的脂质蓄积。d，比较RA@脂肪细胞中Dox和pDox的装载能力。e，RA增强了共焦荧光显微镜(比例尺：20μM)下测定的装载能力。f，通过流式细胞术测定通过FABP4的Transwell系统中B16F10和脂肪细胞的串扰。g，通过MTT测定法测定Transwell系统中pDox+RA@脂肪细胞的细胞毒性。h-j，在Transwell系统中测定脂肪细胞中Dox(h)和pDox(i)的释放曲线以及游离脂肪酸(j)的浓度。所有条形表示平均值±s.d.(n＝3)。c、g，执行了未配对的学生t检验。*P<0.05，**P<0.01。

图8A、8B、8C、8D、8E和8F示出了局部载药的脂肪细胞抑制了肿瘤生长。a，个体肿瘤生长动力学。b，每组中的平均肿瘤大小。c，不同治疗的存活曲线。d-f，通过流式细胞术定量PD-L1阳性细胞(d)、CD8细胞(e)和Treg(f)的群体；b，条形表示平均值±s.e.m.(n＝6-7)。进行了双因素ANOVA分析来做所述分析。d-f，条形表示平均值±s.d。(n＝4)。执行未配对的学生t检验。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

图9A、9B、9C、9D、9E和9F示出了用于抑制B16F10肿瘤的肿瘤复发的载药的脂肪细胞。a，个体肿瘤生长动力学。b，每组中的平均肿瘤大小。c，不同治疗的存活曲线。d-f，通过流式细胞术定量CD8细胞(d)、PD-L1阳性细胞(e)和Treg(f)的群体。b，条形表示平均值±s.e.m.(n＝6-8)。进行了双因素ANOVA分析来做所述分析。d-f，条形表示平均值±s.d。(n＝4)。执行未配对的学生t检验。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001。

具体实施方式

在公开和描述本发明的化合物、组合物、制品、装置和/或方法之前，应当理解，除非另有规定，否则它们不限于特定的合成方法或特定的重组生物技术方法，或者除非另有规定，否则它们不限于特定的试剂，因为它们当然会有所不同。另外应当了解，本文使用的术语只是为了描述特定实施例的目的，并非旨在进行限制。

A.定义

如在说明书和所附权利要求书中所用，单数形式“一个”“一种”“该”和“所述”包括复数指代物，除非上下文另外明确规定不是这样。因此，例如，对“药物载体”的提及包括两个或更多这样的载体的混合物等。

范围可在本文中被表示为从“约”一个特定值和/或至“约”另一个特定值。当表达此类范围时，另一个实施例包括从一个特定值和/或至另一个特定值。相似地，在利用前词“约”将值表示为近似值时，应当理解，该特定值形成另一个实施例。还应当理解，每个范围的端点在相对于另一个端点和独立于另一个端点方面都是显著的。还应当理解，本文公开了许多值，并且每个值在本文中除值本身之外还被公开为“约”该特定值。例如，如果公开了值“10”，则还公开了“约10”。还应理解，当公开了“小于或等于”值、“大于或等于”值以及时，也公开了如本领域技术人员适当理解的值之间的可能范围。例如，如果公开了值“10”，则还公开了“小于或等于10”以及“大于或等于10”。还应理解，在整个申请中，数据以多种不同格式提供，并且该数据表示端点和起点，以及数据点的任何组合的范围。例如，如果公开了特定数据点“10”和特定数据点15，则应理解认为公开了大于、大于或等于、小于、小于或等于以及等于10和15以及介于10和15之间。还应理解，还公开了两个特定单元之间的每个单元。例如，如果公开了10和15，则还公开了11、12、13和14。

在本说明书及随后的权利要求书中，将引用多个术语，将其定义为具有以下含义：

“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，并且该描述包括所述事件或情况发生的情况和所述事件或情况不发生的情况。

对受试者的“给药”包括向受试者引入或递送药剂的任何途径。可通过任何合适的途径进行给药，包括口服、局部、静脉、皮下、经皮、穿皮、肌肉内、关节内、肠外、小动脉内、皮内、脑室内、颅内、腹腔内、病灶内、鼻内、直肠、阴道、通过吸入、通过植入的存贮器、肠外(例如，皮下、静脉、肌肉、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、腹膜内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术)等。如本文所用，“并行给药”、“联合给药”、“同时给药(“simultaneousadministration”或“administered simultaneously”)”意指化合物在同一时间点给药或基本上紧接着给药。在后一种情况下，该两种化合物的给药时间足够接近，以至于观察到的结果与在同一时间点给予化合物时获得的结果不可区分。“全身给药”是指通过将药剂引入或递送到受试者身体的广泛区域(例如，超过身体的50％)的途径，例如通过进入循环或淋巴系统，将药剂引入或递送给受试者。相比之下，“局部给药”是指通过一条途径向受试者引入或递送药剂，该途径将该药剂引入或递送到紧邻给药点的一个或多个区域，并且在治疗上不系统地大量引入该药剂。例如，局部施用的药剂在局部施用点的附近很容易被检测到，但在受试者身体的远侧部位不可检测到或检测到的量可以忽略不计。给药包括自我给药和他人给药。

“生物相容的”通常是指材料及其任何代谢物或降解产物通常对受试者无毒并且不对受试者造成显著的副作用。

“包含”意指组合物、方法等包括所提到的元素，但不排除其他元素。当用于定义组合物和方法时，“基本上由...组成”应指包括所提到的元素，但不包括对组合具有任何重要意义的其他元素。因此，基本上由本文所定义的元素组成的组合物不排除来自分离和纯化方法的痕量污染物和药学上可接受的载体，诸如磷酸盐缓冲盐水、防腐剂等。“由...组成”应指排除多于其他成分的痕量元素和用于给予本发明的组合物的实质性方法步骤。由这些过渡术语中的每个所定义的实施例都在本发明的范围内。

“对照”是在实验中用于比较目的的替代受试者或样品。对照可为“阳性对照”或“阴性对照”。

“控释”或“缓释”是指为了在体内达到所需的药代动力学曲线，以可控的方式从给定剂型释放药剂。“控释”药剂递送的一个方面是操纵制剂和/或剂型以建立所需的药剂释放动力学的能力。

药剂的“有效量”是指药剂提供所需的效果的足够数量。“有效的”药剂的量将在不同受试者之间变化，取决于受试者的年龄和一般情况、特定的一种或多种药剂等许多因素。因此，并不总是能够指定量化的“有效量”。然而，任何受试者病例中的适当的“有效量”可由本领域的普通技术人员使用常规实验方法确定。此外，如本文所用，并且除非另外特别说明，否则药剂的“有效量”也可以指涵盖治疗有效量和预防有效量的量。实现治疗效应所需的药剂的“有效量”可根据诸如受试者的年龄、性别和体重等因素而变化。可调整剂量方案以提供最佳治疗应答。例如，可每天施用若干分次剂量，或者可按照治疗情况的紧急程度按比例减少剂量。

“减少”可以指导致较少的症状数量、疾病、组合物、病症或活性的任何变化。当含有该物质的基因产物的遗传产量与不含该物质的基因产物的遗传产量相比较小时，物质也被理解为减少基因的遗传产量。此外，举例来说，减少可以是一种疾患症状的改变，使得症状比以前观察到的要少。减少可以是统计学上显著的量的病症、症状、活性、组合物中的任何个体、中位数或平均减少。因此，只要减少非常显著，减少可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

“抑制(Inhibit、inhibiting和inhibition)”意指降低活性、应答、病症、疾病或其他生物学参数。这可以包括但不限于活性、应答、病症或疾病的完全消融。这也可以包括，例如，与未经处理的或对照水平相比，活性、应答、病症或疾病减少10％。因此，与未经处理的或对照水平相比，减少量可以是10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或介于两者之间的任何减少量。

“增加”可以指导致更大量的症状、疾病、组合物、病症或活性的任何变化。增加可以是统计学上显著的量的病症、症状、活性、组合物方面的任何个别的、中位数的或平均的增加。因此，只要增加非常显著，增加可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％的增加。

“药学上可接受的”组分可指并非生物学上或以其他方式不可取的组分，即该组分可掺入本发明的药物制剂中并给予如本文所述的受试者，而不引起显著的不良生物效应或以有害的方式与包含该组分的制剂的任何其他组分相互作用。当用于提及对人体的给药时，该术语通常意味着该组分已达到毒理学和制造试验的要求标准，或者它包括在美国食品药品监督管理局所制定的非活性成分指南中。

“药学上可接受的载体”(有时称为“载体”)意指可用于制备通常安全且无毒的药物或治疗组合物的载体或赋形剂，并且包括兽医和/或人药用或治疗用的可接受的载体。术语“载体”或“药学上可接受的载体”可以包括但不限于磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液(诸如油/水或水/油乳液)和/或各种类型的润湿剂。如本文所用，术语“载体”包括但不限于任何赋形剂、稀释剂、填充剂、盐、缓冲液、稳定剂、增溶剂、脂质或本领域中熟知的用于药物制剂的其他材料，并且如本文中进一步描述。

“药理活性”(或仅“活性”)，正如在“药理活性”衍生物或类似物中所用的那样，可指具有与母体化合物相同类型的药理活性并且程度大致相等的衍生物或类似物(例如，盐、酯、酰胺、缀合物、代谢物、异构体、片段等)。

“聚合物”是指相对高分子量的天然或合成有机化合物，其结构可由重复的小单元、单体表示。聚合物的非限制性实例包括聚乙烯、橡胶、纤维素。合成聚合物通常由单体的加成或缩聚形成。术语“共聚物”是指由两种或更多种不同的重复单元(单体残基)形成的聚合物。以举例的方式并且非限制性地，共聚物可为交替共聚物、无规共聚物、嵌段共聚物或接枝共聚物。还可设想，在某些方面，嵌段共聚物的各种嵌段链段本身可包含共聚物。术语“聚合物”包括所有形式的聚合物，包括但不限于天然聚合物、合成聚合物、均聚物、杂聚物或共聚物、加成聚合物等。

“治疗剂”是指任何具有有益生物学效应的组合物。有益的生物学效应包括治疗效应和预防效应，其中治疗效应例如治疗疾患或其他不希望的生理病症，预防效应例如预防疾病或其他不良生理症状(例如，非免疫原性癌症)。该术语还涵盖本文中具体提及的有益剂在药学上可接受的药理活性衍生物，包括但不限于盐、酯、酰胺、前体药剂、活性代谢物、异构体、片段、类似物等。当使用术语“治疗剂”时，或者当明确标识特定的药剂时，应当理解，该术语包括药剂本身以及在药学上可接受的药理活性盐、酯、酰胺、前体药剂、缀合物、活性代谢物、异构体、片段、类似物等。

组合物(例如，包含药剂的组合物)的“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是指有效地达到所需的治疗结果的量。在一些实施例中，所需的治疗结果是控制I型糖尿病。在一些实施例中，所需的治疗结果是控制肥胖。给定治疗剂的治疗有效量通常将根据诸如所治疗的疾患或疾病的类型和严重程度以及受试者的年龄、性别和体重等因素而变化。术语还可指有效促进所需的治疗效应(如疼痛缓解)的治疗剂的量或治疗剂的递送速率(例如，随时间推移的量)。精确所需的治疗效应将根据待治疗的病症、受试者的耐受性、待给予的药剂和/或药剂制剂(例如，治疗剂的效力、制剂中的药剂浓度等)，以及本领域中的普通技术人员所理解的各种其他因素而变化。在一些情况下，在向受试者连续几天、几周或几年给予多种剂量的该组合物后，可获得所需的生物学或医学应答。

在整个本专利申请中，参考各种出版物。这些出版物的全部公开内容据此以引用方式并入本申请，以便更全面地描述本申请所涉及的技术现状。所公开的参考文献也单独并且具体地以引用方式并入本文，参考文献中包含的材料在参考文献所依据的句子中予以讨论。

B.组合物

本发明公开了用于制备本发明所公开的组合物，以及在本文所公开的方法中使用的组合物本身。本文公开了这些及其他材料，并且应当理解，当本发明公开这些材料的组合、子集、相互作用、基团等时，虽然可能未明确公开这些化合物的各种不同的个体和集体组合和排列的具体参考，但是其中每个在本文中均得到特别考虑和描述。例如，如果公开并且讨论了特定脂肪细胞封装的抗癌药物并且讨论了可以对包括脂肪细胞封装的抗癌药物的多个分子进行多种修改，除非指明是相反情况，否则具体考虑到脂肪细胞封装的抗癌药物的各种和每种组合和排列以及可能的修改。因此，如果公开了一类分子A、B和C以及一类分子D、E和F以及组合分子的实例，则公开了A-D，那么即使未单独引用其中每一项，也认为公开了个体和集体考虑的含义组合A-E、A-F、B-D、B-E、B-F、C-D、C-E和C-F。同样，还公开了这些组合的任何子集或组合。因此，例如，将认为公开了A-E、B-F和C-E的子组。该概念适用于本申请的所有方面，包括但不限于制备和使用本发明所公开的组合物的方法中的步骤。因此，如果存在可以执行的各种附加步骤，则应当理解，这些附加步骤中的每个均可用本发明所公开的方法的任何特定实施例或实施例的组合来执行。

