CD24用于预防和治疗移植物抗宿主病和粘膜炎的使用方法

摘要

本发明涉及CD24蛋白在预防或治疗移植物抗宿主病和粘膜炎中的用途。

说明书

发明领域

本发明涉及用于预防和治疗移植物抗宿主病和粘膜炎的组合物和方法。

发明背景

同种异体造血干细胞移植(HCT)是成人中广泛的高危白血病和脊髓发育不良的唯一确定的治愈疗法。同种异体移植的重要功能是利用供体T细胞消除同种异体白血病细胞，这种作用称为GVL。然而，移植物抗宿主病(GVHD)是一种危及生命的并发症，其在当来自供体干细胞移植物的免疫感受态细胞对宿主进行免疫攻击时发生。活化的供体T细胞在以准备方案开始的炎症级联反应后损伤宿主上皮细胞。确切的风险取决于干细胞来源、患者年龄、条件和所用的GVHD预防。发病率直接与人类白细胞抗原(HLA)差异程度有关。急性GVHD的中位发作通常在移植后21至25天。发病率从完全组织相容性相关供体移植物的接受者中的30％至65％到不匹配的造血细胞或来自无关供体的造血细胞的接受者中的60％至80％。脐带血移植与中性粒细胞恢复较慢，发病率较低和急性GVHD发作较晚有关。增加发病率的因素包括使用外周血而不是骨髓作为造血细胞的来源以及较大的接受者年龄。慢性GVHD的诊断中位时间为HLA同胞移植后4.5个月，无关供体移植后4个月。同种异体HCT发生2年后，从不发生新的慢性GVHD。

二十多年来，钙依赖磷酸酶抑制剂(例如环孢菌素和他克莫司(tacrolimus))与甲氨蝶呤(methotrexate)的组合仍然是预防GVHD的护理标准(standard of care)。尽管是免疫预防的常规施用，但临床上显著的GVHD(II-IV级)发生在约30％至65％的经受HLA匹配相关HCT的患者和60％至80％的接收不相关供体HCT的患者。急性GVHD是HCT后的早期事件，发病的中位时间约为25至30天。在非常严重的GVHD的患者中，死亡率超过90％。对此的一种解释是，一旦确定，超过50％的患者对高剂量皮质类固醇进行一线治疗发生无效反应。对于显示类固醇难治性或需要长期治疗的患者，存活率显著降低。即使成功，高剂量的皮质类固醇也是发病率的主要来源，因为感染增加和去调节(deconditioning)，使患者处于TRM的显著风险中。

由HCT调节(conditioning)方案引起的宿主组织损伤，包括高剂量化疗和/或全身照射(TBI)，被认为是急性GVHD发展的第一步。调节方案引起的宿主组织损伤导致促炎细胞因子(例如TNF-α、IL-1β和IL-6)的释放，以及损伤相关分子模式(DAMP)和病原体相关分子模式(PAMP)的释放。DAMP和PAMP均可通过与模式识别受体(PRR)结合来激活抗原呈递细胞(APC)，例如树突状细胞(DC)。宿主APC随后激活供体T细胞和免疫级联反应，从而导致促炎细胞因子的释放和靶向宿主组织的抗原特异性同种反应性T细胞的扩增，从而产生GVHD。因此，探索是否可以通过靶向宿主对组织损伤的反应并阻止APC的激活(启动GVHD的关键过程)来缓解GVHD，引起了极大兴趣。

迄今为止，GVHD的治疗和预防主要集中于通过体内或离体途径药理学抑制或耗竭T细胞以抑制介导组织损伤的同种异型反应T细胞的扩增。尽管非选择性T细胞耗竭策略(例如抗胸腺细胞球蛋白)可有效预防GVHD，但由于抵消了复发、感染和移植排斥的风险，因此它们不能提高存活率。相反，通过靶向单一促炎细胞因子的更具选择性抑制尚未显示出治疗GVHD的临床益处。结果，除了耗竭T细胞的抗体外，尚无生物制剂被批准用于GVHD，他克莫司与甲氨蝶呤的组合仍然是预防GVHD的护理标准。尚未满足的重大医疗需求要求为预防和治疗GVHD提供更具选择性的生物产品。

粘膜炎是化学疗法和放射疗法治疗癌症的常见且痛苦的副作用，其导致内衬在消化道的粘膜发炎和溃疡。其为放射/放射疗法(RT)或化学疗法引起的组织损伤的结果。粘膜炎可发生在沿着胃肠(GI)道的任何地方，但口腔粘膜炎是指发生在口腔中的特定炎症和溃疡。口服和胃肠道(GI)粘膜炎几乎影响所有接受阿糖胞苷和高剂量5-氟尿嘧啶、烷基化剂和铂基化合物高剂量化疗的患者，以及大多数接受放疗的头颈部恶性肿瘤患者。放射诱导的口腔粘膜炎(RIOM)发生在100％改变分级放射治疗的头颈癌患者中。患有口腔粘膜炎的患者会经历严重的疼痛、炎症、溃疡和出血，这可能会严重阻碍患者的吞咽能力，由于癌症治疗的中断，这也可能限制肿瘤的控制。因此，口腔粘膜炎是在癌症患者中对于头部和颈部的化学疗法和/或放射疗法所看到的重要的不良反应。消化道粘膜炎会增加死亡率和发病率，并导致医疗费用上升。在美国，每名患有头颈癌的患者的RIOM经济成本估计达到17,000.00美元。

由于用于造血干细胞移植(HCT)的调节方案，粘膜炎负担最深。HCT的治疗方案包括预调节方案，包括在有或没有全身照射(TBI)的情况下进行高粘膜毒性化学疗法，其需要在移植前杀死受体的癌性造血细胞。这种预调节治疗会导致整个消化道严重受损。低级粘膜炎包括粘膜红斑和片状(patchy)溃疡或假膜(pseudomembrane)。严重的粘膜炎(≥3级)伴有汇合的溃疡或假膜以及轻微创伤的出血，其可能发展为组织坏死，明显的自发性出血和危及生命的后果。与接受HCT的患者的粘膜炎有关的另一种适应症是口腔移植物抗宿主病(GVHD)，其为一种慢性GVHD形式。与化学疗法和放射线诱发的粘膜炎一样，口腔GVHD包括粘膜红斑，溃疡和痛苦的脱皮性口腔病变。但是，缺乏对口腔急性GVHD的真实临床病例定义，因为HCT后的前28天期间，有几个因素，尤其是有或没有同时放射的调节性化学疗法，都可促进口腔病变的发展。

如所指出的，GVHD、粘膜炎和相关适应症均涉及组织损伤的要素。为了应对这些挑战，本领域需要有效治疗和预防GVHD和粘膜炎的方法。

发明概述

本文提供了在有需要的受试者中预防或治疗移植物抗宿主病(GvHD)或粘膜炎的方法，其可以包括向受试者施用CD24蛋白。本文还提供了CD24蛋白在制备用于预防或治疗受试者中GvHD或粘膜炎的药物中的用途。该方法或用途可以降低受试者发生III-IV级急性GvHD的风险。受试者可以是人类。受试者可以经受或已经经受了造血干细胞移植(HCT)。受试者可患有癌症，其可以是急性髓样白血病(Acute Myeloid Leukemia)(AML)、急性成淋巴细胞性白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia)(ALL)、慢性骨髓性白血病(ChronicMyelogenous Leukemia)(CML)、骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic syndrome)(MDS)或慢性骨髓单核细胞性白血病(Chronic Myelomonocytic Leukemia)(CMML)。

CD24蛋白可以以240mg或480mg的剂量施用。CD24蛋白可以在HCT之前或之后施用，且可以在HCT前一天施用。CD24蛋白可以施用超过一次，且可以以每两周一次的剂量施用。剂量可以包括HCT前一天的剂量，HTC后第14天的剂量以及HCT后第28天的剂量，并且剂量可以分别为480mg、240mg和240mg。

CD24蛋白可包含成熟的人CD24多肽，在其N端或C端与哺乳动物免疫球蛋白(Ig)蛋白的Fc区融合。成熟的人CD24多肽可以包含SEQ ID NO:1或2所示的序列。Ig蛋白可以是人的。Fc区可以包含铰链区以及IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgA的CH2和CH3结构域。Fc区可以包含铰链区和IgM的CH2、CH3和CH4结构域。CD24蛋白可以包含SEQ ID NO:6、11或12所示的序列。CD24蛋白的氨基酸序列可以由SEQ ID NO:6、11或12所示的序列组成。CD24蛋白可以是可溶的，并且可以被糖基化。CD24蛋白可以使用真核表达系统制备，所述真核表达系统包括在哺乳动物细胞中由载体表达。细胞可以是中国仓鼠卵巢细胞。

附图简述

图1A显示了全长CD24融合蛋白，CD24Fc(在本文中也称为CD24Ig)(SEQ ID NO:5)的氨基酸组成。带下划线的26个氨基酸是CD24的信号肽(SEQ ID NO:4)，在分泌过程中从表达该蛋白的细胞中切除，因此从该蛋白的加工版本中缺失(SEQ ID NO:6)。序列的粗体部分是用于融合蛋白的成熟CD24蛋白的胞外结构域(SEQ ID NO:2)。为了避免免疫原性，成熟CD24蛋白中通常存在的最后一个氨基酸(A或V)已从构建体中删除。非带下划线的非粗体字母是IgG1 Fc的序列，包括铰链区以及CH1和CH2结构域(SEQ ID NO:7)。图1B显示了CD24

图2显示了来自小鼠(SEQ ID NO:3)和人(SEQ ID NO:2)的成熟CD24蛋白之间的氨基酸序列变异。潜在的O-糖基化位点以粗体显示，N-糖基化位点用下划线标出。

