技术领域
本发明属于心血管技术领域,尤其涉及一种胃癌化疗相关心肌损伤标志物。
背景技术
胃癌是一种高致死性疾病,是消化道肿瘤中最常见的类型。目前,每年有70多万人死于胃癌,而且每年新发的胃癌患者也有近100万。目前,胃癌的主要治疗方式是手术治疗,放疗,化疗以及靶向治疗等。其中,化疗在胃癌晚期患者治疗中起着关键作用,且治疗的效果显著。但是化疗治疗会导致患者出现不可逆的心脏毒性,最终患者会因为心力衰竭、严重心律失常影响患者的生存期。因此,实现胃癌患者化疗相关的心肌损伤的早诊断能够有效的提高患者的生存率。
LncRNA是指长度超过200个核苷酸的内源性非蛋白编码转录本。随着高通量测序技术的发展,研究人员发现,lncRNA的失调表达会改变疾病的进展,并且可以作为多种疾病的独立生物标志物。由于lncRNA可以直接从患者血浆和血清中检测,因此具有检测方便快捷、高灵敏度,高特异度和无创伤的优点。因此,研究胃癌化疗相关的心肌损伤lncRNA有助于实现患者心肌损伤的早诊断和早治疗。
发明内容
本发明的目的在于提供一种胃癌化疗心肌损伤标志物。
为实现上述目的,本发明提供了如下技术方案:
本发明提供了一种用于胃癌化疗心肌损伤辅助诊断和预后诊断的标志物LncRNA-RP11-114O8.1,所述LncRNA-RP11-114O8.1的序列如SEQ ID No.1所示。
此外,本发明提供了检测血液样本中LncRNA-RP11-114O8.1表达水平的试剂在制备胃癌化疗心肌损伤辅助诊断试剂盒中的应用。
优选地,所述试剂为LncRNA-RP11-114O8.1特异性引物的检测试剂。
优选地,所述LncRNA-RP11-114O8.1特异性引物的上游引物序列如SEQ ID NO.2所示,所述LncRNA-RP11-114O8.1特异性引物的下游引物序列如SEQ ID NO.3所示。
此外,本发明提供了检测血液样本中LncRNA-RP11-114O8.1表达水平的试剂在制备胃癌化疗心肌损伤预后诊断试剂盒中的应用。
优选地,所述试剂为LncRNA-RP11-114O8.1特异性引物的检测试剂。
优选地,所述LncRNA-RP11-114O8.1特异性引物的上游引物序列如SEQ ID NO.2所示,所述LncRNA-RP11-114O8.1特异性引物的下游引物序列如SEQ ID NO.3所示。
除此之外,本发明提供了检测血液样本中LncRNA-RP11-114O8.1表达水平的试剂在制备区分胃癌化疗心肌损伤和胃癌化疗无心肌损伤患者的诊断试剂盒中的应用。
优选地,所述试剂为LncRNA-RP11-114O8.1特异性引物的检测试剂。
优选地,所述LncRNA-RP11-114O8.1特异性引物的上游引物序列如SEQ ID NO.2所示,所述LncRNA-RP11-114O8.1特异性引物的下游引物序列如SEQ ID NO.3所示。
本发明的有益效果是:
本发明发现LncRNA-RP11-114O8.1在胃癌化疗心肌损伤患者外周血中的表达相较于未进行化疗治疗的胃癌患者外周血中的表达显著降低;同时,这种下降与胃癌化疗无心肌损伤患者外周血中LncRNA-RP11-114O8.1的表达存在显著的差异;除此之外,治疗后,症状得到缓解的胃癌化疗心肌损伤患者外周血中LncRNA-RP11-114O8.1的表达量相较于胃癌化疗心肌损伤患者外周血显著提高,且差异具有统计学意义。因此,LncRNA-RP11-114O8.1可以作为胃癌化疗心肌损伤患者辅助诊断和预后诊断的标志物,并且可以作为区分胃癌化疗心肌损伤患者和胃癌化疗无心肌损伤患者的标志物。
附图说明
图1 LncRNA-RP11-114O8.1在a,b,c和d组中的表达差异,
a组:未进行化疗治疗的胃癌患者外周血,
b组:胃癌化疗心肌损伤患者外周血,
c组:胃癌化疗无心肌损伤患者外周血,