在这项工作中，脂肪细胞被用作药物递送贮库，用于化学治疗剂的缓释以增强抗癌疗效并且同时调节肿瘤免疫微环境，以促进效应子CD4和CD8 T细胞浸润(图1a)。因此，在一个方面，本文公开了工程化脂肪细胞，其包含抗癌剂和共轭脂肪酸。

应当理解并且在本文中预期的是，所公开的工程化脂肪细胞包含抗癌剂，其用于将缓释的治疗剂直接递送至癌细胞。应当理解并且在本文中预期的是，治疗性抗癌剂可包括抗体、小分子、肽、多肽、模拟肽、聚合物或核酸。例如，治疗剂载有一种或多种化学治疗剂。可用于所公开的水凝胶骨架的化学治疗剂可包括本领域已知的任何抗癌剂，包括但不限于玻玛西林(Abemaciclib)、醋酸阿比特龙、Abitrexate(甲氨蝶呤)、Abraxane(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、AC-T、Adcetris(本妥昔单抗)、ADE、曲妥珠单抗抗体-药物偶联物(Ado-Trastuzumab Emtansine)、亚德里亚霉素(盐酸阿霉素)、马来酸阿法替尼、Afinitor(依维莫司)、Akynzeo(奈妥吡坦和盐酸帕洛诺司琼)、Aldara(咪喹莫特)、阿地白介素、Alecensa(阿来替尼)、阿来替尼(Alectinib)、阿仑单抗、爱宁达(Alimta)(培美曲塞二钠)、Aliqopa(Copanlisib Hydrochloride，盐酸柯帕尼西布)、注射用Alkeran(盐酸美法仑)、Alkeran片(美法仑)、Aloxi(盐酸帕洛诺司琼)、Alunbrig(布吉他滨)、Ambochlorin(苯丁酸氮芥)、Amboclorin(苯丁酸氮芥)、氨磷汀、氨基乙酰丙酸、阿那曲唑、阿瑞匹坦、阿可达(帕米膦酸二钠)、瑞宁得(Arimidex)(阿那曲唑)、阿诺新(Aromasin)(依西美坦)、Arranon(奈拉滨)、三氧化二砷、Arzerra(奥法木单抗)、天冬酰胺酶菊欧文氏菌(Asparaginase Erwinia chrysanthemi)、阿特珠单抗、阿瓦斯汀(贝伐单抗)、阿维单抗(avelumab)、阿昔替尼、阿扎胞苷、Bavencio(阿维单抗)、BEACOPP、Becenum(卡莫司汀)、Beleodaq(贝利司他)、贝利司他、盐酸苯达莫司汀、BEP、Besponsa(奥英妥珠单抗)、贝伐单抗、贝沙罗汀、百克沙(托西莫单抗和碘I 131托西莫单抗)、比卡鲁胺、BiCNU(卡莫司汀)、博来霉素、博纳吐单抗、Blincyto(博纳吐单抗)、硼替佐米、Bosulif(博舒替尼)、博舒替尼、本妥昔单抗、布加替尼、BuMel、白消安、白舒非(白消安)、卡巴他赛、Cabometyx(卡博替尼-S-苹果酸酯)、卡博替尼-S-苹果酸酯、CAF、Campath(阿仑单抗)、Camptosar(盐酸伊立替康)、卡培他滨、CAPOX、Carac(氟尿嘧啶-外用)、卡铂、卡铂-紫杉醇、卡非佐米、Carmubris(卡莫司汀)、卡莫司汀、卡莫司汀植入物、康士得(比卡鲁胺)、CEM、色瑞替尼、柔红霉素(盐酸道诺霉素)、Cervarix(HPV二价重组疫苗)、西妥昔单抗、CEV、苯丁酸氮芥、苯丁酸氮芥-强的松、CHOP、顺铂、克拉屈滨、Clafen(环磷酰胺)、氯法拉滨、Clofarex(氯法拉滨)、Clolar(氯法拉滨)、CMF、考比替尼、Cometriq(卡博替尼-S-苹果酸酯)、盐酸柯帕尼西布、COPDAC、COPP、COPP-ABV、Cosmegen(放线菌素)、Cotellic(考比替尼)、克唑替尼、CVP、环磷酰胺、Cyfos(异环磷酰胺)、Cyramza(雷莫芦单抗)、阿糖胞苷、阿糖胞苷脂质体、Cytosar-U(阿糖胞苷)、Cytoxan(环磷酰胺)、达拉菲尼、达卡巴嗪、达克金(地西他滨)、放线菌素、达雷木单抗、达拉他滨(达雷木单抗)、达沙替尼、盐酸道诺霉素、盐酸道诺霉素和阿糖胞苷脂质体、地西他滨、去纤苷酸钠、Defitelio(去纤苷酸钠)、地加瑞克、地尼白介素、地诺单抗、DepoCyt(阿糖胞苷脂质体)、地塞米松、盐酸地拉佐生、地努妥昔单抗、多西他赛、Doxil(盐酸阿霉素脂质体)、盐酸阿霉素、盐酸阿霉素脂质体、Dox-SL(盐酸阿霉素脂质体)、DTIC-Dome(达卡巴嗪)、德瓦鲁单抗、Efudex(氟尿嘧啶-外用)、Efudex(拉布立酶)、Ellence(盐酸表柔比星)、埃罗妥珠单抗、乐沙定(奥沙利铂)、伊屈波帕、Emend(阿瑞匹坦)、Empliciti(埃罗妥珠单抗)、甲磺酸恩西地平、恩杂鲁胺、盐酸表柔比星、EPOCH、爱必妥(西妥昔单抗)、甲磺酸艾日布林、Erivedge(维莫德吉)、盐酸埃罗替尼、Erwinaze(天冬酰胺酶菊欧文菌)、Ethyol(氨磷汀)、Etopophos(磷酸依托泊苷)、依托泊苷、磷酸依托泊苷、Evacet(盐酸阿霉素脂质体)、依维莫司、Evista(盐酸雷洛昔芬)、Evomela(盐酸美法仑)、依西美坦、5-FU(氟尿嘧啶-注射液)、5-FU(氟尿嘧啶-外用)、法乐通(托瑞米芬)、Farydak(帕比司他)、Faslodex(氟维司群)、FEC、Femara(来曲唑)、非格司亭、Fludara(氟达拉滨磷酸盐)、氟达拉滨磷酸盐、Fluoroplex(氟尿嘧啶-外用)、氟尿嘧啶注射液、氟尿嘧啶-外用、氟他胺、Folex(甲氨蝶呤)、Folex PFS(甲氨蝶呤)、FOLFIRI、FOLFIRI-贝伐单抗、FOLFIRI-西妥昔单抗、FOLFIRINOX、FOLFOX、Folotyn(普拉曲沙)、FU-LV、氟维司群、Gardasil(重组HPV四价疫苗)、Gardasil 9(重组HPV非价疫苗)、Gazyva(奥比妥珠单抗)、吉非替尼、盐酸吉西他滨、吉西他滨-顺铂、吉西他滨-奥沙利铂、吉妥单抗、Gemzar(盐酸吉西他滨)、Gilotrif(马来酸阿法替尼)、Gleevec(甲磺酸伊马替尼)、Gliadel(卡莫司汀植入物)、Gliadel Wafer(卡莫司汀植入物)、谷卡匹酶、醋酸戈舍瑞林、Halaven(甲磺酸艾日布林)、Hemangeol(盐酸普萘洛尔)、Herceptin(曲妥单抗)、重组HPV二价疫苗、重组HPV非价疫苗、重组HPV四价疫苗、Hycamtin(盐酸拓扑替康)、Hydrea(羟基脲)、羟基脲、Hyper-CVAD、Ibrance(帕博西尼)、替伊莫单抗、依鲁替尼、ICE、Iclusig(盐酸帕纳替尼)、Idamycin(盐酸伊达比星)、盐酸伊达比星、Idelalisib、Idhifa(甲磺酸恩西地平)、Ifex(异环磷酰胺)、异环磷酰胺、Ifosfamidum(异环磷酰胺)、IL-2(阿地白介素)、甲磺酸伊马替尼、Imbruvica(依鲁替尼)、Imfinzi(德瓦鲁单抗)、咪喹莫特、Imlygic(Talimogene Laherparepvec)、Inlyta(阿昔替尼)、Inotuzumab Ozogamicin、干扰素α-2b、重组白介素-2(阿地白介素)、内含子A(重组干扰素α-2b)、碘I 131托西莫单抗和托西莫单抗、伊匹单抗、Iressa(吉非替尼)、盐酸伊立替康、盐酸伊立替康脂质体、Istodax(罗米地辛)、伊沙匹隆、柠檬酸伊沙佐米、Ixempra(伊沙匹隆)、Jakafi(磷酸鲁索替尼)、JEB、Jevtana(卡巴他赛)、Kadcyla(Ado-曲妥单抗)、Keoxifene(盐酸雷洛昔芬)、Kepivance(帕利夫明)、Keytruda(派姆单抗)、Kisqali(瑞博西尼)、Kymriah(Tisagenlecleucel)、Kyprolis(卡非佐米)、醋酸兰瑞肽、二甲苯磺酸拉帕替尼、Lartruvo(Olaratumab)、来那度胺、甲磺酸来乐伐替尼、Lenvima(甲磺酸乐伐替尼)、来曲唑、亚叶酸钙、Leukeran(苯丁酸氮芥)、醋酸亮丙瑞林、Leustatin(克拉屈滨)、Levulan(氨基乙酰丙酸)、Linfolizin(苯丁酸氮芥)、LipoDox(盐酸阿霉素脂质体)、洛莫司汀、Lonsurf(三氟尿苷和盐酸地匹福林)、Lupron(醋酸亮丙瑞林)、Lupron Depot(醋酸亮丙瑞林)、Lupron Depot-Ped(醋酸亮丙瑞林)、Lynparza(奥拉帕尼)、Marqibo(硫酸长春新碱脂质体)、Matulane(盐酸丙卡巴肼)、盐酸氮芥、醋酸甲地孕酮、Mekinist(曲美替尼)、美法仑、盐酸美法仑、巯基嘌呤、美司钠、Mesnex(美司钠)、Methazolastone(替莫唑胺)、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤LPF(甲氨蝶呤)、溴化甲基纳曲酮、Mexate(甲氨蝶呤)、Mexate-AQ(甲氨蝶呤)、米哚妥林、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、Mitozytrex(丝裂霉素C)、MOPP、Mozobil(普乐沙福)、Mustargen(盐酸氮芥)、突变霉素(丝裂霉素C)、Myleran(白消安)、Mylosar(阿扎胞苷)、Mylotarg(吉妥单抗)、纳米颗粒紫杉醇(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、Navelbine(酒石酸长春瑞滨)、耐昔妥珠单抗、奈拉滨、Neosar(环磷酰胺)、马来酸来那替尼、Nerlynx(马来酸来那替尼)、奈妥吡坦和盐酸帕洛诺司琼、Neulasta(培非格司亭)、Neupogen(非格司亭)、Nexavar(甲苯磺酸索拉非尼)、Nilandron(尼鲁米特)、尼洛替尼、尼鲁米特、Ninlaro(柠檬酸伊沙佐米)、甲苯磺酸尼拉帕尼一水合物、纳武单抗、Nolvadex(柠檬酸他莫昔芬)、Nplate(罗米司亭)、奥比妥珠单抗、Odomzo(索尼德吉)、OEPA、奥法木单抗、OFF、奥拉帕尼、奥拉单抗、高三尖杉酯碱、Oncaspar(培门冬酶)、盐酸恩丹西酮、Onivyde(盐酸伊立替康脂质体)、Ontak(DenileukinDiftitox)、Opdivo(纳武单抗)、OPPA、奥西替尼、奥沙利铂、紫杉醇、紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂、PAD、帕博西尼、帕利夫明、盐酸帕洛诺司琼、盐酸帕洛诺司琼和奈妥吡坦、帕米膦酸二钠、帕尼单抗、帕比司他、Paraplat(卡铂)、Paraplatin(卡铂)、盐酸帕唑帕尼、PCV、PEB、培门冬酶、培非格司亭、聚乙二醇干扰素α-2b、PEG-内含子(聚乙二醇干扰素α-2b)、派姆单抗、培美曲塞二钠、Perjeta(帕妥珠单抗)、帕妥珠单抗、Platinol(顺铂)、Platinol-AQ(顺铂)、普乐沙福、Pomalidomide、Pomalyst(Pomalidomide)、盐酸帕纳替尼、Portrazza(耐昔妥珠单抗)、普拉曲沙、强的松、盐酸丙卡巴肼、Proleukin(阿地白介素)、Prolia(地诺单抗)、Promacta(伊屈泼帕乙醇胺)、盐酸普萘洛尔、Provenge(西普鲁塞-T)、Purinethol(巯基嘌呤)、Purixan(巯基嘌呤)、二氯化镭223、盐酸雷洛昔芬、雷莫芦单抗、拉布立酶、R-CHOP、R-CVP、重组人乳头瘤病毒(HPV)二价疫苗、重组人乳头瘤病毒(HPV)非价疫苗、重组人乳头瘤病毒(HPV)四价疫苗、重组干扰素α-2b、瑞戈非尼、Relistor(溴化甲基纳曲酮)、R-EPOCH、Revlimid(来那度胺)、Rheumatrex(甲氨蝶呤)、瑞博西尼、R-ICE、Rituxan(利妥昔单抗)、Rituxan Hycela(利妥昔单抗和人透明质酸酶)、利妥昔单抗、利妥昔单抗和人透明质酸酶、罗拉匹坦盐酸盐、罗米地辛、罗米司亭、红比霉素(盐酸道诺霉素)、Rubraca(樟脑磺酸卢卡帕尼)、樟脑磺酸卢卡帕尼、磷酸鲁索替尼、Rydapt(米哚妥林)、Sclerosol胸膜内气溶胶(Talc)、司妥昔单抗、西普鲁塞-T、Somatuline Depot(醋酸兰瑞肽)、索尼德吉、甲苯磺酸索拉菲尼、Sprycel(达沙替尼)、STANFORD V、无菌滑石粉(滑石粉)、Steritalc(滑石粉)、Stivarga(瑞戈非尼)、苹果酸舒尼替尼、Sutent(苹果酸舒尼替尼)、Sylatron(聚乙二醇干扰素α-2b)、Sylvant(司妥昔单抗)、Synribo(高三尖杉酯碱)、Tabloid(硫鸟嘌呤)、TAC、Tafinlar(达拉非尼)、Tagrisso(奥西替尼)、滑石粉、Talimogene Laherparepvec、柠檬酸他莫昔芬、Tarabine PFS(阿糖胞苷)、Tarceva(盐酸埃罗替尼)、Targretin(贝沙罗汀)、Tasigna(尼洛替尼)、Taxol(紫杉醇)、Taxotere(多西他赛)、Tecentriq(阿特珠单抗)、Temodar(替莫唑胺)、替莫唑胺、替西罗莫司、沙利度胺、Thalomid(沙利度胺)、硫鸟嘌呤、三胺硫磷、Tisagenlecleucel、Tolak(氟尿嘧啶-外用)、盐酸拓扑替康、托瑞米芬、Torisel(替西罗莫司)、托西莫单抗和碘I 131托西莫单抗、Totect(盐酸右雷佐生)、TPF、他比特定、曲美替尼、曲妥单抗、Treanda(盐酸苯达莫司汀)、三氟尿苷和盐酸地匹福林、Trisenox(三氧化二砷)、Tykerb(二甲苯磺酸拉帕替尼)、Unituxin(恩杂鲁胺)、尿苷三乙酸酯、VAC、凡德他尼、VAMP、Varubi(盐酸罗拉吡坦)、Vectibix(帕尼单抗)、VeIP、Velban(硫酸长春碱)、Velcade(硼替佐米)、Velsar(硫酸长春碱)、维莫非尼、Venclexta(Venetoclax)、Venetoclax、Verzenio(Abemaciclib)、Viadur(醋酸亮丙瑞林)、Vidaza(阿扎胞苷)、硫酸长春碱、Vincasar PFS(硫酸长春新碱)、硫酸长春新碱、硫酸长春新碱脂质体、酒石酸长春瑞滨、VIP、Vismodegib、Vistogard(三乙酸尿苷)、Voraxaze(葡糖苷酶)、Vorinostat、Votrient(盐酸帕唑帕尼)、Vyxeos(盐酸道诺霉素和阿糖胞苷脂质体)、Wellcovorin(亚叶酸钙)、Xalkori(克唑替尼)、希罗达(卡培他滨)、XELIRI、XELOX、Xgeva(地诺单抗)、Xofigo(二氯化镭223)、Xtandi(恩杂鲁胺)、Yervoy(伊匹单抗)、Yondelis(他比特定)、Zaltrap(Ziv-阿柏西普)、Zarxio(非格司亭)、Zejula(甲苯磺酸尼拉帕尼一水合物)、Zelboraf(维莫非尼)、Zevalin(替伊莫单抗)、Zinecard(盐酸右雷佐生)、Ziv-阿柏西普、Zofran(盐酸恩丹西酮)、Zoladex(醋酸戈舍瑞林)、唑来膦酸、Zolinza(伏立诺他)、Zometa(唑来膦酸)、Zydelig(艾代拉里斯)、Zykadia(色瑞替尼)和/或Zytiga(醋酸阿比特龙)、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂或CTLA-4抑制剂(诸如，例如，纳武单抗、派姆单抗、pidilizumab、BMS-936559、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗(Durvalumab)或阿维单抗)或任何盐、酯类、酰胺、前药、前药剂、缀合物、活性代谢物、异构体、片段和/或其类似物。应当理解并且在本文中预期的是，某些脂肪酸(诸如，例如二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA))具有抗癌治疗作用，并且可以在所公开的方法和组合物中作为抗癌剂与工程化脂肪细胞的共轭脂肪酸一起使用。除了本文公开的任何其他抗癌剂之外，还可以采用此类抗癌脂肪酸。

