一株高效表达几丁质酶重组菌的构建及高酶活突变体的筛选

摘要

一株高效表达几丁质酶重组菌的构建及高酶活突变体的筛选。本发明借助重组蛋白技术实现BcchiA1在枯草芽孢杆菌中的高效分泌型表达，解决了大部分微生物几丁质酶分泌量不足的问题。同时，创建一种新的几丁质酶高通量筛选方法，极大地提高了筛选通量和效率。此外，本发明涉及公开几株高酶活几丁质酶突变体，BcchiA1(Y10A)、BcchiA1(R301A)、BcchiA1(E327A)、BcchiA1(Y10A/R301A)、BcchiA1(Y10A/E327A)、BcchiA1(R301A/E327A)和BcchiA1(Y10A/R301A/E327A)，酶活性比野生型BcchiA1分别提高了2.49倍、0.67倍、3.61倍、2.39倍、3.46倍、4.75倍、16.89倍，其中BcchiA1(Y10A/R301A/E327A)酶活性最优。最终，将几丁质酶BcchiA1及其最优突变体BcchiA1(Y10A/R301A/E327A)与来源于Bacillus atrophaeus的单加氧酶BatLPMO10分别协同作用后，可使BcchiA1和BcchiA1(Y10A/R301A/E327A)的水解效率分别提高50.00％和46.71％。