乳制品中双氰胺残留量的测定方法

摘要

本发明提出了一种乳制品中双氰胺残留量的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括以下步骤：S1：配置不同浓度的双氰胺标准工作液；S2：对乳制品中残留的双氰胺用乙腈和水的混合溶液超声提取，基质分散固相萃取净化，制备成待测液；S3：采用液相色谱串联质谱仪对步骤S1中制备的双氰胺标准工作液进行质谱测定，并绘制标准曲线；S4：采用液相色谱串联质谱仪对步骤S2中的待测液进行质谱测定，并通过步骤S3的标准曲线获得乳制品中双氰胺的含量。该测定方法单独地、更简便地、更准确地测得乳制品中双氰胺的残留量。

说明书

技术领域

本发明属于食品检测与化学分析技术领域，涉及一种乳制品中双氰胺残留量的测定方法。

背景技术

双氰胺又名二氰二胺、二聚氰胺，英文名称dicyandiamide，缩写DICY或DCD，化学式为C

2013年1月，新西兰乳业巨头恒天然集团被爆出其生产的部分奶粉中含有双氰胺，其缘由是由于新西兰奶农使用了含有双氰胺的化肥，从而导致奶粉中产生了双氰胺残留。双氰胺是生产三聚氰胺的原料，同样属于非蛋白高氮物质，其安全性尚未得到评估。此外，双氰胺作为单氰胺的二聚体，其对小鼠毒害症状与单氰胺三聚体三聚氰胺类似，13000mg/kg剂量的双氰胺和三聚氰胺给药后的小鼠出现一致毒害症状，均出现不安，跳跃，呼吸急促，随后在几十分钟内便死亡。鉴于其可能会像三聚氰胺一样对婴幼儿产生危害，新西兰政府禁止销售含有双氰胺的奶制产品。我国是新西兰奶粉的主要进口国，目前市面上约40％的奶粉来自新西兰，此次事件再度引起了人们对奶粉安全的高度关注和质疑。

中国专利CN102419354A公开了一种液态奶中小分子有害物质的通用快速检测方法，并具体公开了采用超高效液相色谱与三重四级杆质谱联用测定其中的小分子有害物质的方法；所述方法适用于检测液态奶中三聚氰胺、双氰胺等小分子有害物质。

中国专利CN102435699A公开了一种液相色谱串联质谱快速检测乳与乳制品中三聚氰胺的方法，并具体公开了在待测乳制品中加入内标，用乙腈提取三聚氰胺，以正相色谱柱串联质谱MRM(multiple reaction monitoring，质谱多反应监测)定性、定量的分析、测量乳制品中三聚氰胺的步骤。

中国专利CN103217498A公开了一种液-质联用检测奶粉中双氰胺的方法及样品前处理方法，该方法包括下列步骤：样品前处理：样品用水溶解，并加入有机提取液进行提取，随后加入MgSO

发明内容

针对现有技术中所存在的上述技术问题的部分或者全部，本发明提出了一种乳制品中双氰胺残留量的测定方法，该方法能更简便地、更准确地测得乳制品中双氰胺的残留量。

为了实现以上发明目的，本发明提出了一种乳制品中双氰胺残留量的测定方法，该测定方法包括以下步骤：

S1：配置不同浓度的双氰胺标准工作液；

S2：对乳制品中残留的双氰胺用乙腈和水的混合溶液超声提取，基质分散固相萃取净化，制备成待测液；

S3：采用液相色谱串联质谱仪对步骤S1中制备的双氰胺标准工作液进行质谱测定，并绘制标准曲线；

S4：采用液相色谱串联质谱仪对步骤S2中的待测液进行质谱测定，并通过步骤S3的标准曲线获得乳制品中双氰胺的含量。

在一种实施方案中，步骤S1中配置双氰胺标准工作液包括以下步骤：

S11：取适量的双氰胺内标标准品，用纯水配成浓度不低于100μg/mL的标准储备液；

S12：将储备液用纯水溶液稀释成10μg/mL的标准中间液；

S13：将中间液用水稀释成浓度为多种浓度的标准工作液。

在一种实施方案中，步骤S2中对乳制品中残留的双氰胺进行提取包括以下步骤：

S21：称取试样加水超声，加入正己烷饱和乙腈、乙腈饱和正己烷后涡旋混合均匀，振荡，离心，提取乙腈层。

在一种实施方案中，步骤S2中对乳制品中残留的双氰胺进行提取包括以下步骤：

称取1g-5g试样，加入2mL-10mL水超声5min-15min，加入10mL-30mL正己烷饱和乙腈、5mL-15mL乙腈饱和正己烷涡旋混合均匀，振荡提取10min-30min，10000r/min-18000r/min离心2min-8min；提取乙腈层。

