甘草次酸在制备治疗肾小管间质炎症药物中的应用

摘要

本申请属于医药技术领域，具体涉及甘草次酸在制备治疗肾小管间质炎症药物中的应用，所述肾小管间质炎症为高尿酸引起的肾小管间质炎症。甘草次酸通过抑制高尿酸引起的肾小管上皮细胞坏死、抑制高尿酸晶体引起的单核巨噬细胞Nlrp3炎症小体的激活、GSDMD介导的细胞焦亡和炎症因子的分泌，抑制高尿酸引起肾小管间质炎症。

说明书

技术领域

本申请属于医药技术领域，具体涉及甘草次酸在制备治疗肾小管间质炎症药物中的应用，所述肾小管间质炎症为高尿酸引起的肾小管间质炎症。

背景技术

近年来，高尿酸血症患病率呈上升趋势，高尿酸性肾病发病率日渐明显，当血尿酸浓度超过6.8mg/dL，尿酸盐可能沉积在肾组织内形成单钠尿酸晶体，并引起肾脏小管间质炎症反应，病理以肾小管上皮细胞死亡和间质炎症细胞浸润为特征。腺嘌呤饮食诱导的小鼠肾损伤，模拟了高尿酸肾病，并且肾间质可以明显看到大量炎症细胞浸润，主要为中性粒细胞和巨噬细胞，而肾小球的病变不明显，这些特有的特征，区别于以肾小球病变为主要特征的糖尿病肾病。

甘草次酸甘草次酸是五环三萜类化合物，具有类皮质醇激素作用，具有强的抗炎症、调节免疫和通过抑制DNA损伤从而抑制细胞死亡的作用，其在糖尿病肾病、放射性肺损伤等研究中具有保护作用，但在高尿酸引起的肾小管间质炎症未见报道。

专利CN106539803A公开了甘草中的主要成分之一的18β-甘草次酸(或盐)作为减轻化疗药顺铂引起的急性肾损伤的辅助治疗药物的应用。顺铂作为常用化疗药物，其肾脏毒性制约了其临床应用。本发明中的18β-甘草次酸可抑制顺铂诱导的急性肾损伤中肌酐、尿素氮的水平，降低KIM-1损伤蛋白的表达，抑制顺铂引起的肾小管上皮细胞的凋亡，本发明首次发现18β-甘草次酸对顺铂引起的急性肾损伤具有保护作用，其机制与其抑制肾小管上皮细胞凋亡有关，在中药抗癌的辅助治疗中提供了新的潜在药物。但是，并未公开甘草次酸对高尿酸引起肾小管间质炎症的有效。

专利CN102813661B公开了一种甘草次酸衍生物的具有较好的肾损伤保护作用，可以用于制备肾损伤性疾病的预防和治疗药物；甘草次酸衍生物能降低血尿素氮和肌酐，改善肾功能。该文献也未提及甘草次酸对高尿酸引起肾小管间质炎症有效。

发明内容

本发明人现已出人意料发现甘草次酸具有明显减轻高尿酸引起肾小管间质炎症的作用。

本发明的目的是提供甘草次酸在制备治疗肾小管间质炎症药物中的应用，所述肾小管间质炎症为高尿酸引起的肾小管间质炎症。

所述甘草次酸减轻高尿酸肾病肾功能损害，降低血尿素氮和肌酐。

所述甘草次酸减轻高尿酸导致的肾小管损伤和间质炎症改变。

所述甘草次酸减轻高尿酸肾组织中性粒细胞浸润。

所述甘草次酸减轻高尿酸肾组织巨噬细胞浸润。

所述甘草次酸减轻尿酸钠晶体诱导的肾小管上皮细胞死亡。

所述甘草次酸减轻尿酸钠晶体诱导的巨噬细胞NLRP3炎症小体的激活、细胞焦亡标志蛋白GSDMD的剪切和IL-1β的分泌。

发明人研究中发现甘草次酸通过抑制高尿酸引起的肾小管上皮细胞坏死、抑制高尿酸晶体引起的单核巨噬细胞Nlrp3炎症小体的激活、GSDMD介导的细胞焦亡和炎症因子的分泌，明显减轻高尿酸引起肾小管间质炎症。

含有甘草次酸的组合物在制备治疗肾小管间质炎症药物中的应用，所述肾小管间质炎症可以为急性草酸钙肾病或者高尿酸性肾病。

所述组合物是以甘草次酸作为活性成分，加上药学上可接受的辅料所制成的药物。.

