使用纯化的两亲性多肽组合物的外科手术方法

摘要

提供了用于控制外科手术过程出血的组合物、方法和递送装置(如预填充注射器)，其中所述组合物的特征为具有含水制剂，其能够在与患者体液和/或血液(即在生理条件下)接触时变成凝胶状态。

说明书

本申请是申请号为201480025688.7，申请日为2014年3月6日的中国发明专利申请的分案申请。本申请和其母案申请要求2013年3月6日提交的美国临时专利申请号61/773,359的优先权，其所公开的整体内容通过引用并入本申请。

本说明书参考于2014年3月6日以电子形式提交的命名为“2004837-0033_ST”的ASCII.txt文件的序列表。该.txt文件于2014年2月27日生成，大小为13KB。

技术背景

实施外科手术程序以校正患者遇到的多种医疗问题。通常，造成一个切口以进入患者身体内的外科手术部位。可以钳住血管以防止和/或最小化出血；可以使用牵开器以暴露外科手术部位，或使其保持打开，以便外科医生能够实施一项或多项与所述外科手术程序相关的任务。取决于将要实施的工作，可能需要多个切口和/或剖口，以便穿透到外科手术部位。例如，要到达腹部内的位置，可能需要剖开皮肤、皮下组织、肌肉层和/或腹膜。如在一些外科手术程序的情况下，外科医生可能需要切割骨头。例如，一些外科手术程序可能涉及切割头骨以到达大脑，或切割胸部以到达心脏。在实施任意一个程序或全部程序的过程中的多个节点都可能并且也通常会发生出血事件。

在外科手术程序中的一些出血是可以预期的。然而，广泛性出血(即超出了在给定外科手术程序中通常会遇到的量)可能是危险的，甚至危及生命。在某些情况下，严重出血可能导致外科手术程序终止。在一些情况下，输血可能是必要的。在外科手术程序中通常采用血液或血液膨胀剂以补偿失血。在某些情况下，采取的为应对失血的步骤在外科手术中增加了相当长的时间，和/或会导致患者恢复时间较长。

在外科手术程序中控制出血的护理标准包括使用合成产品、动物来源的材料或根据所需的方式或已经建立的方法，局部施用人类血液成分。这样的产品和材料主要由组织构建蛋白构成，非常适用于外科应用，因为它们是生物相容的，并已证明有效。然而，它们并非没有限制。例如，这些产品可通过感染物质，如病毒，的存在而存在感染的危险。此外，动物来源的产品因为可以触发不良免疫反应而存在固有风险，可能包括当患者的身体对产品中外源抗原产生反应而出现的过敏性休克。

除其他事项外，本发明提供了改进的外科手术程序，例如，使用的材料更安全，能更有效地控制和止住外科医生在进行手术任务中遇到的出血。本发明还提供了在更短的时间中实施和/或比通常在标准程序中发生出血更少的手术程序。

除其他事项外，本发明提供了改进的用于治疗和/或手术期间止血(如渗出性出血)的外科手术程序。可以预期的是由本发明提供的肽组合物特别适合在手术方法中用于止血，如冠状动脉分流术和全部或部分肝切除。在一些实施例中，在手术方法中使用本文描述的肽组合物在停止和/或控制外科手术程序(如体内)中的出血提供了改进。

在一些实施例中，本发明提供了一种为患者或对象进行体内手术程序的方法，其中在身体上造成一个切口，从而a)在第一时间段提供进入包括内部器官或组织的受损部分的部位的路径，b)在所述第一时间段期间进行部分或全部所述受损部分的去除、修复或置换，并且c)在所述第一时间段结束时闭合所述切口，其改进包括在所述第一时间段内，在所述部位上实施至少一次组合物的施用，所述组合物包含具有0.1-10％肽的溶液，其中所述肽包含具有RADA重复序列的氨基酸序列；其中所述溶液的特征在于其具有在两种状态之间转变的能力：当一个或多个特定离子基本不存在时形成未凝胶化状态，而当所述一个或多个离子以阈值水平或高于阈值水平存在时形成凝胶状态，其中所述一个或多个离子在所述部位上存在或变为存在；并且在第二时间段内允许所述组合物保留在所述部位处，所述第二时间段足以使所述组合物中的肽转变到其凝胶状态。

在一些实施例中，所述第一时间段大于5分钟；在一些实施例中，大于10，20，30，40，50，或60分钟。在一些实施例中，所述第一时间段为约一小时。在一些实施例中，所述第一时间段少于五分钟；在一些实施例中，小于10，20，30，40，50或60分钟。在一些实施例中，所述第一时间段少于一小时。

在一些实施例中，本发明还包括实施的改进，所述改进还包括在所述第二时间段内，在所述部位实施至少一项其他医疗程序。在一些实施例中，所述第二时间段少于五分钟；在一些实施例中，小于10，9,8，7,6，5,4，3，2，或1分钟。在一些实施例中，所述第二时间段为约5分钟。在一些实施例中，所述第二时间段大于5分钟；在一些实施例中，所述第二时间段大于6，7，8，9，10分钟或更长时间。在一些实施例中，所述第二时间段为约10分钟。

在一些实施例中，一个或多个离子选自钾(K

在一些实施例中，所述患者或对象为人或非人。在一些特定的实施例中，非人对象包括哺乳动物。在一些特定的实施例中，哺乳动物包括啮齿动物(如小鼠或大鼠)、狗、猫、马、猪、家牛、绵羊、山羊、羊驼，白臀野牛、北美野牛、骆驼、鹿、驴、大额牛、豚鼠、美洲驼、骡、兔、驯鹿、水牛和牦牛。

在一些实施例中，本发明所述的体内手术程序是指至少切除肝脏的一部分。在一些实施例中，实施全部或部分肝脏切除。本发明所述的一些实施例中，还包括在第一时间段小于4个小时(如小于3.75，3.50，3.00，2.75，2.00，1.75，1.50，或1.00)内完成肝脏切除的改进，并且因此所述第一时间段与没有所述改进的标准第一时间段相比时间缩短，其中标准第一时间段在五到六小时范围内(如为约五到六小时范围内，包括在内端值；在某些实施例中，约5.0，5.1，5.2，5.3，5.4，5.5，5.6，5.7，5.8，5.9，6.0小时)。

在一些实施例中，本发明还包括第一时间段不在所述部位应用纤维蛋白胶或

在一些实施例中，在其他任何外科手术活动之前在所述部位处完成至少一个第一施用。

在一些实施例中，本发明所述的体内外科手术程序是指冠状动脉分流术。

在一些实施例中，所述患者或对象在手术前被给予抗凝血剂。

在一些实施例中，本发明所述体内外科手术程序是指冠状动脉分流术，其中所述改进还包括：在第一时间段内完成所述外科手术，所述第一时间段与没有所述改进的标准第一时间段相比，每次移植至少缩短20分钟(如至少21，22，23，24，25，26，27，28，29或30分钟)，在一些特定实施例中为约20分钟。

在一些实施例中，本发明所述的肽溶液的浓度范围为约0.1％至约10％(如约0.1–10％；0.2–9.9％,0.3–9.8％,0.4–9.7％,0.5–9.6％,0.6–9.5％,0.7–9.4％,0.8–9.3％,0.9–9.2％,1.0–9.1％,1.1–9.0％,1.2–8.9％,1.3–8.8％,1.4–8.7％,1.5–8.6％,1.6–8.5％,1.7–8.4％,1.8–8.3％,1.9–8.2％,2.0–8.1％,2.1–8.0％,2.2–7.9％,2.3–7.8％,2.4–7.7％,2.5–7.6％,2.6–7.5％,2.7–7.4％,2.8–7.3％,2.9–7.2％,3.0–7.1％,3.1–7.0％,3.2–6.9％,3.3–6.8％,3.4–6.7％,3.5–6.6％,3.6–6.5％,3.7–6.4％,3.8–6.3％,3.9–6.2％,4.0–6.1％,4.1–6.0％,4.2–5.9％,4.3–5.8％,4.4–5.4％,4.6–5.3％,4.7–5.2％,4.8–5.1％或4.9–5.0％)。在各种实施例中，浓度范围为0.1-5％，0.25-4.75％，0.5-4.5％，0.75-4.25％，1.0-4.0％，1.25-3.75％，1.5-3.5％，1.75-3.25％，2.0-3.0％，或2.25-2.75％。在各种实施例中，本发明所述的肽溶液的浓度范围为1-3％，包括端值；在一些特定实施例中为约1.0％，在一些实施例中，为约1.5％；在一些实施例中，为约2.0％；在一些实施例中，为约2.5％；在一些实施例中，为约3％。

在各种实施例中，本发明所述肽包含含有两个、三个或四个RADA(SEQ ID NO：1)重复序列的氨基酸序列(SEQ ID NO：1)；在一些实施例中，含有两个RADA重复序列的氨基酸序列(如RADARADA；SEQ ID NO：2)；在一些实施例中，含有三个重复序列的氨基酸序列(如RADARADARADA；SEQ ID NO：3)；在一些实施例中，含有四个RADA重复序列的氨基酸序列重复(如RADARADARADARADA；SEQ ID NO：4)。

在一些实施例中，本发明提供了为患者或对象进行体内外科手术程序的方法，所述方法包括在第一时间段暴露在患者身体内的部位，以到达内部器官或组织的受损部分，以便在第一时间段期间去除、修复或置换器官或组织的至少一部分，对所述位置内的部位施用含0.1-10％肽溶液的组合物，其中所述肽包含具有RADA重复序列的氨基酸序列；并且其中所述溶液的特征在于其具有在两种状态之间转变的能力：当一个或多个特定离子基本不存在时形成未凝胶化状态，和当所述一个或多个离子以阈值水平或高于阈值水平存在时形成凝胶状态，其中所述一个或多个离子在所述位置上存在或变为存在，在第二时间段内将所述组合物保留在所述位置处，其中所述组合物中的肽转变为凝胶状态。

在一些实施例中，所述第一时间段大于5分钟；在一些实施例中，大于10，20，30，40，50，或60分钟。在一些实施例中，所述第一时间段为约一小时。在一些实施例中，所述第一时间段少于五分钟；在一些实施例中，小于10，20，30，40，50或60分钟。在一些实施例中，所述第一时间段少于一小时。

一些实施例中，本发明还包括在所述第二时间段期间在所述位置实施至少一项其他医疗程序。在一些实施例中，所述第二时间段少于五分钟；在一些实施例中，为小于10，9，8，7，6，5，4，3，2，或1分钟。在一些实施例中，所述第二时间段为约5分钟。在一些实施例中，所述第二时间段大于5分钟；在一些实施例中，所述第二时间段大于6，7，8，9，10分钟或更长时间。在一些实施例中，所述第二时间段为约10分钟。

在一些实施例中，一个或多个离子选自钾(K

在各种实施例中，患者或对象为人或非人。在一些特定实施例中，非人对象包括哺乳动物。在一些特定的实施例中，哺乳动物包括啮齿动物(如小鼠或大鼠)、狗、猫、马、猪、家牛、绵羊、山羊、羊驼，白臀野牛、北美野牛、骆驼、鹿、驴、大额牛、豚鼠、美洲驼、骡、兔、驯鹿、水牛和牦牛。

在一些实施例中，本发明所述的体内外科手术是指至少部分肝脏切除。在一些实施例中，实施全部或部分肝脏切除。在一些实施例中，本发明还包括，所述肝脏切除在第一时间段小于4个小时(如小于3.75，3.50，3.00，2.75，2.00，1.75，1.50，或1.00)内完成肝脏切除的改进，并且因此所述第一时间段并因此与没有所述改进的标准第一时间段相比时间缩短，其中标准第一时间段在五到六小时范围内(如为约五到六小时范围内，包括端值；在某些实施例中，约5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0小时)。

在一些实施例中，本发明还包括在所述第一时间段不施用纤维蛋白胶或

在一些实施例中，在其他任何外科手术活动之前在所述部位处至少完成一个第一施用。在一些实施例中，所述患者在手术前被给予抗凝血剂。

在一些实施例中，本发明所述的肽溶液的浓度范围为约0.1％至约10％(如约0.1-10％；0.2-9.9％，0.3-9.8％，0.4-9.7％，0.5-9.6％，0.6-9.5％，0.7-9.4％，0.8-9.3％，0.9-9.2％，1.0-9.1％，1.1-9.0％，1.2-8.9％，1.3-8.8％，1.4-8.7％，1.5-8.6％，1.6-8.5％，1.7-8.4％，1.8-8.3％，1.9-8.2％，2.0-8.1％，2.1-8.0％，2.2-7.9％，2.3-7.8％，2.4-7.7％，2.5-7.6％，2.6-7.5％，2.7-7.4％，2.8-7.3％，2.9-7.2％，3.0-7.1％，3.1-7.0％，3.2-6.9％，3.3-6.8％，3.4-6.7％，3.5-6.6％，3.6-6.5％，3.7-6.4％，3.8-6.3％，3.9-6.2％，4.0-6.1％，4.1-6.0％，4.2-5.9％，4.3-5.8％，4.4-5.4％，4.6-5.3％，4.7-5.2％，4.8-5.1％或4.9-5.0％)。在各种实施例中，浓度范围为0.1-5％，0.25-4.75％，0.5-4.5％，0.75-4.25％，1.0-4.0％，1.25-3.75％，1.5-3.5％，1.75-3.25％，2.0-3.0％，或2.25-2.75％。

在一些实施例中，本发明所述的肽溶液的浓度范围为1-3％；包括端点。在一些特定实施例中为约1.0％，在一些实施例中，为约1.5％；在一些实施例中，为约2.0％；在一些实施例中，为约2.5％；在一些实施例中，为约3％。

在各种实施例中，本发明所述肽包含含有两个、三个或四个RADA(SEQ ID NO：1)重复序列的氨基酸序列(SEQ ID NO：1)；在一些实施例中，含有两个RADA重复序列的氨基酸序列(如RADARADA；SEQ ID NO：2)；在一些实施例中，含有三个重复序列的氨基酸序列(如RADARADARADA；SEQ ID NO：3)；在一些实施例中，含有四个RADA重复序列的氨基酸序列重复(如RADARADARADARADA；SEQ ID NO：4)。

在一些实施例中，本发明提供了治疗患者或对象肝脏手术中渗出性出血的方法，所述方法步骤包括(a)在患者或对象渗出性出血的位置施用包括0.1-10％肽溶液的组合物，其中所述肽包含具有RADA重复序列的氨基酸序列；并且其中所述溶液的特征在于其具有在两种状态之间转变的能力：当一个或多个特定离子基本不存在时形成未凝胶化状态，和当所述一个或多个离子以阈值水平或高于阈值水平存在时形成凝胶状态，其中所述一个或多个离子在所述位置上存在或变为存在；(b)将所述被施用的组合物保持在具有所述一个或多个离子的所述位置一段足以使所述组合物凝胶化的时间；和(c)不首先移除所述位置处的组合物，在所述位置处实施一项或多项肝脏手术任务。

在一些实施例中，所述渗出性出血是由电烙术造成的。

在一些实施例中，所述患者或对象在肝脏手术开始前被给予抗凝剂。

在一些实施例中，通过内镜施用包含溶液的本发明所述的肽组合物。在一些实施例中，通过内镜实施所述一项或多项肝脏手术任务。在一些实施例中，通过腹腔镜实施所述一项或多项肝脏手术任务。在一些特定实施例中，一项或多项肝脏手术任务包括肝脏的分离。在一些特定实施例中，一项或多项肝脏手术任务包括血管剥离。