图3A-C.CD24IgG1(CD24Fc)的药代动力学的WinNonlin区室(compartmental)模型分析。空心圆代表3只小鼠的平均值，且该线是预测的药代动力学曲线。图3A.i.v.注射1mgCD24IgG1。图3B.s.c.注射1mg CD24IgG1(CD24Fc)。图3C.通过曲线下面积(AUC)、半衰期和最大血液浓度测量的血液中抗体总量的比较。注意，总体而言，s.c注射的AUC和Cmax约为i.v.注射的80％，尽管差异在统计学上不显著。

图4A-B.CD24-Siglec G(10)相互作用可区分PAMP和DAMP。图4A.宿主对PAMP的响应不受CD24-Siglec G(10)相互作用的影响。图4B.CD24-Siglec G(10)相互作用可能通过与Siglec G/10相关的SHP-1抑制宿主对DAMP的响应。

图5A-C.CD24 Fc与Siglec 10和HMGB1结合并激活Siglec G：人Siglec10的小鼠同源物。图5A.CD24Fc-Siglec 10相互作用的亲和力测量。图5B.CD24Fc以阳离子依赖性方式与HMGB-1特异性相互作用。在存在或不存在阳离子螯合剂EDTA的情况下，将CD24Fc与HMGB1在0.1mM CaCl

图6A-B.CD24Fc抑制由抗CD3激活的人T细胞产生TNF-α和IFN-γ。在存在或不存在CD24Fc的情况下，用抗CD3刺激人PBML 4天，并通过ELISA测量细胞培养上清液中释放的IFN-γ和TNF-α的量。显示的数据是三次重复的平均值。误差线，SEM。

图7A-B.CD24抑制人类巨噬细胞产生炎性细胞因子。图7A.CD24的ShRNA沉默导致自发产生TNF-α、IL-1β和IL-6。用编码混乱(scrambled)或两个独立的CD24 shRNA分子的慢病毒载体转导THP1细胞。通过与PMA(15ng/ml)培养4天，将转导的细胞分化为巨噬细胞。洗去PMA和非贴壁细胞后，将细胞再培养24小时以通过细胞因子微珠阵列测量炎性细胞因子。图7B.与图7A相同，除了在最后24小时内将给定浓度的CD24Fc或对照IgG Fc添加至巨噬细胞外。图4A所示的数据是来自三个独立实验的平均值和S.D，而图4B中代表至少3个独立实验的那些。

图8显示了通过治疗人类受试者的PK可评估人群的平均血浆CD24Fc浓度(±SD)的图。PK＝药代动力学；SD＝标准差。

图9显示了针对PK可评估群体的CD24Fc C

图10显示了针对PK可评估群体的CD24Fc AUC

图11显示了针对PK可评估群体的CD24Fc AUC

图12显示了进行随机的、安慰剂对照的IIa期剂量递增试验的试验设计，以评估在接受同种异体骨髓抑制性(myeloablative)造血干细胞移植(HCT)的癌症患者中，CD24Fc在预防急性GVHD的护理标准中的添加。

图13显示了IIa期试验中单剂量和多剂量组的给药方案。

图14显示了该试验入组患者的移植中位时间。

图15显示了该试验入组患者的骨髓供体嵌合性。

图16显示了在治疗(CD24Fc)组中II-IV级和III-IV级急性GVHD的发病率。

图17显示了与接受甲氨蝶呤/他克莫司的同期对照患者相比，接受甲氨蝶呤/他克莫司+CD24Fc的患者在HCT后180天III-IV级aGVHD的累积发病率。

图18显示了Kaplan-Meier生存分析，其比较接受CD24Fc或安慰剂对照的患者的180天III-IV级aGVHD，无复发存活率。

图19显示了Kaplan-Meier生存分析，其比较接受CD24Fc和同期对照的患者的180天III-IV级aGVHD，无复发存活率。

图20显示了Kaplan-Meier生存分析，其比较了在移植后800天接受CD24Fc或安慰剂对照的患者的总体存活率。

图21显示了Kaplan-Meier生存分析，其比较了在移植后800天接受CD24Fc或同期对照的患者的总体存活率。

图22A-B显示了来自240和480mg单剂量组的PK数据。图22A.线性标度上的平均(标准差)血浆CD24Fc浓度(ng/mL)相对于时间的图。图22B.半对数标度上的平均(标准差)血浆CD24Fc浓度(ng/mL)相对于时间的图。

图23A-B显示了来自多剂量组的PK数据。图23A.线性标度上的平均(标准差)血浆CD24Fc浓度(ng/mL)相对于时间的图。图23B.半对数标度上的平均(标准差)血浆CD24Fc浓度(ng/mL)相对于时间的图。

图24A-B显示了CD24Fc处理对口腔粘膜炎的作用。图24A.粘膜炎综合评分。为了测量对粘膜炎的影响，我们产生了多个患有严重(3级或4级)粘膜炎的患者的天数，并且在条形图中提供了该数字，并在括号中标出了患有粘膜炎患者的数量。图24B.CD24Fc引起的粘膜炎评分的剂量依赖性降低。显示了个体粘膜炎评分的平均值和标准误。使用皮尔逊法确定患者药物剂量与粘膜炎评分之间的相关系数和P值。R＝-0.9983，P＝0.0009。

图25A-B显示了与安慰剂对照组(图25A)和同期对照组(图25B)相比，CD24Fc组的180天III-IV级GVHD自由存活率(free Survival)。

图26A-B显示了与安慰剂对照组(图26A)和同期对照组(图26B)相比，CD24Fc组的无复发存活率。

发明详述

组织损伤可导致促炎细胞因子(例如TNF-α、IL-1β和IL-6)的释放，以及损伤相关分子模式(DAMP)和病原体相关分子模式(PAMP)的释放。DAMP和PAMP均可通过与模式识别受体(PRR)结合来激活抗原呈递细胞(APC)，例如树突状细胞(DC)。宿主APC随后激活供体T细胞和免疫级联反应，从而导致促炎细胞因子的释放和靶向宿主组织的抗原特异性同种反应性T细胞的扩增。正是这些事件导致了GVHD的发展并加剧了粘膜炎的影响。例如，RIOM开始于放疗后口腔粘膜、舌头和咽部的急性炎症，这与各种炎性细胞的募集以及炎性细胞因子、趋化介质和生长因子的释放时间巧合。

粘膜炎和GVHD中组织损伤的涉及，提出了可以探索通过CD24Fc负调节宿主对DAMP响应的前景，以用于GVHD治疗。发明人的临床前研究表明，CD24Fc特异性靶向DAMP介导的炎症，并能在小鼠模型，包括人源化小鼠模型中预防GVHD。重要的是，该药物具有优于常规免疫抑制剂的优势，因为它不会引起一般的免疫抑制，并且使用高剂量的CD24Fc不会阻断非人类灵长类动物的抗体应答。数据还表明，CD24Fc预防GVHD，但保留了移植物抗白血病(GVL)作用，使其成为预防白血病患者GVHD的理想药物。最后，发明人在非人类灵长类动物中的研究表明，CD24Fc不会抑制抗原特异性免疫应答，这表明CD24Fc不太可能增加感染的风险。

发明人发现，CD24的可溶形式对于预防移植物抗宿主病(GVHD)和相关病症如粘膜炎以及用于预防HCT后的白血病复发是高度有效的。发明人还发现，在接受HCT治疗的患者中，CD24Fc产生严重粘膜炎(≥3级)的剂量依赖性减轻。这些效果可以通过DAMP介导。模式识别涉及由PAMP和DAMP触发的炎性应答。发明人已经认识到，最近的研究表明，对DAMP的加剧的宿主应答可能在炎性和自身免疫性疾病的发病机理中起作用。发现DAMP可促进炎性细胞因子和自身免疫性疾病的产生，并在动物模型中被发现，因此发现DAMP的抑制剂如HMGB1和HSP90可减轻类风湿性关节炎(RA)。TLR、RAGE-R、DNGR(由Clec9A编码)和Mincle已被证明是负责介导由多种DAMP引发的炎症的受体。

发明人最近的工作表明，CD24-Siglec G相互作用可区分对DAMP和PAMP的先天免疫。Siglec蛋白是膜相关的免疫球蛋白(Ig)超家族成员，其识别多种含唾液酸的结构。大多数Siglec具有与SHP-1、-2和Cbl-b相关的细胞内免疫酪氨酸抑制基序(ITIM)，以控制炎性反应的关键调节因子。发明人已经报道CD24作为Siglec(小鼠中的Siglec G和人中的Siglec 10)的第一个天然配体。Siglec G通过SHP-1/2信号传导机制与唾液酸化CD24相互作用，以抑制TLR介导的宿主对DAMP(例如HMGB1)的应答。

人CD24是由CD24基因中240个碱基对的开放阅读框编码的小GPI锚定分子。在这80个氨基酸中，前26个构成信号肽，而后23个用作裂解信号，以允许GPI尾部附着。结果，成熟的人CD24分子仅具有31个氨基酸。这31个氨基酸之一是人类人群中多态的。开放阅读框的核苷酸170处的C到T转换导致成熟蛋白质的第31位残基的丙氨酸(A)取代为缬氨酸(V)。由于该残基紧邻切割位点的N末端，并且由于置换是非保守的，所以这两个等位基因可以在细胞表面上以不同的效率表达。的确，用cDNA进行转染研究表明CD24

本发明人已证实CD24负向调节宿主对由于组织或器官损伤而释放的细胞DAMP的应答，并且至少两种重叠机制可以解释这种活性。首先，CD24结合几种DAMP，包括HSP70、HSP90、HMGB1和核仁素，并且阻遏对这些DAMP的宿主应答。为此，推测CD24可以捕获炎性刺激物，以防止与其受体，TLR或RAGE的相互作用。其次，使用对乙酰氨基酚诱导的肝坏死并确保炎症的小鼠模型，发明人证实，通过与其受体Siglec G的相互作用，CD24提供了对组织损伤的宿主应答的有力负调节。为了实现这种活性，CD24可以通过Siglec G结合并刺激信号传导，其中Siglec G相关的SHP1触发负调节。两种机制可以协同作用，因为具有任一基因的靶向突变的小鼠产生强得多的炎症应答。事实上，当用HMGB1、HSP70或HSP90刺激时，从来自CD24

