一种基于诱导型昆虫细胞生产AAV基因药物的方法

摘要

本发明涉及一种基于诱导型昆虫细胞生产AAV基因药物的方法，所述方法包括：(1)分别构建用于包装腺相关病毒的Rep基因质粒、Cap基因质粒和目的基因质粒；其中Rep基因质粒和Cap基因质粒含有晚期启动子；(2)将构建的三个质粒整合到Sf9昆虫细胞基因组上，得到可生产AAV的稳转细胞株；(3)大量扩增、培养所述稳转细胞株；在需要生产AAV时，用不携带外源基因的杆状病毒，感染所述稳转细胞株，以诱导稳转细胞株中的晚期启动子激活并驱动Rep基因和Cap基因表达，包装生产AAV。该方法不需要使用携带外源基因的杆状病毒，因此不会带来因杆状病毒大量复制扩增所带来的外源基因丢失的问题，有利于获得稳定的AAV产物，进一步简化AAV生产步骤，提高生产效率，实现AAV的大规模化高效生产并降低成本。