在一些实施例中，本发明所述肽溶液的浓度范围为约0.1％至约10％(如0.1-10％；0.2-9.9％，0.3-9.8％，0.4-9.7％，0.5-9.6％，0.6-9.5％，0.7-9.4％，0.8-9.3％，0.9-9.2％，1.0-9.1％，1.1-9.0％，1.2-8.9％，1.3-8.8％，1.4-8.7％，1.5-8.6％，1.6-8.5％，1.7-8.4％，1.8-8.3％，1.9-8.2％，2.0-8.1％，2.1-8.0％，2.2-7.9％，2.3-7.8％，2.4-7.7％，2.5-7.6％，2.6-7.5％，2.7-7.4％，2.8-7.3％，2.9-7.2％，3.0-7.1％，3.1-7.0％，3.2-6.9％，3.3-6.8％，3.4-6.7％，3.5-6.6％，3.6-6.5％，3.7-6.4％，3.8-6.3％，3.9-6.2％，4.0-6.1％，4.1-6.0％，4.2-5.9％，4.3-5.8％，4.4-5.4％，4.6-5.3％，4.7-5.2％，4.8-5.1％或4.9-5.0％)。在各种实施例中，浓度范围为0.1-5％，0.25-4.75％，0.5-4.5％，0.75-4.25％，1.0-4.0％，1.25-3.75％，1.5-3.5％，1.75-3.25％，2.0-3.0％，或2.25-2.75％。在一些实施例中，本发明所述肽溶液的浓度范围为1-3％；包括端点。在一些特定实施例中，为约1.0％，在一些实施例中，为约1.5％；在一些实施例中，为约2.0％；在一些实施例中，为约2.5％；在一些实施例中，为约3％。

在各种实施例中，本发明所述肽包含含有两个、三个或四个RADA(SEQ ID NO：1)重复序列的氨基酸序列(SEQ ID NO：1)；在一些实施例中，含有两个RADA重复序列的氨基酸序列(如RADARADA；SEQ ID NO：2)；在一些实施例中，含有三个重复序列的氨基酸序列(如RADARADARADA；SEQ ID NO：3)；在一些实施例中，含有四个RADA重复序列的氨基酸序列重复(如RADARADARADARADA；SEQ ID NO：4)。

在一些实施例中，一个或多个离子选自钾(K

在一些实施例中，所述患者或对象为人或非人。在一些特定的实施例中，非人患者或对象包括哺乳动物。在一些特定的实施例中，哺乳动物包括啮齿动物(如小鼠或大鼠)、狗、猫、马、猪、家牛、绵羊、山羊、羊驼，白臀野牛、北美野牛、骆驼、鹿、驴、大额牛、豚鼠、美洲驼、骡、兔、驯鹿、水牛和牦牛。

在一些实施例中，本发明提供治疗患者或对象冠状动脉分流术移植物采集期间出血的方法，包括(a)向移植物采集部位施加含0.1-10％肽溶液的组合物，其中所述肽包含具有RADA重复序列的氨基酸序列；并且所述溶液的特征在于其具有在两个状态之间转变的能力：当一个或多个特定离子基本不存在时形成未凝胶化状态，和当一个或多个离子以阈值水平或高于阈值水平存在时形成凝胶状态，其中所述一个或多个离子在所述位置上存在或变为存在；和(b)将所述组合物保持在具有所述一个或多个离子的所述位置一段足以使该组合物凝胶化时间。

在一些实施例中，所述出血是由电烙术造成的。

在一些实施例中，施用本发明所述肽组合物的步骤在移植物采集开始前实施。在一些特定实施例中，不去除施加的凝胶状态肽组合物实施移植物采集。

在一些实施例中，施用本发明所述肽组合物的步骤在移植物采集开始后完成前实施。在一些特定实施例，不去除施加的凝胶状态肽组合物实施移植物采集。

在一些实施例中，将本发明所述肽组合物保持在一个位置的步骤包括在至少一个步骤的移植物采集步骤的实施期间保持。在一些实施例中，将本发明所述肽组合物保持在一个位置的步骤包括在移植物采集步骤的完成期间保持。在各种实施例中，不去除本发明所述施用的肽组合物实施和/或完成移植物采集。

在一些实施例中，本发明所述的肽溶液的浓度范围为约0.1％至约10％(如0.1-10％；0.2-9.9％，0.3-9.8％，0.4-9.7％，0.5-9.6％，0.6-9.5％，0.7-9.4％，0.8-9.3％，0.9-9.2％，1.0-9.1％，1.1-9.0％，1.2-8.9％，1.3-8.8％，1.4-8.7％，1.5-8.6％，1.6-8.5％，1.7-8.4％，1.8-8.3％，1.9-8.2％，2.0-8.1％，2.1-8.0％，2.2-7.9％，2.3-7.8％，2.4-7.7％，2.5-7.6％，2.6-7.5％，2.7-7.4％，2.8-7.3％，2.9-7.2％，3.0-7.1％，3.1-7.0％，3.2-6.9％，3.3-6.8％，3.4-6.7％，3.5-6.6％，3.6-6.5％，3.7-6.4％，3.8-6.3％，3.9-6.2％，4.0-6.1％，4.1-6.0％，4.2-5.9％，4.3-5.8％，4.4-5.4％，4.6-5.3％，4.7-5.2％，4.8-5.1％或4.9-5.0％)。在各种实施例中，浓度范围为0.1-5％，0.25-4.75％，0.5-4.5％，0.75-4.25％，1.0-4.0％，1.25-3.75％，1.5-3.5％，1.75-3.25％，2.0-3.0％，或2.25-2.75％。在一些实施例中，本发明所述的肽溶液的浓度范围为1-3％；包括端点。在一些特定实施例中，为约1.0％，在一些实施例中，为约1.5％；在一些实施例中，为约2.0％；在一些实施例中，为约2.5％；在一些实施例中，为约3％。

在各种实施例中，本发明所述肽包含含有两个、三个或四个RADA(SEQ ID NO：1)重复序列的氨基酸序列(SEQ ID NO：1)；在一些实施例中，含有两个RADA重复序列的氨基酸序列(如RADARADA；SEQ ID NO：2)；在一些实施例中，含有三个重复序列的氨基酸序列(如RADARADARADA；SEQ ID NO：3)；在一些实施例中，含有四个RADA重复序列的氨基酸序列重复(如RADARADARADARADA；SEQ ID NO：4)。

在一些实施例，一个或多个离子选自钾(K

在一些实施例中，所述患者或对象为人或非人。在一些特定的实施例中，非人患者或对象包括哺乳动物。在一些特定的实施例中，哺乳动物包括啮齿动物(如小鼠或大鼠)、狗、猫、马、猪、家牛、绵羊、山羊、羊驼，白臀野牛、北美野牛、骆驼、鹿、驴、大额牛、豚鼠、美洲驼、骡、兔、驯鹿、水牛和牦牛。

在一些实施例中，本发明提供在患者或对象中实施冠状动脉分流术移植术程序的方法，包括(a)在患者的心脏位置施用包括0.1-10％肽溶液的组合物，其特征在于其中所述肽包含具有RADA重复序列的氨基酸序列；并且该溶液的特征在于其具有在两个状态之间转变的能力：当一个或多个特定离子基本不存在时形成未凝胶化状态，和当一个或多个离子以阈值水平或高于阈值水平存在时形成凝胶状态，其中所述一个或多个离子在所述位置上存在或变为存在

在一些实施例中，所述心脏位置是冠状动脉上的一个解剖学部位。在一些实施例中，所述心脏位置是移植血管上的一个解剖学部位。在一些实施例中，所述心脏位置是一个氧合器的环状连接部位。

在各种实施例中，本发明所述肽组合物在心脏位置的施用不需要额外施加压力。

在一些实施例中，施用本发明所述肽组合物的步骤在移植物采集开始后完成前实施。在一些特定实施例中，不去除施加的凝胶状态肽组合物实施移植物采集。

在一些实施例中，施用本发明所述肽组合物的步骤在移植物采集开始后完成前实施。在一些特定实施例中，不去除施加的凝胶状态肽组合物实施移植物采集。

在一些实施例中，将本发明所述肽组合物保持在一个位置的步骤包括在至少一个移植物采集步骤的实施期间保持。在一些实施例中，将本发明所述肽组合物保持在一个位置的步骤包括在移植物采集步骤的完成期间保持。在各种实施例中，不去除施加的本发明所述肽组合物实施和/或完成移植物采集。

在一些实施例中，提供了一种为患者或对象进行冠状动脉分流移植程序的一种方法，包括一种不在所述部位施用纤维蛋白胶或

在一些实施例中，提供了一种为患者或对象进行冠状动脉分流移植程序的一种方法，包括在所述部位施用除纤维蛋白胶或

在一些实施例中，本发明所述的肽溶液浓度范围为约0.1％至约10％(如0.1-10％；0.2-9.9％，0.3-9.8％，0.4-9.7％，0.5-9.6％，0.6-9.5％，0.7-9.4％，0.8-9.3％，0.9-9.2％，1.0-9.1％，1.1-9.0％，1.2-8.9％，1.3-8.8％，1.4-8.7％，1.5-8.6％，1.6-8.5％，1.7-8.4％，1.8-8.3％，1.9-8.2％，2.0-8.1％，2.1-8.0％，2.2-7.9％，2.3-7.8％，2.4-7.7％，2.5-7.6％，2.6-7.5％，2.7-7.4％，2.8-7.3％，2.9-7.2％，3.0-7.1％，3.1-7.0％，3.2-6.9％，3.3-6.8％，3.4-6.7％，3.5-6.6％，3.6-6.5％，3.7-6.4％，3.8-6.3％，3.9-6.2％，4.0-6.1％，4.1-6.0％，4.2-5.9％，4.3-5.8％，4.4-5.4％，4.6-5.3％，4.7-5.2％，4.8-5.1％或4.9-5.0％)。在各种实施例中，浓度范围为0.1-5％，0.25-4.75％，0.5-4.5％，0.75-4.25％，1.0-4.0％，1.25-3.75％，1.5-3.5％，1.75-3.25％，2.0-3.0％，或2.25-2.75％。在一些实施例中，本发明所述的肽溶液的浓度范围为1-3％；包括端点。在一些特定实施例中，为约1.0％，在一些实施例中，为约1.5％；在一些实施例中，为约2.0％；在一些实施例中，为约2.5％；在一些实施例中，为约3％。

在各种实施例中，本发明所述肽包含含有两个、三个或四个RADA(SEQ ID NO：1)重复序列的氨基酸序列(SEQ ID NO：1)；在一些实施例中，含有两个RADA重复序列的氨基酸序列(如RADARADA；SEQ ID NO：2)；在一些实施例中，含有三个重复序列的氨基酸序列(如RADARADARADA；SEQ ID NO：3)；在一些实施例中，含有四个RADA重复序列的氨基酸序列重复(如RADARADARADARADA；SEQ ID NO：4)。

在一些实施例中，一个或多个离子选自钾(K

在一些实施例中，所述患者或对象为人或非人。在一些特定的实施例中，非人患者或对象包括哺乳动物。在一些特定的实施例中，哺乳动物包括啮齿动物(如小鼠或大鼠)、狗、猫、马、猪、家牛、绵羊、山羊、羊驼，白臀野牛、北美野牛、骆驼、鹿、驴、大额牛、豚鼠、美洲驼、骡、兔、驯鹿、水牛和牦牛。

在一些实施例中，本发明提供的预充式注射器用于在包括本发明所述肽组合物的外科手术程序中使用，包括如本文所述的本发明的肽组合物的使用。

在一些实施例中，提供了应用在外科手术程序中的预填充注射器，包括含有0.1-10％肽溶液的注射筒，其中所述肽包含具有RADA重复序列的氨基酸序列；并且所述溶液的特征在于其具有在两种状态之间转变的能力：当一个或多个特定离子基本不存在时形成未凝胶化状态，和当一个或多个离子以阈值水平或高于阈值水平存在时形成凝胶状态，其中所述一个或多个离子在所述位置上存在或变为存在；和非金属喷嘴；其中，所述注射筒和非金属喷嘴能够以液体密封方式形成安全连接。

在一些实施例中，本发明所述的肽溶液浓度范围为约0.1％至约10％(如0.1-10％；0.2-9.9％，0.3-9.8％，0.4-9.7％，0.5-9.6％，0.6-9.5％，0.7-9.4％，0.8-9.3％，0.9-9.2％，1.0-9.1％，1.1-9.0％，1.2-8.9％，1.3-8.8％，1.4-8.7％，1.5-8.6％，1.6-8.5％，1.7-8.4％，1.8-8.3％，1.9-8.2％，2.0-8.1％，2.1-8.0％，2.2-7.9％，2.3-7.8％，2.4-7.7％，2.5-7.6％，2.6-7.5％，2.7-7.4％，2.8-7.3％，2.9-7.2％，3.0-7.1％，3.1-7.0％，3.2-6.9％，3.3-6.8％，3.4-6.7％，3.5-6.6％，3.6-6.5％，3.7-6.4％，3.8-6.3％，3.9-6.2％，4.0-6.1％，4.1-6.0％，4.2-5.9％，4.3-5.8％，4.4-5.4％，4.6-5.3％，4.7-5.2％，4.8-5.1％或4.9-5.0％)。在各种实施例中，浓度范围为0.1-5％，0.25-4.75％，0.5-4.5％，0.75-4.25％，1.0-4.0％，1.25-3.75％，1.5-3.5％，1.75-3.25％，2.0-3.0％，或2.25-2.75％。在一些实施例中，本发明所述的肽溶液的浓度范围为1-3％；包括端点。在一些特定实施例中，为约1.0％，在一些实施例中，为约1.5％；在一些实施例中，为约2.0％；在一些实施例中，为约2.5％；在一些实施例中，为约3％。

在各种实施例中，本发明所述肽包含含有两个、三个或四个RADA(SEQ ID NO：1)重复序列的氨基酸序列(SEQ ID NO：1)；在一些实施例中，含有两个RADA重复序列的氨基酸序列(如RADARADA；SEQ ID NO：2)；在一些实施例中，含有三个重复序列的氨基酸序列(如RADARADARADA；SEQ ID NO：3)；在一些实施例中，含有四个RADA重复序列的氨基酸序列重复(如RADARADARADARADA；SEQ ID NO：4)。

在一些实施例，一个或多个离子选自钾(K

在一些实施例中，所述患者或对象为人或非人。在一些特定的实施例中，非人患者或对象包括哺乳动物。在一些特定的实施例中，哺乳动物包括啮齿动物(如小鼠或大鼠)、狗、猫、马、猪、家牛、绵羊、山羊、羊驼，白臀野牛、北美野牛、骆驼、鹿、驴、大额牛、豚鼠、美洲驼、骡、兔、驯鹿、水牛和牦牛。。

在一些实施例中，在手术程序中使用本发明所述的预填充注射器，其中所述手术程序选自冠状动脉分流移植术(CABG)、肝脏切除术、纯腹腔镜肝脏切除术(PLH)、内镜粘膜切除术(EMR)、内镜粘膜下剥离术(ESD)、胸腔镜肺局部切除术、淋巴结清扫术、开放性肾部分切除术、腹腔镜肾部分切除术、主动脉置换和矫形骨科手术。

在一些实施例中，本发明所述的预填充注射器，其中所述包含刚性的非金属喷嘴是刚性的。在一些实施例中，本发明所述的预填充注射器，其中所述包含柔性的非金属喷嘴是柔性的。在一些特定的实施例中，所述非金属喷嘴是柔性的，使得它能够在内镜手术程序中使用。在一些特定的实施例中，所述非金属喷嘴是柔性的，使得它能够用于在腹腔镜外科手术程序中使用。