在一种实施方案中，步骤S2中对乙腈层净化包括以下步骤：

取步骤S21提取的乙腈层加入到装有无水硫酸镁、C18、PSA、GCB的离心管中，涡旋混匀，振荡，离心，取上清液至小离心管中，再次离心，取上清液待测。

在一种实施方案中，步骤S2中对乙腈层净化包括以下步骤：

取1mL-5mL步骤S21提取的乙腈层加入到装有200mg-600mg的无水硫酸镁、60mg-150mg的C18、80mg-150mg的PSA、30mg-100mg的GCB的离心管中，涡旋混匀，振荡8min-15min，10000r/min-18000r/min离心1min-10min，取0.8mL-2mL上清液至小离心管，10000r/min-18000r/min离心1min-10min，取上清液装瓶待测。

在一种实施方案中，步骤S4中根据步骤S3的标准曲线获得双氰胺的含量包括：

S41：采用液相色谱串联质谱仪对步骤S2中的待测液进行测定获得待测液的峰值面积；

S42：根据峰值面积通过标准曲线查得试样溶液中试样溶液中被测组分的浓度c；

S43：根据公式

在一种实施方案中，所述测定方法中还包括空白试验，对所述空白试验的测定包括：

选取阴性样品，采用液相色谱串联质谱仪按照测定标准工作液的步骤进行质谱测定，获得空白试验的质谱图。

在一种实施方案中，步骤S3和S4中采用的色谱条件包括：

a)色谱柱：Waters BEH Amide，1.7μm×2.1mm×50mm；

b)色谱柱温度：30℃；

c)流动相：(5mmol/L乙酸胺+0.1％甲酸)/乙腈(5/95)；

d)流速：0.2mL/min；

e)进样量：2.5μL。

在一种实施方案中，步骤S3和S4中采用的色谱条件包括：

a2)液相色谱柱：阳离子交换和C18的混合色谱柱CR(1∶4)2.0×150mm×5μm；

b2)柱温：35℃；

c2)流动相：流动相C(20mmol/L乙酸铵+0.2％甲酸水)∶流动相B(乙腈)＝90∶10；

d2)流速：0.3mL/min；

e2)进样量：5μL。

在一种实施方案中，步骤S3和S4中采用的质谱条件包括：

电离方式：ESI+；

锥孔气流：氮气，40L/h；

毛细管电压：3.0kV；

去溶剂气流：氮气，1000L/h；

源温度：150℃；

碰撞气：氩气；

去溶剂温度：500℃；

监测模式：多反应监测(MRM)。

在一种实施方案中，步骤S3和S4中采用的多反应监测离子对、碰撞气能量、锥孔电压、驻留时间包括：

采用双氰胺化合物，母离子84.8、子离子67.75；采用的锥孔电压10V，碰撞能量13eV；

采用双氰胺化合物，母离子84.8、子离子45.85采用的锥孔电压13V，碰撞能量13eV；

采用双氰胺内标化合物，母离子88.8、子离子70.75；采用的锥孔电压25V，碰撞能量13eV。

与现有技术相比，本发明的优点在于：

在本发明中，通过乙腈和水的混合溶液对试样中残留的双氰胺超声提取，通过对基质萃取净化，采用超高效液相色谱串联质谱法进行测定，内标法定量。该方法相对于现有技术能单独、准确地测得试样中残留的双氰胺含量。该测定方法更简便，而且测定灵敏、回收率高。

附图说明

下面将结合附图来对本发明的优选实施例进行详细地描述，在图中：

图1是0.01μg/mL双氰胺的标准品质谱图；

图2是实施例一的奶粉空白样品质谱图；

图3是实施例一的奶粉空白样品加标质谱图；

图4是实施例一的双氰胺标准工作曲线；

图5是实施例二的0.01μg/mL双氰胺的标准溶液质谱图；

图6是实施例二的脱脂粉样品的质谱图；

图7是实施例二的脱脂粉样品空白样品的质谱图；

图8是实施例二的脱脂粉样品添加回收样品的质谱图。

附图中，相同的部件使用相同的附图标记。附图并未按照实际的比例绘制。

具体实施方式

为了使本发明的技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图对本发明的示例性实施例进行进一步详细的说明。显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是所有实施例的穷举。并且在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以互相结合。

