含有杜仲树皮提取物的用于皮肤清爽或皮肤红肿缓解的化妆品组合物

摘要

本发明提供由天然产物衍生的物质组成的化妆品组合物，具体地，通过使用杜仲树皮提取物及杜仲树皮提取物中含有的京尼平苷和桃叶珊瑚苷来提供由外部暴露的热引起的用于缓解红肿或抑制皮肤温度升高的用于皮肤清爽的化妆品组合物及其制备方法。

说明书

技术领域

本发明涉及一种含有杜仲树皮提取物的用于皮肤清爽或皮肤红肿缓解的化妆品组合物。

背景技术

皮肤是占人体约16％的部位且覆盖人体的表面，并与外部环境直接接触，因此与温度、湿度等外部因素有密切的关系。人体的适宜体温为36.5℃，而皮肤的适宜温度为低5～6℃的31℃，若适宜温度过高或过低，则皮肤的健康状况会下降。

最近，地球更新了自气象观测以来的最高温度，包括韩国在内的全世界都持续着高温，据分析，即使当前每个国家实施气候政策，也会导致3℃以上的全球变暖。随着地球温度的升高，紫外线、红外线等外部环境也使皮肤温度升高，由此加速了皮肤衰老。因此，从由外部刺激引起的皮肤温度上有必要保持皮肤的适宜温度。

皮肤以及体温的升高是包括外周免疫系统和大脑的复杂反应，在一般的热通道中，体温随着前列腺素E2(Prostaglandin E2，PGE2)的生成而升高。PGE2是发热的主要介质，其与下丘脑前部的体温调节神经元的受体结合并起发热作用，通过由PGE2引起的血管扩张和微血管通透性增大来增加被感染的组织的血流量，从而导致皮肤红肿及浮肿。与此相关，在使用3D人造皮肤模型的实验中，还进行了由热刺激增加PGE2的生成的研究和前列腺素E合成酶(PGE synthase，PGES)的表达及其所诱导的热休克蛋白(Heat ShockProtein，HSP)-70的表达的研究。

但是，对PGE2相关的皮肤热调节使用天然产物材料的研究是微乎其微的。因此，本发明利用天然植物提取物来调节由外部刺激引起的皮肤热，从而研发提供用于皮肤红肿缓解或皮肤清爽的化妆品组合物。

发明内容

技术问题

本发明的目的在于，研发提供通过调节由外部刺激引起的皮肤热来发掘因热引起的皮肤红肿缓解及皮肤清爽效果优异的天然产物提取物并含有其作为有效成分的化妆品组合物。

解决问题的方案

本发明提供含有杜仲(Eucommia Ulmoides)树皮提取物的用于缓解红肿的化妆品组合物。

并且，本发明提供含有杜仲(Eucommia Ulmoides)树皮提取物的用于抑制皮肤温度升高的化妆品组合物。

一方面，在本发明中，优选地，上述杜仲树皮提取物可抑制PGE2合成酶蛋白的表达。

另一方面，在本发明中，优选地，相对于化妆品组合物的总重量，可含有0.1重量百分比至20重量百分比的上述杜仲树皮提取物。

并且，本发明提供含有京尼平苷(Geniposide)作为有效成分的用于缓解红肿的化妆品组合物。

并且，本发明提供含有桃叶珊瑚苷(Aucubin)作为有效成分的用于缓解红肿的化妆品组合物。

并且，本发明提供含有京尼平苷(Geniposide)作为有效成分的用于抑制皮肤温度升高的化妆品组合物。

并且，本发明提供含有桃叶珊瑚苷(Aucubin)作为有效成分的用于抑制皮肤温度升高的化妆品组合物。

一方面，在本发明中，优选地，上述京尼平苷(Geniposide)或桃叶珊瑚苷(Aucubin)可抑制PGE2合成酶蛋白的表达。

另一方面，在本发明中，优选地，相对于化妆品组合物的总重量，可含有0.1重量百分比至20重量百分比的上述京尼平苷(Geniposide)或桃叶珊瑚苷(Aucubin)。

再一方面，在本发明中，上述化妆品组合物可以为选自由润肤液、柔肤水、爽肤水、收敛水、乳液、牛奶乳液、保湿乳液、营养乳液、按摩霜、营养霜、保湿霜、护手霜、粉底、精华、营养精华、面膜、香皂、洁面泡沫、洁面乳、洁面霜、身体乳或沐浴露组成的组中的一种以上的剂型。