在一些实施例中，本发明所述的预填充注射器包含如本文所述肽溶液体积在约1-50毫升的范围内(如约1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，或50毫升)。在一些实施例中，体积范围为约1到约10毫升，包括端值；在一些特定实施例中，为约1个，2，3，4，5，6，7，8，9或10毫升。在一些实施例中，为约1mL。在一些实施例中，为约3毫升。在一些实施例中，为约5毫升；在一些实施例中，为约10毫升。在一些实施例中，体积范围为约20毫升至约30毫升。在一些实施例中，体积范围为约30毫升至约40毫升。在一些实施例中，体积范围为约40毫升至约50毫升；在一些实施例中，为约30毫升。

在一些实施例中，提供的试剂盒包括如本文所述的一个或多个预填充注射器的试剂盒。在一些特定实施例中，试剂盒包含一个，两个，三个，四个，五个，或更多个预填充注射器。

在一些实施例中，提供了包括如本文所述的预填充注射器和为容纳所述预填充注射器而专门形成的泡罩包装的药物包装。

附图说明

本文所包括的由以下图表组成的附图仅用于说明目的而不是为了限制。

图1是肽支架中肽之间的相互作用示意图。这些肽由交替的亲水性和疏水性残基构成的氨基酸序列组成，所述肽能够自组装，当暴露在相当于生理条件的电解质溶液中能形成极度稳定的β折叠(美国5955343和美国5670483)。所述肽支架由肽之间的许多相互作用来稳定。例如，从相邻肽的正电荷氨基酸侧链和带负电荷氨基酸侧链形成互补离子对，其它亲水性残基例如天冬酰胺和谷氨酰胺参与氢键相互作用。相邻肽的疏水性基团参与范德华相互作用。肽骨架上的氨基和羰基也参与分子间氢键相互作用。

图2示出肽溶液的组成和肽溶液形成纤维网使得溶液凝胶化的条件的图示。展示了RADA重复序列肽链已展示(左上)和暴露于生理条件后所得到的纤维网形成(右上)。展示了纤维网的电子显微镜照片(右下)以及形成的凝胶状态(左下)。

图3为说明性示意图，未按比例绘制，显示典型的冠状动脉分流移植物手术(CABG)中的心脏上实施手术的移植物位置。CABG手术实施的典型步骤在右边有详细说明。

图4为说明性示意图，未按比例绘制，显示在外科手术程序中安置金属钉板(左)、伽马钉(中)以及一个安德销(右)，以修复股骨粗隆间骨折。

图5为说明性示意图，未按比例绘制，显示通过胸腔镜进行局部肺切除的外科手术部位，。

图6为可用于将肽溶液递送到手术和/或出血部位的注射器图示。柱塞、手指握杆、垫圈、注射筒和盖帽已标示。

图7为具有和不具有附加的专门的喷嘴/插管的预填充式注射器，所述预填充式注射器用于将肽溶液递送至手术和/或出血部位。

图8为具有和不具有附加的专门的连接器的预填充式注射器，所述预填充式注射器用于通过导管施用将肽溶液递送至手术和/或出血部位。

图9示出包括分别独立使用灭菌泡罩包装的预填充注射器和专门的喷嘴/插管的药物包装。

图10表示了根据三个示例性外科手术(肝切除、血管造口术、内镜)，手术中止血实施程序中的需要的时间以分钟数计(X轴)和施用位置数量(Y轴)的柱状图。

本发明不限于具体的方法和描述的实验条件，因为这些方法和条件可以变化。也可以理解的是，由于本发明的范围将由所附的权利要求来限定，本文使用术语的目的仅用于描述具体实施例，并且除非另有说明，所述术语是非限制性的。

除非另有说明，本文使用的所有技术和科学术语及短语具有本领域普通技术人员通常所理解的相同含义。虽然任何方法和类似或等同于本文描述的方法和材料可以在实践中或测试本发明中使用，此处描述的方法和材料是优选的。本文提及的所有出版物通过引用并入本文。

如本说明书和所附权利要求书，除非上下文另有明确说明，单数形式“一”，“一个”，和“该”包括复数引用。因此，例如，提及“一种方法”包括一种或多种方法，和/或本文描述类型的步骤和/或本领域技术人员通过阅读本公开内容能够理解等等。

术语“载剂”是指稀释剂、佐剂、赋形剂或运载体，组合物可以通过所述稀释剂、佐剂、赋形剂或运载体被施用。载剂可以包括无菌液体，如水和油，包括石油、动物油、植物油或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。

术语“互补的”意指肽能够自组装成在来自支架中的相邻肽的亲水性残基之间形成离子或氢键合相互作用的折叠。在许多实施例中，如图1所示，肽中的每一个亲水性残基或与相邻肽上的亲水性残基相互作用(例如，氢键或离子配对)，或暴露于溶剂。

术语“赋形剂”意指一种加入到药物组合物中以提供所需的稠度一致性或稳定效果的非治疗剂。合适的药物赋形剂包括，例如淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。

短语“生理条件”意指对于生物体或细胞系统来说在自然界中存在可以发生的外部或内部环境条件。如本文所用，生理条件是指那些在人或非人动物体内存在，尤其是那些存在于外科手术部位和/或在外科手术部位内的条件。示例性的生理条件与实验室设置的条件相反，后者相比之下被理解为人造的。生理条件通常包括，例如20-40℃的温度范围，1个大气压，pH为6-8,葡萄糖浓度为1-20mM，地球上大气压水平和重力下的氧浓度。

术语“纯”用于指示本文所述肽组合物在何种程度上不含其它化学物质，包括去除有问题的肽加合物以及不同长度的肽。例如，在一些实施例中，如果在组合物中基本所有肽都具有与某特定的序列或该序列的截短体(如该序列的末端截短体，例如羧基末端截短体)，则该肽组合物被认为是特定的肽(即具有特定氨基酸序列的肽)的“纯”组合物。在一些实施例中，在特定肽(即具有特定氨基酸序列的肽)的纯组合物中至少90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或更多的肽具有与某特定的序列或该序列的截短体(如该序列的末端截短体，例如氨基末端截短体)相同的氨基酸序列。所述肽(即具有特定氨基酸序列的肽)的氨基酸序列与特定序列或截短体(如末端截短体，例如氨基末端截短体)完全相同。在一些实施例中，在特定肽(即具有特定氨基酸序列的肽)的纯组合物中至少90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或更多的所述肽(即具有特定氨基酸序列的肽)是全长。

短语“治疗有效量”意指产生所需效果的给药量。在一些实施例中，当按照治疗给药方案施用于患有或易患某种疾病，障碍和/或病状的人群，以治疗疾病、障碍和/或病状时，该术语所指的量是足够的量。在一些实施例中，治疗有效量意指降低疾病，障碍和/或病状的一种或多种症状的发生率和/或严重程度，和/或延缓疾病，障碍和/或病状的一种或多种症状的发生。本领域的普通技术人员能理解的是，术语“治疗有效量”实际上并不需要在特定个体上来实现治疗成功。而治疗有效量可以是当对需要这种治疗的患者给药时，显著数目的对象提供了特定期望的药理学反应的量。在一些实施例中，参考治疗有效量可以是参考在一个或多个特定组织(如受该疾病，障碍或病状影响的组织)或液体(如血液、唾液、血清、汗水、眼泪、尿液等)中测定的量。本领域的普通技术人员可理解的是，在一些实施例中，特定的试剂或疗法的治疗有效量可以以单剂量配制和/或给药。在一些实施例中，治疗有效试剂可以以多次剂量配制和/或给药，例如，作为给药方案的一部分。

如本文所使用的，术语“局部的”当用于描述组合物给药时，是用来描述组合物被施用在身体表面的情况，例如作为在上下文中典型的情况，皮肤或粘膜下，以类似的方式使用已知的组合物，例如乳膏、泡沫、凝胶、乳液和软膏。局部给药被理解为是经皮肤的的，这意味着它们直接施用于皮肤。局部给药还意在包括可以被应用到除皮肤外的其他组织的其它制剂，如施加到结膜的滴眼剂、或施加在耳内的滴耳剂或治疗施加到牙齿的表面的治疗。作为给药途径，局部给药与肠内(消化道内)和肠胃外给药(注射到循环系统)具有对比性。

如本文所使用的，短语“存储和/或药物递送系统”意指用于存储和/或递送本文所述的肽组合物的系统。适合于本文描述的肽组合物的示例性的存储和/或递送系统是小瓶，瓶，烧杯，袋，注射器，安瓿，药筒，容器或

如本文所使用的，术语“喷嘴”意指一种通常是薄的、圆柱形物体，通常具有窄端和宽端，其可适用于固定在本文所描述的递送装置上。在一些实施例中，术语“喷嘴”和“套管”可互换使用。喷嘴由两个连接点或端点组成，第一连接点或端点用以连接到传送系统(例如注射器)，第二连接点可作为其中递送药物组合物的施用的点或作为点连接到辅助设备(如导管)的点。

术语“孔”在本文中意指喷嘴、套管和/或导管的开口，在用于与含有本发明所述的肽组合物的递送和/或存储系统(如注射器)相连接中使用的开口。通常，孔的特征在于通过各种测定或计量来表征，例如内壁直径的厚度、外壁直径的厚度和壁厚。测量或计量(如直径、厚度等)示例性的用于与含有本发明所述的肽组合物递送和/或存储系统(例如，注射器)相连接的喷嘴、套管和/或导管的孔的示例性测量或计量(如直径、厚度等)可以在任意正规系统中找到(如法国标度或法国测量系统法式计量体系，存根铁线测量系统也被称为伯明翰线规)。

在本文中使用的术语“结构上相容的”意指能够维持足够恒定的肽内距离以允许支架形成。在本发明的某些实施例中，肽内距离的变化小于4、3、2或1埃。如果足够稳定的力存在，还可预期肽内距离的更大变化未必会阻止支架形成。肽内距离可基于分子建模或基于先前已报道的本领域已知的简化程序(例如，美国专利号5,670,483)来计算。在一个实施方法中，肽内距离通过获取成对的每一个氨基酸的侧链上的无支链原子的数目之和来计算。例如，赖氨酸-谷氨酸离子对的肽内距离之和为5

如本文所使用的，术语“对象”意指任何哺乳动物，包括人类。在本发明的某些特定实施例中的对象是成人，青少年或婴儿。在一些实施例中，使用术语“个体”或“患者”并旨在与“对象”互换。还可以考虑通过本发明进行药物组合物给药和/或实施子宫内治疗的方法。

自胶凝肽组合物

本发明公开提供了通过使用某些无菌自胶凝肽组合物而改进的外科方法，如本文所述。本发明还提供了用于在特定手术程序期间给药而特别制备的这种组合物。例如，本发明公开提供了特别设计的含有这种自胶凝肽组合物的递送系统(如预填充注射器和/或套管)。

本文所公开的组合物、外科手术方法以及装置提供了对现有方法的各种改进。

在本发明所述的肽组合物中使用的特定示例性肽序列包括美国专利No.5,670,483和/或5,955,343和/或以及美国专利申请No.09/778,200中报道的那些序列，每一项通过引用并入本文。这些肽链包含由交替的亲水性和疏水性氨基酸组成的氨基酸序列，所述多肽以能够以在电解质，诸如单价阳离子(如一价阳离子)存在的情况下自组装形成极度稳定的β折叠宏观结构的能力来表征。示例性的电解质是Na

在许多实施例中，所用肽具有由交替的带正电荷和带负电荷的氨基酸构成的氨基酸序列。这些离子侧链彼此自身互补，因为当带正电荷和带负电荷的氨基酸残基可形成互补离子对的时候，这些肽被认为是自身互补。这些肽链因而被称为离子型自身互补肽或I型自组装肽。如果离子残基通过一个带正电荷的残基与一个带负电荷的残基交替(-

表1

自组装肽的代表

之前的研究已表明，表1中肽内带电荷的残基可以被相同电荷的其它残基取代(如用带正电荷的精氨酸取代带正电荷的赖氨酸和/或用带负电荷的天冬氨酸取代带负电荷的谷氨酸)而对自组装不产生不利影响。然而，具有相反电荷的残基的取代(如用带负电荷的残基如天冬氨酸和谷氨酸取代带正电荷的赖氨酸和/或精氨酸)破坏自组装。

可替换地或附加地，除了带电荷的残基以外，还可将可形成氢键的其它亲水性残基诸如天冬酰胺和谷氨酰胺掺入肽链，或者用其来代替带电荷的残基。如果将肽链中的丙氨酸变成更加疏水的残基诸如亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸，则这些肽链具有更大的自组装倾向性和形成强度增强的肽基质。一些具有与前述肽链相似的组成和长度的肽形成α螺旋和随机卷曲而非β折叠，并且不形成宏观结构。因此，除了自身互补以外，其它因素对于宏观支架的形成也可能是非常重要的，诸如链长度、分子间相互作用的程度和形成交错排列的能力。

可以生成其它自组装肽链，例如具有与任何自组装肽链不同的单个氨基酸残基或多个氨基酸残基的氨基酸序列的其它自组装肽链。此外，特定细胞识别配体诸如RGD或RAD整合至自组装肽中可促进支架中细胞的增殖和/或吸引细胞进入支架。

在一些实施例中，自组装肽中包括半胱氨酸，例如，以形成二硫键。或者，具有芳环的残基可整合入自组装肽，这样可以通过紫外线照射而产生肽链之间的交联。表2列出易受紫外线交联的肽的氨基酸序列的代表性实例。交联的程度可以由预定的紫外线照射长度以及预定的肽链浓度进行精确控制。交联的程度可以通过例如光散射、凝胶过滤或使用标准方法的扫描电子显微镜等确定。或者，交联的程度可以通过使用HPLC和/或质谱分析经蛋白酶(如基质金属蛋白酶)消化的自组装肽结构来检测。支架的材料强度可以在如本文所述的交联前以及交联后确定。

表2

可交联肽的代表性的可交联肽的序列

可以对任何感兴趣的特定的自组装肽进行本文所述的任何序列或改变的组合。

在一些实施例中，选择肽序列来实现自组装肽形成的结构所期望的刚度和/或弹性水平。然而不希望受任何理论束缚，低弹性可以有助于允许细胞迁移进入自组装结构支架和/或在驻留在支架结构中后彼此通讯。

在一些实施例中，选择肽序列以组装成具有低弹性模量的结构，所述低弹性模量例如在标准锥板流变仪测量的1-10千帕范围内。这样的低值允许支架作为细胞收缩的结果而变形，该变形可提供细胞间通讯的方法。此外，这样的模量允许支架将生理应激传递给在其中迁移的细胞，刺激所述细胞产生在显微结构上比疤痕更接近天然组织的组织。

支架的刚度可以通过各种手段，例如包括改变肽序列、改变肽浓度，改变肽长度以及它们的组合来控制。或者，可以使用其他方法以提高刚度，例如将一个或多个可交联部分(如生物素)连接到肽上(如氨基末端、羧基末端或内部的位置，如侧链)，以便它们可以交联，例如在自组装结构中。

在一些实施例中，降解位点如一个或多个聚集蛋白聚糖加工位点(如表3中强调的)，基质金属蛋白酶(MMP)的切割位点，如那些用于胶原酶的位点等，可以以同样的方法被引入肽中，不管是在其氨基末端，其羧基末端，或者在序列的其他位置。，方法一致。这种本领域技术人员理解，包含降解位点的肽形成的肽结构单独或与能够交联的其他肽组合形成的肽结构，可以通过暴露于适当的蛋白酶，在本领域技术人员理解的适当的条件(包括暴露的时间)下降解。在一些实施例中，组装肽形成的结构的体内半衰期可以通过一个或多个降解位点掺入所使用的肽调节，例如使所述结构被酶降解。

