用于治疗哮喘或帕金森病的方法和药物组合物

摘要

本发明涉及用于治疗哮喘的方法和包含氯胍的组合物。本发明还涉及用于治疗帕金森病的方法和包含氯胍的组合物。

说明书

发明领域

本公开涉及用于治疗哮喘的包含氯胍(proguanil)的方法和组合物。本公开还涉及用于治疗帕金森病的包含氯胍的方法和组合物。

发明背景

哮喘是一种下呼吸道的慢性炎性疾病，其特征在于气道高反应性和粘液阻塞。支气管哮喘是影响儿童和年轻成人的最常见的慢性疾病。强有力的证据表明哮喘中存在遗传成分(Bleecker等人,Am.J.Respir.Crit.Care.Med.,156:S113-6(1997)；Kauffmann等人,Chest,121(3Supp.):27S(2002))。还已知多种环境因素调节哮喘的临床表达以及哮喘相关表型：支气管高反应性、萎缩和IgE升高(Koppelman等人,Eur.Resp.J.,13:2-4(1999)；Cookson,Nature,25:B5-11(1999)；Holloway,Clin.Exp.Allergy,29:1023-1032(1999))。

自从1948年以来，皮质醇的药理学类似物(例如泼尼松)已经在临床上使用，并且仍然是治疗包括哮喘的各种炎性疾病的护理标准。这些糖皮质激素(GC)减少了对哮喘极重要的病理性炎症，并且认为它们通过其抗炎作用控制临床哮喘症状(Expert Panel Report3(EPR-3):Guidelines for the Diagnosis and Management of Asthma-Summary Report2007.J Allergy Clin.Immunol.2007,120:S94-138)。仍然需要改进的哮喘治疗方法。

帕金森病是随意运动的障碍，其中肌肉变得僵硬和迟缓，运动变得笨拙和困难，并且肌肉群的不受控制的节奏性颤搐产生特征性的抖动或震颤。该病症被认为是由脑中突触前多巴胺能神经元的变性引起的。在神经元活动期间，化学递质多巴胺的不充分释放由此导致帕金森症状学。

帕金森综合征最广泛使用的治疗是施用左旋多巴(L-DOPA)，一种多巴胺的前体，它通过替代缺失的多巴胺而间接地起作用。然而，使用左旋多巴也有缺点，例如，患者经常遭受副作用如运动障碍和开关效应，并且必须将左旋多巴与外周多巴脱羧酶抑制剂如卡比多巴或benzaseride组合施用。这些抑制剂防止左旋多巴向多巴胺的外周降解，因此使得更多的药物能够进入脑并限制外周副作用。这种治疗改善了患者的生活质量，但不会阻止疾病的发展。此外，这种治疗与许多副作用有关，包括恶心、呕吐、腹胀和精神副作用(例如，毒性混淆状态、偏执狂和幻觉)。仍然需要改善帕金森病的治疗。

发明简述

本文公开了一种治疗有需要的个体的哮喘的方法，所述方法包括向所述个体施用药物组合物，所述药物组合物包含由式1表示的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂:

[式1]

在所述方法的一些实施方案中，所述组合物还包含式2表示的化合物或其药学上可接受的盐:

[式2]

哮喘可以是但不限于过敏原诱导的哮喘、病毒诱导的哮喘、冷诱导的哮喘、污染诱导的哮喘和/或运动诱导的哮喘。

在治疗哮喘的方法的一些实施方案中，将组合物口服施用于个体。在治疗哮喘的方法的一些实施方案中，组合物包含每千克个体体重0.001mg至100mg的每种化合物。

本文还公开了药物组合物，其包含由式1表示的化合物或其药学上可接受的盐、由式2表示的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂:

[式1]

[式2]

在一些实施方案中，所述组合物适于口服施用至个体。在一些实施方案中，组合物包含1mg至1000mg的每种化合物。

本文还公开了治疗有需要的个体的帕金森病的方法，所述方法包括向所述个体施用药物组合物，所述药物组合物包含由式1表示的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂:

[式1]

在所述方法的一些实施方案中，所述组合物还包含式2表示的化合物或其药学上可接受的盐:

[式2]

在治疗帕金森病的方法的一些实施方案中，将组合物口服施用于个体。在治疗帕金森病的方法的一些实施方案中，组合物包含每千克个体体重0.001mg至100mg的每种化合物。

