一种新的基于重叠延伸PCR的载体构建方法以及试剂盒

摘要

本发明公开了一种新的基于重叠延伸PCR的载体构建方法：(1)根据目的基因和目的载体的序列设计第一轮PCR扩增引物对，上游引物5’端部分为目的载体上目的基因插入位置之前的20～35bp同源臂序列，3’端部分为目的基因扩增特异引物；下游引物5’端部分为目的载体上目的基因插入位置之后的20～35bp同源臂序列，3’端部分为目的基因扩增特异引物；(2)用第一轮PCR扩增引物扩增目的基因；(3)回收第一轮PCR产物，以回收产物作为引物，以环形的目的质粒载体作为模板，进行第二轮PCR反应；(4)消化第二轮PCR产物；(5)取消化后的PCR产物转化大肠杆菌，摇菌提取质粒，鉴定得到含有目的基因的正确重组质粒。