可以确定肽结构的降解速率，例如，可以通过使用例如HPLC、质谱法和/或NMR分析释放的肽组分来确定肽结构的降解速率。或者，如果利用放射性标记的肽，可以测量释放的放射性的量，例如通过闪烁计数。对于一些实施例，所述组装肽链的β折叠降解足够快，所以没有必要在用于组装的肽中掺入切割位点。

表3

具有聚集蛋白聚糖位点的代表性肽序列

在一些实施例中，所使用的肽具有疏水性氨基酸丙氨酸(A)和亲水性氨基酸精氨酸(R)及天冬氨酸(D)的交替结构，其中相应的正电荷和负电荷确定毗邻分子的相对位置。不希望受任何特定理论的束缚，但在此类实施例中提出，自组装可通过中性氨基酸侧链之间的疏水键和肽骨架之间的氢键完成。在一些这样的实施例中，所使用的肽具有的氨基酸序列包括，或在一些实施例中包括，精氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-丙氨酸(RADA)的重复，或在一些实施例中由精氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-丙氨酸(RADA)的重复构成。在一些实施例中，所使用的肽含有两个、三个、四个或更多个RADA重复(SEQ ID NO：1)。在一些实施例中，所述肽包含四个RADA重复(如具有序列RADARADARADARADA；SEQ ID NO：4)。

在一些实施例中，本发明所述肽组合物中使用的肽序列具有至少12或16个氨基酸残基长度。在一些实施例中，本发明所述肽组合物中使用的肽序列正好具有12或16个氨基酸残基长度。

在一些实施例中，本发明所述肽组合物中使用的肽序列具有至少8或12个氨基酸残基长度。在一些实施例中，本发明所述肽组合物中使用的肽序列正好具有8或12个氨基酸残基长度。

在一些实施例中，本发明所述肽组合物中使用的肽包括天然氨基酸或由天然氨基酸组成；在一些实施例中，它们包含一种或多种非天然的和/或修饰的氨基酸。

在一些实施例中，本发明所述肽组合物中使用的肽包含D-氨基酸或由D-氨基酸组成。在一些实施例中，本发明所述肽组合物中使用的肽包含L-氨基酸或由L-氨基酸组成。在一些实施例中，本发明所述肽组合物中使用的肽包含D-氨基酸和L-氨基酸。

在一些实施例中，本发明所述肽组合物中使用的肽是合成的，例如，使用标准逐步合成化学并用高压液相色谱纯化。

在一些实施例中，本发明所述肽组合物是或包含生物可吸收的水溶液，其主要成分为肽。在一些实施例中，其中所述溶液的特征在于其具有在两种状态之间转变的能力，例如在特定pH值和/或当一个或多个特定离子基本不存在时形成未凝胶化状态，和当在特定pH值和/或所述一个或多个离子以阈值水平或高于阈值水平存在时形成凝胶状态。

在一些实施例中，当肽溶液暴露于等电点附近的pH值时发生从未凝胶转变至凝胶状态(如通过肽的自组装)；在一些这样的实施例中，等电点为约pH 7。在一些实施例中，当肽溶液暴露于pH范围为pH约6到pH约8时发生这样的转变(如通过肽的自组装)，包括端点，例如，约6.0，6.1，6.2，6.3，6.4，6.5，6.6，6.7，6.8，6.9，7.0，7.1，7.2，7.3，7.4，7.5，7.6，7.7，7.8，7.9，或8.0；在一些实施例中，这样的pH在约6.5至约7.5的范围内，包括端点；在一些实施例中，约6.8至约7.2，包括端点；在一些实施例中约为7.0。

在一些实施例中，当肽溶液暴露于低浓度(如约几毫摩尔，例如范围为约1毫摩尔至约10毫摩尔，包含端点)的一价碱金属离子(如钠

在一些实施例中，所述转变(和/或肽的自组装)在生理条件(即pH约为7，在盐如Na

在一些实施例中，生理条件意指那些存在于对象体内的条件，例如在对象的手术部位上或内部。例如，在一些实施例中，生理条件可以通过体液、血液、组织和/或它们的组合的存在下实现。在一些实施例中，通过加入由离子组成的缓冲液在体内或体外实现生理条件，例如通过外源性的加入一种或示例性离子至导致凝胶状态形成的水平。例如，在一些实施例中，肽可于体外暴露在体内合适的生理条件下，例如在手术程序之前或期间。在一些实施例中，所述暴露发生在对象的身体内(如在体内手术期间)，或在对象身体上(如局部施用，例如腹腔镜或活检留下的开口处)。

在一些实施例中，当暴露于适当的pH和离子条件时，溶液中所使用的肽自组装成结构，例如包含纤维网络的结构。在一些实施例中，所使用的肽自组装成网络结构，其包括纤维和孔隙。在一些实施例中，所述纤维的直径在约10至约20nm的范围内，包括端点；在一些实施例中，所述孔隙直径在约50至约200nm的范围内。在一些具体实施例中，所使用的肽自组装成类似于天然胶原结构的网络(图1)。

在一些实施例中，根据本发明所述的肽组合物包含肽溶液的浓度在约0.1％至约10％的范围内，包括端点。在各种不同的实施例中，浓度范围为0.1-10％；0.2-9.9％，0.3-9.8％，0.4-9.7％，0.5-9.6％，0.6-9.5％，0.7-9.4％，0.8-9.3％，0.9-9.2％，1.0-9.1％，1.1-9.0％，1.2-8.9％，1.3-8.8％，1.4-8.7％，1.5-8.6％，1.6-8.5％，1.7-8.4％，1.8-8.3％，1.9-8.2％，2.0-8.1％，2.1-8.0％，2.2-7.9％，2.3-7.8％，2.4-7.7％，2.5-7.6％，2.6-7.5％，2.7-7.4％，2.8-7.3％，2.9-7.2％，3.0-7.1％，3.1-7.0％，3.2-6.9％，3.3-6.8％，3.4-6.7％，3.5-6.6％，3.6-6.5％，3.7-6.4％，3.8-6.3％，3.9-6.2％，4.0-6.1％，4.1-6.0％，4.2-5.9％，4.3-5.8％，4.4-5.4％，4.6-5.3％，4.7-5.2％，4.8-5.1％或4.9-5.0％，包含端点。

在各种实施例中，浓度范围为0.1-5％，0.25-4.75％，0.5-4.5％，0.75-4.25％，1.0-4.0％，1.25-3.75％，1.5-3.5％，1.75-3.25％，2.0-3.0％，2.25-2.75％；在具体实施例中，范围为1.0-3.0％；在具体实施例中，浓度为约1％；在具体实施例中，浓度为约1.5％；在具体实施例中，浓度为约2％；在具体实施例中，浓度为约2.5％；在具体实施例中，浓度为约3％。

在一些实施例中，肽组合物中含有肽溶液浓度为约0.5％至约5％的范围。在一些实施例中，根据本发明所述的肽组合物中含有的肽溶液浓度为约0.5％，1％，1.5％，2％，2.5％，3％，3.5％，4％，4.5％，5％或更高。

本发明提供了使用包括本文所述肽溶液的组合物的方法，特别是实施外科手术程序的方法。在一些实施例中，外科手术程序可以是体内外科手术。在一些实施例中，外科手术可以是表面的或局部的。

本文所述肽组合物可用于各种外科手术程序，以更有效和更高效的方式控制和阻止外科医生在执行手术任务时遇到的出血。通过使用本发明书描述的肽化合物，提供了比通常标准程序更短时间实施和/或出血更少的示例性外科手术程序。本发明提供了这样的认识，即当在特定手术程序中使用时，本文所述的肽组合物中特别适用和/或能提供特别的优点。例如，除其他事项外，本发明包括这样的认识，即本文所述的肽组合物提供了在各种外科手术中有效止血的效果优势。示例性的效果优势是更快的完成外科手术程序中的一个或多个手术任务，并且作为结果，外科手术程序的总持续时间降低。具体地，各个实施例描述了包含肽溶液的组合物的功效和安全性，其中所述肽包含RADA重复的氨基酸序列；且其中所述溶液的特征在于其具有在两种状态之间转变的能力：当一个或多个特定离子基本不存在时形成未凝胶化状态(或者水溶液)，和当所述一个或多个离子以阈值水平或高于阈值水平存在时形成凝胶状态，其中所述一个或一个以上离子存在于或变为存在于给药部位(或位置)。

在一些实施例中，本发明提供了这样的认识，即除其他事项外，本文中所述的肽组合物与手术程序中使用相似方式用于止血的现有材料相比具有临床优势。

在一些实施例中，除其他事项外，本发明提供了这样的认识，即肽组合物可以由人工合成制造，而无需使用任何动物来源的产品，避免任何感染的风险。

在一些实施例中，本发明提供了这样的认识，即与现有材料相比，对对象实施包括使用本文中所述的肽组合物的外科手术程序的方法需要最少的准备和操作，或基本上不需要任何准备和操作，因此提供了应用的优势。

在一些实施例中，本发明提供了这样的认识，即现有材料(如纤维蛋白胶)，与本文中所描述的肽组合物相比，硬化后难以从施用部位除去。例如，肽组合物可用盐水洗涤，从而允许在手术中重复使用。

在一些实施例中，本发明提供了这样的认识，即一旦在应用时采用凝胶状态，本文所述的肽组合物是无色的并且保持透明，从而保持手术区域视野清晰。这对于确保有效的控制和/或阻止手术部位出血是必不可少的。

在一些实施例中，本发明提供了这样的认识，即在外科手术期间一旦出血止住了或一旦与手术程序相关的所有或基本上所有任务已经完成，过量的本文所述肽组合物可以简单地通过用水洗涤去除。在具体的实施例中，去除已施加到手术部位上或者手术部位内的一个或多个位点上的肽组合物后，继发性出血通过对象的凝血系统被阻碍、抑制和/或改善。

在一些实施例中，本发明提供了这样的认识，即本文所述肽组合物与血液接触后或在施用位点上凝胶化，而不是在递送装置内凝固(例如附着于预填充注射器的喷嘴)，使得其可以在特定手术程序中施用，例如，内镜和腹腔镜，从而排除使用现有材料会固化导致并发症的困难。

在一些实施例中，本发明提供了这样的认识，即本文所述肽组合物提供了一个不同的作用机理。在某些实施例中，本文所描述的肽组合物在一个或多个出血部位的施用提供了一个或多个出血部位上的表面压力。一旦采用凝胶状态，所述表面压力在所施用的肽组合物层下使得正常凝血功能发生，从而关闭出血部位并止血。现有材料需要额外的手动压力进行压迫。

在一些实施例中，本发明提供了这样的认识，即本文所述肽组合物减少了实施一个或多个与手术程序相关的任务的时间。

因此，除了其他方面，本发明提供了利用本文所述肽组合物改进的手术方法。在一些实施例中，提供的手术方法相对于护理方法的参考或标准的改进之处在于它是在较短的时间期间内实施。在一些实施例中，所述外科手术方法相对于患者恢复护理方法的参考或标准的改善之处在于，患者的恢复相对于未使用本文所述肽组合物进行相同的手术方法的患者有所改善。

在一些实施例中，本文所述的肽组合物用于对象的身体外部或内部进行外科手术的方法中。在某些实施例中，本文所述的肽组合物用于实施于对象的血管、内部器官和/或骨骼的手术方法中。

在一些实施例中，本文所述的肽组合物用于手术部位中血管移植的外科手术方法中。在某些实施例中，血管手术方法包括分流术(如冠状动脉分流术)。

在一些实施例中，本文所述的肽组合物用于实施全部或部分器官切除或剖析的手术方法。器官实质上可以是给定外科手术程序中的候选者，但是，不希望被理论束缚，示例性的器官可以包括，例如，肝，脾，胆囊，胰腺，胃或肺。在某些实施例中，本文所述的肽组合物用于实施从器官中全部或部分去除癌变组织或恶性组织的手术方法。在某些实施例中，本文所述的肽组合物用于实施从器官中全部或部分切除良性组织的手术方法。

在一些实施例中，本文所述的肽组合物可以用于实施修复对象的一个或多个骨折的手术方法。在某些实施例中，肽组合物通过注入对象的一个或多个骨折部位中使用。在某些实施例中，肽组合物通过施加到对象的一个或多个骨折部位使用。

在一些实施例中，本文所述的肽组合物在手术部位的应用可以变化，如根据应用部位、患者的具体因素、手术程序，应用部位条件、给药途径及其他。当本文所述的肽组合物用于治疗与给定外科手术程序相关的各种出血部位，包括在对象体内手术，直接施用是有利的，通常直接施用阻止出血必需的量(如治疗有效量)。在一些实施例中，施用本文所述的肽组合物的频率和持续时间可以根据条件或应用部位的严重程度加以调整。

在一些实施例中，在外科手术方法中施用本文所述的肽组合物以可注射的制剂提供。这种装置对所述肽组合物用于阻止外科手术程序中的出血比现有材料有利，所述现有材料可能需要执行者或外科医生进行混合或其他机械操作方式。注射制剂可以用于需要治疗对象(人或非人)的出血部位的任何类型的应用。包括本文所述的肽组合物的药物组合物可通过注射器和喷嘴递送到出血部位或手术部位。

在一些实施例中，接受外科手术程序(体内或其他方式)的对象，可使用预填充注射器在出血部位施用本文所述的治疗有效量的肽组合物。示例性技术包括将固定在预填充注射器的喷嘴根据需要接近一个或多个有需要的出血部位。

根据本发明使用的肽组合物包含如本文所述的肽，以及任选的一种或多种合适的载体、赋形剂和/或其它制剂掺入剂；在一些实施例中，选择所用组合物的组分以提供改善的转移、递送、耐受、性能等等。

在许多实施例中，本发明中使用的肽组合物包含在水溶液中的肽(即，在水性的和/或水混溶性的载体中)。此类组合物的示例性水性载体包括，例如，制药级水，蔗糖(如蔗糖水)以及它们的组合。在一些特定的实施例中，用于本发明中的肽组合物包含水溶液中的肽，其中所述水溶液包含的载体为有机化合物，其特征在于通过赋予水性溶液中的肽溶解性和/或稠化效应。

在许多实施例中，根据本发明使用的肽组合物是无菌的和/或在无菌条件下制备。

在一些实施例中，根据本发明使用的肽组合物，包括水性制剂，可存储在氧气剥夺环境中。氧气剥夺环境可以通过例如将水性溶液存储在惰性气体(如氮气或氩气)中来产生。

在一些实施例中，根据本发明使用的肽组合物可以以干燥形式保存，例如以干粉形式，例如通过冻干实现。

在一些实施例中，根据本发明使用的肽组合物，具体包括水性制剂，被适当地存储在温度为约0℃至约10℃的范围内，包括端点，例如，约0.5℃，1.0℃，1.5℃，2.0℃，2.5℃，3.0℃，3.5℃，4.0℃，4.5℃，5.0℃，5.5℃，6.0℃，6.5℃，7.0℃，7.5℃，8.0℃，8.5℃，9.0℃，9.5℃或10.0℃；在一些实施例中，该温度为约2.0℃至约8.0℃，包括端点。在一些实施例中，该温度高于0℃低于10℃。