附图简述

图1。IPS-07004对A549肺癌细胞存活的影响。

图2。IPS-07004对LPS诱导的A549肺癌细胞中IL-6和IL-8表达的影响。

图3。IPS-07004对IL-1β诱导的A549肺癌细胞中IL-6表达的影响。

图4。IPS-07004对IL-1β诱导的A549肺癌细胞中IL-8表达的影响。

图5。IPS-07004和孟鲁司特组合治疗对LPS诱导的A549肺癌细胞中IL-6和IL-8表达的影响。

图6。IPS-07004和孟鲁司特组合治疗对IL-1β诱导的A549肺癌细胞中IL-6和IL-8表达的影响。

图7。IPS-07004对小鼠和HMC-1细胞中TSLP表达的抑制作用。

图8。IPS-07004对肥大细胞数和血清IgE水平的抑制作用。

图9。IPS-07005对HMC-1细胞中人Caspase-1活性的影响。

图10A和10B。IPS-07005对PMA诱导的HMC-1细胞中IL-6和IL-8表达的影响。

图11A和11B。IPS-07005的组合治疗对IL-1β诱导的A549肺癌细胞中IL-6和IL-8表达的影响。

图12。IPS-07005对OVA特异性IgE表达的抑制作用。

图13A和13B。IPS-07005对支气管肺泡灌洗液(BAL)中总细胞数和嗜酸性粒细胞数的抑制作用。图13C。嗜酸性粒细胞的组织学图像。

图14。IPS-07005对OVA诱导的肺组织学变化的影响，如通过H&E染色(100x)所测定的。

图15A和15B。用于杯形细胞可视化的用PAS染色的气道组织学图像。

图16A和16B。IPS-07005对BAL液中IL17A和CXCL1表达的抑制作用。

图17A和17B。IPS-07005对BAL液中CCL3和CCL2表达的抑制作用。

图18。IPS-07004对帕金森病(PD)小鼠行为的影响。

图19。IPS-07005对PD脑中纹状体和黑质中酪氨酸羟化酶表达的影响。

图20。IPS-07005对PD脑中IL-1β表达的影响。

发明详述

氯胍也称为chlorguanide，是一种前药，其被肝脏转化为其活性代谢物，环氯胍，是二氢叶酸还原酶(DHFR)抑制剂。本公开提供了包含由式1表示的化合物或其药学上可接受的盐的组合物:

[式1]

所述组合物可还包含孟鲁司特(商品名SINGLULAIR)(式2所示的化合物)或其药学上可接受的盐:

[式2]

孟鲁司特是白三烯受体拮抗剂(LTRA)，用于维持治疗哮喘和缓解季节性过敏症状。孟鲁司特是CysLT

孟鲁司特用于许多病症，包括哮喘、运动诱发的支气管痉挛、过敏性鼻炎、原发性痛经(即与已知病因无关的痛经；见痛经病因)和荨麻疹。如果单独使用皮质类固醇不能带来所需的效果，那么除了吸入皮质类固醇之外，孟鲁司特主要用作成人的补充疗法。它还用于在静脉内施用免疫球蛋白期间预防过敏反应和哮喘爆发。

本文公开的组合物可以包含氯胍，氯胍和孟鲁司特，或氯胍和其它抗哮喘剂，如齐留通、扎鲁司特、硫酸特布他林和沙丁胺醇。本文公开的组合物还可以包含氯胍、孟鲁司特和其它用于治疗帕金森病的药物，例如左旋多巴、卡比多巴和/或benzaseride。

本文公开的化合物的药学上可接受的盐包括衍生自以下物质的盐：无机碱例如锂(Li)、钠(Na)、钾(K)、钙(Ca)、镁(Mg)、铁(Fe)、铜(Cu)、锌(Zn)和锰(Mn)；衍生自有机碱例如N,N'-二乙酰基乙二胺、葡糖胺、三乙胺、氯、氢氧化物、二环己胺、二甲双胍、苄胺、三烷基胺、硫胺素及其等价物；手性碱例如烷基苯胺、甘氨醇、苯基甘氨醇及其等价物；天然氨基酸盐例如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、正亮氨酸、酪氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、羟基脯氨酸、组氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、精氨酸、丝氨酸及其等价物；含有烷基硫酸酯例如卤代烷、MeI和(Me)

除了盐形式之外，本公开提供了前药形式的化合物。本文所述化合物的前药是在生理条件下容易经历化学变化以提供本公开的化合物的那些化合物。另外，前药可以通过化学或生物化学方法在离体环境中转化为本公开的化合物。例如，当与合适的酶或化学试剂一起置于透皮贴剂储库中时，前药可以缓慢地转化为本公开的化合物。前药通常是有用的，因为在一些情况下，它们比母体药物更容易给药。例如，它们可以通过口服施用而生物利用，而母体药物则不能。前药在药物组合物中的溶解度也可以高于母体药物。多种前药衍生物是本领域已知的，例如依赖前药的水解裂解或氧化活化的那些。前药的非限制性实例是本公开的化合物，其作为酯(“前药”)施用，但之后代谢水解成羧酸，即活性实体。另外的实例包括本公开的化合物的肽基衍生物。