本发明所述甘草次酸在治疗肾小管间质炎症时，可以单独使用，也可以与其他药物配合同时使用，或者与其他药物一起制成复方制剂使用，都可以达到治疗肾小管间质炎症的目的。

本发明所述药学上可接受的辅料，是指制备不同剂型时加入所需的各种常规辅料，例如稀释剂、黏合剂、崩解剂、助流剂、润滑剂、矫味剂、包合材料、吸附材料等以常规的制剂方法制备成任何一种常用的口服制剂，例如可以是颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液、汤剂、滴丸剂等。

药理实验结果表明：

(1)甘草次酸减轻高尿酸肾病肾功能损害，甘草次酸干预组血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)都明显下降。

(2)甘草次酸减轻高尿酸导致的肾小管损伤和间质炎症改变，甘草次酸干预组肾小管死亡程度减轻、肾小管扩张减少、间质炎症细胞浸润明显减少。

(3)甘草次酸减轻高尿酸肾组织中性粒细胞浸润，甘草次酸干预组中性粒细胞数目明显减少。即Ly6G阳性的细胞数目明显减少。

(4)甘草次酸减轻高尿酸肾组织巨噬细胞浸润，甘草次酸干预组巨噬细胞数目明显减少。即F4/80阳性的细胞数目明显减少。

(5)甘草次酸减轻尿酸钠晶体诱导的肾小管上皮细胞死亡，即PI阳性(红色荧光)的细胞数目明显增加。

(6)甘草次酸减轻尿酸钠晶体诱导的巨噬细胞NLRP3炎症小体的激活、细胞焦亡标志蛋白GSDMD的剪切和IL-1β的分泌。

附图说明

图1为甘草次酸对高尿酸肾病肾功能的影响图；图中左图为BUN图；右图为Scr图。

图2为甘草次酸对高尿酸肾病肾小管间质损伤的影响图；图中自左向右分别为对照组PAS染色图；模型组PAS染色图；甘草次酸组PAS染色图；肾小管间质损伤评分图。

图3为甘草次酸对高尿酸肾病中性粒细胞浸润的影响图；图中自左向右分别为对照组免疫组化染色图；模型组免疫组化染色图；甘草次酸组免疫组化染色图；Ly6G阳性细胞数图。

图4为甘草次酸对高尿酸肾病肾组织巨噬细胞浸润的影响图；图中自左向右分别为对照组免疫组化染色图；模型组免疫组化染色图；甘草次酸组免疫组化染色图；F4/80阳性细胞数图。

图5为甘草次酸对尿酸钠诱导的肾小管上皮细胞死亡的影响图；图中自左向右分别通过荧光显微镜观察对照组PI/DAPI双染色图；模型组PI/DAPI双染色图；甘草次酸组PI/DAPI双染色图；PI阳性细胞数图。(PI(红色)：显示细胞死亡，DAPI(蓝色)：显示细胞核；碘化丙啶(propidiumiodide,PI)，DAPI，即4',6-二脒基-2-苯基吲哚,显示活细胞)

图6为甘草次酸抑制尿酸钠诱导的巨噬细胞炎症小体的激活和IL-1β的分泌图；图中1为对照组，2为尿酸钠刺激组，3为甘草次酸+尿酸钠刺激组。左图为Western blot蛋白印迹；右图为ELISA检测IL-1β的分泌水平的图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式来对本申请作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本申请，但并不以此限制本发明。

甘草次酸治疗肾小管间质炎症的药理实验资料

一、试验方法

(1)建立腺嘌呤饮食诱导的高尿酸肾损伤：含0.2％腺嘌呤(TD150071)饲料给小鼠饮食。21天后取小鼠血和肾组织。(该模型会导致高尿酸血症、肾组织尿酸晶体产生，导致肾小管间质损伤)

(2)甘草次酸干预组：在给以腺嘌呤饮食前24小时，先给予每日按40mg/kg甘草次酸灌胃一次，1周后改为隔日给药一次，直至腺嘌呤饮食观察时间结束。

(3)对照组仅以生理盐水灌胃和常规饲料饮食。

二、结果：

(1)

BUN(mg/dl)：对照组(7.896±0.836),模型组(66.238±7.186)；甘草次酸组(30.41±6.398)

Scr(mg/dl):对照组(0.196±0.02),模型组(0.94±0.142)；甘草次酸组(0.41±0.074)

甘草次酸减轻高尿酸肾病肾功能损害，甘草次酸干预组血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)都明显下降(见图1)。

(2)甘草次酸减轻高尿酸导致的肾小管损伤和间质炎症改变，甘草次酸干预组肾小管死亡程度减轻、肾小管扩张减少、间质炎症细胞浸润明显减少(见图2)。

(3)甘草次酸减轻高尿酸肾组织中性粒细胞浸润，甘草次酸干预组中性粒细胞数目明显减少。即Ly6G阳性的细胞数目明显减少(见图3)。

(4)甘草次酸减轻高尿酸肾组织巨噬细胞浸润，甘草次酸干预组巨噬细胞数目明显减少。即F4/80阳性的细胞数目明显减少(见图4)。

(5)甘草次酸减轻尿酸钠晶体诱导的肾小管上皮细胞死亡，即PI阳性(红色荧光)的细胞数目明显增加(见图5)。

(6)甘草次酸减轻尿酸钠晶体诱导的巨噬细胞NLRP3炎症小体的激活、细胞焦亡标志蛋白GSDMD的剪切和IL-1β的分泌(见图6)。