1.定义

本文使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并不预期是限制性的。如说明书和所附权利要求中使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指示物，除非上下文另有明确说明。

关于本文的数值范围的叙述，明确考虑了其间具有相同精度的每个中间数。例如，对于6-9的范围，除6和9之外，还考虑了数目7和8，并且对于范围6.0-7.0，明确考虑了数目6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9和7.0。

“肽”或“多肽”是氨基酸的连接序列，并且可以是天然的、合成的、或天然和合成的修饰或组合。

“基本上相同的”可以意指第一氨基酸序列和第二氨基酸序列在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290或300个氨基酸的区域上至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同。

当提及保护动物免于疾病时，“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”意指预防、抑制、阻遏或完全消除疾病。预防疾病涉及在疾病发作之前，将本发明的组合物施用于动物。抑制疾病涉及在疾病诱导之后但在其临床表现之前，将本发明的组合物施用于动物。阻遏疾病涉及在疾病临床表现之后，将本发明的组合物施用于动物。

“变体”可以意指通过氨基酸的插入、缺失或保守取代而在氨基酸序列中不同，但保留至少一种生物活性的肽或多肽。“生物活性”的代表性例子包括结合toll样受体并被特异性抗体结合的能力。变体还可以意指具有氨基酸序列的蛋白质，所述氨基酸序列与具有保留至少一种生物活性的氨基酸序列的参考蛋白质基本上相同。氨基酸的保守取代，即用具有相似性质(例如，荷电区域的亲水性、程度和分布)的不同氨基酸替换氨基酸在本领域中公认为通常涉及微小变化。如本领域理解的，可以通过考虑氨基酸的亲水指数来部分地鉴定这些微小变化。Kyte等人，J.Mol.Biol.157：105-132(1982)。氨基酸的亲水指数基于其疏水性和电荷的考虑。本领域已知具有相似亲水指数的氨基酸可以被取代并且仍保留蛋白质功能。在一个方面，具有±2的亲水指数的氨基酸被取代。氨基酸的亲水性也可以用于揭示导致蛋白质保留生物学功能的取代。在肽的背景下，氨基酸的亲水性的考虑允许计算该肽的最大局部平均亲水性，其是已报道与抗原性和免疫原性良好相关的有用量度。美国专利号4,554,101，以引用的方式全文并入本文。如本领域理解的，具有相似亲水性值的氨基酸的取代可以导致保留生物活性，例如免疫原性的肽。可以用亲水性值在彼此±2内的氨基酸执行取代。氨基酸的疏水指数和亲水性值两者均受该氨基酸的特定侧链的影响。与该观察一致，与生物学功能相容的氨基酸取代被理解为取决于氨基酸的相对相似性，且特别是那些氨基酸的侧链，如通过疏水性、亲水性、电荷、大小和其它特性揭示的。

2.CD24

本文提供的是CD24蛋白，其可以包含成熟的CD24或其变体。成熟的CD24对应于CD24的细胞外结构域(ECD)。成熟的CD24可以来自人或另一种哺乳动物。如上所述，成熟的人CD24蛋白长31个氨基酸，并且在其C末端具有可变的丙氨酸(A)或缬氨酸(V)残基。成熟的CD24蛋白可以包含以下序列：

SETTTGTSSNSSQSTSNSGLAPNPTNATTK(V/A)(SEQ ID NO:1)

C末端缬氨酸或丙氨酸可以是免疫原性的，并且可以从CD24蛋白中省略，从而降低其免疫原性。因此，CD24蛋白可以包含缺少C末端氨基酸的成熟人CD24的氨基酸序列：

SETTTGTSSNSSQSTSNSGLAPNPTNATTK(SEQ ID NO:2)

尽管来自小鼠和人的成熟CD24蛋白的氨基酸序列中相当大的序列变异，但它们是功能上等价的，因为人CD24Fc已显示在小鼠中是活性的。人CD24 ECD的氨基酸序列显示与小鼠蛋白质的一些序列保守性(39％同一性；Genbank登录号NP_033976)。然而，由于取决于物种，CD24 ECD长度仅为27-31个氨基酸，并且与其一些受体(例如Siglec10/G)的结合由糖蛋白的唾液酸和/或半乳糖介导，因此同一性百分比不高并不令人惊讶。人Siglec-10(GenBank登录号AF310233)的细胞外结构域与其鼠同源物Siglec-G(GenBank登录号NP_766488)受体蛋白之间的氨基酸序列同一性为63％(图2)。由于小鼠和人CD24之间的序列保守主要在C末端和丰富的糖基化位点中，成熟CD24蛋白的显著变异可能在使用CD24蛋白时是可以耐受的，尤其是如果这些变异不影响C末端的保守残基、或者不影响来自小鼠或人CD24的糖基化位点。因此，CD24蛋白可以包含成熟鼠CD24的氨基酸序列：

NQTSVAPFPGNQNISASPNPTNATTRG(SEQ ID NO:3)。

人CD24 ECD的氨基酸序列显示与食蟹猴蛋白(52％同一性；UniProt登录号UniProtKB-I7GKK1)比小鼠更多的序列保守性。再次，由于ECD在这些物种中长度仅为29-31个氨基酸，以及糖残基在与其受体结合中的作用，因此同一性百分比不高并不令人惊讶。食蟹猴Siglec-10受体的氨基酸序列尚未确定，但人和恒河猴Siglec-10(GenBank登录号XP_001116352)蛋白之间的氨基酸序列同一性为89％。因此，CD24蛋白还可以包含成熟食蟹猴(或恒河猴)CD24的氨基酸序列：

TVTTSAPLSSNSPQNTSTTPNPANTTTKA(SEQ ID NO:10)

CD24蛋白可以是可溶的。CD24蛋白还可以包含N末端信号肽，以允许从表达该蛋白的细胞中分泌该蛋白。信号肽序列可以包含氨基酸序列MGRAMVARLGLGLLLLALLLPTQIYS(SEQID NO:4)。可替代地，信号序列可以包含在其它跨膜蛋白或分泌蛋白上发现的任何那些信号序列，或由本领域已知的现有信号肽修饰的那些信号序列。

a.融合

CD24蛋白可以在其N末端或C末端处与蛋白质标签融合，所述蛋白质标签可以包含哺乳动物Ig蛋白的一部分，其可以是人或小鼠或来自另一个物种。该部分可以包含Ig蛋白的Fc区。Fc区可以包含Ig蛋白的铰链区、CH2，CH3和CH4结构域中的至少一个。Ig蛋白可以是人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgA，并且Fc区可以包含Ig的铰链区以及CH2和CH3结构域。Fc区可以包含人免疫球蛋白G1(IgG1)同种型SEQ ID NO:7。Ig蛋白也可以是IgM，并且Fc区可以包含IgM的铰链区以及CH2、CH3和CH4结构域。蛋白质标签可以是有助于蛋白质纯化的亲和标签，和/或增强功能性蛋白质的溶解度和回收的溶解度增强标签。蛋白质标签还可以增加CD24蛋白的效价。蛋白质标签还可以包含GST、His、FLAG、Myc、MBP、NusA、硫氧还蛋白(TRX)、小泛素蛋白样修饰剂(SUMO)、泛素(Ub)、白蛋白或骆驼科动物Ig。用于制备融合蛋白和纯化融合蛋白的方法是本领域众所周知的。

基于临床前研究，对于实例中鉴定的融合蛋白CD24Fc的构建，已使用30个氨基酸的天然CD24分子的截短形式，其缺乏在GPI信号切割位点之前的最终多态性氨基酸(即，具有SEQ ID NO:2的成熟CD24蛋白)。将成熟人CD24序列与人IgG1 Fc结构域(SEQ ID NO:7)融合。全长CD24Fc融合蛋白的序列在SEQ ID NO:5(图1A)中提供，并且从细胞中分泌的CD24Fc融合蛋白的加工形式的序列(即缺少被切掉的信号序列)在SEQ ID NO:6中提供。与IgG1 Fc融合的成熟CD24(即，具有SEQ ID NO:1的成熟CD24蛋白)的加工多态变体可以包含SEQ IDNO:11或12所示的氨基酸序列。

b.生产

CD24蛋白可以是高度糖基化的，并且可以涉及CD24的功能，例如免疫细胞的共刺激以及与损伤相关的分子模式分子(DAMP)的相互作用。可以使用真核表达系统制备CD24蛋白。表达系统可能需要从哺乳动物细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的载体表达。该系统也可以是病毒载体，例如可以用于感染真核细胞的复制缺陷型逆转录病毒载体。CD24蛋白也可以由稳定的细胞系产生，所述细胞系从已整合到细胞基因组内的载体或载体的一部分表达CD24蛋白。稳定细胞系可以从整合的复制缺陷型逆转录病毒载体表达CD24蛋白。表达系统可以是GPEx

c.药物组合物

CD24蛋白可以包含在药物组合物中，所述药物组合物可以包含药学上可接受量的CD24蛋白。药物组合物可以包含药学上可接受的载体。药物组合物可以包含溶剂，其可以使CD24蛋白在延长的时期内保持稳定。溶剂可以是PBS，其可以使CD24蛋白在-20℃(-15～-25℃)下保持稳定至少66个月。溶剂可以能够与另一种药物组合容纳CD24蛋白。

药物组合物可以配制用于肠胃外施用，包括但不限于通过注射或连续输注。用于注射的制剂可以是在油性或水性运载体中的悬浮液、溶液或乳液的形式，并且可以含有配制试剂，包括但不限于悬浮剂、稳定剂和分散剂。该组合物还可以以粉末形式提供，用于由合适的运载体重建，所述运载体包括但不限于无菌无热原水。