本公开的某些化合物可以以非溶剂化形式以及溶剂化形式存在，包括水合形式。通常，溶剂化形式等同于非溶剂化形式，并且旨在包括在本公开的范围内。本公开的某些化合物可以以多晶体或无定形形式存在。通常，所有物理形式对于本公开所预期的用途是等同的，并且旨在在本公开的范围内。

本公开的某些化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；外消旋物、对映体、非对映体、几何异构体和单独的异构体都旨在包括在本公开的范围内。这些异构体可以使用常规方法拆分或不对称合成以使异构体“光学纯”，即基本上不含其其它异构体。例如，如果需要本公开的化合物的特定对映异构体，则其可以通过不对称合成制备，或通过手性助剂衍生制备，其中分离所得非对映体混合物并裂解助剂基团以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子含有碱性官能团如氨基或酸性官能团如羧基时，用适当的光学活性酸或碱形成非对映体盐，然后通过本领域公知的分级结晶或色谱方法拆分由此形成的非对映体，随后回收纯对映体。

组合物

本文还公开了药物组合物，其包含由式1表示的化合物或其药学上可接受的盐、由式2表示的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂:

[式1]

[式2]

在一些实施方案中，所述组合物适于口服施用至个体。在一些实施方案中，组合物包含1mg至1000mg的每种化合物。

在一些方面，本公开提供了适合于医药用途的药物组合物，其包含一种或多种本公开的化合物和药学上可接受的赋形剂或载体。本文公开的组合物可以包含氯胍，氯胍和孟鲁司特，或氯胍和其它抗哮喘剂，如齐留通、扎鲁司特、硫酸特布他林和沙丁胺醇。本文公开的组合物还可以包含氯胍、孟鲁司特和其它用于治疗帕金森病的药物，例如左旋多巴、卡比多巴和/或benzaseride。

如本文所用，“药学上可接受的”或“药理学上可接受的”是指当酌情施用于动物或人时不产生不利的、过敏的或其它不良反应的分子实体和组合物。

术语“药学上可接受的赋形剂或载体”包括一种或多种惰性赋形剂，其包括淀粉、多元醇、制粒剂、微晶纤维素、稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等，以及任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。所述介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域公知的。除了任何常规介质或试剂是与活性成分不相容的情况之外，本发明涉及其在治疗组合物中的用途。补充的活性成分也可以掺入组合物中。“药学上可接受的赋形剂”也包括控释手段。

制剂可以改善本公开的化合物或化合物的组合(本文称为活性成分)的一种或多种药物动力学性质(例如，口服生物利用度、膜渗透性)。

剂型的组成、形状和类型通常可根据其应用而变化。例如，与用于治疗相同疾病的适于口服施用的剂型相比，适于粘膜施用的剂型可以包括较少量的活性成分。本发明的这些方面对于本领域的普通技术人员来说是显而易见的(参考文献：Remington’sPharmaceutical Sciences(1990)第18版,Mack Publishing,Easton PA)。

典型的药物组合物和剂型包括一种或多种赋形剂。合适的赋形剂对于药物领域的普通技术人员是显而易见的，并且本公开不限于本文所述的合适的赋形剂的实例。

具体赋形剂是否适用于药物组合物或剂型取决于本领域熟知的各种因素，包括配制待施用于患者的制剂的方法，但不限于此。例如，口服施用的剂型如片剂可包括不适合用于非口服施用制剂的赋形剂。

药物组合物包括适于气雾剂、肺部、吸入、口服、肠胃外(包括皮下、皮内、肌内、静脉内和关节内)、直肠和局部(包括皮肤、颊、舌下和眼内)施用的那些。最合适的途径可取决于接受者的病症和障碍。组合物可以方便地以单位剂型存在，并且可以通过药学领域公知的任何方法制备。通常，通过将活性成分与液体载体或细碎的固体载体或两者均匀且紧密地结合，然后如果需要，将产物成型为所需的组合物来制备组合物。

本公开的组合物还可任选地包含其它治疗成分、抗结块剂、防腐剂、甜味剂、着色剂、矫味剂、干燥剂、成形剂、染料等。当然，任何此类任选成分必须与本公开的化合物相容以确保组合物的稳定性。