d组:治疗后心肌损伤症状缓解的胃癌化疗心肌损伤患者外周血;
图2 a组和b组LncRNA-RP11-114O8.1表达差异的ROC曲线;
图3 b组和c组LncRNA-RP11-114O8.1表达差异的ROC曲线;
图4 b组和d组LncRNA-RP11-114O8.1表达差异的ROC曲线。
具体实施方式
为能清楚说明本方案的技术特点,下面通过具体实施方式,对本方案进行阐述。
实施例1
检测标本选择
1.检测标本分组
a组:45例胃癌患者外周血(未进行化疗治疗),
b组:35例胃癌化疗心肌损伤患者外周血,
c组:15例胃癌化疗无心肌损伤患者外周血,
d组:16例治疗后心肌损伤缓解的胃癌化疗心肌损伤患者外周血;
2.按照分组提取外周血血清RNA
(1)将患者的外周血置于离心机中,3000rpm/min离心15min后,将上清的血清转移到新的离心管中;
(2)取出250μl血清置于EP管中,加入750μl Trizol试剂,反复的吹打混匀,静置5min;
(3)加入200μl氯仿,充分振荡混合液15s,室温下静置5min,4℃ 12000rpm 离心15min;
(4)转移上清至新的EP管中,加入与上清等量的异丙醇,颠倒混匀,室温下静置10min,4℃ 12000rpm 离心15min,弃去上清;
(5)加入1ml预冷的75%乙醇重悬RNA沉淀,轻轻洗涤沉淀,4℃,7500rpm离心15min,去除上清,室温静置去除管壁上的乙醇;
(6)使用分光光度计测定提取RNA的浓度和纯度。
3.将RNA逆转录为cDNA
(1)使用PrimeScript
(2)反应条件如下:
37℃ 15min;85℃ 5s;4℃ 保持。
4.Real-time PCR 检测LncRNA-RP11-114O8.1的表达水平
(1)按下表加入反应液:
其中,LncRNA-RP11-114O8.1的引物序列如下:
Forward Primer: 5’-CACTGCAACTTGCTTTGACCA-3’,SEQ ID NO.2;
Reverse Primer: 5’-CTGAGACATCTGGGTGAGGC-3’, SEQ ID NO.3;
(2)反应过程如下:
95℃ 30s预变性;95℃ 5s,60℃ 34s,重复40个循环;
以β-actin为内参,采用2
实验结果如图1所示,b组的LncRNA-RP11-114O8.1相对表达量为0.479±0.038,c组的LncRNA-RP11-114O8.1相对表达量为0.932±0.043,d组的LncRNA-RP11-114O8.1相对表达量为0.844±0.040;
上述结果说明,相较于未进行化疗的患者,患有胃癌化疗心肌损伤的患者的外周血中LncRNA-RP11-114O8.1的相对表达量显著降低(P < 0.0001),而化疗后未出现心肌损伤的胃癌患者的外周血中LncRNA-RP11-114O8.1的相对表达量则没有显著的差异,说明LncRNA-RP11-114O8.1在胃癌化疗心肌损伤患者中低表达,化疗后通过检测LncRNA-RP11-114O8.1的表达量能够检测出发生心肌损伤的患者。
其次,胃癌化疗心肌损伤患者和胃癌化疗无心肌损伤的患者外周血中LncRNA-RP11-114O8.1的相对表达量存在显著差异(P < 0.0001),说明化疗后通过检测患者外周血中LncRNA-RP11-114O8.1的相对表达量能有效的区分患者是否存在心肌损伤。
其次,相较于患有胃癌化疗心肌损伤的患者,治疗后心肌损伤缓解的患者的外周血中LncRNA-RP11-114O8.1的相对表达量显著提高(P< 0.0001),说明患有胃癌化疗心肌损伤的患者与治疗后心肌损伤缓解的患者外周血中的LncRNA-RP11-114O8.1的相对表达量存在显著的差异,因此LncRNA-RP11-114O8.1能够用于胃癌化疗心肌损伤患者的预后诊断。