药物组合物还可以配制为迟效制剂，其可以通过植入或通过肌内注射施用。该组合物可以用合适的聚合或疏水材料(例如，作为在可接受的油中的乳液)、离子交换树脂配制或配制为微溶衍生物(例如，作为微溶盐)。用于皮下注射的制剂可能与适应症如狼疮及其相关表现和并发症特别相关。

3.治疗方法

a.GVHD

本文提供了通过向受试者施用CD24蛋白在有需要的受试者中预防、减轻或治疗移植物抗宿主病(GVHD)的方法。受试者可能患有或有发展为GVHD的风险。受试者可以经受或已经经受了造血干细胞移植(HCT)。CD24蛋白可预防性地用于预防经受HCT的受试者中的GVHD。GVHD可以是急性GVHD。CD24蛋白可以降低受试者患III-IV级急性GVHD的风险。GVHD可以是慢性GVHD，包括口腔GVHD。

受试者可以患有癌症。癌症可以是急性髓样白血病(AML)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性骨髓性白血病(CML)、骨髓增生异常综合征(MDS)或慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)。

b.粘膜炎

本文提供了通过向受试者施用CD24蛋白在有需要的受试者中预防、减轻或治疗粘膜炎的方法。本文还描述了通过向受试者施用CD24蛋白在有需要的受试者中预防、减轻或治疗与GVHD或HCT有关的其他病症的方法。相关病症可以是粘膜炎，所述粘膜炎可以是口腔粘膜炎。粘膜炎是消化道内壁粘膜的疼痛性炎症和溃疡，通常作为HCT的预调节化学疗法和/或放疗方案的不良反应。粘膜炎可发生在胃肠道的任何地方。口腔粘膜炎是指口腔中发生的特定炎症和溃疡。口腔粘膜炎是癌症治疗的常见且常常使人衰弱的并发症。许多造血干细胞移植接受者经历了粘膜炎，其中口腔粘膜炎是最常见和最使人衰弱的。

受试者可能患有粘膜炎或有发展成粘膜炎的风险，所述粘膜炎可以是口腔粘膜炎。受试者可以经受或可以正在经受化学疗法和放射疗法中的至少一种。CD24蛋白可预防性地用于预防受试者的粘膜炎。CD24蛋白可以降低受试者发生严重粘膜炎的风险。

c.药物

还提供了CD24蛋白在制备用作本文所述的药物中的用途。

d.剂量方案

施用的CD24蛋白的剂量可以为0.01mg/kg至1000mg/kg，也可以为1至500mg/kg，取决于对GVHD或粘膜炎的所需效果以及施用途径。CD24蛋白可以通过静脉内(IV)输注或通过皮下、壁内(即在腔或器官的壁内)或腹膜内注射来施用。剂量可以是10-1000mg、10-500mg、240mg或480mg，特别适合于受试者是人类的情况。

CD24蛋白可以在干细胞移植之前或之后施用。可以在干细胞移植之前1-4天，特别是1天施用CD24蛋白。CD24蛋白也可以在干细胞移植之前或之后以多剂量施用。CD24蛋白可以每两周2、3、4、5或6次剂量施用。CD24蛋白的每个剂量可以是240mg或480mg。相对于干细胞移植的当天(第0天)，第一剂量可以在第-4天到第0天施用，尤其可以在第-1天施用。此后可以每9-19或11-17天施用一次后续剂量。相对于干细胞移植日，可在+9至+19天或+11至+17天，尤其是+14天施用第二剂。相对于干细胞移植日，可在+18至+38天，+23至+33天或+22至+34天，尤其是+28天施用第三剂。特别地，相对于干细胞移植日，可以分别在第-1天、第+14天和+28天以480mg、240mg和240mg的三个两周一次施用形式施用CD24蛋白。CD24蛋白可以特别是CD24Fc。

CD24蛋白可以在化学疗法和放射疗法中的至少一种施用于受试者之前或期间施用。可以施用CD24蛋白，以使其在释放DAMP时存在。

e.组合治疗

可以将CD24蛋白与预防GVHD的护理标准联合施用于受试者。预防GVHD的护理标准可包含施用甲氨蝶呤加钙依赖磷酸酶抑制剂(如他克莫司(Prograf，FK506)或环孢菌素(Sandimmune，Neoral))。他克莫司可以在相对于干细胞移植当天的第-3天施用，并且可以通过IV或PO(口服)施用。对于连续输注的IV给药，基于调整后的体重，起始剂量可以为0.03mg/kg/天。对于口服给药，起始剂量可以是每天两次0.045mg/kg/剂量。如果受试者不能耐受他克莫司，则可以以100倍IV输注他克莫司剂量的剂量(例如3mg/kg/天起始剂量)通过IV向受试者施用环孢菌素。环孢菌素也可以以3倍IV剂量的剂量口服施用。当使用Neoral品牌时，由于更高的生物利用度，可以以2倍IV剂量口服施用环孢菌素。

在不存在GVHD的情况下，仅可在移植后的前100天内监测他克莫司水平的治疗剂量。他克莫司的治疗目标谷水平(trough level)可以为5-15ng/mL。在输注CD24蛋白后的第一周(第0天至第7天)，监测他克莫司水平最少应3次(例如每48-72小时一次)。在不存在GVHD或复发的情况下，可以在移植后+100天开始逐渐减少他克莫司。在存在GVHD的情况下，他克莫司可以以治疗剂量继续使用。

甲氨蝶呤可与他克莫司联合使用用于标准的GVHD预防。甲氨蝶呤可以在HCT之后的第1天以15mg/m

对于粘膜炎，可以将CD24蛋白与至少一种免疫调节剂(即，不同于CD24蛋白)一起施用，以使恶化的炎性成分最小化。对于用5-氟尿嘧啶治疗的受试者，可以将CD24蛋白与别嘌呤醇组合施用。

可以将CD24蛋白与以下一种或多种骨髓抑制性预调节方案组合施用，并且可以在预调节方案之前或期间施用。可以施用CD24蛋白，使得其在响应骨髓抑制性预调节方案和HCT中的至少一种而释放DAMP时存在。

白消安(Busulfan)和氟达拉滨(fludarabine)

相对于干细胞移植日，白消安可以在第-5至-2天施用。剂量可以是3.2mg/kg/天或130mg/m

白消安和环磷酰胺

相对于干细胞移植日，白消安可以在第-7至-4天施用。剂量可以是3.2mg/kg/天或130mg/m

环磷酰胺与全身照射

相对于干细胞移植，全身照射(TBI)可以在第-7至-4天施用。相对于干细胞移植日，环磷酰胺可以在第-3至-2天施用。剂量可以是60mg/kg/天，且总剂量可以是120mg/kg。用于骨髓抑制性方案的环磷酰胺、TBI和TBI施用实施顺序可以根据本领域已知的用于骨髓抑制性预调节的制度标准进行。

CD24蛋白也可以与上述的单独的骨髓抑制性治疗或其组合一起施用。

实施例1：在小鼠中的CD24药代动力学

将1mg CD24Fc(CD24Fc)注射到首次用于实验的

实施例2：在对组织损伤的宿主应答中的CD24-Siglec 10相互作用

近二十年前，Matzinger提出了普遍称为危险理论的东西。本质上，她认为免疫系统在感知到宿主中的危险时打开。虽然当时没有明确定义危险的性质，但已确定坏死与细胞内组分如HMGB1和热休克蛋白(其被称为DAMP)的释放有关，用于危险相关的分子模式。发现DAMP促进炎性细胞因子和自身免疫疾病的产生。在动物模型中，发现HMGB1和HSP90的抑制剂改善RA。DAMP的牵涉提出了可以对于RA疗法探索对DAMP的宿主应答的负调节的前景。

使用对乙酰氨基酚诱导的肝坏死并确保炎症，观察到通过Siglec G的相互作用，CD24提供了对组织损伤的宿主应答的强有力的负调节。CD24是GPI锚定分子，其在造血细胞和其它组织干细胞中广泛表达。人中的各种自身免疫疾病，包括多发性硬化、系统性红斑狼疮、RA和巨细胞关节炎的遗传分析，显示CD24多态性与自身免疫疾病的风险之间的显著相关。Siglec G是I-凝集素家族的成员，通过其识别含唾液酸结构的能力定义。Siglec G识别在CD24上的含有唾液酸的结构，并且通过树突细胞负调节炎性细胞因子的产生。就其与CD24相互作用的能力而言，人Siglec 10和小鼠Siglec G是功能上等价的。然而，尚不清楚小鼠和人同源物之间是否存在一对一的相关性。尽管该机制尚未完全阐明，但SiglecG相关的SHP1可能涉及负调节似乎是合理的。这些数据导致了新的模型，其中CD24-Siglec G/10相互作用可能在区别病原体相关的分子模式(PAMP)与DAMP中起关键作用(图4)。

至少两个重叠机制可以解释CD24的功能。首先，通过与各种DAMP结合，CD24可以捕获炎性刺激物，以防止其与TLR或RAGE的相互作用。这一观点得到CD24与几种DAMP分子缔合的观察的支持，所述DAMP分子包括HSP70、90、HMGB1和核仁素。其次，可能在与DAMP缔合之后，CD24可以通过Siglec G刺激信号传导。两种机制均可以协同作用，因为具有任一基因的靶向突变的小鼠产生强得多的炎性应答。事实上，当用HMGB1、HSP70或HSP90刺激时，从来自CD24-/-或Siglec G-/-小鼠的骨髓培养的DC产生高得多的炎性细胞因子。相比之下，在其对PAMP例如LPS和PolyI：C的应答中未发现效应。这些数据不仅为先天性免疫系统提供了区分病原体与组织损伤的机制，而且还提示CD24和Siglec G作为与组织损伤相关的疾病的潜在治疗靶标。

实施例3：CD24Fc与HMGB1、Siglec 10相互作用并诱导Siglec G和SHP-1之间的缔合

为了测量CD24Fc和Siglec 10之间的相互作用，我们将CD24Fc固定在CHIP上，并使用Biacore来测量不同浓度的Siglec-10Fc的结合。如图5a所示，CD24Fc以1.6x10