活性剂单独或与其它合适组分组合，可以利用若干技术通过肺部途径施用，所述技术包括但不限于气管内滴注(通过注射器将溶液递送入肺中)、气管内脂质体递送、吹入(通过注射器或任何其它类似装置将粉末组合物施用入肺中)和气雾剂吸入。适于肺部途径吸入的组合物包括用于雾化的无菌溶液，其包含溶解于盐水溶液中的治疗有效量的化合物，并且任选地含有防腐剂例如苯扎氯铵或三氯叔丁醇，以及包含溶解或混悬于适当推进剂中的治疗有效量的气雾剂组合物。气雾剂(例如，喷射或超声喷雾器、定量吸入器(MDI)和干粉吸入器(DPI))也可用于鼻内应用。气雾剂可以方便地以单位剂型存在，并通过药学领域公知的任何方法制备。气雾剂组合物是固体材料和液滴在气体介质中的稳定分散体或混悬液，并且可以被置于加压的可接受的推进剂中，如氢氟烷烃(HFA，即HFA-134a和HFA-227，或其混合物)、二氯二氟甲烷(或其他氯氟碳推进剂，如推进剂11、12和/或114的混合物)、丙烷、氮气等。肺部组合物可以包括渗透增强剂，例如脂肪酸和糖类、螯合剂、酶抑制剂(例如蛋白酶抑制剂)、辅助剂(例如甘胆酸盐、脂肽、span 85和萘莫司他)、防腐剂(例如苯扎氯铵或氯丁醇)和乙醇(通常高达5％但可能高达20％重量)。乙醇通常包含在气雾剂组合物中，因为它可以改善计量阀的功能，并且在一些情况下还改善分散体的稳定性。肺部组合物还可以包括表面活性剂，其包括但不限于胆汁盐和在美国专利6,524,557号和其中的参考文献中描述的那些。描述于美国专利6,524,557中的表面活性剂，例如C8-C16脂肪酸盐、胆汁盐、磷脂或烷基糖是有利的，因为据报道它们中的一些还增强组合物中化合物的吸收。

还合适的是包含与合适载体混合的治疗有效量的活性化合物的干粉组合物，其适于与干粉吸入器一起使用。可加入本公开的干粉组合物中的吸收促进剂包括美国专利6,632,456中描述的那些。WO02/080884描述了粉末表面改性的新方法。气雾剂组合物可包括美国专利美国专利5,230,884、美国专利5,292,499、WO017/8694、WO01/78696、US2003019437、US20030165436,和WO96/40089(其包括植物油)。适于吸入的持续释放组合物描述于US20010036481A1、US20030232019A1和US20040018243A1以及WO01/13891、WO02/067902、WO03/072080和WO03/079885中。WO03/015750、US20030008013和WO00/00176中描述了包含微粒的肺部组合物。包含稳定玻璃态粉末的肺部组合物描述于US20020141945和美国专利号6,309,671中。其它气雾剂组合物描述于EP 1338272A1、WO90/09781、美国专利5,348,730、美国专利6,436,367、WO91/04011和美国专利6,294,153以及美国专利6,290,987中，描述了一种基于脂质体的组合物，其可以通过气雾剂或其它方式施用。用于吸入的粉末组合物描述于US20030053960和WO01/60341中。如US20010038824所述，可以鼻内施用所述试剂。

尽管在大多数情况下肺部途径是有利的，但也可能存在其它施用途径可能是有利的情况。例如，口服施用可能是理想的。在这方面，可以考虑使用其中的化合物被经修饰的氨基酸可释放地包封的组合物来施用，如美国专利5,811,127中所述。人们也可以考虑以可植入的持续释放剂型施用，如US20040115236中所述。

含有活性成分的药物组合物可以是适于口服使用的形式，例如片剂、锭剂、糖锭、水性或油性混悬剂、可分散粉末或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊、或糖浆或酏剂。用于口服使用的组合物可以根据本领域已知的用于制备药物组合物的任何方法制备。这样的组合物可以含有一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的试剂，以提供药学上美观和可口的制剂。片剂含有与其它无毒的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分，所述赋形剂适于制备片剂。这些赋形剂可以是，例如，惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶，和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以是未包衣的，或者它们可以通过已知技术包衣以延缓在胃肠道中的崩解和吸收，从而提供较长时间的持续作用。例如，可以使用时间延迟材料如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。它们也可以通过美国专利4,256,108；4,160,452；和4,265,874中公开的方法以形成用于控制释放的渗透治疗片剂。

片剂可通过任选地与一种或多种助剂一起压制或模塑来制备。压制片剂可以通过在合适的机器中压制自由流动形式如粉末或颗粒的活性成分来制备，任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、润滑剂、表面活性剂或分散剂混合。模制片可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉末化合物的混合物来制备。片剂可以任选地被包衣或刻痕，并且可以被配制以提供其中活性成分的持续、延迟或受控释放。

口服使用的组合物还可以以硬明胶胶囊的形式存在，其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或者以软明胶胶囊的形式存在，其中活性成分与水或油介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。

水性混悬剂含有与适于制备水性混悬剂的赋形剂混合的活性物质。这些赋形剂是助悬剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或润湿剂可以是天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或烯化氧与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如十七乙烯氧基鲸蜡醇，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物，例如聚乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。水性混悬剂还可以含有一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯，一种或多种着色剂，一种或多种调味剂，和一种或多种甜味剂，例如蔗糖或糖精。

适于通过加入水来制备水性混悬剂的可分散粉末和颗粒提供了与分散剂或润湿剂、混悬剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散剂或润湿剂和混悬剂的实例是上面已经提到的那些。也可存在其它赋形剂，例如甜味剂、调味剂和着色剂。

