一种基于ELP-Intein和ccdB的高效质粒载体及其使用方法

摘要

本发明涉及基因工程领域，具体的说是一种基于ELP‑Intein和ccdB的高效质粒载体及其使用方法。质粒载体为闭合环状的双链DNA，含有ccdB基因做作为负筛选标记，因此该载体能够灵活地进行无背景克隆。同时，该质粒载体含有T7启动子和终止子，并具有ELP‑Intein表达盒，可以高效地表达外源蛋白，还可用基于Intein自我切割的ELP标签和His‑tag标签双纯化法进行蛋白纯化。同时，将基于尿素的变性‑复性循环与基于ELP标签的纯化步骤相结合，可以有效的实现不溶性蛋白的纯化。本质粒载体的灵活克隆功能、高效表达功能、双纯化功能，特别是对于不溶性蛋白包涵体的纯化功能，将使得该载体及相应使用方法在基因工程领域具有广泛的应用前景。