CD24Fc的体外功效研究。

为了研究CD24Fc对人T细胞产生的炎性细胞因子的影响，人PBML中的成熟T细胞被抗CD3抗体(OKT3)激活，其为不同浓度的CD24Fc或人IgG1 Fc存在下T细胞受体的常用激动剂。4天后，收集上清液，并通过酶联免疫吸附测定(ELISA)测量IFN-γ和TNF-α的产生以确认活化。图6中结果证明与对照IgG Fc对照相比，来自两个不同制备批次的CD24Fc显著降低了来自活化的人PBML的IFN-γ和TNF-α的产生。另外，当添加CD24Fc时，以剂量依赖的方式抑制细胞因子产生。因此，CD24Fc可在体外抑制抗CD3诱导的人PBML激活。这项研究不仅表明CD24Fc的作用机理可能是通过抑制T细胞活化，而且还建立了可靠的生物测定方法，所述方法用于药物效力和稳定性测试。

为了确定CD24Fc是否调节人类细胞系中炎性细胞因子的产生，我们首先使用RNAi使人类急性单核细胞白血病THP1细胞系中的CD24沉默，然后通过用PMA处理它们将其诱导分化为巨噬细胞。如图7a所示，CD24沉默大幅增加了TNFα、IL-1β和IL-6的产生。这些数据证明了内源性人CD24在限制炎性细胞因子产生中的重要作用。重要的是，CD24Fc恢复了对CD24沉默的细胞系中TNFα的抑制(图7b)，以及对IL-1β和IL-6的抑制。这些数据不仅证明了CD24在人类细胞的炎性反应中的相关性，而且提供了一种简单的测定法来评估CD24Fc的生物学活性。

综上所述，这些数据证明CD24Fc能够抑制由适应性和先天性刺激触发的细胞因子产生。然而，由于该药物在减少先天效应子产生的细胞因子方面更为有效，因此我们认为其预防功能的主要机制是防止在移植初期由组织损伤引发的炎症。

实施例4：CD24在人中的药代动力学

该实施例显示了CD24蛋白在人中的药代动力学分析。这衍生自I期、随机化、双盲、安慰剂对照、单次递增剂量研究，以评价CD24Fc在健康男性和女性成人受试者中的安全性、耐受性和PK。在该研究中召募了各8个受试者的5个群组中的总共40个受试者。每个群组中的8个受试者中的6个接受研究药物，并且2个受试者接受安慰剂(0.9％氯化钠，盐水)。第一群组用10mg进行给药。后续群组接受30mg、60mg、120mg和240mg CD24Fc或匹配的安慰剂，并且间隔至少3周给药，以允许审查每个先前群组的安全性和耐受性数据。只有在已证实足够的安全性和耐受性的情况下，才允许向新的受试者群组施用下一个更高剂量。

在每个群组中，最初的2名受试者在第1天时是1个研究药物接受者和1个安慰剂接受者。在第7天后给药第3至5个和第6至8个受试者(在亚组之间间隔最少24小时)。在相同亚组中的每个受试者间隔至少1小时进行给药。必要时，剩余受试者的给药延迟，等待审查在涉及该群组中的第一亚组或第二亚组的剂量后时期过程中可能已出现的任何重大安全性问题。随后的群组在先前群组后给药至少3周。

筛选就诊(就诊1)在活跃治疗期开始前至多21天发生。在提供知情同意书后，受试者经历关于合格性的筛选程序。

受试者在第-1天(就诊2)时加入临床药理学单位(Clinical Pharmacology Unit)(CPU)，并且随机化的治疗期在最少10小时过夜禁食后第1天时开始。将受试者随机分配给用CD24Fc或安慰剂作为单一剂量的治疗。受试者保持封闭状态直到第4天的早晨。

所有受试者都在第7天、第14天、第21天、第28天和第42天(±1天)返回CPU，用于随访(就诊3、就诊4、就诊5、就诊6和就诊7)。就诊7是所有受试者的最后一次就诊。

受试者数目：

计划的：40个受试者

筛选的：224个受试者

随机化的：40个受试者

完成的：39个受试者

中断的：1个受试者

研究产品和比较者信息：

CD24Fc：经由IV输注施用10mg、30mg、60mg、120mg或240mg的单一剂量；批号：09MM-036。CD24Fc是完全人源化的融合蛋白，其由人CD24的成熟序列和人免疫球蛋白G1的可结晶片段区(IgG1Fc)组成。CD24Fc以无菌、透明、无色、无防腐剂的水溶液形式供应，用于IV施用。将CD24Fc配制为单一剂量注射溶液，浓度为10mg/mL且pH为7.2。每个CD24Fc小瓶含有在16mL±0.2mL的CD24Fc中的160mg CD24Fc、5.3mg氯化钠、32.6mg磷酸氢二钠七水合物和140mg磷酸二氢钠一水合物。CD24Fc在透明硼硅酸盐玻璃小瓶中供应，所述玻璃小瓶具有氯丁基橡胶塞和铝制翻转密封。

经由IV输注施用匹配的安慰剂(0.9％氯化钠，盐水)；批号：P296855、P311852、P300715、P315952。

意向治疗(ITT)群体由接受研究药物的至少1个剂量的所有受试者组成。ITT群体是用于受试者信息和安全性评估的主要分析群体。

通过治疗和就诊概括了临床实验室评估(化学、血液学和尿分析)。还概括了自基线的变化。通过治疗和时间点概括了生命体征(血压、心率、呼吸频率和温度)。还概括了自基线的变化。列出了所有体检数据。概括了心电图参数和自基线的变化。列出了总体解释。

如图8中所示，CD24Fc的平均血浆浓度与施用的CD24Fc剂量成比例地增加。对于除了120mg之外的所有剂量组，在剂量后1小时达到CD24Fc的最大平均血浆浓度。在剂量后2小时达到关于120mg组的CD24Fc的最大平均血浆浓度。到第42天(984小时)时，关于所有组的CD24Fc的平均血浆浓度已降低至最大平均血浆浓度的2％至4％。

表1通过用于PK可评估群体的治疗概括了血浆CD24Fc PK参数。

表1通过治疗的血浆CD24Fc药代动力学参数的概括-PK可评估群体

图9显示了CD24Fc C

C

血浆CD24Fc的C

实施例5：CD24可用于治疗人类受试者中移植物抗宿主病

进行了一项多中心(multicenter)、预期性(prospective)、双盲、随机化、安慰剂对照的IIa期剂量递增试验，以评估在接受同种异体骨髓抑制性造血干细胞移植(HCT)的癌症患者中，将CD24蛋白，CD24Fc添加到预防急性GVHD的护理标准中。试验设计如图12所示。

IIa期研究的主要目标包括评估在骨髓抑制性预调节之后进行匹配的无关供体HCT的患者中CD24Fc联合甲氨蝶呤和他克莫司预防的安全性和耐受性，以确定推荐的2期剂量(RP2D)或最大耐受剂量(MTD)。此外，IIa期研究的次要疗效目标包括：

·确定在标准GVHD预防甲氨蝶呤和他克莫司中添加CD24Fc是否会降低HCT后第100天II-IV级aGVHD的累积发病率

·估计HCT后第180天的II-IV级aGVHD无病(free)生存期(GFS)

·描述1年时cGVHD(cGVHD)的发病率

·描述HCT后一年复发的发病率

·描述HCT后一年的移植相关死亡率(TRM)的发病率

·描述HCT后第100天的感染率

·评估HCT后一年的总体生存期(OS)、III-IV级GVHD缺失和无复发生存期

·评估预调节毒性，包括口腔粘膜炎和器官衰竭

其他目的包括评估CD24Fc的药代动力学(PK)谱，检查CD24Fc和安慰剂组中HCT后APC和T细胞的免疫细胞谱和功能应答，以及评估药代动力学(PD)生物标志物，例如CD24Fc和安慰剂组中促炎细胞因子、DAMP、脂质和GVHD生物标志物的血浆浓度。

该试验根据机构惯例(institutional practice)招募了经受同种异体HCT，接受来自相配的无关供体的移植物的患者。年龄在18-70岁之间的患者因恶性血液病而接受匹配的无关供体同种异体HCT，卡诺夫斯基表现评分为70％，为该研究的合格条件。需要在HLA-A、HLA-B、HLA-C和HLA-DRB1的无关供体和受体之间进行8/8HLA等位基因匹配。鉴于在该群体中II-IV级aGVHD(60-80％)和III-IV级aGVHD(20-35％)的发病率较高，预计将研究限制在接受来自无关供体的HCT的患者中，以限制异质性并促进aGVHD发病率的统计估计以用于随后的疗效评估。

该试验仅使用了包含他克莫司和甲氨蝶呤的骨髓抑制性预调节方案和护理标准(SOC)预防，因为这些患者经历最严重的组织损伤，并且在这种情况下药物将可能具有最强的生物学作用。根据IIa期方案，所有患者均接受甲氨蝶呤和他克莫司的骨髓抑制性调节和预防GVHD的护理标准。根据治疗医师的决定，患者接受由氟达拉滨和白消安(Flu/Bu 4)或环磷酰胺和全身照射(Cy/TBI)组成的骨髓抑制性调节方案，然后在第0天输注干细胞。GVHD预防施用给所有患者且由他克莫司(移植前-3天开始)和甲氨蝶呤(移植后+1天开始)与处理组的CD24Fc或安慰剂组的生理盐水联合。在不存在GVHD的情况下，在第+100天开始逐渐减少他克莫司。供体干细胞的来源是外周血干细胞(PBSC)或骨髓(BM)。

IIa期临床试验除了预防SOC GVHD之外，还包含两个单次递增剂量组(240mg和480mg)和一个单次多剂量CD24Fc组，如下表3所述。如图13所示，在单剂量组中，相对于干细胞移植日，在第-1天静脉内施用研究试剂CD24Fc。在多剂量组中，患者接受三个两周一次以480mg(第-1天)、240mg(第+14天)和240mg(第+28天)施用CD24Fc。基于CD24Fc的PK数据，该双周给药期将允许通过两个以上的半衰期。剂量基于固定量，而不基于重量或BSA。每个给药组采用随机3：1比例(6名CD24Fc受试者和2名安慰剂受试者)设计招募了8名受试者，总共招募了24名患者。