药物组合物可以是无菌注射水性或油性混悬剂的形式。该混悬剂可以根据已知技术使用上述那些合适的分散剂或润湿剂和混悬剂配制。无菌注射制剂也可以是在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或混悬剂，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的载体和溶剂中，可以使用的是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发性油通常用作溶剂或混悬介质。为此目的，可以使用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸可用于制备注射剂。

本公开的药物组合物和方法可进一步包含如本文所述的用于治疗哮喘、过敏性疾病和炎性病症的其它治疗活性化合物。在许多情况下，包含本文公开的化合物和供选活性剂的组合物在施用时具有加合或协同效应。

用于本公开的化合物的施用的药物组合物可以方便地以单位剂型存在，并且可以通过本领域熟知的任何方法制备。所有方法包括将活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，通过将活性成分均匀且紧密地与液体载体或细碎的固体载体或两者结合，然后如果需要，将产物成形为所需的组合物，来制备药物组合物。在药物组合物中，活性目标化合物的含量足以对疾病的过程或状况产生所需的效果。

使用方法

术语“个体”或“患者”在本文中定义为包括动物，例如哺乳动物，包括但不限于灵长类(例如人或非人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等。在一些实施方案中，所述个体是人。

如本文所用，术语“预防”是指延迟或排除疾病和/或其伴随症状的发作、阻止个体获得疾病或降低个体获得疾病的风险的方法。

如本文所用，术语“治疗”意指包括减轻、减少或消除疾病或病症和/或其伴随症状以及减轻、减少或根除疾病本身的病因。

术语“治疗有效量”是指由研究者、兽医、医生或其它临床医师所寻求的将引起组织、系统、动物或人的生物学或医学反应的主题化合物的量。术语“治疗有效量”包括当施用时足以防止所治疗的病症或障碍的一种或多种症状的发展或减轻至一定程度的化合物的量。治疗有效量将根据化合物、疾病及其严重性和待治疗哺乳动物的年龄、体重等而变化。

本文公开了治疗有需要的个体的哮喘的方法，所述方法包括向所述个体施用药物组合物，所述药物组合物包含由式1表示的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂:

[式1]

本文还公开了治疗有需要的个体的哮喘的方法，所述方法包括向所述个体施用药物组合物，所述药物组合物包含由式1表示的化合物或其药学上可接受的盐、由式2表示的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂:

[式1]

[式2]

本文还公开了治疗有需要的个体的哮喘的方法，所述方法包括向所述个体施用药物组合物，所述药物组合物包含氯胍和其它抗哮喘剂，如齐留通、扎鲁司特、硫酸特布他林和沙丁胺醇。预防和/或治疗哮喘方法包括过敏原诱导的哮喘、病毒诱导的哮喘、冷诱导的哮喘、污染诱导的哮喘和/或运动诱导的哮喘。

在治疗哮喘的方法的一些实施方案中，将组合物口服施用于个体。在治疗哮喘的方法的一些实施方案中，组合物包含每千克个体体重0.001mg至100mg的每种化合物。

本文还公开了治疗有需要的个体的帕金森病的方法，所述方法包括向所述个体施用药物组合物，所述药物组合物包含由式1表示的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂:

[式1]

本文还公开了治疗有需要的个体的帕金森病的方法，所述方法包括向所述个体施用药物组合物，所述药物组合物包含由式1表示的化合物或其药学上可接受的盐、由式2表示的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂:

[式1]

[式2]

在治疗帕金病的方法的一些实施方案中，将组合物口服施用于个体。在治疗帕金森病的方法的一些实施方案中，组合物包含每千克个体体重0.001mg至100mg的每种化合物。

根据待治疗的疾病和个体的病症，本公开的化合物可以通过气雾剂、肺部、吸入、口服、肠胃外(例如，肌内、腹膜内、静脉内、ICV、脑池内注射或输注、皮下注射或植入)、吸入、鼻、阴道、直肠、舌下或局部(例如，透皮、局部)施用途径施用，并且可以单独或一起配制在含有常规无毒的药学上可接受的载体、辅助剂和适于每种施用途径的介质的合适剂量单位组合物中。本公开还涉及以储库组合物形式施用本公开的化合物，其中活性成分在限定的时间段内释放。

活性成分或其药学上可接受的盐用于成人的剂量范围通常为约0.005mg/天至约10g/天、约1mg/天至约1,000mg/天,约10mg/天至约750m/天,约50mg/天至约500mg/天或约75mg/天至约350mg/天。以离散单位提供的片剂或其它形式的剂型可以方便地含有一定量的本公开化合物，其在这样的剂量下或作为其多个剂量是有效的，例如含有5mg至500mg，通常约10mg至200mg的单位。给予患者的化合物的精确量将由主治医师负责。然而，所用剂量将取决于许多因素，包括患者的年龄和性别、所治疗的确切病症及其严重性。