发明人在发明过程中注意到，目前大部分对乳制品的测定是针对三聚氰胺和双氰胺两者，由于三聚氰胺和双氰胺的一些性能接近，使用该方法测量双氰胺时容易导致测量结果不准确。而单独测量双氰胺的方法中制备待测样品的过程比较繁琐，费时费力，而且NaCl的加入可能会导致盐析作用，减小样品的溶解度，进而导致测试结果不准确。

针对以上不足，本发明的实施例提出了一种乳制品中双氰胺残留量的测定方法，下面进行详细说明。

在一个实施例中，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法需要准备的试剂和材料包括：

1)水溶液：水为超纯水(实验室用)；

2)正己烷(色谱纯)；

3)乙腈(色谱纯)；

4)乙酸胺(优级纯)；

5)无水硫酸镁(分析纯)；

6)吸附剂石墨化碳；

7)吸附剂PSA(N-丙基乙二胺)；

8)吸附剂C18；

9)双氰胺标准品：英文名称：dicyandiamide；CAS：461-581-5；相对分子质量：84.08；分子式：C

10)双氰胺同位素内标：英文名称：dicyandiamide-15N4；相对分子质量：87.7。

在一个实施例中，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法需要准备的测试仪器和设备包括：

11)超高效液相色谱串联质谱：配ESI源(Electron Spray Ionization，电喷雾离子源)；

12)涡旋混合器；

13)分析天平；

14)振荡器；

15)50mL高速离心管；

16)50mL低速离心管；

17)5mL离心管；2mL小离心管；

18)容量瓶；

19)移液器。

实施例一：

在本实施例中，采用的试样为某品牌奶粉。本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法主要包括以下步骤：

S1：配置不同浓度的双氰胺标准工作液；

S2：对乳制品(本实施例中指某品牌奶粉)中残留的双氰胺用乙腈和水的混合溶液超声提取，基质分散固相萃取净化，制备成待测液；

S3：采用液相色谱串联质谱仪对步骤S1中制备的双氰胺标准工作液进行质谱测定，并绘制标准曲线；

S4：采用液相色谱串联质谱仪对步骤S2中的待测液进行质谱测定，并通过步骤S3的标准曲线获得乳制品中双氰胺的含量。

在本实施例中，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法包括双氰胺标准工作液的配备。更具体地，双氰胺标准工作液的配备包括：

S11、配制双氰胺内标标准储备液：准确称取适量的双氰胺内标标准品(精确至0.1mg)，用水配成浓度不低于100μg/mL的标准储备液(4℃可储存1年)；

S12、配制双氰胺内标标准中间液：将内标储备液液稀释成10μg/mL的标准中间液；

S13、配制双氰胺标准工作液：将双氰胺内标标准中间液用水稀释成浓度为2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL、50ng/mL的标准工作液。

优选地，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法还包括样品制备保存步骤：取样品约200g装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，常温下保存。

进一步地，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法的步骤S2中对乳制品中残留的双氰胺进行提取包括以下步骤：

S21：称取试样加水超声，加入正己烷饱和乙腈、乙腈饱和正己烷后涡旋混合均匀，振荡，离心，提取乙腈层。

优选地，在本实施例中，步骤S2中对乳制品中残留的双氰胺进行提取包括以下步骤：

称取1g-5g试样，加入2mL-10mL水超声5min-15min，加入10mL-30mL正己烷饱和乙腈、5mL-15mL乙腈饱和正己烷涡旋混合均匀，振荡提取10min-30min，10000r/min-18000r/min离心2min-8min；提取乙腈层。

在一个优选的实施例中，步骤S2中对乳制品中残留的双氰胺进行提取主要包括以下步骤：

称取试样约2g(精确到0.001g)，添加内标20μL，加入3mL水超声10min，加入17mL正己烷饱和乙腈，10mL乙腈饱和正己烷涡旋混合均匀，振荡提取20min，15000r/min离心3min；提取乙腈层。