发明的效果

本发明通过使用杜仲树皮提取物及杜仲树皮提取物中含有的京尼平苷和桃叶珊瑚苷来提供用于缓解由外部暴露的热引起的红肿和抑制皮肤温度升高的用于皮肤清爽的化妆品组合物及其制备方法。

通过使用本发明的杜仲树皮提取物及杜仲树皮提取物中含有的京尼平苷和桃叶珊瑚苷来呈现细胞凋亡抑制效果、热保护功效及抑制由热处理增加的PGE2合成酶蛋白的表达从而具有的抗炎功效。

附图说明

图1为利用高效液相色谱(HLPC)的京尼平苷(Geniposide)分析结果曲线图。

图2为利用高效液相色谱(HLPC)分析纯度的杜仲树皮提取物中京尼平苷(Geniposide)的含量分析结果曲线图。

图3为利用高效液相色谱(HLPC)的桃叶珊瑚苷(Aucubin)分析结果曲线图。

图4为利用高效液相色谱(HLPC)分析纯度的杜仲树皮提取物中桃叶珊瑚苷(Aucubin)的含量分析结果曲线图。

图5为通过MTT法(MTT assay)对对照组、杜仲树皮提取物以及作为有效成分的京尼平苷(Geniposide)及桃叶珊瑚苷(Aucubin)进行人永生化角质形成细胞(HaCaT)细胞毒性实验的结果柱状图。

图6为根据JC-1染色(staining)比较对照组、杜仲树皮提取物以及作为有效成分的京尼平苷(Geniposide)及桃叶珊瑚苷(Aucubin)的染色程度的照片。

图7为对对照组、杜仲树皮提取物以及作为有效成分的京尼平苷(Geniposide)及桃叶珊瑚苷(Aucubin)照射中波紫外线(UVB)后比较相关基因TRPV4的mRNA表达程度的柱状图。

图8为比较对照组、杜仲树皮提取物以及作为有效成分的京尼平苷(Geniposide)及桃叶珊瑚苷(Aucubin)的PGE2合成酶蛋白的表达程度的柱状图。

图9为示出比较含有杜仲树皮提取物的凝胶(gel)(实施例2)产品使用组与未含有杜仲树皮提取物的凝胶(比较例)产品使用组的根据各产品使用前后的皮肤表面温度的对比柱状图。

图10为示出比较含有杜仲树皮提取物的凝胶(实施例2)产品使用组与未含有杜仲树皮提取物的凝胶(比较例)产品使用组的各产品使用前后的皮肤血流量的对比柱状图。

具体实施方式

杜仲(Eucommia ulmoides)是属于杜仲科的落叶胶木，叶片呈椭圆形，果实切成扁平的长圆形则呈现出橡胶黏性般的线，干燥的树皮可用作中药材。杜仲的树皮称为杜仲，嫩叶称为檰芽，均为药用，公知为具有治疗腰痛、神经痛、高血压和止痛等的功效。

本发明提供含有杜仲(Eucommia Ulmoides)树皮提取物的用于缓解红肿的化妆品组合物。

并且，本发明提供含有杜仲(Eucommia Ulmoides)树皮提取物的用于抑制皮肤温度升高的化妆品组合物。

在本发明的化妆品组合物中，上述杜仲树皮提取物可以使用在本发明所属技术领域中通常使用的各种提取方法。例如，可以利用纯化水、甲醇、乙醇、甘油、乙酸乙酯、丁二醇、丙二醇、二氯甲烷、己烷溶剂中的单独一种或混合2种以上的混合溶剂作为提取溶剂来提取。

在本发明中，将杜仲树皮干燥并粉碎后使用乙醇获得杜仲树皮提取物，然后用过滤器过滤将其浓缩，之后通过添加丁二醇制备杜仲树皮提取物来使用。

在本发明的化妆品组合物中，上述杜仲树皮提取物可抑制PGE2合成酶蛋白的表达。

前列腺素E2(Prostaglandin E2，PGE2)是在生物体内合成的一种生理活性物质，作用于发热的主要介质，与下丘脑前部的体温调节神经元的受体结合并起发热作用，从而对体温起升高作用。并且，通过由PGE2引起的血管扩张和微血管通透性增大来增加被感染的组织的血流量，从而导致皮肤红肿及浮肿。