在哮喘的治疗或预防中，适当的剂量水平通常为每天每千克患者体重约0.001至100mg，其可以以单剂量或多剂量施用。剂量水平可以为约0.01mg/kg/天至约75mg/kg/天或约0.05mg/kg/天至约20mg/kg/天。适合的剂量水平可以为约0.01mg/kg/天至约50mg/kg/天、约0.05mg/kg/天至约20mg/kg/天或约0.1mg/kg/天至约10mg/kg/天。在该范围内剂量可以为0.01mg/kg/天至0.1mg/kg/天、0.1mg/kg/天至1mg/kg/天、1mg/kg/天至10mg/kg/天。对于口服施用，组合物可以以片剂形式提供，所述片剂含有1mg至1000mg的活性成分，如但不限于至1mg，5mg，10mg，15mg，20mg，25mg，50mg，75mg，100mg，150mg，200mg，250mg，300mg，400mg，500mg，600mg，750mg，800mg，900mg和1000mg的活性成分，用于待治疗患者的症状剂量调整。化合物可以每天1至4次的方案施用，例如每天一次、两次、三次或四次。

类似地，在帕金森病的治疗或预防中，合适的剂量水平通常为约0.001至100mg/kg患者体重/天，其可以以单剂量或多剂量施用。剂量水平可以为约0.01mg/kg/天至约75mg/kg/天或约0.05mg/kg/天至约20mg/kg/天。适合的剂量水平可以为约0.01mg/kg/天至约50mg/kg/天、约0.05mg/kg/天至约20mg/kg/天或约0.1mg/kg/天至约10mg/kg/天。在该范围内剂量可以为0.01mg/kg/天至0.1mg/kg/天、0.1mg/kg/天至1mg/kg/天、1mg/kg/天至10mg/kg/天。对于口服施用，组合物可以以片剂形式提供，其包含1mg至1000mg的活性成分，如但不限于1mg，5mg，10mg，15mg，20mg，25mg，50mg，75mg，100mg，150mg，200mg，250mg，300mg，400mg，500mg，600mg，750mg，800mg，900mg,和1000mg的活性成分，用于待治疗患者的症状剂量调整。化合物可以每天1至4次的方案施用，例如每天一次、两次、三次或四次。

在一些实施方案中，氯胍或孟鲁司特的剂量为约0.05mg/天至约1000mg/天，包括该范围内的任何和所有变化，诸如约0.1mg/天至约1000mg/天、约1mg/天至约1000mg/天、约2.5mg/天至约100mg/天、约5mg/天至约50mg/天、约10mg/天至约750mg/天、约50mg/天至约500mg/天或约75mg/天至约350mg/天。

在一些实施方案中，孟鲁司特以经口服摄入的片剂、咀嚼片和颗粒剂的形式提供。孟鲁司特可以每天在进食或不进食时服用一次。孟鲁司特可以作为孟鲁司特钠施用，其中5.2mg孟鲁司特钠相当于5mg孟鲁司特。

然而，应当理解，对于任何特定患者的具体剂量水平和施用频率可以变化，并且将取决于多种因素，包括所用具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时间长度、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用模式和时间、排泄速率、药物组合、特定病症的严重程度和接受治疗的宿主。

本公开的化合物可以与其它活性剂组合或在组合中使用，所述其它活性剂可用于治疗、预防、抑制或改善本公开的化合物对其有用的疾病或病症。

这些其它活性剂或药物可通过其通常使用的途径和量与本公开的化合物同时或相继施用。当本公开的化合物与一种或多种其它药物同时使用时，优选除本公开的化合物之外还含有所述其它药物的药物组合物。因此，本公开的药物组合物包括除了本公开的化合物之外还含有一种或多种其它活性成分或治疗剂的那些。

本公开的化合物与第二活性成分的重量比可以变化，并且将取决于每种成分的有效剂量。通常，将使用各自的有效剂量。因此，例如，当本公开内容的化合物与NSAID组合时，本公开内容的化合物与NSAID的重量比通常为约1000:1至约1:1000，或约200:1至约1:200。本公开的化合物和其它活性成分的组合通常也将在前述范围内，但在每种情况下，应当使用每种活性成分的有效剂量。

下文中，将参照下述非限制性实施例，进一步详细描述本发明。然而，提供所述实施例，仅用于解释性目的，并且不是旨在限制本发明的范围。

实施例

实施例1。体外细胞生存力测定(MTT)。

IPS-07004(氯胍)购自Key Organics(伦敦，英国)。

将A549肺癌细胞(1x10

为了检测用IPS-07004处理的A549细胞的存活率，使用MTT进行体外细胞存活率试验。当细胞被LPS(脂多糖)和IL-1β(白细胞介素-1β)诱导时，IPS-07004对生存力的影响很小或没有影响(图1)。