在本实施例中，步骤S2中对乙腈层净化主要包括以下步骤：

取步骤S21提取的乙腈层加入到装有无水硫酸镁、C18、PSA、GCB的离心管中，涡旋混匀，振荡，离心，取上清液至小离心管中，再次离心，取上清液待测。

在一个优选的实施例中，步骤S2中对乙腈层净化包括以下步骤：

取1mL-5mL步骤S21提取的乙腈层加入到装有200mg-600mg的无水硫酸镁、60mg-150mg的C18、80mg-150mg的PSA、30mg-100mg的GCB的离心管中，涡旋混匀，振荡8min-15min，10000r/min-18000r/min离心1min-10min，取0.8mL-2mL上清液至小离心管，10000r/min-18000r/min离心1min-10min，取上清液装瓶待测。

在一个进一步优选的实施例中，步骤S2中对乙腈层净化包括以下步骤：

分别称取400mg无水硫酸镁，100mgC18，100mgPSA，50mgGCB放入5mL离心管，往5mL里离心管加2.5mL提取得到的乙腈层，涡旋混匀，振荡10min，12000r/min离心3min，取1.0mL上清液加入到2mL小离心管，12000r/min离心3min后，取上清液装瓶，上机测定。

进一步地，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法包括以下UPLC色谱条件：

a1)色谱柱：Waters BEH Amide，1.7μm×2.1mm×50mm；

b1)色谱柱温度(即柱温)：30℃；

c1)流动相：(5mmol/L乙酸胺+0.1％甲酸)/乙腈(5/95)；

d1)流速：0.2mL/min；

e1)进样量：2.5μL。

优选地，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法采用以下表1所示的质谱条件：

表1质谱条件

从以上表1的质谱条件结合图1至图4的质谱图可以看到，在本实施例中，通过优化毛细管电压、离子源温度、锥孔与去溶剂气流量等参数得到了理想的双氰胺分析参数。

进一步地，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法包括以下表2的测定工作条件：

表2多反应监测离子对、碰撞气能量、锥孔电压、驻留时间

从以上表2的测定工作条件结合图1至图4的质谱图可以看到，在本实施例中，通过优化得到当前双氰胺及其内标的母离子、子离子和碰撞能量在灵敏度、信噪比、选择性等方面均达到理想的效果。

进一步地，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法包括以下步骤：

41)质谱测定。该方法分别将待测样品和标准工作液用液相色谱串联质谱仪测定。以标准工作液双氰胺浓度与内标浓度，相应的峰面积比值为纵坐标，绘制标准曲线。

在一个实施例中，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法还包括以下步骤：

42)空白试验。选取阴性样品，按上述41)的质谱测定步骤进行。

在一个实施例中，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法包括：

43)样品中双氰胺的含量计算公式：

式中：X表示试样中双氰胺的含量，mg/kg；

c表示从标准曲线上查得的试样溶液中被测组分的浓度，ng/mL；

m表示试样质量，g；

注：计算结果需扣除空白值。

进一步说明的是，如图1至图4示出了实施例一的相关质谱图。其中，图1所示是0.01μg/mL双氰胺的标准品质谱图。本实验采用质谱法，图1显示的两张图表示不同母离子-子离子组合的质谱图，其中上面的图是母离子84.8、子离子67.75组合的质谱图，下面的图是母离子84.8、子离子45.8组合的质谱图。在图1所示的质谱图中，上面的图显示了保留时间为1.35min，定量离子信噪比＞10。下面的图显示了保留时间为1.36min，定性离子信噪比＞10。

图2所示是奶粉空白样品质谱图；其中上面的图是母离子84.8、子离子67.75组合的质谱图，下面的图是母离子84.8、子离子45.8组合的质谱图。在该质谱图中，显示了空白样品中双氰胺为未检出，并无其他干扰。。

图3所示是奶粉空白样品加标质谱图；其中上面的图是母离子84.8、子离子67.75组合的质谱图，下面的图是母离子84.8、子离子45.8组合的质谱图。在该质谱图中，上面的图显示了母离子84.8、子离子67.75组合的双氰胺保留时间1.36min，定量离子信噪比＞10，回收率在80-110％之间满足质控要求，且无其他干扰。下面的图显示了母离子84.8、子离子45.8组合的保留时间为1.35min，定量离子信噪比＞10，回收率在80-110％之间满足质控要求。

图4是实施例一的双氰胺标准工作曲线。在标准工作曲线中，显示了本专利仪器方法在2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL、50ng/mL这6个浓度梯度下线性良好。