在本发明的化妆品组合物中，优选地，相对于化妆品组合物的总重量，含有0.1重量百分比至20重量百分比的上述杜仲树皮提取物。

并且，本发明提供含有京尼平苷(Geniposide)作为有效成分的用于缓解红肿的化妆品组合物。

京尼平苷(Geniposide)为环烯醚萜苷的成分，是一种存在于约40种天然植物的物质，公知为在抗炎、抗氧化、免疫调节等方面具有药理效果。

并且，本发明提供含有桃叶珊瑚苷(Aucubin)作为有效成分的用于缓解红肿的化妆品组合物。

桃叶珊瑚苷(Aucubin)为环烯醚萜苷的成分，是一种主要在天然植物中所发现的物质，公知为在保护肝损伤、增强免疫力、治疗痛风等方面具有药理效果。

并且，本发明提供含有京尼平苷(Geniposide)作为有效成分的用于抑制皮肤温度升高的化妆品组合物。

并且，本发明提供含有桃叶珊瑚苷(Aucubin)作为有效成分的用于抑制皮肤温度升高的化妆品组合物。

在本发明的化妆品组合物中，上述京尼平苷(Geniposide)或桃叶珊瑚苷(Aucubin)可抑制PGE2合成酶蛋白的表达。

在本发明的化妆品组合物中，优选地，相对于化妆品组合物的总重量，含有0.1重量百分比至20重量百分比的上述京尼平苷(Geniposide)或桃叶珊瑚苷(Aucubin)。

在本发明的化妆品组合物中，上述化妆品组合物可以为选自由润肤液、柔肤水、爽肤水、收敛水、乳液、牛奶乳液、保湿乳液、营养乳液、按摩霜、营养霜、保湿霜、护手霜、粉底、精华、营养精华、面膜、香皂、洁面泡沫、洁面乳、洁面霜、身体乳或沐浴露组成的组中的一种以上的剂型。

并且，本发明的化妆品组合物可以与除本发明以外的其他化妆品组合物并用。并且，本发明的化妆品组合物可以根据常规的使用方法来使用，并且可以根据使用者的皮肤状况或喜好来改变使用次数。

以下，在实施例及实验例中更详细地说明本发明。然而，本发明的发明要求保护范围并不限于以下实施例及实验例，还包括等价的技术思想的所有改变。

实施例1：杜仲树皮提取物的制备

将杜仲树皮干燥并粉碎后在50％的乙醇中加入比例为1：5的杜仲和50％的乙醇，优选地，在30～80℃的温度下以1：8的重量百分比比例搅拌1～5天，优选地，在50℃的温度下搅拌1天来获得杜仲树皮提取物。然后，使用0.1～10um的网眼尺寸，优选地，使用1～0.3um的网眼尺寸的过滤器过滤杜仲树皮提取物。将过滤的杜仲树皮提取物在大约40～70℃的温度下，优选地，在60℃的温度下浓缩并制备浓缩液。通过在制备的浓缩液中加入丁二醇以使其为10～50重量百分比，优选地，使其为30重量百分比来制备杜仲树皮提取物。

实验例1：杜仲树皮提取物的含量分析

在本实验例中，对上述实施例1的提取物实施作为杜仲树皮提取物的有效成分的表1(京尼平苷)及表2(桃叶珊瑚苷)的含量分析。在记载的条件下利用高效液相色谱(HPLC)进行纯度分析，其结果示在以下表3和图1、图2、图3及图4中。

表1

用于京尼平苷(Geniposide)的含量分析的利用高效液相色谱(HLPC)的纯度分析条件

表2

用于桃叶珊瑚苷(Aucubin)的含量分析的利用高效液相色谱(HLPC)的纯度分析条件

表3利用高效液相色谱(HLPC)的纯度分析结果

实验例2：杜仲树皮提取物的细胞毒性评价(MTT法)

在本实验例中，测定上述实施例1的杜仲树皮提取物及作为其有效成分的京尼平苷(Geniposide)和桃叶珊瑚苷(Aucubin)的细胞毒性。

在24-孔板(well plate)中接种人永生化角质形成细胞(HaCaT)并培养24小时后，将培养的细胞的培养基更换为无血清(serum free)培养基，并且按浓度处理试样后培养24小时。为培养结束的细胞更换稀释10倍的2.5mg/ml的MTT溶液的培养基进行反应后，通过去除上清液并加入1ml的二甲基亚砜(DMSO)来溶解所生成的MTT-甲臜(formazan)晶体，再用酶标仪(ELISA Reader)在570nm处测定吸光度。与对照组相比细胞毒性表示为吸光度的百分比，其示在以下表4中。