进一步理解并且在本文中预期的是，工程化脂肪细胞可以包含多于一种类型的抗癌剂、阻断抑制剂或免疫调节剂。例如，纳米颗粒可以包含1、2、3、4、5、6、7、8、910、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种抗癌剂、阻断抑制剂或免疫调节剂的任意组合。

本文公开的工程化脂肪细胞可以装载有抗癌剂缀合的脂肪酸。共轭脂肪酸是多不饱和脂肪酸，其包含仅被一个单键隔开的至少一个双键对。在一个方面，共轭脂肪酸可包含共轭亚油酸的一种或多种异构体，包括但不限于9cis、11trans、10trans和/或12cis。例如，在一个方面，共轭脂肪酸包括瘤胃酸(9cis、11反式亚油酸)。用于所公开的方法和工程化脂肪细胞中的其他脂肪酸包括二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)。

在一个方面，前药可以经由环境反应性接头与共轭脂肪酸缀合。如本文所用，“接头”是指连接相邻分子的分子。一般来讲，除连接相邻分子或保持它们之间的一些最小距离或其他空间关系之外，接头无特定的生物学活性。在某些情况下，可以选择接头来影响或稳定相邻分子的某些特性，诸如分子的折叠、净电荷或疏水性。环境应答性接头的实例包括但不限于pH应答性接头(例如，酯接头、肼、羧基二甲基马来酸酐、原酸酯、亚胺、-硫代丙酸酯、乙烯基醚和亚磷酰胺)，酶促应答性接头，葡萄糖应答性接头(诸如，例如硼酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯、亚甲基双丙烯酰胺、聚(乙二醇)二丙烯酸酯和乙二醇二甲基丙烯酸酯)或H

应当理解并且在本文中预期的是，脂质转运蛋白向肿瘤微环境中的癌细胞提供脂肪酸。通过在工程化脂肪细胞中提供脂质转运蛋白，与脂肪酸缀合的前药可以类似地被递送至癌细胞。因此，在一个方面，本文公开了任何前述方面的脂肪细胞，其进一步包含脂质转运蛋白。脂质转运蛋白可以是本领域已知的任何脂质转运蛋白，包括但不限于脂肪酸结合蛋白(FABP)4(FABP4)、FABP1、FABP2、FABP3、FABP5、FABP6、FABP7。FABP8、FABP9、FABP11、FABP12、FABP5样1、FABP5样2、FABP5样3、FABP5样4、FABP5样5、FABP5样6、FABP5样7、脂肪酸转运蛋白(FATP)1(FATP1)、FATP2、FATP3、FATP4、FATP5和/或FATP6。

本文还公开了向肿瘤提供抗癌剂的缓释的方法，其包括将所述抗癌剂与共轭脂肪酸缀合，将所述缀合的抗癌剂封装在脂肪细胞中以制成工程化脂肪细胞，并将所述工程化脂肪细胞递送至肿瘤。

1.药物载体/药品的递送

如上所述，这些组合物也可以药学上可接受的载体施用到体内。“药学上可接受”意指非生物学上或其他方面不良的材料，即，该材料可与核酸或载体一起施用给受试者，不会造成任何不良生物学效应或以有害方式与含其的药物组合物的任何其他组分相互作用。如本领域技术人员所熟知，该载体将自然地被选择，以最小化该活性成分的任何降解，并最小化该受试者中的任何不利副作用。

可经口服、肠外(例如静脉)、经肌肉注射、经腹膜内注射、经皮、体外、局部等方式给药，包括局部鼻内给药或通过吸入剂给药。如本文所用，“局部鼻内给药”意指通过一个或两个鼻孔将该组合物递送至鼻腔和鼻腔通道，且可包括通过喷雾机制或液滴机制递送，或通过核酸或载体的喷雾化递送。通过吸入剂的组合物的给药是通过鼻腔或口腔、通过喷雾或液滴机制递送。通过插管，递送也可以直接到达呼吸系统的任何区域(例如肺)。所需组合物的确切数量因受试者而异，具体取决于受试者的物种、年龄、体重和一般情况、所治疗过敏性疾患的严重程度、所使用的特定核酸或载体、其给药方式等。因此，不可能为每种组合物指定确切数量。然而，适当的量可以由本领域的普通技术人员通过仅使用本文给出教导的常规实验来确定。

该组合物的肠外给药(如果使用)通常以注射为特征。注射剂可以制备成常规形式，可以是液体溶液或悬浮液，也可以是适于在注射前在液体中溶解悬浮液的固体形式，或者是乳剂。最近修订的肠外给药方法包括使用缓释或缓释系统，以保持恒定剂量。参见，例如，美国专利号3,610,795，其通过引用并入本文。

材料可以是溶液、悬浮液(例如，并入微粒、脂质体或细胞中)。它们可能通过抗体、受体或受体配体靶向于特定的细胞类型。以下参考文献是利用该技术将特定蛋白质靶向肿瘤组织的实例(Senter等人，Bioconjugate Chem.，2:447-451，(1991)；Bagshawe、K.D.，Br.J.Cancer，60:275-281，(1989)；Bagshawe等人，Br.J.Cancer，58:700-703，(1988)；Senter等人，Bioconjugate Chem.，4:3-9，(1993)；Battelli等人，CancerImmunol.Immunother.，35:421-425，(1992)；Pietersz和McKenzie，Immunolog.Reviews，129:57-80，(1992)；以及Roffler等人，Biochem.Pharmacol，42:2062-2065，(1991))。“隐形”和其他抗体缀合的脂质体(包括脂质介导的针对结肠癌的药物)、通过细胞特异性配体的受体介导的DNA靶向、淋巴细胞介导的肿瘤靶向和体内小鼠胶质瘤细胞的高特异性治疗性逆转录病毒靶向等载体。以下参考文献是利用该技术将特定蛋白质靶向肿瘤组织的实例(Hughes等人，Cancer Research，49:6214-6220，(1989)；以及Litzinger和Huang，Biochimica et Biophysica Acta，1104:179-187，(1992))。一般来说，受体参与内吞作用的途径，无论是组成性的还是配体诱导的。这些受体聚集在网格蛋白所包被的小窝中，通过网格蛋白所包被的囊泡进入细胞，通过对受体进行分类的酸化的核内体，然后循环到细胞表面、在细胞内储存，或在溶酶体中降解。内化途径具有多种功能，如营养摄取、活化蛋白去除、大分子清除、病毒和毒素的机会性进入、配体的解离和降解、以及受体水平的调节等。根据细胞类型、受体浓度、配体类型、配体价态和配体浓度，许多受体遵循不止一个细胞内途径。综述了受体介导的内吞作用的分子和细胞机制(Brown和Greene，DNA and CellBiology 10:6，399-409(1991))。

a)药学上可接受的载体

所述组合物包括抗体，可在治疗上与药学上可接受的载体结合使用。

合适的载体及其制剂在以下文献中有所描述：Remington:The Science andPractice of Pharmacy(第19版)，A.R.Gennaro,Mack Publishing Company,Easton,PA1995。通常，在该制剂中使用适当量的药学上可接受的盐以使该制剂等渗。药学上可接受的载体的实例包括但不限于生理盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。该溶液的pH值优选为约5至约8，且更优选为约7至约7.5。进一步的载体包括缓释制剂，如含有抗体的固体疏水性聚合物的半透膜基质，其基质为成型制品的形式，例如，膜、脂质体或微粒。对于本领域技术人员来说，显而易见的是，某些载体可能更可取，例如取决于给药途径和给药组合物的浓度。