在一些实施例中，根据本发明使用的肽的组合物以单位剂量形式提供，例如与递送系统一起。

在一些实施例中，根据本发明的肽组合物的适当的单位剂量，肽的递送量在约0.1％至约10％(w/v)的肽的范围内，包括端值；例如约0.1％，0.2％，0.3％，0.4％，0.5％，0.6％，0.7％，0.8％，0.9％，1.0％，1.1％，1.2％，1.3％，1.4％，1.5％，1.6％，1.7％，1.8％，1.9％，2.0％，2.1％，2.2％，2.3％，2.4％，2.5％，2.6％，2.7％，2.8％，2.9％，3.0％，3.1％，3.2％，3.3％，3.4％，3.5％，3.6％，3.7％，3.8％，3.9％，4.0％，4.1％，4.2％，4.3％，4.4％，4.5％，4.6％，4.7％，4.8％，4.9％，5.0％，5.1％，5.2％，5.3％，5.4％，5.5％，5.6％，5.7％，5.8％，5.9％，6.0％，6.1％，6.2％，6.3％，6.4％，6.5％，6.6％，6.7％，6.8％，6.9％，7.0％，7.1％，7.2％，7.3％，7.4％，7.5％，7.6％，7.7％，7.8％，7.9％，8.0％，8.1％，8.2％，8.3％，8.4％，8.5％，8.6％，8.7％，8.8％，8.9％，9.0％，9.1％，9.2％，9.3％，9.4％，9.5％，9.6％，9.7％，9.8％，9.9％，或10.0％。在一些实施例中，该递送量为约1.0％至约5.0％的范围内。在一些实施例中，为约1.0％至约3％的范围内。在一些实施例中，为约1.0％；在一些实施例中，为约1.5％；在一些实施例中，为约2.0％；在一些实施例中，为约2.5％；在一些实施例中，为约3.0％。在一些实施例中，溶液中肽组合物的适当单位剂量为约1.0毫升至约50.0毫升的范围内，包括端点，例如约1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，或50毫升。在一些实施例中，溶液中肽组合物的适当单位剂量为为约1.0mL至约10mL的范围内。在一些实施例中，范围在约20毫升至约30毫升范围内。在一些实施例中，范围在约30毫升至约40毫升内。在一些实施例中，范围在约40mL至约50mL内。在一些实施例中，为约5毫升；在一些实施例中，为约10毫升；在一些实施例中为约30毫升。

在一些实施例中，肽溶液适当的单位剂量为约0.1％至约10％的浓度范围内(w/v)，如本文所述。在一些实施例中，适当的单位剂量为约1毫升至约5毫升的1.0％至3.0％(w/v)的水溶液，或约30毫升的1.0％至3.0％(w/v水溶液。

在一些实施例中，如本文所述的肽组合物与适当的存储或递送容器，例如小瓶、瓶、烧杯、袋、注射器、安瓿、药筒、容器或

合适的预充式注射器包括，但不限于，具有烘烤硅涂层的硼硅酸盐玻璃注射器，喷涂硅硼硅酸盐玻璃注射器，无硅塑料树脂注射器或环烯烃聚合物注射器，聚丙烯注射器和聚乙烯注射器。

在一些实施例中，与适当的存储或递送容器一起提供(例如，包括在内)的肽组合物的形式为如本文所述的溶液；在一些实施例中，其形式为如本文所述的干燥形式(如，干粉末形式)。

在各种实施例中，根据本发明使用的肽组合物适合在外科手术程序中施用于对象。在各种实施例中，在对象身体中实施手术程序，例如，在体内。示例性体内外科手术程序是指矫正血管异常(例如旁路)，切除或剥离(如全部或部分从器官去除损坏或病变组织)，或修复损坏的器官，组织或骨(如修复脾脏破裂，修复骨折，修复撕裂的肌肉或韧带等)的程序。在各种实施例中，在对象身体外部实施手术程序，如局部。示例性局部外科手术程序是指修复对象皮肤上的开口(如缝合关闭由于穿刺或其它突起造成的皮肤开口)的程序。在一些实施例中，对象是人。在一些实施例中，对象是非人动物(如马、狗、猫等)。

在一些实施例中，除了提供如本文所述的改进的手术方法，本发明还提供了特别适用于递送本文所述肽组合物的储存和/或递送系统。在一些实施例中，本文所述的肽组合物的存储系统与递送系统分离。在一些实施例中，本文所述肽组合物的存储在递送系统中提供。例如，本文所述的肽组合物可存储在递送系统中，如预填充注射器，直到在实施手术方法期间应用。

在一些实施例中，本文所述的存储和/或递送系统可在一个或多个外科手术方法中使用。在一些实施例中，本文所述的存储和/或递送系统可以用在止血方法中，以便减少对对象实施手术方法的持续时间。

在一些实施例中，所述存储和/或递送系统特别适用于递送本文所述肽组合物至体内位点，包括例如外科手术的位点。在一些实施例中，本发明提供了喷嘴和/或套管用于组合物(如肽组合物)的递送。

在一些实施例中，所述喷嘴和/或套管适用于连接到注射器或其它存储或递送容器，其可以，例如，预先使用组合物填充以用于递送。所述喷嘴和/或套管的实例见图7和8所述。

在一些实施例中，所述喷嘴与传统的针在一个或多个不同特征上有区别。例如，在一些实施例中，示例性喷嘴相比于标准金属针是由非金属材料制成的。

在一些实施例中，所述喷嘴和/或套管由塑料材料(如聚丙烯)制成。在某些实施例中，所述喷嘴和/或套管由柔性材料制成。在一些实施例中，所述喷嘴和/或套管由刚性材料(如非柔性)制成。在一些实施例中，所述喷嘴和/或套管由可被灭菌的材料制成，例如，通过高压灭菌。

在一些实施例中，所述喷嘴和/或套管具有一个钝端，而相比之下，许多标准的针具有一个尖端。例如，标准皮下注射或缝合针，通常具有一个尖端，其进一步具有斜面特征。示例性斜面类型包括标准斜面、短斜面或真短斜面。

在一些实施例中，所述喷嘴和/或套管与许多标准针头相比具有相对较宽的孔隙。在一些实施例中，所述喷嘴和/或套管具有内孔直径、外内径和孔壁厚度。例如，在一些实施例中，所述喷嘴和/或套管内孔直径在约4.00mm至约0.05mm的范围内，包括端值；例如约4.00mm，3.90mm，3.80mm，3.70mm，3.60mm，3.50mm，3.40mm，3.30mm，3.20mm，3.10mm，3.00mm，2.90mm，2.80mm，2.70mm，2.60mm，2.50mm，2.40mm，2.30mm，2.20mm，2.10mm，2.00mm，1.90mm，1.80mm，1.70mm，1.60mm，1.50mm，1.40mm，1.30mm，1.20mm，1.10mm，1.00mm，0.90mm，0.80mm，0.70mm，0.60mm，0.50mm，0.40mm，0.30mm，0.20mm，0.10mm，0.09mm，0.08mm，0.07mm，0.06mm，或0.05mm；在一些实施例中，所述内孔直径为约3.810mm，3.429mm，2.997mm，2.692mm，2.388mm，2.159mm，1.803mm，1.600mm，1.372mm，1.194mm，1.067mm，0.838mm，0.686mm，0.603mm，0.514mm，0.413mm，0.152mm，0.337mm，0.311mm，0.260mm，0.127mm，0.210mm，0.184mm，0.159mm，0.133mm，0.108mm，或0.0826mm；在一些实施例中，所述内孔直径为约1.200mm至约0.400mm的范围内，包括端值；在一些实施例中，为约1.194mm，在一些实施例中，为约1.067；在一些实施例中，为约0.838mm；在一些实施例中，为约0.686mm；在一些实施例中，为约0.603mm；在一些实施例中，为约0.514mm。

在一些实施例中，所述外孔直径在约5.00mm至约0.15mm的范围内，包括端值；例如约5.00mm，4.90mm，4.80mm，4.70mm，4.60mm，4.50mm，4.40mm，4.30mm，4.20mm，4.10mm，4.00mm，3.90mm，3.80mm，3.70mm，3.60mm，3.50mm，3.40mm，3.30mm，3.20mm，3.10mm，3.00mm，2.90mm，2.80mm，2.70mm，2.60mm，2.50mm，2.40mm，2.30mm，2.20mm，2.10mm，2.00mm，1.90mm，1.80mm，1.70mm，1.60mm，1.50mm，1.40mm，1.30mm，1.20mm，1.10mm，1.00mm，0.90mm，0.80mm，0.70mm，0.60mm，0.50mm，0.40mm，0.30mm，0.20mm，0.10mm；在一些实施例中，所述内孔直径为约4.572mm，4.191mm，3.759mm，3.404mm，3.048mm，2.769mm，2.413mm，2.108mm，1.829mm，1.651mm，1.473mm，1.270mm，1.067mm，0.9081mm，0.8192mm，0.7176mm，0.6414mm，0.5652mm，0.5144mm，0.4636mm，0.4737mm，0.4128mm，0.3620mm，0.3366mm，0.3112mm，0.2604mm，0.2350mm，0.2096mm，或0.1842mm；在一些实施例中，所述外孔直径为约1.650mm至约0.750mm的范围内，包括端值；在一些实施例中，为约1.651；在一些实施例中，为约1.473；在一些实施例中，为约1.270mm；在一些实施例中，为约1.067mm；在一些实施例中，为约0.9081mm；在一些实施例中，为约0.8192。

在一些实施例中，所述孔壁厚度在约0.400mm至约0.025mm的范围内，包括端值；例如约0.400mm，0.375mm，0.350mm，0.325mm，0.300mm，0.0275mm，0.250mm，0.225mm，0.200mm，0.175mm，0.150mm，0.125mm，0.100mm，0.075，0.050mm，或0.025mm；在一些实施例中，所述孔壁厚度为约0.381mm，0.356mm，0.330mm，0.305mm，0.254mm，0.229mm，0.203mm，0.216mm，0.191mm，0.1524mm，0.2826mm，0.1524mm，0.1270mm，0.1016mm，0.1734mm，0.1016mm，0.0889mm，0.0762mm，0.0635mm，或0.0508mm；在一些实施例中，所述孔壁厚度为约0.250mm至约0.150mm的范围之内；在一些实施例中，为约0.229mm；在一些实施例中，为约0.216mm；在一些实施例中，为约0.203mm；在一些实施例中，为约0.191mm；在一些实施例中，为约0.1524mm。

在一些实施例中，所述喷嘴和/或套管具有锥形孔。在一些实施例中，所述喷嘴和/或套管锥度的大小孔部分之间基本均匀。在一些实施例中，所述喷嘴和/或套管逐渐变细至它们传送底端的小孔部分，例如本文所述的钝端。

在一些实施例中，所述喷嘴和/或套管的长度在约6英寸至约0.25英寸范围内；包括端点，例如，约6.0英寸，5.9英寸，5.8英寸，5.7英寸，5.6英寸，5.5英寸，5.4英寸，5.3英寸，5.2英寸，5.1英寸，5.0英寸，4.9英寸，4.8英寸，4.7英寸，4.6英寸，4.5英寸，4.4英寸，4.3英寸，4.2英寸，4.1英寸，4.0英寸，3.9英寸，3.8英寸，3.7英寸，3.6英寸，3.5英寸，3.4英寸，3.3英寸，3.2英寸，3.1英寸，3.0英寸，2.9英寸，2.8英寸，2.7英寸，2.6英寸，2.5英寸，2.4英寸，2.3英寸，2.2英寸，2.1英寸，2.0的英寸，1.9英寸，1.8英寸，1.7英寸，1.6英寸，1.5英寸，1.4英寸，1.3英寸，1.2英寸，1.1英寸，1.0英寸，0.9英寸，0.8英寸，0.7英寸，0.6英寸，0.5英寸，0.4英寸，0.3英寸，或0.2英寸；在一些实施例中，为约0.50英寸至约1.5英寸。

在一些实施例中，所述喷嘴和/或套管专门适用于在特定手术程序中应用。例如，喷嘴可基于使用的手术类型(如内镜，腹腔镜等)设计；其他考虑因素为大小、长度和灵活性(如适用的活动范围，如使得周围组织不被扰乱或损坏的使用能力)、几何形状和其他形式。另外，适当的，可加入或连接光学系统和/或光系统，从而允许从外科医生的视角视觉确认原本封闭的施用位置。在一些实施例中，提供了适合于连接到导管的喷嘴和/或套管。所述适配器的例子在图8中提供。

在一些实施例中，适合于连接到导管的所述喷嘴和/或套管具有第一连接端，用于连接到具有直径在约1毫米至约4毫米的范围内的导管。在一些实施例中，直径在大约1毫米至约2毫米的范围内。在某些实施例中，直径为约1.5mm。

在一些实施例中，适用于连接到导管的所述喷嘴和/或套管具有第二连接端，用于连接到存储和/或递送装置，例如，预填充注射器，其直径在约4毫米至约8毫米范围内。在一些实施例中，直径范围在约5毫米至约7毫米的范围内。在某些实施例中，直径为约5毫米。在一个具体的实施例中，直径为约5.21毫米。在某些实施例中，直径为约7毫米。在一个具体的实施例中，直径为约6.9毫米。

或者另外，所述喷嘴和/或套管可以根据从注射器施用所述组合物时的压力背景来设计。

在一些实施例中，所述喷嘴和/或套管可重复使用，例如，适于从第一储存和/或递送载体中去除(如从存储和/或传递载体中递送组合物之后)并连接到第二(和/或后续)储存和/或递送载体。在一些实施例中，所述喷嘴和/或套管是一次性使用的。

在一些实施例中，提供了包含本文所述的存储和/或传送系统的药物包装。合适的药物包装是无菌的，并且在外科手术中可以接受使用。合适的药物包装实例是泡罩包装、气泡包装或翻盖包装。药学上可接受的包装，举例而言，可以被用来包装并由各种材料制成，例如，环烯烃共聚物、聚三氟氯乙烯或者聚氯乙烯。图9中提供了一个药物包装的实例(如泡罩包装)包括存储和/或递送装置，其包含本文所述的肽组合物(如预填充注射器)以及喷嘴/套管。

在一些实施例中，提供了泡罩包装，其包含空腔或袋，提供了定制的，成型的位置，以接受包含本文所述肽组合物的储存和/或递送装置。另外地或任选地，在一些实施例中，提供了泡罩包装，其包含空腔或袋，提供了定制的，成型的位置，以接受本文所述的喷嘴或套管。另外地或任选地，在一些实施例中，提供了泡罩包装，其包含空腔或袋，提供了定做的，成型的位置，以接受本文所述的适配器。在各种不同的实施例中，独立的泡罩包装包含固定到空腔或袋的覆盖物(如特卫强纸)，以保持无菌条件。

在多种实施例中，所述药物包装，例如泡罩包装，是无菌的。灭菌(即本文所述的存储和/或递送装置的无菌处理)可以由本领域已知的和可接受的对医药产品和/或包装灭菌的方法实现。本文所述的药物包装的灭菌技术实例是加压蒸汽、热空气、电离辐射(如伽马和/或电子束)和气体(如环氧乙烷或甲醛)。

在一些实施例中，多个存储和/或递送装置可以在单一的药物包装中提供。例如，在预填充注射器中提供的的一个或多个单位剂量可以包装在多个泡罩包装中，或任选地，在合适于包装多个注射器的翻盖式容器中。在一些实施例中，在泡罩包装中提供包含单位剂量或多次剂量的预填充注射器。在一些实施例中，在翻盖式容器中提供多个预填充注射器，其可以在外科手术(即无菌)中被接受使用。如上所述，使用合适的灭菌技术以确保在各种外科手术中提供灭菌的药物产品。

实施例

以下实施例用于为本领域的技术人员提供如何制造和使用本发明的方法和组合物的实例，其并非旨在限制本发明的范围。已努力确保数字(如量，温度等)使用的准确性，但一些可以预期的实验偏差是本领域技术人员已知的。除非另外指出，否则，份数是重量份数，分子量是平均分子量，温度是摄氏度，压力为大气压或接近大气压。