如以下表4及图5所示，为了评价杜仲树皮提取物及作为指标成分的京尼平苷和桃叶珊瑚苷的功效并确定试样浓度，通过MTT法进行HaCaT细胞毒性测试的结果，杜仲树皮提取物从250ug/ml的浓度开始显示毒性，而京尼平苷和桃叶珊瑚苷没有显示毒性。

表4

实验例3：确认杜仲树皮提取物的光保护功效

在本实验例中，测定上述实施例1的杜仲树皮提取物及作为其有效成分的京尼平苷和桃叶珊瑚苷的光保护功效。

为了验证线粒体的细胞膜的电位变化，将人角质细胞(Human keratinocyte)接种在35mm的板(plate)中并稳定24小时后，更换为无血清培养基(serum-free medium)并处理试样。1小时后，用平衡盐溶液(Hank's Balanced Salt solution，HBSS)的缓冲液清洗，然后加入新鲜的HBSS(fresh HBSS)并用50mJ/cm

通过比较杜仲树皮提取物及作为其有效成分的京尼平苷和桃叶珊瑚苷与作为对照组的UVB处理组来确认染色程度的结果，如图6所示，在实施例1的情况下，在100ug/ml的浓度下呈现细胞凋亡(Apoptosis)抑制功效。京尼平苷在整个处理浓度范围内均呈现功效，特别是在低浓度下与UVB照射组对比，证实了红色荧光和细胞(cell)数量的显著增加。桃叶珊瑚苷在10ug/ml以下的浓度下呈现功效。因此，可以判断出杜仲树皮提取物及作为指标成分的京尼平苷和桃叶珊瑚苷具有高的抑制由UVB引起的细胞凋亡的功效。

实验例4：确认杜仲树皮提取物的热保护功效

在本实验例中，通过上述实施例1的杜仲树皮提取物及作为其有效成分的京尼平苷和桃叶珊瑚苷来测定皮肤热保护功效。

在6孔多功能培养皿(well multidish)中接种HEKn细胞(cell)并培养24小时后，将培养的细胞的培养基更换为HBSS并用100mJ/cm

作为荧光定量PCR(Real-Time PCR)实验结果，如图7所示，杜仲树皮提取物以浓度依赖性的方式降低了由UVB增加的TRPV4的表达，并且用作有效成分的京尼平苷和桃叶珊瑚苷也降低了TRPV4的表达。因此，可以判断出杜仲树皮提取物及作为指标成分的京尼平苷和桃叶珊瑚苷具有保护由紫外线引起损伤的皮肤的热保护功效。

表5

表6

实验例5：确认杜仲树皮提取物的皮肤清爽功效

在本实验例中，测定与皮肤温度升高有关的PGE2合成酶(synthase)蛋白的表达，以发现上述实施例1的杜仲树皮提取物及作为其有效成分的京尼平苷和桃叶珊瑚苷如何影响皮肤清爽效果。

在6孔多功能培养皿(well multidish)中接种人真皮成纤维细胞(normal humandermal fibroblast cell)并培养24小时后，将培养的细胞的培养基更换为HBSS并用红外线(Infrared ray)照射20分钟。之后，更换为无血清(serum-free)培养基并按浓度处理试样后培养24小时。将蛋白分离后，通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定杜仲树皮提取物及作为其有效成分的京尼平苷和桃叶珊瑚苷的PGE2合成酶(synthase)蛋白表达的抑制功效。其示在以下表7及图8中。

表7

如表7及图8所示，杜仲树皮提取物及作为指标成分的京尼平苷和桃叶珊瑚苷抑制由热处理增加的PGE2合成酶蛋白的表达。因此，可以判断出杜仲树皮提取物及作为指标成分的京尼平苷和桃叶珊瑚苷抑制由热处理增加的PGE2合成酶蛋白的表达，从而具有皮肤清爽功效。

实施例2：含有杜仲树皮提取物的化妆品组合物的制备

在本实施例中，制备凝胶作为本发明的化妆品组合物的一例。

将上述实施例1的杜仲树皮提取物制备成含有5.0重量百分比的凝胶。一方面，为了确认含有杜仲树皮提取物的凝胶的功效，制备了未包含杜仲树皮提取物的凝胶(比较例)。以下表8示出实施例2及比较例的化妆品组合物的含量。