本领域技术人员已知药物载体。这些通常是给人类给予药物的标准载体，包括无菌水、生理盐水和生理pH下的缓冲液等溶液。这些组合物可以肌肉注射或皮下注射。其他化合物将根据本领域技术人员使用的标准程序给予。

药物组合物可包括载体、增稠剂、稀释剂、缓冲剂、防腐剂、表面活性剂等以及所选择的分子。药物组合物还可包括一种或多种活性成分，如抗菌剂、抗炎剂、麻醉剂等。

根据是否需要局部或全身治疗以及治疗区域的不同，药物组合物可以多种方式给予。给药可以是局部(包括眼、阴道、直肠、鼻内)、口服、经吸入或肠外，例如经静脉滴注、皮下、腹膜内或肌肉注射。所公开的抗体可经静脉、腹膜内、肌肉、皮下、腔内或经皮给予。

用于肠外给药的制剂包括无菌水溶液或非水溶液、悬浮液和乳剂。非水溶剂的实例有丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄榄油)和可注射有机酯(如油酸乙酯)。水载体包括水、酒精/水溶液、乳剂或悬浮液，包括生理盐水和缓冲介质。肠外载体包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏或固定油。静脉注射载体包括液体和营养补充剂、电解质补充剂(如基于林格氏葡萄糖的补充剂)等。防腐剂和其他添加剂也可以存在，诸如例如，抗菌剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。

局部给药制剂可包括软膏、乳液、面霜、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉末。传统的药物载体、水、粉末或油性碱、增稠剂等可能是必要的或可取的。

口服给药组合物包括粉末或颗粒、水或非水介质中的悬浮液或溶液、胶囊、袋剂或片剂。增稠剂、调味剂、稀释剂、乳化剂、分散助剂或结合剂可能是所期望的。

一些组合物可潜在地作为药学上可接受的酸或碱加成盐给予，并通过无机酸(如盐酸、氢溴酸、高氯酸、硝酸、硫氰酸、硫酸和磷酸)和有机酸(如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸和延胡索酸)反应形成，或无机碱(如氢氧化钠、氢氧化铵、氢氧化钾)和有机碱(如一、二、三烷基和芳基胺及取代乙醇胺)反应形成。

b)治疗用途

可以凭经验确定施用组合物的有效剂量和时间表，并且进行这种确定在本领域技术范围内。组合物的给药剂量范围应足够大，以产生所需的效果，从而影响疾患的症状。剂量不应太大以致引起不利副作用，例如不希望的交叉反应、过敏反应等。通常，剂量将随患者的年龄、病症、性别和疾病程度、给予途径或方案中是否包括其他药物而变化，并且可以通过本领域技术人员来确定。如果有任何禁忌症，也可以由个体医生来调整剂量。剂量可以变化，并且可以每天一剂量或多剂量施用，持续一天或几天。对于给定类别的药品，可以在文献中找到针对适当剂量的指南。例如，在抗体治疗用途的文献中可以找到选择适当剂量抗体的指南，例如，Handbook of Monoclonal Antibodies，Ferrone等人编，NogesPublications，Park Ridge,N.J.，(1985)第22章和第303-357页；Smith等人，Antibodiesin Human Diagnosis and Therapy，Haber等人编，Raven Press，New York(1977)，第365-389页。根据上述因素，单独使用的抗体的典型每日剂量可能在每天约1μg/kg至100mg/kg体重或以上的范围内。

C.治疗癌症的方法

所公开的组合物可用于治疗任何发生不受控制的细胞增殖的疾病，如癌症。因此，在一个方面，本文公开了治疗、预防、抑制或减轻受试者的癌症或转移的方法，该方法包括向受试者施用本文公开的一种或多种工程化脂肪细胞。例如，本文公开了治疗、预防、抑制或减轻受试者的癌症或转移的方法，该方法包括向受试者施用一种或多种包含抗癌前药(诸如，例如阿霉素前药)以及共轭脂肪酸(诸如，例如共轭亚油酸的一种或多种异构体，包括但不限于9cis、11trans、10trans和/或12cis)的工程化脂肪细胞。

使用公开的工程化脂肪细胞可以治疗、抑制、减轻和/或预防的不同类型的癌症的非限制性列表如下：淋巴瘤(霍奇金氏和非霍奇金氏)、白血病、恶性肿瘤、固体组织癌、鳞状细胞癌、腺癌、肉瘤、神经胶质瘤、高级别神经胶质瘤、母细胞瘤、神经母细胞瘤、浆细胞瘤、组织细胞瘤、黑素瘤、腺瘤、低氧肿瘤、骨髓瘤，与艾滋病相关的淋巴瘤或肉瘤、转移癌或一般癌症。

所公开的组合物可用于治疗的代表性但不限于以下的癌症列表：淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、霍奇金病、骨髓性白血病、膀胱癌、脑癌、神经系统癌、头颈癌、头颈部鳞状细胞癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌等肺癌、神经母细胞瘤/胶质母细胞瘤、卵巢癌、皮肤癌、肝癌、黑素瘤、口腔鳞癌、咽喉鳞癌、喉癌和肺鳞癌、宫颈癌、子宫颈癌、乳腺癌、以及上皮癌、肾癌、泌尿生殖道癌、肺癌、食管癌、头颈癌、大肠癌、造血癌、睾丸癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌或胰腺癌。