实施例2。IL-6和IL-8的酶联免疫吸附测定(ELISA)。

将A549细胞(1×10

为了评估IPS-07004是否抑制在哮喘病理学中起关键作用的IL-6和IL-8的表达，采用A549细胞中细胞因子的ELISA。

IPS-07004以剂量依赖性方式降低LPS(图2)和IL-1β(图3和4)诱导的A549细胞中IL-6和IL-8的表达水平。这些数据表明IPS-07004可用于治疗哮喘。

实施例3。IPS-07004和孟鲁司特组合治疗对LPS或IL-1β诱导的A549肺癌细胞中IL-6和IL-8表达的影响。

为了检测IPS-07004与孟鲁司特(一种抗哮喘剂)组合对抗哮喘功能的协同作用，进行了A549细胞中细胞因子表达的测定。

与单独用孟鲁司特处理相比，IPS-07004与孟鲁司特的组合显示在抑制LPS(图5)和IL-1β(图6)诱导的A549细胞中IL-6和IL-8表达方面更有效。这些数据表明，IPS-07004与孟鲁司特的组合治疗能够用于治疗哮喘。

实施例4。IPS-07005的化合物特性

适应证:哮喘

作用方式靶标:来自NLRP3炎性小体的胱天蛋白酶-1抑制剂

先导材料:IPS-07004

组成:IPS-07004 10mg/kg(mpk)+孟鲁司特1.0mpk

开发阶段:I期

图7显示IPS-07004对HMC-1细胞和DNCB(2,4-二硝基氯苯)小鼠中胱天蛋白酶-1活性和TSLP(胸腺基质淋巴细胞生成素)表达的抑制作用。

图8表示IPS-07004对肥大细胞数和血清IgE水平的抑制作用。

实施例5。IPS-07005对哮喘的抑制作用-基于体外细胞的测定

结果

使用基于HMC-1(人肥大细胞系)细胞的分析，IPS-07005((IPS-07004+孟鲁司特)抑制炎性小体关键组分胱天蛋白酶-1的活性，以抑制Pro-TSLP、IL-1β和IL-18向活性形式的转化，如图9所示。

IPS-07004单独以剂量依赖性方式抑制HMC-1细胞中的胱天蛋白酶-1活性，IPS-07005提供了协同效应。

图10显示IPS-07005对PMA(佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯)和A23187(钙离子载体(C 1))诱导的HMC-1细胞中IL-6和IL-8表达的影响。IPS-07005与IPS-07004、单独的孟鲁司特或地塞米松相比，在HMC-1细胞中抑制IL-6和IL-8的表达。

为了评估IPS-07005是否抑制在哮喘病理学中起关键作用的IL-6和IL-8的表达，采用了A549肺癌细胞中细胞因子的ELISA。IPS-07005以剂量依赖性方式降低IL-1β诱导的A549细胞中IL-6和IL-8的表达水平(图11)。IPS-07005与IPS-07004、单独的孟鲁司特或地塞米松相比，在A549细胞(人肺癌细胞)中抑制IL 6和IL-8的表达。

这些数据表明IPS-07005适合用于治疗哮喘。

实施例6。IPS-07005对哮喘的抑制作用-体内动物数据

图12显示IPS-07005对OVA特异性IgE表达的抑制作用。IPS-07005(IPS-0700410mpk+孟鲁司特1mpk)显示支气管肺泡灌洗液(BALF)中OVA诱导的IgE水平显著降低。

图13A和13B表示IPS-07005对支气管肺泡灌洗(BAL)液中总细胞数和嗜酸性粒细胞数的抑制作用。图13C显示当用IPS-07004或IPS-07005处理时，OVA激发的细胞中嗜酸性粒细胞的数量减少。BALF样品中炎性细胞的分析显示OVA致敏使总细胞数显著增加。然而，用IPS-07005处理减少了细胞总数。特别是，与OVA激发组相比，施用IPS-07005也显著降低了相应组中BALF中的总细胞数和嗜酸性粒细胞数(图13A和13B)。

图14显示了IPS-07005对OVA诱导的肺组织学变化的影响，如通过H&E染色(100x)测定。图14显示用PAS染色的气道的组织学图像，用于杯状细胞的可视化。用PAS(高碘酸-Schiff)染色肺切片，来评价它们的杯状细胞增生水平。我们观察到三组中紫色区域(即用PAS染色的肺组织区域)的大小有明显差异。我们注意到OVA激发的小鼠支气管通道中杯状细胞增生和粘液过量产生。然而，我们注意到IPS-07005和高剂量孟鲁司特处理组的杯状细胞数量显著低于OVA激发组(图15A和15B)。