实施例1 RADA-16解决方案

发明人已经确定，本文所述的肽组合物通过与在外科手术期间应用现有材料控制和/或阻止出血完全不同的机制阻断在外科手术中的出血。通常情况下，使用凝血因子。然而，通过在生理条件下的快速凝胶化，本文所述的肽组合物无需使用凝血因子即可封闭出血部位，并且可以在没有药理作用下止血。发明人已在对人类和非人类对象的各种手术程序中使用本文所述的肽组合物，并发现现在给定的出血部位处血管的表面部分，所述肽凝胶与血细胞交织，从而使得凝胶顶层的下方发生血液凝固。其他材料，如纤维蛋白胶，通过激活凝血系统而发挥作用，从而阻断从给定部位的出血。本文所述的肽组合物示例性属性包括人工合成肽的原始材料和不包括任何动物来源的注射用水。这即便没有消除也极大地减少了在外科手术程序中使用本文所述肽组合物而发生感染的风险。此外，因为本文所述的肽组合物以水溶液形式提供，其可以通过预填充注射器供给，并可直接被用于外科手术部位之上或之内。在应用前无需如通常使用的其它材料(例如，纤维蛋白胶)一样经特殊配制。此外，水溶液的大部分成分是水，其可以几乎无限制的方式重复使用，这一点不同于其它材料，特别是粘合剂基料。。

本实施例描述了一种特定的肽组合物，在本文中称其为在各种手术方法中使用的“组合物1”。组合物1是一种含有在水中的2％-2.5％RADA-16的生物吸收性水溶液。

通过以下步骤生产组合物1：使用固相合成制备由化学合成的氨基酸组成的肽，在水中溶解肽用于注射，用细菌过滤器(0.2毫米)过滤溶液，并将得到的滤液通过无菌的方式填充入注射器。这样，完成了制造，而无需使用任何动物来源的材料，消除了任何生物材料感染的风险。

组合物1是透明的无色液体，并在施用于手术部位后保留这种透明的特质，在施用于手术部位后肽溶液通过形成水凝胶而生成凝胶状态，其具有阻止外科手术程序实施期间出血的能力。这种透明的特质，使成组合物1相比其他材料，以其易用性和保持术野清晰的能力独特地适用于外科手术程序。组合物1可在预填充注射器中提供，因此与其它材料(例如，纤维蛋白胶)相比有独特性，其他材料需要用单独的液体配制并混合。使用组合物1没有这样的需要，因为所述组合物由肽制造，并且可以通过水洗完全去除。本发明人认识到在外科手术程序中施用组合物1的多种优点：几乎无限的施用频次、更快更有效地控制及阻断出血、由于其透明的属性从而保持手术视野及出血部位清晰可见、易于冲洗去除、减少外科手术中进行出血控制操作的时间、缩短完成外科手术程序的总时间、并且可通过总体上减少在手术期间的血液损失而提高患者康复率。

细胞培养实验已经证明，组合物1的主要组分肽(CH

化学名：乙酰-(精氨酰-丙氨酰-天冬氨酰-丙氨酰)

分子式：C

分子量：1712.8

不同于其他控制和/或阻止手术期间出血的措施，例如，氧化纤维素或通过凝血形成而阻止血流的基于淀粉的局部吸收制剂，组合物1作用的机制是通过pH的变化改变物理性质以密封出血点来实现的。

实施例2在非人类动物手术程序中施用组合物1

该实施例描述了某项基于经批准用于控制手术程序中出血的材料的有效性验证研究结果的动物研究。植入比格犬的人工血管移植物的渗出针孔出血模型被设计用来模拟从自体血管的吻合口部位的渗出针孔出血。

所有动物接受符合国家医学研究会编制的实验动物护理原则和由美国国家科学院出版社出版(1996年)的实验动物研究学会(ILAR)制定的护理和使用实验动物指南的人性化护理。

兔腹主动脉穿刺。对每只兔子实施剖腹手术以暴露约10cm腹主动脉。静脉内给药肝素钠(500IU)。通过使用注射针(23-26G)穿刺腹主动脉建立出血模型。证实出血后，用夹持阻止外周和中枢的血流并且立即使用注射器在伤口位置施用组合物1。在1-2分钟之后让血流恢复，目测穿刺部位的出血。将本研究中所用的兔腹主动脉固定在福尔马林中，并且组合物1-处理和未处理(对照)部位的血管横截面被制作成病理标本，然后在显微镜下观察。

结果表明，除了一只使用2％肽浓度的组合物1的动物外，观察到其他施用≥2％肽浓度的组合物1的动物出血均完全停止。在血管穿刺部位和其表面观察到无结构的嗜酸性胶凝化组合物1。此外，观察到凝胶化组合物1在组织表面形成物理性地封闭穿刺的涂层。

比格犬腹主动脉移植物替换。重量分别为13.1kg和11.4kg的雄性比格犬(n＝2)用于使用组合物1的主动脉移植物替换手术程序。在全身麻醉的情况下通过剖腹术露出腹主动脉。静脉输注肝素钠1000IU。确认活性凝血时间(ACT)已经超过200秒后，夹住腹主动脉，并实施端对端的移植物替换程序。观察到移植物吻合和针孔的渗出性出血(一种渗出型出血)。在针孔施用组合物1以评估功效和出血的停止。

结果表明，从吻合部位的渗出型出血停止，并且在施用大约2毫升2.5％的组合物1约1分钟后，该吻合口的渗出确认停止。此外，针孔处的渗出型流血也被止住。通过与在兔子(如上所述)中使用的相同尺寸的26-G注射针头穿刺人工血管移植物制备腹主动脉穿刺出血模型，观察到喷射状血液。外周和中枢的血流停止，施用约1毫升2.5％的组合物1。在约1分钟后让血流恢复。确认在伤口部位的完全止血。此程序在移植物的三个不同位置重复三次。术后观察三天。

小鼠静脉内给药。组合物1一旦与出血部位的血液接触即形成凝胶。通过应用在出血部位，一定量的凝胶化组合物1有可能进入血流。[客户注意：我们可以做什么：“不可否认不正确的静脉内给药有造成凝胶化组合物1进入血流的风险。为了评估这些风险，我们使用小鼠和兔模拟组合物1给药。”]在该实施例中，使用小鼠证明了组合物1的静脉内给药的安全性。

简言之，将凝胶化组合物1的悬浊液以被认为具有不良生物效应的浓度给药。结果表明，稀释达40倍时观察到小鼠对象死亡。虽然没有确定直接原因，但是怀疑是由于肺动脉栓塞造成死亡。没有对小鼠进行尸检。但是，下面的异常行为表明肺梗死：自发行为减少、蹲姿和呼吸加快。80倍稀释时虽然观察到异常(不活跃和呼吸急促)，但是没有观察到死亡。160倍稀释时没有观察到异常。

在类似的实验中，对豚鼠施用0.2mL的160倍稀释的组合物悬浊液。未在任何动物中观察到异常行为。

不希望受到理论的束缚，在以下假定条件下这些结果可以外推至人类：当假设条件为对象是体重60kg、具有4.6L总血量的成人时，利用在小鼠(体重约40克，总血量约3毫升)中观察到的数据，通过静脉内注射组合物1凝胶可能导致类似于在小鼠中观察到的死亡的预期量可能是大约770ml的4倍稀释至40倍稀释的或者是约19.3-193ml的组合物1。所述体积比手术程序中使用的要大得多。如本例所示，组合物1是一种在各种动物的手术模型中控制出血的安全有效的溶液。

如本例所示，组合物1的施用在上述示例性动物外科手术程序阻止出血中展示出功效。此外，从静脉给药实验中，通过注射器施用的5毫升组合物1的单剂量即使在错误给药的情况下直接进入血管也不太可能造成肺栓塞或其他不良事件导致死亡。

实施例3冠状动脉分流移植术(CABG)

本实施例描述了使用本文所述的肽组合物的冠状动脉分流移植术，特别是可以施用本文所述的肽组合物的手术方法步骤。所述示范性肽组合物是组合物1(如上所述)。

冠状动脉分流移植术，或CABG，从剥离胸廓内动脉或采集用作移植物的大隐静脉开始。将胸廓内动脉与远离堵塞的冠状动脉的心脏外部区域吻合。将采集的大隐静脉与冠状动脉底部和远离病变(堵塞)的冠状动脉的心脏外部区域吻合。

一般来说，在CABG手术中，因为历史成功率，胸廓内动脉移植物是第一选择。可选地，在需要多个移植物的事件中可以使用大隐静脉。在CABG手术的多个阶段可发生出血，例如，剥离胸廓内动脉或采集用作移植物的大隐静脉、由于肝素造成上述区域再出血、各种心脏动脉与移植物的吻合部位以及心脏连接部位与氧合器的套管(管)的吻合部位(图3)。

剥离或移植物采集部位的出血。施用标准手术器械或手术用电刀进行剥离或移植物采集。采集部位出血通常是使用手术用电刀造成的，并且接受此手术的患者在此步骤后被肝素化治疗以防止在准备连接氧合器时从凝结处出血。肝素化后，采集位置经常发生渗出型再出血，此时通常用手术用电刀制止这种再出血。这会需要额外的时间，延长了CABG程序并造成组织损伤。这延长了愈合程序，导致手术程序后恢复较慢。由于手术目标是分流术而不是采集移植物，外科医生希望最小化实施外科手术的总手术时间、最小化手术期间出血的步骤。现有控制出血的手术方法不能充分地并且不典型也不广泛地应用于在该程序期间控制出血。相反，使用手术用电刀燃烧组织以停止任何出血。

在一项CABG手术中，组合物1可被在手术期间多个步骤施用来控制出血，减少完成手术所需的总时间。组合物1可施用到采集位置以有效地防止出血。由于其使用方便，组合物1可在采集程序前和采集程序期间被施用。此外，它也可以在肝素化之前施用。通过防止术后出血和肝素化后再出血，外科医生可减少出血总量，缩短完成手术所需的总时间。另外，在麻醉所需时间中也确认上述时间的节省。

对需要进行这种手术的患者实施的CABG手术程序中，成功实施分流需要四个移植物。每个移植物的时间减少了5至20分钟，即将实施的总手术时间减少了20至80分钟。时间的减少是部分由于，去除或减少程序中对电手术刀的需要。此外，观察到感染风险降低。实施CABG程序的时间的减少，可以预期总住院治疗时间减少，如24小时时间段。在一些情况下，外科医生在手术程序中遇到难以处理的再出血，病人会需要额外的2或3天的住院治疗。

将肽组合物(例如组合物1)在剥离或移植物采集期间或之后的目标出血部位施用于大面积区域，并允许留在该区域不变。这使得该溶液在目标位置形成凝胶状态。不建议手动操作肽组合物，例如，通过手指摩擦，因为这会导致凝胶破坏。尽管由溶液变化成凝胶状态，肽组合物仍保持透明。这种独特的特性，可维持手术视野清晰，以及在该程序中改善和更好地控制多个部位的出血。使用含有在该程序中适用的溶液和专门喷嘴的预填充注射器有助于减少用于实施各个步骤的时间，以及作为一个整体的该程序。肽组合物可以在CABG程序结束时从该区域洗去。

在CABG手术中，

可以以与

冠状动脉和体循环后出血。剥离胸廓内动脉后，一端与堵塞冠状动脉的外末端吻合。要做到这一点，需要从心脏表面识别目标冠状动脉。然而，心脏被脂肪组织覆盖，外科医生需要深入脂肪组织才能发现冠状动脉。这可能会导致出血。如果出血点可以被识别，则可应用血管夹，如果不能识别，则通过纱布广泛限制出血，必须施压约一分钟以控制出血。在此期间手术程序必须停止。或者，本文所述肽组合物可事先施用到冠状动脉区域防止出血或者当发现在此区域内有出血时施用，因为它是透明的所施用的区域可通过外科器械进行操作。

吻合动脉出血。当大隐静脉与冠状动脉吻合时，通常会通过线和针或通过自动吻合装置实施，并且通常会发生出血。由于烧伤导致动脉吻合损坏，所以手术用电刀不能被用来控制这种类型的出血。如果本质上出血呈抛射状，则需要在合适的区域进行更多的缝合。如果需要的话施用纤维蛋白胶、

所述肽组合物容易与动脉吻合。其能够先施用于手指或纱布，接着被粘贴在吻合动脉的看不见的区域上。不像纤维蛋白胶，在这种情况下即时束缚是可能的，并且防止了施用后由于血压导致的再出血。这最小化了束缚时间(2-5分钟)，并增强控制出血的程序。

在心脏和氧合器套管/管连接部位的出血。在CABG手术中，有必要防止心脏跳动时，通过套管/管将氧合器与动脉和心脏连接，以便在患者身体其他部位循环血液。套管直接插入并缝线固定。有时能在循环期间在缝合部位发现出血或在套管去除后的去除部位上发现出血。因为纤维蛋白胶固化区域使得去除套管很困难，因此通常不施用纤维蛋白胶。此外，由于其片状特性，使得

组合物1在人类心血管外科手术中的临床研究。研究方案由东邦大学医学中心樱花医院和大森医院的伦理审查委员会批准。所有患者签署知情同意书。在本临床研究中，25名患者(22男，3女)的33个施用部位作为组合物1的施用靶点。患者在2010年1月和2011年4月之间满足特定标准并接受CABG、腹主动脉瘤血管外科手术(AAA)或闭塞性动脉硬化(ASO)。

使用下列排除标准：(1)有对肽类药物或蛋白制剂过敏的既往病史的个体，(2)具有除手术疾病外其他可能阻碍研究的严重并发症的个体，(3)无法终止可能影响在手术程序中组合物1的使用的药物，如血液凝集类药物(血液凝固促进剂，即凝血酶)和抗纤维蛋白溶解剂(如具有抗纤维蛋白溶解作用的药物；ζ氨基己酸，凝血酸，抑肽酶制剂等)的个体，(4)具有儿童分类B或C的个体，以及(5)其他研究人员认为不适合参加研究的个体。

所有程序在病人全身麻醉的情况下实施。CABG在无心肺分流术下进行。程序中以200IU/kg施用肝素钠，手术程序后施用硫酸鱼精蛋白以达到目标ACT200秒。使用织造涤纶移植物(J移植物，Japan Lifeline，东京，日本)实施人工血管移植物置换术治疗AAA。使用ePTFE环状Gore-Tex血管移植物(WL Gore&Associates；Flagstaff,AZ,USA)和隐静脉实施移植搭桥手术或自体静脉补片成形术治疗ASO。在手术程序期间施用5000IU肝素钠，但通常不在外科手术后施用硫酸鱼精蛋白。

在CABG程序中，设计用于施用组合物1的目标位置是血管对血管的吻合部位。对于外科手术程序治疗AAA和ASO，施用组合物1的目标位置包括移植物吻合部位和自体静脉补片成形术部位。施用的出血类型目标是：(1)通常施用纤维蛋白胶和胶原材料能止住的血液渗出，和(2)在通常使用其他方法，如结扎、钳制以及凝血治疗期间无效或无法实施的渗血。如果遇到大量血液喷出或血液涌出，实施其他典型的治疗方法，包括结扎、钳制或凝血。组合物1不在这些情况下施用。

使用纱布去除吻合口的血液后，在施用硫酸鱼精蛋白前，在每一个目标位置上均匀地轻轻涂抹组合物1，不要将凝胶化的组合物1破坏。具体地，冠状动脉吻合部位施用约1毫升的2.5％组合物1，主动脉吻合口部位施用约2mL，其他周围血管吻合部位施用约1毫升。