在本文公开的任何方法中，可以与封装在公开的工程化脂肪细胞中的脂肪酸缀合用于治疗癌症的化学治疗剂可以包括本领域已知的任何抗癌剂，包括但不限于玻玛西林(Abemaciclib)、醋酸阿比特龙、Abitrexate(甲氨蝶呤)、Abraxane(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、AC-T、Adcetris(本妥昔单抗)、ADE、曲妥珠单抗抗体-药物偶联物(Ado-Trastuzumab Emtansine)、亚德里亚霉素(盐酸阿霉素)、马来酸阿法替尼、Afinitor(依维莫司)、Akynzeo(奈妥吡坦和盐酸帕洛诺司琼)、Aldara(咪喹莫特)、阿地白介素、Alecensa(阿来替尼)、阿来替尼、阿仑单抗、爱宁达(Alimta)(培美曲塞二钠)、Aliqopa(Copanlisib Hydrochloride，盐酸柯帕尼西布)、注射用Alkeran(盐酸美法仑)、Alkeran片(美法仑)、Aloxi(盐酸帕洛诺司琼)、Alunbrig(布吉他滨)、Ambochlorin(苯丁酸氮芥)、Amboclorin(苯丁酸氮芥)、氨磷汀、氨基乙酰丙酸、阿那曲唑、阿瑞匹坦、阿可达(帕米膦酸二钠)、瑞宁得(Arimidex)(阿那曲唑)、阿诺新(Aromasin)(依西美坦)、Arranon(奈拉滨)、三氧化二砷、Arzerra(奥法木单抗)、天冬酰胺酶菊欧文氏菌(AsparaginaseErwinia chrysanthemi)、阿特珠单抗、阿瓦斯汀(贝伐单抗)、阿维单抗(avelumab)、阿昔替尼、阿扎胞苷、Bavencio(阿维单抗)、BEACOPP、Becenum(卡莫司汀)、Beleodaq(贝利司他)、贝利司他、盐酸苯达莫司汀、BEP、Besponsa(奥英妥珠单抗)、贝伐单抗、贝沙罗汀、百克沙(托西莫单抗和碘I 131托西莫单抗)、比卡鲁胺、BiCNU(卡莫司汀)、博来霉素、博纳吐单抗、Blincyto(博纳吐单抗)、硼替佐米、Bosulif(博舒替尼)、博舒替尼、本妥昔单抗、布加替尼、BuMel、白消安、白舒非(白消安)、卡巴他赛、Cabometyx(卡博替尼-S-苹果酸酯)、卡博替尼-S-苹果酸酯、CAF、Campath(阿仑单抗)、Camptosar(盐酸伊立替康)、卡培他滨、CAPOX、Carac(氟尿嘧啶-外用)、卡铂、卡铂-紫杉醇、卡非佐米、Carmubris(卡莫司汀)、卡莫司汀、卡莫司汀植入物、康士得(比卡鲁胺)、CEM、色瑞替尼、柔红霉素(盐酸道诺霉素)、Cervarix(HPV二价重组疫苗)、西妥昔单抗、CEV、苯丁酸氮芥、苯丁酸氮芥-强的松、CHOP、顺铂、克拉屈滨、Clafen(环磷酰胺)、氯法拉滨、Clofarex(氯法拉滨)、Clolar(氯法拉滨)、CMF、考比替尼、Cometriq(卡博替尼-S-苹果酸酯)、盐酸柯帕尼西布、COPDAC、COPP、COPP-ABV、Cosmegen(放线菌素)、Cotellic(考比替尼)、克唑替尼、CVP、环磷酰胺、Cyfos(异环磷酰胺)、Cyramza(雷莫芦单抗)、阿糖胞苷、阿糖胞苷脂质体、Cytosar-U(阿糖胞苷)、Cytoxan(环磷酰胺)、达拉菲尼、达卡巴嗪、达克金(地西他滨)、放线菌素、达雷木单抗、达拉他滨(达雷木单抗)、达沙替尼、盐酸道诺霉素、盐酸道诺霉素和阿糖胞苷脂质体、地西他滨、去纤苷酸钠、Defitelio(去纤苷酸钠)、地加瑞克、地尼白介素、地诺单抗、DepoCyt(阿糖胞苷脂质体)、地塞米松、盐酸地拉佐生、地努妥昔单抗、多西他赛、Doxil(盐酸阿霉素脂质体)、盐酸阿霉素、盐酸阿霉素脂质体、Dox-SL(盐酸阿霉素脂质体)、DTIC-Dome(达卡巴嗪)、德瓦鲁单抗、Efudex(氟尿嘧啶-外用)、Efudex(拉布立酶)、Ellence(盐酸表柔比星)、埃罗妥珠单抗、乐沙定(奥沙利铂)、伊屈波帕、Emend(阿瑞匹坦)、Empliciti(埃罗妥珠单抗)、甲磺酸恩西地平、恩杂鲁胺、盐酸表柔比星、EPOCH、爱必妥(西妥昔单抗)、甲磺酸艾日布林、Erivedge(维莫德吉)、盐酸埃罗替尼、Erwinaze(天冬酰胺酶菊欧文菌)、Ethyol(氨磷汀)、Etopophos(磷酸依托泊苷)、依托泊苷、磷酸依托泊苷、Evacet(盐酸阿霉素脂质体)、依维莫司、Evista(盐酸雷洛昔芬)、Evomela(盐酸美法仑)、依西美坦、5-FU(氟尿嘧啶-注射液)、5-FU(氟尿嘧啶-外用)、法乐通(托瑞米芬)、Farydak(帕比司他)、Faslodex(氟维司群)、FEC、Femara(来曲唑)、非格司亭、Fludara(氟达拉滨磷酸盐)、氟达拉滨磷酸盐、Fluoroplex(氟尿嘧啶-外用)、氟尿嘧啶注射液、氟尿嘧啶-外用、氟他胺、Folex(甲氨蝶呤)、Folex PFS(甲氨蝶呤)、FOLFIRI、FOLFIRI-贝伐单抗、FOLFIRI-西妥昔单抗、FOLFIRINOX、FOLFOX、Folotyn(普拉曲沙)、FU-LV、氟维司群、Gardasil(重组HPV四价疫苗)、Gardasil 9(重组HPV非价疫苗)、Gazyva(奥比妥珠单抗)、吉非替尼、盐酸吉西他滨、吉西他滨-顺铂、吉西他滨-奥沙利铂、吉妥单抗、Gemzar(盐酸吉西他滨)、Gilotrif(马来酸阿法替尼)、Gleevec(甲磺酸伊马替尼)、Gliadel(卡莫司汀植入物)、Gliadel Wafer(卡莫司汀植入物)、谷卡匹酶、醋酸戈舍瑞林、Halaven(甲磺酸艾日布林)、Hemangeol(盐酸普萘洛尔)、Herceptin(曲妥单抗)、重组HPV二价疫苗、重组HPV非价疫苗、重组HPV四价疫苗、Hycamtin(盐酸拓扑替康)、Hydrea(羟基脲)、羟基脲、Hyper-CVAD、Ibrance(帕博西尼)、替伊莫单抗、依鲁替尼、ICE、Iclusig(盐酸帕纳替尼)、Idamycin(盐酸伊达比星)、盐酸伊达比星、Idelalisib、Idhifa(甲磺酸恩西地平)、Ifex(异环磷酰胺)、异环磷酰胺、Ifosfamidum(异环磷酰胺)、IL-2(阿地白介素)、甲磺酸伊马替尼、Imbruvica(依鲁替尼)、Imfinzi(德瓦鲁单抗)、咪喹莫特、Imlygic(TalimogeneLaherparepvec)、Inlyta(阿昔替尼)、Inotuzumab Ozogamicin、干扰素α-2b、重组白介素-2(阿地白介素)、内含子A(重组干扰素α-2b)、碘I 131托西莫单抗和托西莫单抗、伊匹单抗、Iressa(吉非替尼)、盐酸伊立替康、盐酸伊立替康脂质体、Istodax(罗米地辛)、伊沙匹隆、柠檬酸伊沙佐米、Ixempra(伊沙匹隆)、Jakafi(磷酸鲁索替尼)、JEB、Jevtana(卡巴他赛)、Kadcyla(Ado-曲妥单抗)、Keoxifene(盐酸雷洛昔芬)、Kepivance(帕利夫明)、Keytruda(派姆单抗)、Kisqali(瑞博西尼)、Kymriah(Tisagenlecleucel)、Kyprolis(卡非佐米)、醋酸兰瑞肽、二甲苯磺酸拉帕替尼、Lartruvo(Olaratumab)、来那度胺、甲磺酸来乐伐替尼、Lenvima(甲磺酸乐伐替尼)、来曲唑、亚叶酸钙、Leukeran(苯丁酸氮芥)、醋酸亮丙瑞林、Leustatin(克拉屈滨)、Levulan(氨基乙酰丙酸)、Linfolizin(苯丁酸氮芥)、LipoDox(盐酸阿霉素脂质体)、洛莫司汀、Lonsurf(三氟尿苷和盐酸地匹福林)、Lupron(醋酸亮丙瑞林)、Lupron Depot(醋酸亮丙瑞林)、Lupron Depot-Ped(醋酸亮丙瑞林)、Lynparza(奥拉帕尼)、Marqibo(硫酸长春新碱脂质体)、Matulane(盐酸丙卡巴肼)、盐酸氮芥、醋酸甲地孕酮、Mekinist(曲美替尼)、美法仑、盐酸美法仑、巯基嘌呤、美司钠、Mesnex(美司钠)、Methazolastone(替莫唑胺)、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤LPF(甲氨蝶呤)、溴化甲基纳曲酮、Mexate(甲氨蝶呤)、Mexate-AQ(甲氨蝶呤)、米哚妥林、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、Mitozytrex(丝裂霉素C)、MOPP、Mozobil(普乐沙福)、Mustargen(盐酸氮芥)、突变霉素(丝裂霉素C)、Myleran(白消安)、Mylosar(阿扎胞苷)、Mylotarg(吉妥单抗)、纳米颗粒紫杉醇(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、Navelbine(酒石酸长春瑞滨)、耐昔妥珠单抗、奈拉滨、Neosar(环磷酰胺)、马来酸来那替尼、Nerlynx(马来酸来那替尼)、奈妥吡坦和盐酸帕洛诺司琼、Neulasta(培非格司亭)、Neupogen(非格司亭)、Nexavar(甲苯磺酸索拉非尼)、Nilandron(尼鲁米特)、尼洛替尼、尼鲁米特、Ninlaro(柠檬酸伊沙佐米)、甲苯磺酸尼拉帕尼一水合物、纳武单抗、Nolvadex(柠檬酸他莫昔芬)、Nplate(罗米司亭)、奥比妥珠单抗、Odomzo(索尼德吉)、OEPA、奥法木单抗、OFF、奥拉帕尼、奥拉单抗、高三尖杉酯碱、Oncaspar(培门冬酶)、盐酸恩丹西酮、Onivyde(盐酸伊立替康脂质体)、Ontak(Denileukin Diftitox)、Opdivo(纳武单抗)、OPPA、奥西替尼、奥沙利铂、紫杉醇、紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂、PAD、帕博西尼、帕利夫明、盐酸帕洛诺司琼、盐酸帕洛诺司琼和奈妥吡坦、帕米膦酸二钠、帕尼单抗、帕比司他、Paraplat(卡铂)、Paraplatin(卡铂)、盐酸帕唑帕尼、PCV、PEB、培门冬酶、培非格司亭、聚乙二醇干扰素α-2b、PEG-内含子(聚乙二醇干扰素α-2b)、派姆单抗、培美曲塞二钠、Perjeta(帕妥珠单抗)、帕妥珠单抗、Platinol(顺铂)、Platinol-AQ(顺铂)、普乐沙福、Pomalidomide、Pomalyst(Pomalidomide)、盐酸帕纳替尼、Portrazza(耐昔妥珠单抗)、普拉曲沙、强的松、盐酸丙卡巴肼、Proleukin(阿地白介素)、Prolia(地诺单抗)、Promacta(伊屈泼帕乙醇胺)、盐酸普萘洛尔、Provenge(西普鲁塞-T)、Purinethol(巯基嘌呤)、Purixan(巯基嘌呤)、二氯化镭223、盐酸雷洛昔芬、雷莫芦单抗、拉布立酶、R-CHOP、R-CVP、重组人乳头瘤病毒(HPV)二价疫苗、重组人乳头瘤病毒(HPV)非价疫苗、重组人乳头瘤病毒(HPV)四价疫苗、重组干扰素α-2b、瑞戈非尼、Relistor(溴化甲基纳曲酮)、R-EPOCH、Revlimid(来那度胺)、Rheumatrex(甲氨蝶呤)、瑞博西尼、R-ICE、Rituxan(利妥昔单抗)、Rituxan Hycela(利妥昔单抗和人透明质酸酶)、利妥昔单抗、利妥昔单抗和人透明质酸酶、罗拉匹坦盐酸盐、罗米地辛、罗米司亭、红比霉素(盐酸道诺霉素)、Rubraca(樟脑磺酸卢卡帕尼)、樟脑磺酸卢卡帕尼、磷酸鲁索替尼、Rydapt(米哚妥林)、Sclerosol胸膜内气溶胶(Talc)、司妥昔单抗、西普鲁塞-T、Somatuline Depot(醋酸兰瑞肽)、索尼德吉、甲苯磺酸索拉菲尼、Sprycel(达沙替尼)、STANFORD V、无菌滑石粉(滑石粉)、Steritalc(滑石粉)、Stivarga(瑞戈非尼)、苹果酸舒尼替尼、Sutent(苹果酸舒尼替尼)、Sylatron(聚乙二醇干扰素α-2b)、Sylvant(司妥昔单抗)、Synribo(高三尖杉酯碱)、Tabloid(硫鸟嘌呤)、TAC、Tafinlar(达拉非尼)、Tagrisso(奥西替尼)、滑石粉、Talimogene Laherparepvec、柠檬酸他莫昔芬、Tarabine PFS(阿糖胞苷)、Tarceva(盐酸埃罗替尼)、Targretin(贝沙罗汀)、Tasigna(尼洛替尼)、Taxol(紫杉醇)、Taxotere(多西他赛)、Tecentriq(阿特珠单抗)、Temodar(替莫唑胺)、替莫唑胺、替西罗莫司、沙利度胺、Thalomid(沙利度胺)、硫鸟嘌呤、三胺硫磷、Tisagenlecleucel、Tolak(氟尿嘧啶-外用)、盐酸拓扑替康、托瑞米芬、Torisel(替西罗莫司)、托西莫单抗和碘I 131托西莫单抗、Totect(盐酸右雷佐生)、TPF、他比特定、曲美替尼、曲妥单抗、Treanda(盐酸苯达莫司汀)、三氟尿苷和盐酸地匹福林、Trisenox(三氧化二砷)、Tykerb(二甲苯磺酸拉帕替尼)、Unituxin(恩杂鲁胺)、尿苷三乙酸酯、VAC、凡德他尼、VAMP、Varubi(盐酸罗拉吡坦)、Vectibix(帕尼单抗)、VeIP、Velban(硫酸长春碱)、Velcade(硼替佐米)、Velsar(硫酸长春碱)、维莫非尼、Venclexta(Venetoclax)、Venetoclax、Verzenio(Abemaciclib)、Viadur(醋酸亮丙瑞林)、Vidaza(阿扎胞苷)、硫酸长春碱、Vincasar PFS(硫酸长春新碱)、硫酸长春新碱、硫酸长春新碱脂质体、酒石酸长春瑞滨、VIP、Vismodegib、Vistogard(三乙酸尿苷)、Voraxaze(葡糖苷酶)、Vorinostat、Votrient(盐酸帕唑帕尼)、Vyxeos(盐酸道诺霉素和阿糖胞苷脂质体)、Wellcovorin(亚叶酸钙)、Xalkori(克唑替尼)、希罗达(卡培他滨)、XELIRI、XELOX、Xgeva(地诺单抗)、Xofigo(二氯化镭223)、Xtandi(恩杂鲁胺)、Yervoy(伊匹单抗)、Yondelis(他比特定)、Zaltrap(Ziv-阿柏西普)、Zarxio(非格司亭)、Zejula(甲苯磺酸尼拉帕尼一水合物)、Zelboraf(维莫非尼)、Zevalin(替伊莫单抗)、Zinecard(盐酸右雷佐生)、Ziv-阿柏西普、Zofran(盐酸恩丹西酮)、Zoladex(醋酸戈舍瑞林)、唑来膦酸、Zolinza(伏立诺他)、Zometa(唑来膦酸)、Zydelig(艾代拉里斯)、Zykadia(色瑞替尼)和/或Zytiga(醋酸阿比特龙)、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂或CTLA-4抑制剂(诸如，例如，纳武单抗、派姆单抗、pidilizumab、BMS-936559、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗(Durvalumab)或阿维单抗)或任何盐、酯类、酰胺、前药、前药剂、缀合物、活性代谢物、异构体、片段和/或其类似物。因此，一方面是治疗、预防、抑制和/或减轻受试者的癌症或转移的方法，该方法包括向受试者施用包含阿霉素以及共轭脂肪酸(诸如，例如共轭亚油酸的一种或多种异构体，包括但不限于9cis、11trans、10trans和/或12cis)的一种或多种工程化脂肪细胞。在一个方面，本文公开了治疗、预防、抑制和/或减轻受试者的癌症或转移的方法，该方法包括向受试者施用一种或多种工程化脂肪细胞，其中抗癌前药包括阿霉素前药并且共轭亚油酸包括瘤胃酸(9cis、11trans亚油酸)。

应当理解并在本文中考虑到，可以将被工程化脂肪细胞封装的脂肪酸缀合的抗癌剂设计成对肿瘤的微环境具有生物应答性，并在暴露至微环境内的因素(诸如，例如活性氧或pH)后释放出抗癌剂、阻断抑制剂或免疫调节剂。在一个方面，在本文中预期的是，可以设计生物应答的工程化脂肪细胞以将抗癌剂、阻断抑制剂或免疫调节剂释放到肿瘤微环境中至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、65、70、75、80、85或90天。

“治疗(Treat、treating或treatment)”及其在本文中使用的语法变体包括组合物的给药，其目的在于部分或完全预防、延迟、治疗、治愈、缓解、减轻、改变、补救、改进、改善、稳定、减缓和/或降低强度或一种或多种疾病或病症的频率，一种疾病或病症的症状，或一种疾病或病症的根本原因。根据本发明所述的治疗可防范性、预防性、姑息性或补救性地应用。预防性治疗是在发病前(例如，在出现明显的癌症迹象之前)、在早期发作期间(例如，在癌症的初始体征和症状之后)或在癌症的确定发展之后向受试者给药。预防性给药可在感染症状出现之前一天或数天至数年发生。