表3 2a期剂量递增计划

表4列出了CD24Fc和安慰剂群组中患者的人口统计学信息和临床特征，其在各种风险因素(例如年龄、恶性肿瘤和合并症)中相对平衡。在CD24Fc和安慰剂群组中，最常见的恶性肿瘤是AML/MDS(66.7％和83.3％)。CD24Fc群组中72％的患者和安慰剂组中50％的患者具有中等或高的合并症指数。在两个群组中，与骨髓相比，PBSC更经常用作移植物来源，并且Flu/Bu 4是两个群组中最常见的调节方案。全部CD24Fc群组中的四名患者接受了Cy/TBI调节。

表4 2a期患者特征

BM＝骨髓；Cy/TBI＝环磷酰胺/全身照射；D＝供体；Flu/Bu 4＝氟达拉滨/白消安；R＝接受者

该研究的主要目的是：评估CD24Fc在进行骨髓抑制性同种异体造血细胞移植(HCT)的受试者中的安全性和耐受性；并确定接受HCT的患者的CD24Fc的II期推荐剂量(RP2D)或最大耐受剂量(MTD)。

招募到研究中的所有患者均已完成治疗期，这是用CD24Fc治疗的第一天，直至单剂量组HCT后30天或多剂量组HCT后60天(确切天数可能会根据研究药物施用的最后天数而有所不同，不构成偏差)，是不良事件(AE)的评估和报告期，所述不良事件包括可能与研究药物相关的剂量限制性毒性。表5提供了在2a期试验中观察到的毒性总结。总体而言，该研究表明，在意向性治疗(ITT)人群中，通常可以很好地耐受IV施用高达480mg的CD24Fc。没有观察到归因于或可能归因于研究药物的输注毒性、剂量限制毒性(DLT)或SAE，也没有患者退出研究。

如图14所示，所有24名受试者在移植后都被植入。在CD24Fc暴露和安慰剂的患者中，在HCT后植入嗜中性粒细胞的中值分别为13.0和15.5天。在CD24Fc暴露和安慰剂的患者中，在HCT后植入血小板的中值分别为13.0和15.0天，但安慰剂组中只有一名患者没有植入血小板并且在第49天死亡。没有移植失败的案例。在CD24Fc暴露的患者中，第+30天时的中值CD3嵌合率为82.5％(范围38-100％)，而安慰剂组为82.0％(范围62％-91％)(图15)。在暴露CD24Fc的患者中，中值供体CD3嵌合率在第100天增加到86％(范围42％-100％)，而安慰剂组则增加到84％(范围17％-100％)。在CD24Fc和安慰剂组中，第30天和第100天的供体CD33嵌合率为100％。

表5毒性概述

2a期研究的疗效分析被认为是次要的，且包括以下内容：描述HCT后第180天的无III-IV级急性GVHD生存期(GFS)；描述HCT后第100天的II-IV级急性GVHD的累积发病率；描述HCT后第180天的III-IV级GVHD，无复发存活率；描述HCT后第180天的II-IV级急性GFS；描述HCT后一年慢性GVHD的发病率；描述HCT后一年复发的发病率；描述HCT后一年的移植相关死亡率(TRM)的发病率；描述HCT后第100天的感染率；评估HCT后一年的总存活率(OS)和无病生存期(DFS)。

除了在IIa期研究中包含安慰剂组外，从2012年1月至2017年11月采用相同的骨髓抑制性调节和GVHD预防方案(减去实验治疗CD24Fc)，从接受配对无关供体HCT的相同机构收集同期对照(N＝92)数据。考虑到安慰剂对照组中的患者较少，纳入了同期对照群组。表6总结了同期对照群组中92名成年患者的人口统计学数据。

表6招募至同期对照群组中的患者的特征

表7和表8提供了Ph 2a研究的临床结果的概述。急性GVHD根据国际CIBMTR注册机构和血液和骨髓移植临床试验网络使用的共同指南进行分级，并每周记录。在接受HCT后第0天至HCT后第100天评估患者的aGVHD。

表7临床结果概述，包括II-IV级和III-IV级aGVHD的累积发病率。

*第180天后死亡(n＝2)：群组1肺炎2/2感染(d 210)和群组2CMML复发(d 196)

表8临床结果总结

到第100天时，II至IV级急性移植物抗宿主病的发病率

表9总结了第100天时mITT群体中II至IV级急性GVHD的累积发病率。到第100天，总共有7位(38.9％)接受CD24Fc的患者(240mg CD24Fc单剂量群组中的2名患者[33.3％]，480mg CD24Fc单剂量群组中的3名[50.0％]患者和在960mg CD24Fc多剂量群组中的2名患者[33.3％])和1位(16.7％)接受安慰剂的具有II至IV级急性GVHD的患者。此外，到第100天时，有1名(16.7％)接受安慰剂的患者在没有发生II至IV级急性GVHD的情况下死亡。在第100天存活且没有发生II至IV级急性GVHD的患者将在其上次评估急性GVHD时在第100天时或在第100天之前接受审查。每个处理组中至少50.0％的患者被审查。

表9到第100天-mITT人群II至IV级急性移植物抗宿主病的累积发病率

总体而言，CD24Fc处理组在第100天(具有95％CI)的II至IV级急性GVHD的累积发病率是38.9％(16.8％，60.7％)，而安慰剂组是16.7％(0.5％，54.9％)。CD24Fc对安慰剂的风险比(具有90％CI)为2.6(0.5，14.7)。在同期对照中，II-IV级aGVHD的累积发病率为50％。在CD24Fc处理组中，四例II级aGVHD仅涉及皮肤，两例涉及皮肤和上消化道(GI)。安慰剂组中没有II级aGVHD的病例。

到第180天，无II-IV级急性移植物抗宿主病生存期

表10总结了mITT人群直至180天的II至IV级急性GFS。在任何处理组中均未达到II至IV级急性GFS Kaplan-Meier估计值的中值。总体而言，CD24Fc处理组在第180天的II至IV级急性GFS发病率(具有95％CI)为61.1％(35.3％，79.2％)，而安慰剂组为50.0％(11.1％，80.4％)。CD24Fc对安慰剂的风险比(具有90％CI)为0.8(0.3，2.5)。在数据截止日期还活着并且没有记录发生II至IV级急性GVHD的患者在第180天或之前在急性GVHD评估的最后日期进行审查。除小样本量外，对每个处理组中至少50.0％的患者进行审查。

表10 II至IV级急性移植物抗宿主病-到第180天无病生存期-mITT人群

到180天，mITT人群的III至IV级急性GFS

如表11所示，到第180天总共有1名(5.6％)接受CD24Fc的患者(480mg CD24Fc单剂量组中有1名[16.7％]患者)和2名(33.3％)接受安慰剂的患者具有III至IV级急性GVHD。总体而言，CD24Fc处理组在第180天时III至IV级急性GFS发生率(具有95％CI)为94.4％(66.6％，99.2％)，而安慰剂组为50.0％(11.1％，80.4％)。CD24Fc对安慰剂的风险比(具有90％CI)为0.1(0.0，0.7)。在数据截止日期还活着并且没有记录的发生III至IV级急性GVHD的患者在急性GVHD评估的最后日期(即第180天或之前)进行审查。每个处理组中至少有50.0％的患者被审查。在同期对照组中，第180天的III至IV级急性GFS率为24％。图25显示了与安慰剂对照组(图25A)和同期对照组(图25B)相比，CD24Fc组的180天无III-IV级GVHD生存期。

表11 III至IV级急性移植物抗宿主病-到第180天无病生存期-mITT人群

与同期群组对照中观察到的50％响应率相比，在数据截止时研究中所有发生aGVHD的患者对类固醇治疗具有响应。HCT后的前一百天之后，每季度评估一次患者的迟发性aGVHD(定义为第100天后的急性GVHD发作)或cGVHD，直至HCT后一年。移植后第100天后，在CD24Fc群组中未观察到其他aGVHD事件。

图16显示了在治疗(CD24Fc)群组中II-IV级和III-IV级急性GVHD的累积发生率。特别是，观察到只有一名涉及具有下GI的III级GVHD且没有肝GVHD的患者。在CD24Fc群组中，HCT后第180天，III-IV级aGVHD的累积发生率趋势低于同期对照组中180天时III-IV级aGVHD的累积发生率(P＝0.097)。在安慰剂组的患者中，在第182天还有另外一例III级aGVHD，导致在第184天死亡。该患者在第145天出现白血病复发。这些结果表明，除甲氨蝶呤和他克莫司预防治疗外，CD24Fc还降低了接受骨髓抑制性调节后经历HCT的患者发生更严重的III级和IV级aGVHD的风险。

造血干细胞移植后1年无病生存期

表12总结了mITT人群HCT后1年的无病生存期(DFS)。任何处理组均未达到DFSKaplan-Meier估计值的中值。总体而言，CD24Fc处理组HCT后1年的DFS率(具有95％CI)为83.3％(56.8％，94.3％)，而安慰剂组为50.0％(11.1％，80.4％)。CD24Fc对安慰剂的风险比(具有90％CI)为0.2(0.1，0.9)。在随访期结束时还活着且未经历疾病复发的患者在评估的最后日期进行审查。每个处理组中至少50.0％的患者被审查。图26显示了与安慰剂对照组(图26A)和同期对照组(图26B)相比，CD24Fc组的无复发生存期。