图16显示IPS-07005对BAL液中IL17A和CXCL1表达的抑制作用。图17显示IPS-07005对在BAL液中CCL3和CCL2表达的抑制作用。

为了测定IPS-07005对哮喘小鼠中细胞因子水平的抗哮喘作用，测量了BAL液中IL-17A、CXCL1、CCL2和CCL3的产生。与正常组的小鼠相比，暴露于OVA引起BAL液中IL-17A、CXCL1、CCL2和CCL3的明显增加(图16和17)。然而，在IPS-07005存在下的OVA暴露小鼠中，在OVA暴露后的BAL液中在嗜中性粒细胞浸润中起重要作用的IL-17A、CXCL1的水平降低(图16)。

这一结果强烈提示IPS-07005能够抑制中性粒细胞性哮喘，这是一种对于治疗哮喘而言在医学上未满足的需求。IPS-07005降低了在BAL液中的巨噬细胞活性中起关键作用的CCL2和CCL3的水平(图17)。与IPS-07004或孟鲁司特相比，它显示在降低这些细胞因子的表达方面更有效。IPS-07005对这些细胞因子表达的抑制作用是由于IPS-07004和孟鲁司特的协同作用。总之，这些发现证明IPS-07005的抗炎作用是由多种炎性因子的调节介导的。

方法

将25mg卵清蛋白(OVA)和1mg氢氧化铝水合物(AlOH3)溶解在300mL无菌盐水溶液中，并在0和21天通过腹膜内施用致敏。在观察期结束时，所有活体动物用异氟烷麻醉，从腔静脉/腹主动脉收集血液。取出肺并用无菌盐水溶液洗涤。将250mL无菌盐水装入1mL注射器中，重复注射和回收三次。将洗涤的溶液轻轻离心(300rpm，10分钟)，将上清液冷冻并用于CXCL1(ab216951,Abcam PLC)IL-17A(ab199081,Abcam PLC)和CCL3(ab100726,Abcam PLC)的分析。将沉淀物重悬于相同量的无菌盐水溶液中并用于嗜酸性粒细胞计数和总细胞计数。将收集的血液在室温下放置30分钟，并以3,000rpm离心20分钟。分离血清，用于总IgE和Ova特异性IgE分析。使用福尔马林固定的肺组织进行组织病理学检查。将解剖时提取的肺组织置于盒中并浸没在至少20倍于组织体积的10％中性缓冲福尔马林(10％NBF)中。固定后，将组织切成约4mm厚，在通用组织处理和包埋后制成石蜡块。然后，用旋转切片机将切片切成4μm厚，并进行苏木精&伊红(H&E)染色和PAS染色。

实施例7。抑制帕金森病

方法

对于1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)中毒，小鼠以2小时间隔接受四次腹膜内注射溶于PBS的MPTP-HCl(20mg/kg，游离碱在盐水中；Sigma-Aldrich，圣路易斯，MO)。最后一次MPTP注射十二小时后，注射MPTP的小鼠通过口服施用每天接受一次IPS-07004、孟鲁司特或IPS-07005。

为了研究IPS-07004对PD小鼠的异常行为的影响，进行了爬杆测试(T-转身和T-LA时间)。在用MPTP(20mg/kg，I.P)处理的小鼠中诱导PD，并以10mg/kg的剂量给予小鼠IPS-07004，然后在小鼠中进行爬杆测试，其可以测量运动徐缓，这是帕金森病的标志。T转身测量黑色小鼠从杆的顶部向下转弯的时间。如图18所示，与MPTP处理的对照组和左旋多巴处理组相比，IPS-07004缩短T-转身和T-LA时间。

为了测定IPS-07004和IPS-07005在PD小鼠中的抗PD功能，我们分析了酪氨酸羟化酶(TH)在PD脑中纹状体和黑质中的表达。脑内的免疫组织化学分析显示，与MPTP处理的对照组和左旋多巴处理组相比，IPS-07004和07005处理的小鼠的TH水平降低，如图19所示。

为了评价IPS-07004和07005的抗PD功能是否是由于PD脑中的炎症抑制，进行了细胞因子表达的分析。IPS-07004和IPS-07005降低了PD小鼠中IL-1b的表达，如图20所示。

上述具体实施方案的描述将充分揭示本发明的一般特性，以致其他人通过应用本领域的技术知识，可以容易地修改和/或适应各种应用，而不脱离本发明的一般构思。因此，基于本文所呈现的教导和指导，所述适应和修改预计在所公开的实施方案的等同方案的含义和范围之内。应当理解，本文的措辞或术语是为了描述而不是限制的目的，以便本说明书的术语或措辞由技术人员根据教导和指导来解释。

本发明的广度和范围不应由任何上述示例性实施方案限制，而应仅根据所附权利要求及其等同方案来限定。

本文描述的所有各个方面、实施方案和选项可以以任何和所有变化形式组合。

本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度如同每个单独的出版物、专利或专利申请被具体地和单独地指明通过引用并入本文。