在一个方面，所公开的包括向受试者施用本文所公开的任何工程化脂肪细胞或包含所述工程化脂肪细胞的药物组合物的治疗、预防、抑制或减轻癌症或转移的方法，可包括以适合治疗受试者的特定癌症的任何频率施用工程化脂肪细胞或药物组合物。例如，工程化脂肪细胞或药物组合物至少每12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、26小时、28小时、30小时、32小时、34小时、36小时、38小时、40小时、42小时、44小时、46小时、48小时一次，每3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天一次，每2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月一次施用给患者。在一个方面中，治疗剂递送载体或药物组合物每周施用至少1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次。

D.实例

提出以下实例是为了向本领域普通技术人员提供关于如何制备和评估本文所要求保护的化合物、组合物、制品、装置和/或方法的完整公开和描述，并且旨在纯粹地示范并且非旨在限制公开。已经努力确保数字(例如，数量、温度等)的准确性，但是应该考虑一些误差和偏差。除非另有说明，否则份数为重量份，温度为℃或处于环境温度，并且压力为大气压或接近大气压。

1.实例1

a)结果

在这项工作中，脂肪细胞被用作药物递送贮库，用于化学治疗剂的缓释以增强抗癌疗效并且同时调节肿瘤免疫微环境，以促进效应子CD4和CD8 T细胞浸润(图1a)。合成了pH和ROS应答的阿霉素前药(pDox)(图1b)，并与瘤胃酸(RA)一起封装到脂肪细胞中，这增强了Dox与脂肪细胞的相容性，并进一步促进了Dox通过脂质代谢途径转运至肿瘤细胞。这些工程化脂肪细胞可以将pDox和RA递送到癌细胞中，具有细胞杀伤和免疫调节作用(图1c)。在肿瘤微环境中，这些工程化脂肪细胞下调了几种促肿瘤脂肪因子，并建立了肿瘤抑制免疫力(图1d)。

在Transwell系统中，将3T3-L1细胞分化的脂肪细胞与几种癌细胞系共培养。如预期那样，正常的脂肪细胞促进了这些细胞的生长(图1e-h)。同时，脂肪因子分析显示出在共培养的培养基中高度过表达的VEGF和抵抗素的表达，而脂肪细胞中脂质运载蛋白-2促进了细胞的生长和转移。为了逆转脂肪细胞在肿瘤进展中的恶性作用，我们封装了RA(也称为9Z,11E-共轭亚油酸)，作为一种抗癌脂肪酸，在其分化期间被封装到脂肪细胞中。作为共轭亚油酸(CLA)最丰富的异构体之一，RA已被证明可抑制乳腺、肝脏和前列腺癌细胞生长。根据结果，观察到RA、CLA和另一种CLA异构体10E,12Z-CLA具有相似的细胞毒性，而RA与10E,12Z-CLA之间没有明显的协同作用。与RA(RA@脂肪细胞)或装载有CLA的脂肪细胞(CLA@脂肪细胞)在Transwell系统中共培养时，B16F10细胞生长受到抑制(图1i)。然而，作为几种异构体的混合物，CLA@脂肪细胞不能抑制E0771细胞生长(图1j)，表明不同的CLA异构体的不同功能。

数种促肿瘤脂肪因子是由TAA分泌的，用于抑制抗癌免疫细胞募集并指导肿瘤转移。数据显示，封装在脂肪细胞中的不同脂肪酸可以影响脂肪因子分泌及其在癌细胞生长中的作用。鉴于抵抗素分泌显著减少，它可能是CLA@脂肪细胞和RA@脂肪细胞抑制肿瘤细胞生长和转移的最重要的靶标。值得关注的是，即使VEGF在RA@脂肪细胞培养基中高度过表达，但当与B16F10细胞共培养时，它会降至正常浓度。此外，在RA@脂肪细胞中，脂肪细胞中脂质运载蛋白-2的表达显著降低，而MCP-1过表达，这促使在黑素瘤的早期募集单核细胞。然而，在B16F10与CLA@脂肪细胞、RA@脂肪细胞或正常脂肪细胞的共培养的培养基中，MCP-1浓度没有显著差异。

最近，针对程序性死亡配体1(PD-L1)的免疫检查点阻断显示出令人期待的临床结果。由TAA功能障碍引起的从白色脂肪向棕色脂肪的转变(一种称为白色脂肪组织褐变的现象)促进了PD-L1在棕色脂肪细胞上的表达。然而，脂肪细胞对癌细胞PD-L1表达的影响很大程度上仍然是未知的。除了测试RA@脂肪细胞对脂肪因子分泌的功能外，还阐明了其在调节免疫细胞中的作用。在Transwell系统中，RA@脂肪细胞和CLA@脂肪细胞可以抑制B16F10细胞的PD-L1表达(图1k)，从而促进T淋巴细胞的浸润和活化。这种作用被BMS309403(一种FABP4抑制剂(iFABP4))部分逆转，表明RA和CLA在脂肪细胞与癌细胞之间的串扰期间起着至关重要的作用。结果还表明，装载10E,12Z-CLA的脂肪细胞或RA和装载10E,12Z-CLA的脂肪细胞的混合物不能如RA@脂肪细胞那样有效地下调PD-L1表达。接下来，使用B16F10小鼠黑素瘤肿瘤模型评估RA@脂肪细胞的抗肿瘤作用(图3a)。RA@脂肪细胞在肿瘤大小和存活率方面显著延迟了肿瘤生长(图2a、2b、2c和3c)，而体重不受这种肿瘤内注射RA@脂肪细胞的影响(图3b)。第二次注射RA@脂肪细胞两天后，收集肿瘤并通过流式细胞术进行分析。PD-L1在接受RA@脂肪细胞的小鼠的肿瘤细胞中显著下调(图2d和3d)。结果，与对照相比，在RA@脂肪细胞治疗组中检测到肿瘤中CD8

还在肿瘤切除模型中研究了RA@脂肪细胞的效力。然后将这些脂肪细胞封装到纤维蛋白凝胶中，将其直接注射到切除腔中。RA@脂肪细胞能够延迟肿瘤复发和生长(图2g、2h、2i、4a和4b)，而对体重没有影响(图4c)。施用RA@脂肪细胞一周后，通过流式细胞术分析了PD-L1阳性细胞、CD8+ T细胞和Treg的群体。与对照组相比，检测到显著较低的PD-L1(图2j和4d)表达，从而增强了肿瘤中CD8

尽管化疗的应用仍然是癌症治疗的主要手段之一，但其受到严重副作用的限制。为了增强治疗的选择性，已证实刺激应答的前药或药物递送系统是令人期待的策略。一些研究表明，与正常细胞相比，肿瘤中的ROS浓度至少高出10倍。为了进一步改善RA@脂肪细胞的治疗效果并减少副作用，通过用基于苯硼酸的ROS应答性接头将阿霉素与油酸缀合合成了阿霉素(Dox)前药(图5)。在10mM H

接下来，与Dox相比，评估了pDox对B16F10(图6d)、A375(图6e)、E0771(图6f)和MCF-7(图6g)细胞系的细胞毒性。pDox对B16F10、A375、E0771细胞的IC50值几乎是Dox的1.5倍，但在MCF-7细胞系中观察到了相似的毒性。将Dox和pDox在其分化期间添加到3T3-L1细胞中用于药物封装。然后将这些载药的脂肪细胞(Dox@脂肪细胞和pDox@脂肪细胞)与B16F10(图6h)和E0771(图6i)细胞在Transwell系统中共培养。值得关注的是，与Dox@脂肪细胞相比，pDox@脂肪细胞在癌细胞与脂肪细胞之间的串扰期间显示了更大的细胞毒性。这可以通过药物摄取途径之间的差异来解释，即癌细胞可以通过自由扩散从脂肪细胞吸收Dox，而脂肪细胞中的pDox可以通过与癌细胞具有更高生物相容性的FABP4介导的脂质代谢途径进入癌细胞。然后，通过将BMS309403添加到Transwell培养基中以阻断脂质从脂肪细胞向癌细胞的转运，针对该理解进行测试。如预期那样，pDox的细胞毒性部分逆转至B16F10细胞(图6j)。然后测定载有Dox和pDox的脂肪细胞的脂质量。Dox显著抑制脂肪细胞中的脂质蓄积。然而，脂质蓄积没有被pDox显著抑制，表明pDox对脂肪细胞有改善的相容性(图6k)。根据共焦显微镜成像，大多数pDox位于脂质小滴中(图6l)。在pDox吸收期间，FABP4抑制剂不影响脂肪细胞中pDox的摄取。然而，在Transwell实验中，它部分抑制了pDox从脂肪细胞向B16F10细胞的转运，这进一步证明了从脂肪细胞的pDox摄取主要取决于FABP4介导的脂质代谢途径(图6m)。

接下来，评估了载有RA的脂肪细胞用于递送pDox的潜力。W使用pDox和RA针对B16F10和E0771细胞系确定了联合疗法的效果(图7a和7b)。RA和Dox联合疗法或pDox治疗显著增强Dox和pDox的细胞毒性。然后，在3T3-L1细胞分化期间，同时施用pDox和RA以产生载有Dox/pDox和RA的脂肪细胞(Dox+RA@脂肪细胞、pDox+RA@脂肪细胞)。在3T3-L1分化期间施用RA可以增强脂质小滴中的脂质蓄积(图7c)。与Dox相比，可以将更多的pDox装载到RA@脂肪细胞中(图7d)，而RA部分地逆转Dox和pDox对脂质小滴形成的抑制作用，导致增强的脂肪细胞的药物装载能力。共焦显微镜成像进一步证实了这一结果，共焦显微镜成像显示在有更多pDox封装在RA@脂肪细胞中的情况下，形成了更多的脂质小滴(图7e)。还标记了核内体，表明大多数pDox位于脂质小滴中。然后将pDox+RA@脂肪细胞或RA@脂肪细胞与B16F10细胞在Transwell中共培养。RA@脂肪细胞显示出提升了脂肪细胞和B16F10细胞中的pDox摄取，这被FABP4抑制剂抑制(图7f)。蛋白质印迹法进一步证实了脂质从脂肪细胞到癌细胞的这一转运。分化开始后，3T3-L1细胞开始翻译FABP4。RA@脂肪细胞或pDox+RA@脂肪细胞可因脂质转运而增强B16F10细胞中FABP4的量，然而BMS309403可抑制该过程。此外，在各组中，RA@脂肪细胞和CLA@脂肪细胞之间的pDox装载能力以及B16F10细胞的pDox摄取没有显著差异。在相同的Transwell系统中，与RA@脂肪细胞相比，pDox+RA@脂肪细胞对癌细胞具有更大的细胞毒性。这种细胞杀伤作用可以被FABP4抑制剂部分逆转，表明该过程取决于FABP4的转运(图7g)。

如上所述，已经证明肿瘤细胞触发的脂解作用所引起的肿瘤周边TAA中脂质含量的损失通过为肿瘤细胞和炎性细胞因子提供能量以产生肿瘤有利的微环境而促进肿瘤转移。因此，肿瘤细胞触发的脂解作用可能是靶向药物递送的新的肿瘤特异性代谢途径。为了测试这一点，将pDox+RA@脂肪细胞和Dox+RA@脂肪细胞与B16F10细胞共培养并使用小鼠成纤维细胞作为对照品，比较它们的药物释放曲线和脂解作用。B16F10显著触发了Dox(图7h)和pDox(图7i)从脂肪细胞的释放，而与游离脂肪细胞相比，成纤维细胞不影响药物释放。此外，根据培养基中的游离脂肪酸浓度，B16F10可在脂肪细胞共培养48h后诱导脂解作用，然而成纤维细胞则不会触发脂质从脂肪细胞中的释放(图7j)。总的来说，在串扰期间，通过肿瘤细胞促进的脂解作用与依赖于FABP4的pDox和RA转运来介导RA和pDox从脂肪细胞的释放。