实施例2
为进一步的研究,LncRNA-RP11-114O8.1能否作为化疗相关心肌损伤的诊断和预后标志物,本发明计算和绘制了a组和b组,b组和c组以及b组和d组之间的ROC曲线,具体内容如图2,图3和图4所示。
从图2中可以看出,a组和b组之间的AUC值为0.9152, Std.Error 为0.03068,P<0.0001,说明在LncRNA-RP11-114O8.1在胃癌化疗心肌损伤患者的辅助诊断中具有优异的诊断价值。
从图3中可以看出,b组和c组之间的AUC值为0.9419,Std.Error为0.3073,P<0.0001,说明在LncRNA-RP11-114O8.1在区分诊断胃癌化疗心肌损伤患者和胃癌化疗未心肌损伤患者中具有优异的诊断价值。
从图4中可以看出,b组和d组之间的AUC值为0.8973,Std.Error为0.4357,P<0.0001,说明LncRNA-RP11-114O8.1在胃癌化疗心肌损伤患者预后诊断中具有优异的诊断价值。
因此,LncRNA-RP11-114O8.1可以作为胃癌化疗心肌损伤患者辅助诊断和预后诊断的标志物,并且可以作为区分胃癌化疗心肌损伤患者和胃癌化疗无心肌损伤患者的标志物。
序列表
<110> 青岛市第九人民医院
<120> 一种胃癌化疗心肌损伤标志物
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 191
<212> DNA
<213> 人源(Human)
<400> 1
atcacacacc gggacctgtc atgggttgac actgcaactt gctttgacca atagcatgga 60
cagaaatgag acctaccaac tttatattgc tctcttcgag gtctgtgcca ccacgtaaga 120
agtataacta tgctgcttct agtgaagttg agcctcaccc agatgtctca gctaccataa 180
ctaaggcact a 191
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cactgcaact tgctttgacc a 21
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ctgagacatc tgggtgaggc 20
机译: 从油砂中收集油的方法,一种基于清洁水的海水的制造方法,一种水的净化方法,一种用于制造海水和压载水的方法,一种用于提取食品替代盐的方法,一种用于制造醇的方法,一种用于制造流体的方法食品,一种基于重力原理的自然净化或精制海水或清洁水的方法,一种用于处理食品废弃物的方法以及一种用于净化水的设备
机译: 一种制造醇的方法,一种从油砂中收集油的方法,一种基于清洁水的海水的制造方法,一种净水的方法,一种制造海水和压载水的方法,一种用于提取食品替代盐的方法,一种用于制造食品的方法流体食品,一种处理食品废物的方法以及一种净化水的装置,该装置可以利用净水或海水中所含的有机污染物作为能源
机译: 用于对流体进行生物修饰的装置,用于对生物体内的流体进行生物修饰的装置,为生物提供具有一种或多种肝功能的体外装置,向生物体提供生命的体内装置一种或多种具有肝功能的生物,一种提供具有一种或多种肾功能的生物的体内装置,一种或多种具有肾脏和肝功能的生物的体内装置,为生物提供一种或多种肾功能,对生物进行流体生物学修饰的方法,制备连续平面器官的方法,为生物提供一种或多种肝功能的方法,方法提供具有一种或多种肾脏功能的生物,通过低温技术制备和使用保存的器官微粒的方法和方法提供具有一种或多种肾脏和生命的生物