表8

实施例2及比较例的组成成分

实施例3：含有杜仲树皮提取物的化妆品组合物的制备

在本实施例中，制备面霜作为本发明的化妆品组合物的一例。

将上述实施例1的杜仲树皮提取物制备成含有5.0重量百分比的面霜。以下表9示出实施例3及比较例的化妆品组合物的含量。

表9

实施例3及比较例的组成成分

实施例4：含有杜仲树皮提取物的化妆品组合物的制备

在本实施例中，制备防晒霜作为本发明的化妆品组合物的一例。

将上述实施例1的杜仲树皮提取物制备成含有5.0重量百分比的防晒霜。以下表10示出实施例4及比较例的化妆品组合物的含量。

表10

实施例4及比较例的组成成分

实施例5：含有杜仲树皮提取物的化妆品组合物的制备

在本实施例中，制备BB霜作为本发明的化妆品组合物的一例。

将上述实施例1的杜仲树皮提取物制备成含有5.0重量百分比的BB霜。以下表11示出实施例5及比较例的化妆品组合物的含量。

表11

实施例5及比较例的组成成分

如上述实施例2至实施例5所示，可制备含有杜仲树皮提取物的化妆品组合物。以下表12为示出实施例2至实施例5的化妆品组合物中的分类。

表12

实验例6：确认本发明的化妆品组合物的皮肤表面温度抑制功效及皮肤血流量抑制功效

在本实验例中，作为上述实施例2至实施例5的化妆品组合物中的一例，旨在确认实施例2的含有杜仲树皮提取物的化妆品组合物的皮肤表面温度抑制活性及皮肤血流量抑制活性。

(1)受试者基本信息

参与本人体试用试验的受试者的信息如以下表13所示。

表13

(2)皮肤表面温度测定结果

在使用产品2周后，访问试验机构并在产品使用前(before)和产品使用2周后(2w)进行测定，并且产品使用2周后利用红外线灯设定人为地提高皮肤温度的实验温度条件后(IR后(After IR))，测定皮肤表面温度的变化。皮肤表面温度测定结果如以下表10及图9所示。

表14

皮肤表面温度平均值(平均±标准误差)

如表10及图9的结果所示，在使用2周后实施例2的产品使用组的皮肤表面温度与使用前相比在统计学上显著降低，而在使用2周后比较例的使用组与使用前相比没有统计学上的差异。实施例2的使用组的皮肤表面温度在产品使用第2周时统计学上显著降低，并且两组进行热处理后的皮肤表面温度在产品使用第2周时进行比较评价的结果，实施例2的使用组的皮肤表面温度统计学上显著降低。

因此，可以确认杜仲树皮提取物可以用作呈现皮肤温度抑制功效的物质。

(3)皮肤血流量测定结果

在产品使用2周后，访问试验机构并在产品使用前(before)和产品使用2周后(2w)进行测定，并且产品使用2周后利用红外线灯设定人为地提高皮肤温度的实验温度条件后(IR后(After IR))，测定皮肤血流量的变化。皮肤血流量测定结果如以下表11及图10所示。

表15

如表11及图10的结果所示，在使用2周后实施例2的产品使用组的皮肤血流量与使用前相比在统计学上显著降低，而在使用2周后比较例的使用组与使用前相比没有统计学上的差异。实施例2的使用组的皮肤血流量在产品使用第2周时统计学上显著降低，并且两组进行热处理后的血流量在产品使用第2周时进行比较评价的结果，实施例2的使用组的皮肤血流量统计学上显著降低。因此，可以确认杜仲树皮提取物作为呈现皮肤血流量抑制功效的物质可用于皮肤红肿缓解。

综上所述，确认了本发明的杜仲树皮提取物及作为其有效成分的京尼平苷和桃叶珊瑚苷具有细胞凋亡抑制效果、热保护功效及抑制由热处理增加的PGE2合成酶蛋白的表达从而具有的抗炎功效。并且，确认了含有杜仲树皮提取物的化妆品组合物具有优异的皮肤温度抑制功效及皮肤血流量抑制功效，可以看出这是根据杜仲树皮提取物及如PGE2的其有效成分的温度调节分子减少所致。