为了验证体内pDox+RA@脂肪细胞的治疗效果，在肿瘤大小达到50-100mm

手术后残留的肿瘤细胞仍然是癌症疗法的严峻挑战。手术可从手术床释放癌细胞，或者诱导先前扩散的癌细胞的血管生成。最近，Krall等人发现手术创伤促进了局部肿瘤和远端免疫原性肿瘤生长两者，表明全身炎性应答在这一过程中起着至关重要的作用。由TAA分泌的炎性细胞因子，包括TNF-α、IL-6和CCL2，可以直接诱导炎性细胞蓄积，并进一步在肿瘤部位形成低度炎症。此外，在肥胖女性中发现高循环浓度的IL-6，这与乳腺癌的进展有关。这些发现表明TAA在手术后肿瘤复发过程中的恶性作用。在此，在肿瘤切除术模型(图9a)中，与对照组相比，在脂肪细胞治疗组中，手术后肿瘤生长更快。使用纤维蛋白凝胶作为药物递送贮库，只有接受载有Dox和RA的凝胶的小鼠针对肿瘤复发显示出更高的防护程度并且延迟肿瘤生长。pDox@脂肪细胞在抑制肿瘤生长方面比载有pDox的凝胶显示出更好的效果。重要的是，Dox+RA@脂肪细胞和pDox+RA@脂肪细胞在保护小鼠免受肿瘤复发方面效果显著，复发率分别为62.5％和37.5％。还证明了，在该基于脂肪细胞的递送贮库中脂质缀合后，肿瘤对Dox的摄取显著增加。与其他组相比，通过pDox+RA@脂肪细胞可将大多数肿瘤复发抑制至少两个月并且具有显著减小的肿瘤体积和更高存活率(图9b和9c)。由于对体重没有显著影响，可以将基于脂肪细胞的药物递送视为与有限毒性作用具有高度的生物相容性。手术后一周，在肿瘤微环境中评估免疫活性。RA治疗组显著降低了肿瘤细胞中的PD-L1表达，然而RA@脂肪细胞显示出更令人期待的结果(图9d)。结果，CD8

这项工作逆转了与肿瘤相关的脂肪细胞的恶性作用，并将其工程化为RA的药物递送特洛伊木马，作为抗肿瘤脂肪酸和脂质缀合的Dox前药用于化疗。在肿瘤内和术后B16F10黑素瘤小鼠模型两者中，均通过经由FABP4介导的肿瘤细胞脂质代谢途径进行药物转运，实现显著增强的抗癌疗效。值得注意的是，除了传统化疗之外，RA@脂肪细胞通过下调PD-L1表达来诱导免疫原性肿瘤表型。这种脂肪细胞介导的药物递送策略可以进一步扩展，以治疗与脂质代谢途径相关的多种疾病。

(1)荧光偏振

为了测定Dox或pDox对FABP4的结合亲和力，将所有样品在PBS缓冲液中稀释。将从5到100nM的FABP4连续稀释液添加到20nM Dox或pDox中。使用QuantaMaster 40UV/VIS稳态荧光分光光度计(Photon Technology International)来测量荧光偏振。如前所述，通过将观察到的偏振([mP])拟合为双态结合的通用方程式来计算每种的解离常数(K

(2)分子动力学模拟

首先，在蛋白质数据库(PDB)中对含有小分子配体的人FABP4蛋白的晶体结构进行综合检索。发现FABP4与亚油酸结合的X射线晶体结构(PDB：2Q9S，分辨率

接下来，手动构建接头(L)链，并将其添加到SA链的碳九上。使用ConfGen程序(OPLS3力场)执行构象搜索，以识别低能构象异构体作为起点。使用借助带有Jaguar的6-311G**Pople基组进行的Hartree Fock几何最小化(这是由于大量的可旋转键)，进一步优化了该构象异构体。然后使用诱导拟合的对接，将优化的SA-L化合物对接到FABP4结合口袋中。诱导拟合的对接通过允许蛋白质和配体两者的原子灵活性来更好地说明蛋白质的灵活性(传统对接仅允许配体中的键旋转，而蛋白质被认为是刚性的)。这一方法成功地识别了SA-L化合物的三个稳定的起始构象。人工检查后，选择了一个构象，该构象将接头的苯环定位于蛋白质表面附近。这一定位似乎没有侧链残基，该侧链残基会阻止药物连接在接头上。

最初，用于识别SA-L对接位姿的相同方法被应用于创建靶分子SA-L-药物。然而，用于SA-L的诱导拟合的对接程序无法在FABP4结合口袋内产生靶标SA-L-药物化合物的稳定对接位姿。缺乏稳定的SA-L-药物结合位姿，因此使用Schrodinger Maestro的3D-sketcher手动构建了SA-L-药物结构，随后进行了初始能量最小化过程。重要的是，将FABP4表面暴露的残基侧链可视化，以确保在SA-L-药物化合物的构建期间不会产生原子碰撞。另外，当放置羟基基团时，考虑了氢键网络的潜力。

在FABP4结合口袋中建立最初的SA-L-药物结构后，使用GPU加速的Desmond软件(OPLS3力场，TIP3P水环境，300K，NTP，2fs时间步长)来运行全原子、20纳秒的分子动力学模拟。另外，结合SA和SA-L复合物的FABP4经历同样的模拟。然后使用MM-GBSA和Desmond轨迹聚类算法来计算SA、SA-L和SA-L-药物的加权结合能。Hayes等人报道了该程序的详细解释。所有这种分子动力学模拟均经历

接下来，测量每个簇的结合自由能，并分别测定结合SA、SA-L和SA-L-药物的FABP4的加权结合自由能。加权结合自由能计算如下：

其中P

b)方法

(1)材料

除非特别说明，否则所有化学品均购自Sigma-Aldrich并按原样使用。盐酸阿霉素购自Oakwood Chemical。BMS309403(FABP4抑制剂)购自Cayman Chemical。RA(9Z,11E-CLA)(产品目录号16413)、10E,12Z-CLA(产品目录号04397)和CLA(产品目录号O5507)购自Sigma-Aldrich。

(2)细胞培养

正常细胞系，包括3T3-L1、B16F10、A375和MCF-7，购自American Type CultureCollection。E0771细胞系购自CH3 Biosystems。生物发光的B16F10细胞(B16F10-luc-GFP)由北卡罗来纳大学教堂山分校的Leaf Huang博士提供。B16F10、A375和MCF-7细胞在含10％FBS(Invitrogen)的DMEM(Gibco，Invitrogen)中培养。将E0771细胞在具有10％FBS和10mMHEPES(Thermo Fisher Scientific)的RPMI 1640培养基中培养。小鼠原代皮肤成纤维细胞购自Cell Biologics(产品目录号C57-6067)，并使用Fibroblast Medium试剂盒(产品目录号M2267)进行培养。为了培养3T3-L1，使用具有10％小牛血清的DMEM(Thermo FisherScientific)作为培养基。使用3T3-L1分化试剂盒(Sigma-Aldrich产品目录号DIF001)来分化3T3-L1前体脂肪细胞。为了实现最大的装载能力，本研究中使用了10-20代3T3-L1细胞。

(3)Dox、pDox和RA的装载与释放

为了生成RA和载有Dox或pDox的脂肪细胞，将RA(200μM)和Dox或pDox(500nM)添加到维持培养基(含10％FBS和1.5mg/mL胰岛素的DMEM/F12(1:1))中，并每48h更换一次。将RA、Dox和pDox的浓度优化为最大浓度，该浓度不会显著引起3T3-L1细胞死亡，但可影响脂质蓄积，这在正文中已进行了讨论。通过Oil Red O染色来评估脂肪细胞中的脂质蓄积，并通过以540nm进行光密度测量来定量。将前体脂肪细胞培养、分化并将药物封装在6孔Transwell插入物中，并与5*10

(4)癌细胞与脂肪细胞之间的串扰

48h后，在96孔板中通过MTT测定法测定药物和脂肪酸的细胞毒性。在Transwell系统中确定载有药物或脂肪酸的脂肪细胞对肿瘤细胞的杀伤或促进作用，其中脂肪细胞接种在24孔板中，而肿瘤细胞则在Transwell插入物中生长。培养72h后，通过MTT测定法测定Transwell插入物中癌细胞的细胞增殖。

对于蛋白质印迹法、流式细胞术和脂肪因子分析(R&D Systems产品目录号ARY013)，将6孔Transwell系统与在Transwell插入物中培养的癌细胞和底部的脂肪细胞一起使用。共培养72h后，分析细胞或培养基。为了确定FABP4在串扰期间的作用，在培养基中添加30μM BMS309403以阻断FABP4。用于蛋白质印迹法的抗体包括β-肌动蛋白(产品目录号sc-47778，Santa Cruz)、FABP4(产品目录号701158，Thermo Fisher)、PD-L1(产品目录号ab205921，Abcam)。PE通道用于测定脂肪细胞和癌细胞中的pDox荧光。

(5)体内肿瘤研究

对于皮下模型，将1*10

对于术后复发模型，在小鼠的右胁将1*10

为了测定PD-L1在肿瘤细胞和T细胞群体中的表达，在第二次注射用于肿瘤内模型的制剂两天后，每组牺牲4只小鼠以获得肿瘤。对于肿瘤复发模型，在手术后1周收获肿瘤。使用染色缓冲液(产品目录420201，BioLegend)制备肿瘤的单细胞悬液。使用FlowJo软件收集并分析每个样品的20000个事件。用于检测PD-L1阳性细胞、CD8+ T细胞和Treg的抗体包括CD3(产品目录100203，Biolegend)、CD4(产品目录100515，Biolegend)、CD8(产品目录100707，Biolegend)、PD-L1(产品目录124311，Biolegend)、FoxP3(产品目录126403，Biolegend)。

(6)2,3-二甲基-5-己烯-2,3-二醇的合成。

剧烈搅拌溶解在混合溶剂(50mL，4:1THF/H

(7)(4-(4-烯丙基-4,5,5-三甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷

-2-基)苯基)甲醇的合成。

将2,3-二甲基-5-己烯-2,3-二醇(0.21g，1.5mmol)、(4-(羟基甲基)苯基)硼酸(0.2g，1.35mmol)和无水MgSO

(8)4-(4-烯丙基-4,5,5-三甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苄基(4-硝基苯基)碳酸酯的合成。

将(4-(4-烯丙基-4,5,5-三甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苯基)甲醇(0.2g)和4-硝基苯基碳氯化物(0.2g)溶解于含Et

(9)4-(4-(3-((2-巯基乙基)硫代)丙基)-4,5,5-三甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苄基(4-硝基苯基)碳酸酯的合成。

将4-(4-烯丙基-4,5,5-三甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苄基(4-硝基苯基)碳酸酯(0.2g，0.5mmol)、乙烷-1,2-二硫代(1g，10mmol)和AIBN(0.2g，1.2mmol)在甲苯(30mL)中混合，并在40℃搅拌，同时通过TLC监测反应。反应完成后，将混合物浓缩并使其通过硅胶柱(PE中的15％-30％EtOAc)，得到产物(0.22g，90％)。

(10)阿霉素前药的合成。

将4-(4-(3-((2-巯基乙基)硫代)丙基)-4,5,5-三甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苄基(4-硝基苯基)碳酸酯(30mg，0.06mmol)、油酸(141.2mg，0.5mmol)和DMPA(4.5mg，0.02mmol)在UV照射(波长365nm)下于THF(50μL)中混合30min。通过TLC监测反应，并在所有4-(4-(3-((2-巯基乙基)硫代)丙基)-4,5,5-三甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苄基(4-硝基苯基)碳酸酯发生反应时停止，然后将混合物在减压条件下浓缩。将产物与盐酸阿霉素(40.6mg，0.07mmol)和Et

E.参考文献

Arab,A.,Akbarian,S.A.,Ghiyasvand,R.&Miraghajani,M.The effects ofconjugated linoleic acids on breast cancer:A systematicreview.Adv.Biomed.Res.5,115-9175.185573.eCollection 2016(2016).

Arendt,L.M.et al.Obesity promotes breast cancer by CCL2-mediatedmacrophage recruitment and angiogenesis.Cancer Res.73,6080-6093(2013).

Au Yeung,C.L.et al.Exosomal transfer of stroma-derived miR21 conferspaclitaxel resistance in ovarian cancer cells through targetingAPAF1.Nat.Commun.7,11150(2016).

Bachelot,T.et al.Prognostic value of serum levels of interleukin 6and of serum and plasma levels of vascular endothelial growth factor inhormone-refractory metastatic breast cancer patients.Br.J.Cancer 88,1721-1726(2003).

Bae,W.K.et al.Docetaxel-loaded thermoresponsive conjugated linoleicacid-incorporated poloxamer hydrogel for the suppression of peritonealmetastasis of gastric cancer.Biomaterials 34,1433-1441(2013).

Behan,J.W.et al.Adipocytes impair leukemia treatment in mice.CancerRes.69,7867-7874(2009).

Biondo,L.A.et al.Impact of Doxorubicin Treatment on the PhysiologicalFunctions of White Adipose Tissue.PLoS One 11,e0151548(2016).

Buchbinder,E.I.&Hodi,F.S.Melanoma in 2015:Immune-checkpoint blockade-durable cancer control.Nat.Rev.Clin.Oncol.13,77-78(2016).

Cipolletta,D.et al.PPAR-gamma is a major driver of the accumulationand phenotype of adipose tissue Treg cells.Nature 486,549-553(2012).