组合物1的主要被评估指标是术中大出血，其被确定如下：完全应答(CR)，在目标部位出血的完全抑制；部分应答(PR)，证实暂时性地完全抑制出血，但仅在因术中二次出血需要治疗而在施用部位重新施用组合物1后观察到永久性的止血施用；微应答(MR)，证实暂时性地止血，但仅在因施用部位在术中二次出血需要治疗而使用除组合物1以外的其他程序后观察到永久性的止血施用；无应答(NR)，目标部位出血没有减少以及没有实现止血。

记录术后出血的次要指标并确定如下：CR，手术后检查程序中未观察到术后出血；PR，从手术后检查推断施用组合物1部位的术后出血，不需要再次手术；以及NR，手术后检查观察到源于组合物1施用部位的术后出血，需要再次手术。

不良事件包括任何异常发现或记录的有关症状、严重程度、持续时间、治疗、程序和结果的不良反应，以及其与研究药物的相关性(以及用于确定任何关联性的依据)。

结果。由年龄在54-80岁范围内的25名患者(23男，2女)组成对象群体。在这些患者中，9例行CABG手术，4例行AAA手术，12例行ASO手术。在33个部位使用组合物1，特别是在胸廓内动脉-冠状动脉吻合区(n＝1)，大隐静脉-冠状动脉吻合区(n＝4)，升主动脉-隐静脉吻合区(n＝4)，移植物吻合区(n＝15)和自体静脉补片成形术(n＝9)。实施平均面积为3.03cm2(从0.25至10cm2)。施用的组合物1平均组成量为1.5毫升(从0.5至3毫升)。观察到的主要指标(术中出血)有效率为87.9％，次要指标(出血后操作后发生率；表4)为100％。对于肝素治疗，观察到的有效率为85.2％(23/27)，出血停止时间为153.6±38.7秒(平均值±S.E.)。对于鱼精蛋白治疗，有效率为100％(6/6)，出血停止时间为195.0±130.1秒(平均值±S.E.)。没有观察到与施用组合物1相关的不良事件(包括严重不良事件)。

表4

Stark等对上述临床研究中组合物1的有效性进行了评估(Stark J et al.1984,Ann Thorac Surg 38:411-413)。以前有报道渗出性出血的总止血率在23.1％-100％。如本例所示，组合物1表现为在该范围的顶端。另外，没有在这一数值中评估的是使用不包括动物来源产品或人血成分的非感染性材料的附加优势。因为组合物1是完全合成的，所以它提供了无感染风险的替代材料。

如本例所示，组合物1施用于25名患者的33个部位上，并且表现出的安全有效率为87.9％(29/33；表1)。所述组合物1在肝素处理和鱼精蛋白处理的个体中没有观察到效力的差异(数据未显示)。没有观察到术后出血或任何种类的其他不良事件。基于这些发现，组合物1提供了一种安全有用的，对在心血管外科手术期间的渗出性出血显示出很好的局部止血的替代材料。

实施例4.胸主动脉置换术

本实施例说明了使用本文所述肽组合物的将主动脉瘤从弓形区域到末梢区域进行全置换的手术程序，特别是能够施用本文所述肽组合物的手术方法步骤。所述示例性肽组合物是组合物1(如上所述)。

简单地说，手术程序包括五个步骤：(1)主动脉交叉钳闭和建立心肺旁路(包括脑保护回流)，(2)降主动脉(末梢侧)的吻合，(3)升主动脉(中央侧)的吻合，(4)左锁骨下动脉、左颈总动脉和无名动脉的吻合，以及(5)撤销心肺旁路。

主动脉堵塞与建立心肺机(包括脑保护回流)。实施正中胸骨切开术和心包切开术后，实施升主动脉和心脏摘除。然后施用肝素。右腋动脉、无名动脉、左颈动脉、左锁骨下动脉及降主动脉插管以便在心肺机和患者之间回流血液。然后，在每个血管封闭时开始心肺机血液的回流。通过注射心肌保护液停止心脏。

降主动脉吻合术(末梢侧)。用电手术刀切割降主动脉，并用3-0或4-0脯氨酸线将血管移植物与之吻合。由于在深部视野受到限制并且在开始回流后很难停止出血，因此需要吻合的确定性。

升主动脉吻合术(中央侧)。用电手术刀切割升主动脉，并用3-0或4-0脯氨酸线将血管移植物与之吻合。在血管移植物中插入通气管以便在再次开始血液回流前除去气泡。松开夹钳前在整个吻合区域施用纤维蛋白胶可以降低渗出性和大出血的风险，然而，这一程序可能导致纤维蛋白胶和吻合区域之间的出血。在这种情况下，由于存在增加出血的风险，要求再次施用纤维蛋白胶，而不是剥离纤维蛋白胶。在吻合区域和已施用过纤维蛋白胶的区域之间很难再次施用纤维蛋白胶。在这种情况下重复施用

可替代地，本文所述的肽组合物(如组合物1)可通过擦拭和/或注射施用在使用纤维蛋白胶未能阻止出血的区域及某些吻合部位。如组合物1应用之前夹持，允许组合物1在吻合部位融入浅层血管。施用合适体积的组合物1，并将其保持在位置上以便不由于重力掉落或者松开夹钳后被血压推离原位。松开夹钳期间，缓慢移走钳子，等待大约30到60秒以允许组合物1与血液凝胶化。因为组合物1无论在溶液中还是凝胶化后都是透明材料，所以可见血管下侧血流。如果组合物1因洗涤或因血压推离被去除，可以在保持夹钳的同时以重复的方式重新施用直到出血停止。一旦出血完全停止，去除夹钳。

无名动脉、左颈动脉和左锁骨下动脉的吻合术。用电手术刀切割无名动脉、左颈动脉、左锁骨下动脉，用5-0脯氨酸线将血管移植物与之吻合，然后施用鱼精蛋白。如上所述在此程序中可以施用组合物1。

从心肺机撤回(通过心跳重新开始循环)。用6-0脯氨酸线闭合连接患者和心肺机的管的插入部位。无名动脉、左颈动脉、左锁骨下动脉的血液循环重新打开，并且全身循环恢复。

实施例5.淋巴结清扫术

本实施例描述了使用本文所述的肽组合物的清扫术，特别是能够施用所述肽组合物的手术方法步骤。所述示例性肽组合物是组合物1(如上所述)。

已知肺门和纵隔淋巴结清扫术是肺癌的标准治疗，并要求对解剖部位中的淋巴结以及周围组织进行清扫。

左腹主动脉旁淋巴结清扫术。用电手术刀切开左主肺动脉位置的纵隔胸膜进入主动脉弓的顶部。用电手术刀、剪刀和夹钳及纱布球将纵隔胸膜与周围组织剥离。清扫主动脉裂孔顶部的淋巴结。在下侧，从腹中取出肺动脉时清扫组织周围的淋巴结。用爱丽丝钳包裹拉出整个淋巴结。接着，用电手术刀、剪刀和夹钳及纱布球将将周围的血管和结缔组织剥离。然后切开淋巴结，使用电手术刀摘除。在淋巴结附着在血管壁或侵入性结合进血管壁的情况下，难以遵循标准清扫程序。因此，在血已渗出和涌出的情况下，应在束缚5-15分钟和结扎缝线后，分离淋巴结。否则，通过夹持血管提取该淋巴结，这要求血管重建。在最坏的情况下，该外科手术程序应被转换为如肺的总摘除的情况。这些外科手术程序的转换也能让手术的时间延长，但也增加了术后出血的风险。因此，遵循标准程序清扫是理想的。

可以施用本文所述的肽组合物(如组合物1)用于预防剥离表面的出血。组合物1具有重力慢慢将其下拉的物理特异性，因此不仅可以在剥离表面施用组合物1，而且特别地能在整个淋巴结上施用。如果需要的话，也可以大量施用。此处不适合施用会固化的纤维蛋白胶。同样的，在清扫前预先覆盖整个剥离表面的

在没有事先处理出血而实施清扫的情况下，可以在施用组合物1后立即开始着手清扫。如果在该区域施用纤维蛋白胶，其很难分离，并可能在剥离时促进出血。

有可能即使经过一段足够的时间出血还没有停止但去除了

实施例6本文所述的肽组合物在骨科手术中的应用

以下实例描述了在股骨粗隆间髋部骨折修复手术中本文所述的肽组合物(如组合物1)的施用(图4)。骨折部位由金属钉板或能承受3至5倍重量的γ钉固定。最近几年，随着外科技术和金属固定装置的现代化，通过在骨折处引入螺钉和板(或三角钉)对骨折部位施加压缩力防止骨折部位在板平面上滑动。

在股骨粗隆间髋部骨折中使用γ钉并施用组合物1。首先，在骨折部位造成一个皮肤切口。造成一个深入阔筋膜、分裂展肌、达到目标股骨的切口。当切开过程中发生出血，通常情况下，实施纱布束缚。需要五到十分钟止血并且手术程序应该停滞。此外，使用高频波电设备通过额外凝血控制出血需要大量的手术时间频繁施用。另外，组合物1具有能够在广泛出血区域(其中可能包括多个出血点)施用因而更快控制出血的优势。此外，由于组合物1的透明性，在手术区域没有任何障碍或受损，因此该程序可以没有任何延迟正常继续。

切开肌肉露出股骨后，在适当的位置导入γ钉前，从大转子顶部将导丝引入股骨管道。然后，使用铰刀沿导丝制造一个直径合适的孔，以用于引入钉子。在程序的此刻，通常使用骨蜡控制股管道的任何出血。骨蜡是一种粘土状材料，使用之前需要捏合和/或升温。通常这可以通过外科医生的手指手动完成。可替代地，组合物1可被用来代替骨蜡。施用前的配制，例如针对骨蜡的配制，对于组合物1而言并不需要，而且组合物1可以实现更快的控制出血。具体而言，组合物1可通过预填充注射器施用，该注射器具有与骨头上的或取决于骨折类型或所做的骨修复的骨折部位上的孔相匹配的喷嘴。此外，组合物1由于其能保持手术视场清晰的透明特性和易于冲洗去除的特性，提供了不停止手术程序的额外优势。

虽然就其在给定骨头或骨折部位的施用而言，骨蜡和组合物1的施用类似，但是骨蜡趋于延缓骨性愈合，而组合物1促进骨性愈合，并且预计比骨蜡有更高的愈合效率。此外，骨蜡可引起炎症，而组合物1在某种程度上由于它的高生物相容性不会引起炎症。

将γ钉引入到经铰刀打开的股骨管道中。在此程序中从股骨管道发生出血时，使用骨蜡。可替代地，在此时施用组合物1并且不会招致手术程序的停止。另外，引入前在γ钉表面施用组合物1能实现控制出血。

在股骨头引入方头螺钉之前，使用专门的仪器确定股骨外侧的进入点。然后，在进入点制造一个通过阔筋膜、分裂展肌到达目标骨的皮肤切口。当发生出血时，通常在出血部位施用纱布束缚或凝血。另外，施用组合物1可更快实现控制出血和出血停止。这种施用适用可用于靶向施用的预填充注射器。这减少了完成手术程序的整体时间，并使患者更快康复。

考虑到骨折部位骨的大小和位置选择方头螺钉。然后确定用以接受方头螺钉的孔的合适的直径和长度，并且通过铰刀从股骨侧面向股骨头中心正下方制造容纳该方头螺钉的孔。接着，将方头螺钉插入该孔并固定钉子和方头螺钉。这导致转子部骨折和股骨芯之间固定。当扩骨孔后从方头螺钉的孔中发生出血时，通常手动将骨蜡置入孔中控制出血。可替代地，可以与骨蜡相同的方式放置或注射组合物1，这将提供更有效的骨性愈合。

为了固定股骨与引入的钉子，将螺钉垂直插入到钉子和股骨芯的孔中。在通过阔筋膜的入口点制造皮肤切口。纵切外展肌以暴露目标股骨，并且通过铰刀在股骨上制造孔后将螺钉插入钉子。在此程序中，如在皮肤、展肌和骨髓等引入钉子进入股管的程序中阻止出血一样，实施纱布束缚或凝血阻止出血。可替代地，组合物1可替换纱布束缚，并可以有针对性地被施用，如果需要的话，通过如具有特殊喷嘴控制流量的预填充注射器，施用在需要的位置。标准技术根据部位(如皮肤、肌肉和骨)分别使用控制出血的方法。相反，无论任何组织都可通过单一程序或方法施用组合物1，其可以消除复杂的程序，并减少手术所需的总时间。

通过闭合展肌、阔筋膜以及缝合皮肤结束手术。在此程序中，当从切口位置出血时，增加纱布束缚或若干缝合线。可替代地，所述程序中，在该部位可有效施用组合物1，通过注射器直接施用在切口位置，这样可以缩短手术时间，减少了所需的缝合线数量。由于组合物1的透明性，正在进行缝线的手术视场不受干扰。本应用不会给程序增加任何额外的时间并且能够适当加快手术部位闭合。

实施例7肝脏切除手术(肝切除术)

本实施例描述使用本文所述肽组合物的肝脏切除手术和，特别是能够施用本文所述肽组合物的外科手术方法的步骤。所述示例性肽组合物是组合物1(如上所述)。

肝切除术通常使用超声手术吸引器、超声波凝固切口装置和电手术刀。通过超声手术吸引器使得肝脏中的血液循环系统和条索状物暴露。胆管门静脉或厚静脉出血通常结扎止血，而薄于3-0线的条索状物的出血通过超声波凝固切口装置止血。也可通过对肝脏的血液循环系统重复夹持和松开来实施肝脏再灌注，以减少出血量。

由于有血管损伤的风险，因此仍然难以在邻近肝脏血管处(特别是在格利森氏囊周围)使用电手术刀。无法阻止逐步从电动手术刀烧灼部分渗出的出血。此外，当在已止血部分附近使用电手术刀时，可能由于剥开结痂而导致再出血发生。但是，可以在施用过肽组合物(如本文所述，如组合物1)的部位使用电手术刀。使用

当出血点不明确时通常用纱布施加压力阻滞出血。也可以施用

如果能清楚地识别出血点则可以在渗出处施用

本文所述的肽组合物可反复施用直至完全止血。在肝脏分离的情况下，最好是在一个出血部位施用超过1毫升的组合物1。在潮湿的表面，组合物1可能无法保持静止，如果手动操作(比如，手指摩擦)可能坍塌。组合物1可以被施用于比出血部位本身更大的区域。在肝脏分离期间可以忽略过剩的组合物1，因为在手术程序完成之后很容易将其洗去。

当施用组合物1后没有完全止血时，可在施用了组合物1的出血部位额外施用组合物1。使用上述方法可以有效阻止大面积区域的渗出性出血。在纤维蛋白胶的情况下，外科医生必须去除并重新施用纤维蛋白胶或在固化的纤维蛋白胶周围大量施用纤维蛋白。因为在周围组织施用纤维蛋白胶不能直接在出血点阻止出血，外科医生可避免过量施用。有时出血来自于纤维蛋白胶下。在手术程序中组合物1可被注入间隙中以更有效止血。纤维蛋白胶通常喷涂在截面以阻止轻度出血并在肝脏分离程序结束后预防术后出血。在该手术程序中组合物1适合于该步骤，并且能在肝脏分离结束后被施用在截面上。通常情况下，由于其剥离截面时产生的影响，

实施例8纯腹腔镜肝切除术(PLH)