另外，本实施例中双氰胺的测定低限为0.05mg/kg。

在本实施例中，还对实施例一的奶粉中双氰胺添加浓度和回收率范围做了实验，实验结果如下表3所示。

通过表3的测试结果，可以看到添加浓度为50μg/mL、200μg/mL、500μg/mL的平均回收率均超过了95％，符合要求。

表3奶粉中双氰胺添加浓度和回收率范围

实施例二：

在本实施例中，采用的样品类型为某品牌的脱脂粉。

采用的移液器规格及编号：018583G(1mL)/R29762F(100μL)。

采用的仪器名称：Thermo液相色谱质谱联用仪。

本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法主要包括以下步骤：

S1：配置不同浓度的双氰胺标准工作液；

S2：对乳制品(本实施例中指某品牌的脱脂粉)中残留的双氰胺用乙腈和水的混合溶液超声提取，基质分散固相萃取净化，制备成待测液；

S3：采用液相色谱串联质谱仪对步骤S1中制备的双氰胺标准工作液进行质谱测定，并绘制标准曲线；

S4：采用液相色谱串联质谱仪对步骤S2中的待测液进行质谱测定，并通过步骤S3的标准曲线获得乳制品中双氰胺的含量。

在本实施例中，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法包括双氰胺标准工作液的配备。更具体地，双氰胺标准工作液的配备包括：

S11、配制双氰胺内标标准储备液：准确称取适量的双氰胺内标标准品(精确至0.1mg)，用水配成浓度不低于100μg/mL的标准储备液(4℃可储存1年)；

S12、配制双氰胺内标标准中间液：将内标储备液液稀释成10μg/mL的标准中间液；

S13、配制双氰胺标准工作液：将双氰胺内标标准中间液用水稀释成浓度为2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL、50ng/mL的标准工作液。

在一个实施例中，优选地，还可以通过以下步骤配制标准工作液：取双氰胺标准溶液(浓度：10μg/mL)100μL，用900μL乙腈稀释得到1.0μg/mL的标准溶液，再取100μL，用900μL乙腈稀释得到100ng/mL的标准溶液，分别取20μL、50μL、80μL、100μL、200μL、500μL至样品瓶中，每瓶中均加入双氰胺同位素(1.0μg/mL)20μL，用960μL、930μL、900μL、880μL、780μL、480μL乙腈稀释，分别得到浓度为0.002μg/mL、0.005μg/mL、0.008μg/mL、0.010μg/mL、0.020μg/mL、0.050μg/mL的标准工作液。用Thermo液相色谱质谱联用仪进行测定得到0.002μg/mL、0.005μg/mL、0.008μg/mL、0.010μg/mL、0.020μg/mL、0.050μg/mL的标准曲线。

优选地，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法还包括样品制备保存步骤：取样品约200g装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，常温下保存。

进一步地，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法的步骤S2中对乳制品中残留的双氰胺进行提取包括以下步骤：

S21：称取试样加水超声，加入正己烷饱和乙腈、乙腈饱和正己烷后涡旋混合均匀，振荡，离心，提取乙腈层。

优选地，在本实施例中，步骤S2中对乳制品中残留的双氰胺进行提取包括以下步骤：

称取1g-5g试样，加入2mL-10mL水超声5min-15min，加入10mL-30mL正己烷饱和乙腈、5mL-15mL乙腈饱和正己烷涡旋混合均匀，振荡提取10min-30min，10000r/min-18000r/min离心2min-8min；提取乙腈层。

在一个优选的实施例中，步骤S2中对乳制品中残留的双氰胺进行提取主要包括以下步骤：

称取试样约2g(精确到0.001g)，添加内标20μL，加入3mL水超声10min，加入17mL正己烷饱和乙腈，10mL乙腈饱和正己烷涡旋混合均匀，振荡提取20min，15000r/min离心3min；提取乙腈层。

在本实施例中，步骤S2中对乙腈层净化主要包括以下步骤：

取步骤S21提取的乙腈层加入到装有无水硫酸镁、C18、PSA、GCB的离心管中，涡旋混匀，振荡，离心，取上清液至小离心管中，再次离心，取上清液待测。

在一个优选的实施例中，步骤S2中对乙腈层净化包括以下步骤：

取1mL-5mL步骤S21提取的乙腈层加入到装有200mg-600mg的无水硫酸镁、60mg-150mg的C18、80mg-150mg的PSA、30mg-100mg的GCB的离心管中，涡旋混匀，振荡8min-15min，10000r/min-18000r/min离心1min-10min，取0.8mL-2mL上清液至小离心管，10000r/min-18000r/min离心1min-10min，取上清液装瓶待测。