Correa,L.H.,Correa,R.,Farinasso,C.M.,de Sant'Ana Dourado,L.P.&Magalhaes,K.G.Adipocytes and Macrophages Interplay in the Orchestration ofTumor Microenvironment:New Implications in CancerProgression.Front.Immunol.8,1129(2017).

Demicheli,R.,Retsky,M.W.,Hrushesky,W.J.&Baum,M.Tumor dormancy andsurgery-driven interruption of dormancy in breast cancer:learning fromfailures.Nat.Clin.Pract.Oncol.4,699-710(2007).

den Hartigh,L.J.,Han,C.Y.,Wang,S.,Omer,M.&Chait,A.10E,12Z-conjugatedlinoleic acid impairs adipocyte triglyceride storage by enhancing fatty acidoxidation,lipolysis,and mitochondrial reactive oxygen species.J.Lipid Res.54,2964-2978(2013).

Desai,M.A.et al.An intrinsically disordered region of methyl-CpGbinding domain protein 2(MBD2)recruits the histone deacetylase core of theNuRD complex.Nucleic Acids Res.43,3100-3113(2015).

Dirat,B.et al.Cancer-associated adipocytes exhibit an activatedphenotype and contribute to breast cancer invasion.Cancer Res.71,2455-2465(2011).

Elliott,B.E.,Tam,S.P.,Dexter,D.&Chen,Z.Q.Capacity of adipose tissueto promote growth and metastasis of a murine mammary carcinoma:effect ofestrogen and progesterone.Int.J.Cancer 51,416-424(1992).

Eschwege,P.et al.Haematogenous dissemination of prostatic epithelialcells during radical prostatectomy.Lancet 346,1528-1530(1995).

Farid,R.,Day,T.,Friesner,R.A.&Pearlstein,R.A.New insights about HERGblockade obtained from protein modeling,potential energy mapping,and dockingstudies.Bioorg.Med.Chem.14,3160-3173(2006).

Friesner,R.A.et al.Glide:a new approach for rapid,accurate dockingand scoring.1.Method and assessment of docking accuracy.J.Med.Chem.47,1739-1749(2004).

Friesner,R.A.et al.Glide:a new approach for rapid,accurate dockingand scoring.1.Method and assessment of docking accuracy.J.Med.Chem.47,1739-1749(2004).

Fuentes-Mattei,E.et al.Effects of obesity on transcriptomic changesand cancer hallmarks in estrogen receptor-positive breastcancer.J.Natl.Cancer Inst.106,10.1093/jnci/dju158.Print 2014 Jul(2014).

Gharpure,K.M.et al.FABP4 as a key determinant of metastatic potentialof ovarian cancer.Nat.Commun.9,2923-018-04987-y(2018).

Ghebeh,H.et al.Doxorubicin downregulates cell surface B7-H1expression and upregulates its nuclear expression in breast cancer cells:roleof B7-H1 as an anti-apoptotic molecule.Breast Cancer Res.12,R48(2010).

Gillilan,R.E.,Ayers,S.D.&Noy,N.Structural basis for activation offatty acid-binding protein 4.J.Mol.Biol.372,1246-1260(2007).

Graves,D.T.,Barnhill,R.,Galanopoulos,T.&Antoniades,H.N.Expression ofmonocyte chemotactic protein-1 in human melanoma in vivo.Am.J.Pathol.140,9-14(1992).

Greenwood,J.R.,Calkins,D.,Sullivan,A.P.&Shelley,J.C.Towards thecomprehensive,rapid,and accurate prediction of the favorable tautomericstates of drug-like molecules in aqueous solution.J.Comput.Aided Mol.Des.24,591-604(2010).

Guo,D.D.et al.Synergistic anti-tumor activity of paclitaxel-incorporated conjugated linoleic acid-coupled poloxamer thermosensitivehydrogel in vitro and in vivo.Biomaterials 30,4777-4785(2009).

Guo,Z.et al.Probing the alpha-helical structural stability of stapledp53peptides:molecular dynamics simulations and analysis.Chem.Biol.DrugDes.75,348-359(2010).

Guo,Z.et al.Probing the alpha-helical structural stability of stapledp53peptides:molecular dynamics simulations and analysis.Chem.Biol.DrugDes.75,348-359(2010).

Halgren,T.A.et al.Glide:a new approach for rapid,accurate docking andscoring.2.Enrichment factors in database screening.J.Med.Chem.47,1750-1759(2004).

Halgren,T.A.et al.Glide:a new approach for rapid,accurate docking andscoring.2.Enrichment factors in database screening.J.Med.Chem.47,1750-1759(2004).

Hao,J.et al.Expression of Adipocyte/Macrophage Fatty Acid-BindingProtein in Tumor-Associated Macrophages Promotes Breast CancerProgression.Cancer Res.78,2343-2355(2018).

Harder,E.et al.OPLS3:A Force Field Providing Broad Coverage of Drug-like Small Molecules and Proteins.J.Chem.Theory Comput.12,281-296(2016).

Hayes,J.M.et al.Kinetics,in silico docking,molecular dynamics,and MM-GBSA binding studies on prototype indirubins,KT5720,and staurosporine asphosphorylase kinase ATP-binding site inhibitors:the role of water moleculesexamined.Proteins 79,703-719(2011).

Howe,L.R.,Subbaramaiah,K.,Hudis,C.A.&Dannenberg,A.J.Molecularpathways:adipose inflammation as a mediator of obesity-associatedcancer.Clin.Cancer Res.19,6074-6083(2013).

Ingram,J.R.et al.PD-L1 is an activation-independent marker of brownadipocytes.Nat.Commun.8,647-017-00799-8(2017).

Jacobson,M.P.et al.A hierarchical approach to all-atom protein loopprediction.Proteins 55,351-367(2004).

Jacobson,M.P.,Friesner,R.A.,Xiang,Z.&Honig,B.On the role of thecrystal environment in determining protein side-chainconformations.J.Mol.Biol.320,597-608(2002).

Jorgensen,W.L.&Tirado-Rives,J.The OPLS[optimized potentials forliquid simulations]potential functions for proteins,energy minimizations forcrystals of cyclic peptides and crambin.J.Am.Chem.Soc.110,1657-1666(1988).

Krall,J.A.et al.The systemic response to surgery triggers theoutgrowth of distant immune-controlled tumours in mouse models ofdormancy.Sci.Transl.Med.10,10.1126/scitranslmed.aan3464(2018).

Kwan,H.Y.et al.Subcutaneous adipocytes promote melanoma cell growthby activating the Akt signaling pathway:role of palmiticacid.J.Biol.Chem.289,30525-30537(2014).

Lapeire,L.et al.Cancer-associated adipose tissue promotes breastcancer progression by paracrine oncostatin M and Jak/STAT3 signaling.CancerRes.74,6806-6819(2014).

Liu,Z.et al.Mature adipocytes in bone marrow protect myeloma cellsagainst chemotherapy through autophagy activation.Oncotarget 6,34329-34341(2015).

Liu,Z.et al.Supramolecular stacking of doxorubicin on carbonnanotubes for in vivo cancer therapy.Angew.Chem.Int.Ed Engl.48,7668-7672(2009).

Lu,G.et al.c9,t11-conjugated linoleic acid induces HCC cell apoptosisand correlation with PPAR-gamma signaling pathway.Am.J.Transl.Res.7,2752-2763(2015).

Masso-Welch,P.A.et al.Inhibition of angiogenesis by the cancerchemopreventive agent conjugated linoleic acid.Cancer Res.62,4383-4389(2002).

Miglietta,A.et al.Conjugated linoleic acid induces apoptosis in MDA-MB-231 breast cancer cells through ERK/MAPK signalling and mitochondrialpathway.Cancer Lett.234,149-157(2006).

Nieman,K.M.et al.Adipocytes promote ovarian cancer metastasis andprovide energy for rapid tumor growth.Nat.Med.17,1498-1503(2011).

Ochoa,J.J.et al.Conjugated linoleic acids(CLAs)decrease prostatecancer cell proliferation:different molecular mechanisms for cis-9,trans-11and trans-10,cis-12 isomers.Carcinogenesis 25,1185-1191(2004).

Petruzzelli,M.et al.A switch from white to brown fat increases energyexpenditure in cancer-associated cachexia.Cell.Metab.20,433-447(2014).

Sakuma,S.et al.cis9,trans11-Conjugated Linoleic Acid DifferentiatesMouse 3T3-L1 Preadipocytes into Mature Small Adipocytes through Induction ofPeroxisome Proliferator-activated Receptor gamma.J.Clin.Biochem.Nutr.47,167-173(2010).

Santander,A.M.et al.Paracrine Interactions between Adipocytes andTumor Cells Recruit and Modify Macrophages to the Mammary TumorMicroenvironment:The Role of Obesity and Inflammation in Breast AdiposeTissue.Cancers(Basel)7,143-178(2015).

Sartipy,P.&Loskutoff,D.J.Monocyte chemoattractant protein 1 inobesity and insulin resistance.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.100,7265-7270(2003).

Sastry,G.M.,Adzhigirey,M.,Day,T.,Annabhimoju,R.&Sherman,W.Protein andligand preparation:parameters,protocols,and influence on virtual screeningenrichments.J.Comput.Aided Mol.Des.27,221-234(2013).

Shelley,J.C.et al.Epik:a software program for pK(a)prediction andprotonation state generation for drug-like molecules.J.Comput.AidedMol.Des.21,681-691(2007).

Sherman,W.,Beard,H.S.&Farid,R.Use of an induced fit receptorstructure in virtual screening.Chem.Biol.Drug Des.67,83-84(2006).

Sherman,W.,Day,T.,Jacobson,M.P.,Friesner,R.A.&Farid,R.Novel procedurefor modeling ligand/receptor induced fit effects.J.Med.Chem.49,534-553(2006).

Shivakumar,D.et al.Prediction of Absolute Solvation Free Energiesusing Molecular Dynamics Free Energy Perturbation and the OPLS ForceField.J.Chem.Theory Comput.6,1509-1519(2010).

Shivakumar,D.et al.Prediction of Absolute Solvation Free Energiesusing Molecular Dynamics Free Energy Perturbation and the OPLS ForceField.J.Chem.Theory Comput.6,1509-1519(2010).

Spencer,M.et al.Adipose tissue macrophages in insulin-resistantsubjects are associated with collagen VI and fibrosis and demonstratealternative activation.Am.J.Physiol.Endocrinol.Metab.299,E1016-27(2010).

Stephan,S.B.et al.Biopolymer implants enhance the efficacy ofadoptive T-cell therapy.Nat.Biotechnol.33,97-101(2015).

Szatrowski,T.P.&Nathan,C.F.Production of large amounts of hydrogenperoxide by human tumor cells.Cancer Res.51,794-798(1991).

Tanmahasamut,P.,Liu,J.,Hendry,L.B.&Sidell,N.Conjugated linoleic acidblocks estrogen signaling in human breast cancer cells.J.Nutr.134,674-680(2004).

Van Den Driessche,G.&Fourches,D.Adverse drug reactions triggered bythe common HLA-B*57:01 variant:virtual screening of DrugBank using 3Dmolecular docking.J.Cheminform 10,3-018-0257-z(2018).

Van Den Driessche,G.&Fourches,D.Adverse drug reactions triggered bythe common HLA-B*57:01 variant:a molecular docking study.J.Cheminform 9,13-017-0202-6.eCollection 2017(2017).

Wang,C.et al.In situ formed reactive oxygen species-responsivescaffold with gemcitabine and checkpoint inhibitor for combinationtherapy.Sci.Transl.Med.10,10.1126/scitranslmed.aan3682(2018).

Wang,Y.Y.et al.Mammary adipocytes stimulate breast cancer invasionthrough metabolic remodeling of tumor cells.JCI Insight 2,e87489(2017).

Watts,K.S.et al.ConfGen:a conformational search method for efficientgeneration of bioactive conformers.J.Chem.Inf.Model.50,534-546(2010).

Wen,D.,Danquah,M.,Chaudhary,A.K.&Mahato,R.I.Small molecules targetingmicroRNA for cancer therapy:Promises and obstacles.J.Control.Release 219,237-247(2015).

Wheate,N.J.,Walker,S.,Craig,G.E.&Oun,R.The status of platinumanticancer drugs in the clinic and in clinical trials.Dalton Trans.39,8113-8127(2010).

Xu,L.et al.Adipocytes affect castration-resistant prostate cancercells to develop the resistance to cytotoxic action of NK cells withalterations of PD-L1/NKG2D ligand levels in tumor cells.Prostate 78,353-364(2018).

Zeyda,M.&Stulnig,T.M.Adipose tissue macrophages.Immunol.Lett.112,61-67(2007).