表12造血干细胞移植后1年无病生存期-mITT人群

造血干细胞移植后1年总体生存期

表13总结了mITT人群HCT后1年的总体生存期(OS)。任何处理组均未达到中值OS时间Kaplan-Meier估计值。总体而言，CD24Fc处理组1年的OS率(具有95％CI)为83.3％(56.8％，94.3％)，安慰剂组为50.0％(11.1％，80.4％)。CD24Fc对安慰剂的风险比(具有90％CI)为0.2(0.1，1.0)。在随访期结束时还活着的患者在已知他们还活着的最后日期被审查。每个处理组中至少50.0％的患者被审查。

表13造血干细胞移植后1年无病生存期-mITT人群

IIa期研究的患者HCT后约800天的总生存期(OS)估计也令人鼓舞。CD24Fc群组患者的总生存期(OS)约为80％，安慰剂群组患者为50％(p＝0.06)(图20)，且同期对照患者为50％(p＝0.05)(图21)。与安慰剂和同期对照患者相比，暴露于CD24Fc的患者的OS改善，支持上述其他发现，结果表明，将CD24Fc与甲氨蝶呤和他克莫司联合施用可显著改善骨髓抑制性调节后接受HCT的患者的预后。

到第180天的无急性移植物抗宿主病生存期和无复发生存期(aGRFS)

旨在预防GVHD的治疗策略可能会由于移植物抗白血病(GVL)效应的降低而导致白血病复发的增加。如表7所示，与安慰剂组(33％)和同期对照组(23％)患者相比，HCT后第180天暴露于CD24Fc的患者中白血病复发的发生率(11％)要更低。480mg CD24Fc群组中的一名受试者在146天时经历CMML复发，而多剂量960mg CD24Fc群组中的一名受试者在HCT后100天时ALL复发。CMML患者在196天因白血病去世。患有ALL复发的患者利用博纳吐单抗(blinatumomab)治疗，实现了完全缓解，自2018年8月8日数据截止还活着。在安慰剂群组中，一名患者在第94天经历CMML复发，一名患有MDS的患者在第146天复发(CMML患者在第316天去世，MDS患者在第184天去世)。这些结果表明CD24Fc不会干扰有益的移植物抗肿瘤(GVT)过程，甚至可能降低白血病复发的风险。

移植后第180天，CD24Fc组的死亡人数低于安慰剂组和同期对照组(表7)。HCT后第180天，任何CD24Fc组均无死亡，安慰剂组中因肺炎有1例死亡(16.7％)，同期对照组有22例死亡(23.9％)。与在HCT后第180天安慰剂组(33％)(P＝0.011，参见图18)和在HCT后第180天同期对照组(53％)(P＝0.017，参见图19)相比，在CD24Fc组(83％)中观察到GVHD III-IV级无复发生存期(RFS)的复合终点的改善。这种终点已经越来越普遍，因为从理论上讲，它不仅包含了干预对GVHD抑制的影响，而且还包含了潜在的影响毒性、感染和复发。为了支持上述观察结果，III-IV级aGVHD、RFS的改善表明，在骨髓抑制性调节方案后，将CD24Fc与标准品护理甲氨蝶呤和他克莫司联合施用对患者预防aGVHD发生而不影响移植物的GVL作用有益处。

到HCT后第180天为止的aGRFS是事后复合终点，其中的事件包括III至IV级急性GVHD、复发或因任何原因死亡。表14总结了mITT人群到180天的III至IV级急性GRFS。

对于CD24Fc处理组，未达到中值III至IV级急性GRFS的Kaplan-Meier估计。对于安慰剂组，中值III至IV级急性GRFS的Kaplan-Meier估计(具有95％CI)为120.0(46.0，不可估计)。总体而言，CD24Fc处理组在第180天(具有95％CI)的III至IV级急性GRFS率为83.3％(56.8％，94.3％)，而安慰剂组为33.3％(4.6％，67.6％)。CD24Fc对安慰剂的风险比(具有90％CI)为0.2(0.0，0.6)。在最后的评估日期，对尚在世并且没有记录的发生III至IV级急性GVHD，需要全身免疫抑制治疗的慢性GVHD或在数据截止日期复发的患者进行审查。

表14 III至IV级急性移植物抗宿主病-到第180天无病生存期和无复发生存期-mITT人群

造血干细胞移植后1年复发的发生率

表15总结了mITT人群HCT后一年复发的累积发生率。总体而言，CD24Fc处理组HCT后1年(具有95％CI)复发的累积发生率为11.1％(1.7％，30.4％)，而安慰剂组为33.3％(2.9％，71.1％)。CD24Fc对安慰剂的风险比(具有90％CI)为0.3(0.1，1.4)。在随访期结束时(第365天[1年])存活且未复发的患者在评估的最后日期被审查。每个处理组中至少50.0％的患者被审查。

表15造血干细胞移植后1年复发的累积发生率-mITT人群

造血干细胞移植后1年无移植物抗宿主病生存期和无复发生存期(GRFS)

HCT后1年内该GRFS是一个复合终点，其中的事件包括III至IV级急性GVHD，需要全身性免疫抑制治疗的慢性GVHD，复发或因任何原因死亡。表16总结了mITT人群HCT后1年III至IV级急性GRFS。

整个CD24Fc处理组的Kaplan-Meier估计(具有95％CI)为229.0天(141.0，不可估计)：240mg CD24Fc单剂量组为247.0天(129.0，不可估计)，480mg CD24Fc单剂量组为287.0天(24.0，不可估计)，以及960mg CD24Fc多剂量组为193.5(100.0，不可估计)。安慰剂组的Kaplan-Meier估计的中值GRFS(具有95％CI)为120.0天(46.0，不可估计)。总体而言，CD24Fc处理组HCT后1年GRFS率(具有95％CI)为32.4％(12.7％，54.0％)，而安慰剂组为33.3％(4.6％，67.6％)。CD24Fc对安慰剂的风险比(具有90％CI)为0.7(0.3，1.7)。在最后的评估日期，对尚在世并且没有记录的发生III至IV级急性GVHD，需要全身免疫抑制治疗的慢性GVHD或在数据截止日期复发的患者进行审查。

表16造血干细胞移植后1年无移植物抗宿主疾病的生存期和无复发生存期-mITT人群

造血干细胞移植后1年非复发死亡的发生率

表17总结了mITT人群HCT一年后NRM的累积发生率。总体而言，CD24Fc处理组1年的NRM累积发生率(具有95％CI)为5.6％(0.3％，23.1％)，而安慰剂组为16.7％(0.5％，54.9％)。CD24Fc对安慰剂的风险比(具有90％CI)为0.3(0.0，2.8)。在随访期末(第365天[1年])还没有复发的存活患者在已知存活的最后日期被审查。每个处理组中至少有50.0％的患者被审查。CD24Fc处理组在180天的NRM累积发生率(具有95％CI)为0.0％，而安慰剂组为16.7％(0.5％，54.9％)。

表17造血干细胞移植后1年内非复发死亡的累积发生率-mITT人群

造血干细胞一年后慢性移植物抗宿主病的发生率

表18总结了mITT人群HCT后一年慢性GVHD的累积发生率。总体而言，CD24Fc处理组HCT后1年慢性GVHD的累积发生率(具有95％CI)为63.3％(34.1％，82.4％)，而安慰剂组为33.3％(2.5％，72.0％)。CD24Fc对安慰剂的风险比(具有90％CI)为2.1(0.6，7.4)。在240mgCD24Fc单剂量组中有3个中度慢性GVHD，在480mg CD24Fc单剂量组中有3个轻度和1个中度慢性GVHD，在960mg CD24Fc多剂量组中有2个轻度和3个中度慢性GVHD。在安慰剂组有2例患有轻度慢性GVHD的患者。总体而言，没有严重的慢性GVHD病例。在随访期末(第365天[1年])存活且未经历慢性GVHD的患者在评估的最后日期被审查。

表18造血干细胞移植后1年的慢性移植物抗宿主病累积发病率-mITT人群

在第100天的感染率

与对GVL的影响一样，旨在通过全面免疫抑制来预防GVHD的治疗策略可能会导致感染率增加，包括细菌感染和CMV重新激活。

表19总结了mITT人群直至第100天的感染发生率。总共有13例(72.2％)接受CD24Fc(240mg CD24Fc单剂量组5例[83.3％]患者，480mg CD24Fc单剂量组2例[33.3％]患者以及960mg CD24Fc多剂量组6例[100.0％]患者)的患者和两例(33.3％)接受安慰剂的患者在直至100天出现感染。

大多数感染被认为是可以控制和解决的。安慰剂组的患者103-001死于肺炎。安慰剂组中的患者102-002患有结膜炎，据报道已恢复/缓解。480mg CD24Fc单剂量组的患者101-010和480mg CD24Fc单剂量组的患者101-011均患有皮疹脓疱，据报道未治愈/未解决。960mg CD24Fc多剂量组中的患者102-006患有上呼吸道感染和艰难梭菌结肠炎，据报道持续干预。

大多数感染是细菌性的(接受CD24Fc的9例[50.0％]患者，接受安慰剂的2例[33.3％]患者)或病毒性的(接受CD24Fc的7例[38.9％]的患者，接受安慰剂的1例[16.7％]患者)。大多数感染发生在血液(接受CD24Fc的8例[44.4％]患者，接受安慰剂的1例[16.7％]患者)、尿液(接受CD24Fc的4例[22.2％]患者，没有接受安慰剂的患者)或排泄物(接受CD24Fc的2例[11.1％]患者和接受安慰剂的2例[33.3％]患者)。从血液培养物中回收的大多数细菌是常见的皮肤栖息者和低毒力病原体(即凝固酶阴性葡萄球菌)。

表19到100天感染发生率总结-mITT人群

如表20所示，CD24Fc组中有9例患者具有CMV重新激活的高风险(HCT之前供体/接受者CMV状态：D+/R+，5；D-/R+，3；未知D/R+，1)。CD24Fc组中具有D+/R-的一例患者具有CMV重新激活的中等风险。CD24Fc组中有8例患者具有D-/R-状态，其被认为低风险。两例D-/R+患者在第42天和第48天具有CMV重新激活，代表在高风险组中在第100天的CMV重新激活累积发生率为22.2％。两名患者在检测到CMV重新激活之前均接受了系统性类固醇治疗。相比之下，在安慰剂组中有2例患者具有CMV重新激活的高风险(D+/R+，1；D-/R+，1)。安慰剂组中的一例患者在系统性类固醇治疗急性GVHD之前的第47天具有CMV重新激活(高风险组为50.0％)。