在一个进一步优选的实施例中，步骤S2中对乙腈层净化包括以下步骤：分别称取400mg无水硫酸镁，100mgC18，100mgPSA，50mgGCB放入5mL离心管，往5mL里离心管加2.5mL提取得到的乙腈层，涡旋混匀，振荡10min，12000r/min离心3min，取1.0mL上清液加入到2mL小离心管，12000r/min离心3min后，取上清液装瓶，上机测定。

在本实施例中，优选地，脱脂粉样品由正己烷饱和的乙腈和水提取，乙腈层用含硫酸镁、PSA、C18、石墨化碳净化管净化，净化后乙腈离心过膜后上机。样品稀释倍数：20；样品定容体积：1mL。

在本实施例中，液相色谱质谱联用仪的工作条件包括：

液相色谱柱：阳离子交换和C18的混合色谱柱CR(1∶4)2.0×150mm×5μm；

流动相：流动相C(20mmol/L乙酸铵+0.2％甲酸水)∶流动相B(乙腈)＝90∶10；

流速：0.3mL/min；

进样量：5μL；

柱温：35℃。

在本实施例中，若无特别说明，则表示选择采用实施例一的表1所列的质谱条件和表2多反应监测离子对、碰撞气能量、锥孔电压、驻留时间的测定工作条件。

进一步地，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法包括以下步骤：

41)质谱测定。该方法分别将待测样品和标准工作液用液相色谱串联质谱仪测定。以标准工作液双氰胺浓度与内标浓度，相应的峰面积比值为纵坐标，绘制标准曲线。

在一个实施例中，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法还包括以下步骤：

42)空白试验。选取阴性样品，按上述41)的质谱测定步骤进行。

在一个实施例中，本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法包括：

43)样品中双氰胺的含量计算公式：

式中：X表示试样中双氰胺的含量，mg/kg；

c表示从标准曲线上查得的试样溶液中被测组分的浓度，ng/mL；

m表示试样质量，g；

注：计算结果需扣除空白值。

进一步说明的是，如图5至图8示出了实施例二的相关色谱图。其中，图5所示为实施例二的0.01μg/mL双氰胺的标准溶液色谱图。表明保留时间为1.47min，信噪比＞10。具有良好的分离度和灵敏度。

图6示是实施例二脱脂粉样品色谱图；在该色谱图中，显示了空白样品中双氰胺为未检出。

图7示是脱脂粉空白样品色谱图；在该色谱图中，显示了空白样品中双氰胺为未检出(可参考下表4)，也无其他干扰。

图8所示是奶粉空白样品加标回收样品色谱图；在该色谱图中，显示了双氰胺保留时间1.48min，定量离子信噪比＞10，回收率≥90％(可参考下表5)，满足实验室质控要求，且无其他干扰。

另外，根据本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法得到该脱脂粉样品中双氰胺的检测结果如下表4所示：

表4脱脂粉样品中双氰胺的检测结果

表4中，测定浓度单位为mg/kg。本发明中双氰胺的测定低限为0.05mg/kg。测定结果小于测定低限的均表示为＜0.05mg/kg。表4的检测结果表明测定结果符合要求。

此外在本实施例中，根据本发明的乳制品中双氰胺残留量的测定方法得到该脱脂粉样品中双氰胺的加标回收率如表5所示：

表5脱脂粉样品中双氰胺的加标回收率

表5中定容体积单位为mL；测定浓度单位为mg/kg。表5表明该脱脂粉样品中双氰胺的加标回收率回收率≥90％。

根据以上表4和表5可知：应用本发明的方法对以上脱脂粉中双氰胺的残留量进行检测，检测结果为未检出。在脱脂乳粉的实际检测中两个0.1mg/kg浓度水平的添加回收样品均拥有良好的回收率，能够满足实验质量控制要求，保证检测结果的科学准确。体现出本方法在实际检测中具有良好的适用性。

尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。因此，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和/或修改，根据本发明的实施例作出的变更和/或修改都应涵盖在本发明的保护范围之内。