HCT患者的CMV感染率按移植前供体和接受者的CMV状态进行分级。D＝供体，R＝接受者，+为阳性，-为阴性，U为未知。

总体而言，IIa期研究对CD24Fc的耐受性良好。没有与输注有关的毒性。在480mg高血糖症组中，暴露于CD24Fc的患者中可能存在一种与药物相关的TEAE≥III级，这是利用胰岛素控制的。在安慰剂组中观察到一种剂量限制性毒性(DLT)，而在CD24Fc组中未观察到DLT。施用CD24Fc的患者在180天内(最后一次CD24Fc给药后至少150天)没有导致死亡的不良事件。安慰剂组在第48天出现了一项肺炎不良事件，导致一名受试者死亡。CD24Fc组中的1名患者在HCT后7个月死亡，尽管确定该死亡不太可能与研究药物有关。在HCT后第100天的任何时候，在这24名患者中任一个均未检测到抗药物抗体(ADA)。

最常见TEAE≥III级(>10％)包括血小板计数减少(83.3％安慰剂和94.4％CD24Fc)、WBC计数减少(66.7％安慰剂和88.9％CD24Fc)、中性粒细胞计数减少(50％安慰剂和83.3％CD24Fc)、淋巴细胞计数减少(50％安慰剂和77.8％CD24Fc)、贫血(50％安慰剂和66.7％CD24Fc)、口腔炎(83.3％安慰剂和50％CD24Fc)和恶心(0％安慰剂和11.1％CD24Fc)。这些SAE与HCT中使用的骨髓抑制性调节方案的已知安全性一致。

HCT的骨髓抑制性调节通常与严重的方案相关的毒性有关，包括器官衰竭。器官衰竭是早期发作移植相关死亡率(TRM)或非复发死亡率(NRM)的最常见原因。在18名患者的CD24Fc组中，没有患者在HCT后的前100天内死亡，而安慰剂组中6名患者中有1名在48天因呼吸衰竭而死亡。

药代动力学结果

图22-23显示了来自2a期试验的三个升级群组的PK数据。来自240和480mg单剂量组的半衰期(图22)约为14天，这与健康受试者中观察到的数据一致。在480mg剂量下，cmx较高，但在14天后(即窥视(peek)GVHD发生和移植的时间)暴露量并未真正增加。在最后的多剂量组中，预期到60天的暴露量增加(图23)，在此期间患者最容易发生GVHD。

表21总结了单剂量组中针对PK群体的CD24Fc的血浆PK参数。对于240和480mgCD24Fc单剂量组，几何平均C

表20 CD24Fc的血浆药代动力学参数总结-PK群体-单剂量组

表22总结了第-1天、第28天和第-1天至第100天多剂量组中PK群体的CD24 Fc血浆PK参数。对于960mg CD24Fc多剂量组，几何平均值C

表21 CD24Fc的血浆药代动力学参数总结-PK群体-多剂量组-第-1天，第28天和第-1天至第100天

IIa期研究的临床证据强烈表明，CD24Fc与甲氨蝶呤和他克莫司组合施用，可通过降低严重aGVHD(III-IV级)的可能性和白血病复发的可能性而大大改善接受骨髓抑制性异体-HCT的白血病患者的预后。如上所述，在暴露于CD24Fc的患者中，III-IV级aGVHD的累积发生率为5.6％，相比之下安慰剂组(盐水加甲氨蝶呤和他克莫司)中为16.7％，在同期对照组中为24％(仅甲氨蝶呤和他克莫司)。这些数据表明，CD24Fc与甲氨蝶呤和他克莫司组合施用作为预防降低了HCT患者中III-IV级aGVHD风险，III-IV级aGVHD是最严重级别的aGVHD，其与非复发死亡率的风险增加有关。与安慰剂组(33.3％)和同期对照组(23％)相比，观察到与未接受CD24Fc的患者相比，接受CD24Fc的患者复发率(11.1％)降低的趋势，这表明CD24Fc不会影响移植物的GVT效应，甚至可能降低白血病复发的风险。与安慰剂组(16.7％)相比，暴露于CD24Fc的患者的NRM更好(5.6％)，更好的1.5年总生存期(89％对比50％，CD24Fc对比安慰剂对照)，III-IV级aGVHD RFS的统计学显著改善(分别为83％对比33％，CD24Fc对比安慰剂对照)，严重的粘膜炎剂量依赖性降低，以及在研究中观察到的仅使用一种与药物相关的TEAE(III级)的良好安全性谱，进一步支持将CD24Fc纳入标准GVHD预防方案中的益处。

降低aGVHD和白血病复发风险的预防试剂将是新的，并且对于在骨髓抑制性调节后接受异体-HCT的白血病患者非常有益。如上所述，该申请中的早期临床数据强烈表明，将CD24Fc与甲氨蝶呤和他克莫司联合施用可显著改善现有的在III-IV级aGVHD预防和白血病复发的临床意义上的预防方案，因此应该有资格获得突破性认定。将在IIb期部分进一步研究在临床研究的IIa期部分中观察到的CD24Fc的作用，该研究被设计用于确认预防性CD24Fc施用在降低骨髓抑制性调节后经历异体-HCT的白血病患者中III-IV级aGVHD和白血病复发的功效。

实施例6

CD24可用于减轻经历HCT的受试者的粘膜炎

HCT的骨髓抑制性调节通常与严重的方案相关毒性有关，包括3-4级粘膜炎。HCT患者已报告严重口腔粘膜炎是他们经历过的最令人痛苦的症状。在实施例5中所述的IIa期GVHD预防试验中，作为测量CD24Fc治疗对受试者粘膜炎的作用的量度，我们产生了组合的粘膜炎评分系统以研究结果。该数据显示在图24A中，并且包含患者经历严重(3或4级)粘膜炎的天数的倍数。分数在条形图中提供，括号内有患有粘膜炎患者的数量。根据CTCAE 4.01对口腔粘膜炎评分。如图24B所示，与安慰剂相比，在所有CD24Fc群组中均观察到了粘膜炎等级-日评分的剂量依赖性降低(R＝-0.9983；P＝0.0009)，并且在多剂量组观察到统计学上显著的降低(安慰剂对比960mg多剂量：P＝0.035，斯氏t检验)。

序列表

<110> 肿瘤免疫股份有限公司（ OncoImmune, Inc.）

Liu, Yang

Zheng, Pan

Devenport, Martin

<120> CD24用于预防和治疗移植物抗宿主病和粘膜炎的使用方法

<130> 060275.0403.01PC00

<150> 62/680,218

<151> 2018-06-04

<150> 62/739,742

<151> 2018-10-01

<150> 62/739,719

<151> 2018-10-01

<160> 12

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 31

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 变体

<222> (31)...(31)

<223> 缬氨酸或丙氨酸

<400> 1

Ser Glu Thr Thr Thr Gly Thr Ser Ser Asn Ser Ser Gln Ser Thr Ser

1 5 10 15

Asn Ser Gly Leu Ala Pro Asn Pro Thr Asn Ala Thr Thr Lys Xaa

20 25 30

<210> 2

<211> 30

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

Ser Glu Thr Thr Thr Gly Thr Ser Ser Asn Ser Ser Gln Ser Thr Ser

1 5 10 15

Asn Ser Gly Leu Ala Pro Asn Pro Thr Asn Ala Thr Thr Lys

20 25 30

<210> 3

<211> 27

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 3

Asn Gln Thr Ser Val Ala Pro Phe Pro Gly Asn Gln Asn Ile Ser Ala

1 5 10 15

Ser Pro Asn Pro Thr Asn Ala Thr Thr Arg Gly

20 25

<210> 4

<211> 26

<212> PRT

<213> 智人

<400> 4

Met Gly Arg Ala Met Val Ala Arg Leu Gly Leu Gly Leu Leu Leu Leu

1 5 10 15

Ala Leu Leu Leu Pro Thr Gln Ile Tyr Ser

20 25

<210> 5

<211> 287

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 融合蛋白

<400> 5

Met Gly Arg Ala Met Val Ala Arg Leu Gly Leu Gly Leu Leu Leu Leu

1 5 10 15

Ala Leu Leu Leu Pro Thr Gln Ile Tyr Ser Ser Glu Thr Thr Thr Gly

20 25 30

Thr Ser Ser Asn Ser Ser Gln Ser Thr Ser Asn Ser Gly Leu Ala Pro

35 40 45

Asn Pro Thr Asn Ala Thr Thr Lys Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

50 55 60

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

65 70 75 80

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

85 90 95

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

100 105 110

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

115 120 125

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

130 135 140

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

145 150 155 160

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

165 170 175

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

180 185 190

Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

195 200 205

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

210 215 220

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

225 230 235 240

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

245 250 255

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

260 265 270

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

275 280 285

<210> 6

<211> 261

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 融合蛋白

<400> 6

Ser Glu Thr Thr Thr Gly Thr Ser Ser Asn Ser Ser Gln Ser Thr Ser

1 5 10 15

Asn Ser Gly Leu Ala Pro Asn Pro Thr Asn Ala Thr Thr Lys Pro Lys

20 25 30

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

35 40 45

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

50 55 60

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

65 70 75 80

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

85 90 95

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

100 105 110

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

115 120 125

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

130 135 140

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

145 150 155 160

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln

165 170 175

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

180 185 190

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

195 200 205

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

210 215 220

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

225 230 235 240

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

245 250 255

Leu Ser Pro Gly Lys

260

<210> 7

<211> 231

<212> PRT

<213> 智人

<400> 7

Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

1 5 10 15

Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

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