本实施例描述了使用本文所述肽组合物的纯腹腔镜肝切除术，特别是能够施用本文所述肽组合物的外科手术方法的步骤。所述示例性肽组合物是组合物1(如上所述)。

当病理性病灶在肝脏表面上时，通常实施纯腹腔镜切除术(PLH)，但是，也可以在部分肝切除术和肝叶切除术的情况下实施。

简言之，将有相机的端口插入脐区，并且在确认肿瘤的位置后将2-3个端口插入肿瘤附近。然后，再将3-4端口用于外科手术程序。通常由超声波检查法确定肿瘤和血管系统的关系。这是由于这样的事实，即PLH程序中不直接接触肿瘤。接着，确定切除线并由电手术刀标记。为了在切除程序中努力减少出血，实施前期凝血(如微波消融凝血和射频消融)。

通过超声刀实施浅层切除。使用用于肝实质的撕裂和抽吸的超声外科吸引器暴露肝脏深区大血管。利用电手术刀烧灼在肝切除术程序中可以清楚识别的渗出型出血。使用结扎阻止任何其他出血。如果肝切除术程序中发生渗出性出血而没有任何明显可识别的出血点，由于以下原因手术将延长相当长的时间：与开放的剖腹手术程序相比腹腔镜手术程序的视场有限，使用超声刀凝结出血同时使用纱布去除血液以保证视野，当没有实施凝血时，在出血部位施用

肽组合物，例如组合物1，可以施用于背侧和广泛的出血部位，因为其可以在一次施用中通过管迅速分布。这是组合物1的一个独特的优点，因为其作为液体施用并且一旦接触组织或外科手术部位即变为凝胶状态。相反地，纤维蛋白胶不适合在切除中施用，因为它在截面有硬化效应，进一步使得外科医生难以实施切除。

应在肝切除术后在血管和肝实质部分的截面彻底查明出血点。通常，通过使用超声刀凝血和使用纤维蛋白胶擦拭来阻止渗出性出血。由于组织的碳化，凝血延迟了肝再生。纤维蛋白胶难以停留在截面上，并倾向于向下流动。另外，由于纤维蛋白胶在手术部位固化并存留，使得手术部位感染的风险增强。可替代地，施用组合物1降低了这种危险，至少由于，组合物1施用在出血位置后的凝胶状态使得它易于被洗去。

实施例9胸腔镜部分肺切除术

本实施例描述了使用本文所述肽组合物的肺体内手术外科手术程序，特别是能够施用本文所述肽组合物的外科手术方法的步骤。所述示例性肽组合物是组合物1(如上所述)。

在此程序的第一步骤中，外科医生首先识别切除部位并通过一个小切口将套管针和胸腔镜插入胸部肋间(图5)。然后外科医生通过胸腔镜检查将切除的区域，并确定自动缝合的方向。接着，通过小切口将自动缝合器插入胸部。通常，用镊子夹住距离被切除的区域约为1.5至2厘米的区域以指示的自动缝合器将要切除的线。需要小心夹住肺组织，因为如果夹得太紧或以大力拉扯很容易撕破撕裂肺组织。如果组织不是由自动缝合器直切的，通过缝合、吸收网或胶原片加固被切除的区域。对于缝合，通常使用2.0或更厚的缝合线。对于结扎，在体外进行捆扎并用胸腔推进器将捆扎带送入胸腔内。

如果在切除过程中肺组织或血管被无意切到或被缝合针损坏，首先使用纱布束缚止血。如果纱布束缚无法阻止出血，则在出血部位施用纤维蛋白胶。当施用液态纤维蛋白胶时，由于纤维蛋白胶不是无色或透明的。，其可能会阻碍手术区域。作为标准方法一般同时使用纤维蛋白胶和聚乙醇酸(PGA)片层来以控制和阻止出血，然而这些材料的使用需要额外的时间，并且对外科医生而言是繁重的。在这一程序下，首先将PGA片贴覆到出血部位，然后在在此区域施用纤维蛋白胶。接着，外科医生必须等待至少五分钟，并检查出血状态。

当手术程序中肺动脉被损坏，由于大量出血，手术区域几乎完全不可见。因此，可能难以辨认出血部位。除非出血部位是明确的，在此时偏向于不使用纤维蛋白胶，以避免由于施用纤维蛋白胶而导致的出血位置周围组织的固化。为了止血，外科医生通常试图大致确定出血部位并实施束缚或阻塞血管。如果所有尝试都不起作用，则开胸实施额外措施。

在外科手术程序的最后，插入胸管以检测出血状态。如果检测到出血，首先实施引流程序去除残留在胸腔内部的血液。然后，实施其他措施(如上所述)。如果在第一次止血尝试中施用纤维蛋白胶，则不能轻易施用第二次，因为组织可能被撕裂形成额外出血部位，或者在去除时可能造成原来出血部位的扩大。当胸腔镜下通过引流和上述其他措施出血没有被恢复，将开胸实施额外措施。

手术外科手术后，还进行密封测试以测出漏气。通过使用5至10厘米H

如果在胸腔镜下在切除程序中或由缝合针造成任何肺组织或血管的损坏，仅仅少量血液即可阻断手术视野。本文所述肽组合物(如组合物1)的施用，由于其透明的特质，止血而不阻断手术视野。，与纤维蛋白胶形成鲜明对比。因为组合物1以液体形式施用，不同于任何片型材料，其也可以直接注射，例如，通过注射器，很容易通过管子注射入出血部位并且很好的施用在肺表面。此外，施用组合物1不需要束缚也不妨碍外科手术程序。组合物1也可以在施用后留下，医生可以随时检查出血的状态。

如果在外科手术程序中肺动脉损坏，立即需要治疗出血。然而，不同于开胸手术，识别出血部位一般需要时间并且难以实施束缚。组合物1显示了在低压条件下对肺动脉产生足够的出血控制和出血停止。再一次的，因为组合物1是透明的，治疗后能够通过引流容易地去除多余的组合物1。能以任何量施用在出血部位周围的区域而在任何时间不妨碍手术区域，从而使外科医生能够迅速恢复手术程序。

如果在手术最后再次检测到出血，不同于纤维蛋白胶，组合物1可容易地从出血部位被去除并在相同位置施用任何次数。

与片型产品不同，对于任何漏气修复组合物1可以通过管施用在容易漏气的部位，并在肺表面很好的施用。相比支撑物，组合物1的施用可缩短外科手术时间。与支撑物不同，组合物1的施用不会由针损害肺组织。如果泄漏部位治疗后再次检测到漏气，组合物1可以很容易被去除并且迅速在相同位置多次施用。

实施例10内镜下黏膜切除术(EMR)

本实施例描述了使用本文所述肽组合物的胃肠系统内镜下黏膜切除术，特别是能够施用本文所述肽组合物的外科手术方法的步骤。所述示例性肽组合物是组合物1(如上所述)。

一般地，内镜下粘膜切除术(EMR)是低淋巴结转移概率的早期胃癌的一种治疗选择。对具有达25mm直径的高度或中度组织学分化型、浅表升高或凹陷但是没有溃疡或粘膜下侵入的确切信号的早期癌症患者实施EMR。通过“剥脱活检法”实施大多数EMR，已在别处对该相对简单的技术进行了描述。较近期的EMR程序已经发展为大多数情况下(如下所述)采用尖端绝缘刀(IT刀)。所述IT刀包括常规针形刀(KD-1L；奥林巴斯,日本)，其顶部有陶瓷球以尽量减少穿孔的风险。在EMR三个月和六个月后实施内镜随诊。

通常地，以如下步骤实施EMR程序：(a)过靛蓝胭脂红染料喷洒在身体下部的小弯部位确定浅表升高的早期胃癌，(b)在目标病灶的周围使用预切刀制造标记点以明确边缘，(c)在将盐水或透明质酸与肾上腺素(0.025毫克/毫升)注射到粘膜下层后，在点外使用常规针形刀制造一个初始切口，将IT刀插入该切口用来在病灶周围进行切割，(d)该标记的肿瘤被从周围正常黏膜处分离，(e)使用在单一碎片中结合切割和凝血电流的标准息肉切除术去除肿瘤，和(f)切除样本显示为具有清晰外缘的高分化腺癌(20×25mm)。

出血的控制在此程序中非常重要。如果出血很严重，将考虑输血或手术。当发生出血时，尤其是在IT刀切除和息肉切除期间，通常根据情况需求使用具有凝血剂、乙醇注射、内镜止血夹、凝血酶溶液喷洒的内镜治疗或这些治疗的组合进行治疗。然而，这些治疗具有缺点。对于凝血剂，因为该技术在出血部位采用环线进行息肉切除术和切除时，组织表面的损害可引起出血。在这种情况下，组织没有时间修复。对于乙醇注射，如果经由内镜通过使用注射器过多的注射入出血部位，能够导致控制出血的低有效率和溃疡面积扩大的风险。对于止血夹，需要外科医生有足够的时间和技能，然而花在手术程序中的时间越多越可能发生很多的看不见的错误，例如，撕裂肌肉壁。对于喷洒凝血酶溶液，可以看到其控制出血的效率很低，尤其是对于由于其不透明性而使得治疗区域模糊视野的暴露血管来说。这是由于上述凝血酶溶液经由内镜通过导管被喷洒在出血部位。

在IT刀制成病灶周围的初始切口后，首先通过导管施用肽组合物，例如，组合物1。这是为了预防息肉切除术的切除时的出血。该情况适用组合物1，因为它是溶液，并且在与出血部位接触时胶凝。该施用不妨碍手术时间，外科医生可以快速进行该步骤，部分因为组合物1的施用创建的清晰的治疗区域。另外，由于其一旦施用即变为凝胶状态的能力，组合物1可在病灶部位保留以防止出血。因此，切除之前施用组合物1可以在很大程度上降低出血的风险，并且可能在切除中淘汰凝血剂的使用。

如果在切除程序中由于例如比预期深的切口，而出现出血，冲洗后充分施用组合物1。这不仅是为了止血，也是为了保持手术视野清晰以便确定出血部位。组合物1的施用消除了对常规方法如乙醇注射、内镜止血夹或凝血酶溶液喷洒的需要。在外科手术程序中通过这些方法控制出血需要大量的操作时间在多点施用。相反地，在本文所述的在外科手术程序中的组合物1的施用提供了在包括多个出血部位的广泛区域内更好的出血控制。

但是，如果出血严重，如渗出、喷出、涌出或暴露血管，则通常使用止血夹或凝血剂。组合物1以有效的方式辅助这些方法，从而防止进一步出血和降低外科医生处理这种情形所花费的时间。

在切除肿瘤后施用组合物1以防止切除部位的操作后出血。该程序消除了止血夹的需求并且缩短操作时间为约10分钟。

如本例所示，组合物1的施用消除了对于上述在肿瘤切除之前、期间和之后用于控制出血的程序组合的需求，并可以缩短程序的总时间。据预测，肿瘤切除可以平均减少至少20分钟。此外，由于整个程序中出血和周围组织损伤的减少，相比于其他技术来说，患者的安全性增加。因此，预期患者康复更快。

实施例11结肠癌内镜子黏膜剥离术(EDS)

本实施例描述了使用本文所述的肽组合物的结肠癌内镜子黏膜剥离术，特别是能够施用本文所述肽组合物的外科手术方法的步骤。所述示例性肽组合物是组合物1(如上所述)。

通常，ESD施用于具有大于20毫米直径、使用EMR难以切除的早期癌症的患者。由一名外科医生和一名助理的团队除使用其他的手术器械外，使用结肠镜(PCF-Q260AI；奥林巴斯,东京,日本)实施程序。ESD的典型程序如下：

喷洒靛蓝胭脂红染料识别结肠的病灶边缘，随后通过粘膜下注射分离病灶。用10％的甘油和含有0.5％靛蓝胭脂红及0.1％肾上腺素的透明质酸的混合物作为注入流体。接着，根据外科医生的偏好使用器具，例如与电动外科装置连接的针形刀、尖端绝缘刀(KD-610L,611L；奥林巴斯,东京,日本)、或高频电刀(DK2618JN20；富士能,东京,日本)实施圆周切口，其。使用上述器具之一沿目标病灶的周围实施连续的粘膜下剖割。在手术程序中通过专门的钳子或的尖端绝缘刀控制出血。一旦ESD完成，还使用专门的钳子或尖端绝缘刀对剖割区域的可见血管实施凝血，以防止迟发性出血。尽管如此，通常不能以有效的方式来控制ESD后的出血。如果术后发生呕吐或出血，使用专门的钳子或尖端绝缘刀紧急通过内镜努力控制出血。通常情况下，术后出血较少见，但是，过度凝血所造成的组织坏死出血在外科手术程序中较常见。

可替代地，本文所述的肽组合物，如组合物1，首先在边缘切口形成后通过导管施用在目标病灶的周围。在这种情况下，组合物1倾倒或注射入(如通过注射器)切口周围的内部组织中。这是为了防止通常用尖端绝缘刀或高频电刀切除时遇到的出血。组合物1的这种施用由于它的透明特质建立了一个清晰的手术视野并且允许外科医生更快进入程序的下一步骤。此外，由于与组织和体液接触时导致的凝胶化状态，它可以保持在切口周围从而防止出血的发生。因此，切除前组合物1的施用可减少出血的风险。因此，这进一步减少了切除时为凝血使用专门的钳子的频率。

如果切除期间由于例如比预期更深的切口而发生出血，在冲洗后充分施用组合物1。这不仅阻止了出血，而且还保持手术视野清晰以便识别出血点。组合物1中的施用消除了使用专门的钳子或尖端绝缘刀的凝血治疗。通过这样的仪器在手术程序中止血需要大量的操作时间多点施用。相反，由于组合物1能够在包括多个出血点的广泛区域内施用，同时维持清晰的手术视野，从而使得外科医生能够更高效地完成外科手术程序，因此通过组合物1控制出血提供了一个更好更有效的控制出血的替代措施。

在出血严重，如渗出、喷出、涌出或暴露血管的情况下，通常使用专门的钳子或尖端绝缘刀进行凝血。当通过器具完成凝血时，可以在手术区域上施用组合物1，以防止进一步出血。不同于使用这些器具的治疗，组合物1不造成组织表面的任何损害，而专门的钳子或尖端绝缘刀倾向于导致组织坏死并使患者的康复复杂化。此外，过度的凝血引发严重的组织坏死，进而导致延时出血。组合物1在此程序中的优点如下：施用后即更快止血，从而将操作时间缩短至少约五至十分钟，由于其透明特性使得手术视野清晰，出血部位可视，施用对组织表面无损伤。

组合物1在ESD完成后立刻施用以防止剖割部位的手术后出血。此程序无需使用专门的钳子。可以进一步将手术程序中的这一部分的时间缩短至少约五至十分钟。如果手术后发生因为呕吐的出血或流血，则在病变部位充分施用组合物1。本应用消除了使用专门的钳子或尖端绝缘刀凝血的需要。这再次导致了操作时间缩短并使患者受益。

如本例所示，组合物1的施用可以在很大程度上减少使用仪器剖割期间和剖割后凝血发生的频率，并且手术程序将平均缩短至少约20分钟(这可能会基于每名患者表现的情况而发生变化)。另外，与凝血技术进行比较，观察到患者康复得更快，这是由于在手术程序中有较少的预计出血和没有组织坏死并且组合物在剖割组织表面对组织形成保护。

实施例12开放性肾部分切除术

本实施例描述了使用本文所述的肽组合物的体内肾脏外科手术程序，特别是能够施用本文所述肽组合物的外科手术方法的步骤。所述示例性肽组合物是组合物1(如上所述)。

下面的实施例描述了开放性肾部分切除术的步骤。简要地说，患者半侧卧位躺下并且制造皮肤切口(剖腹术)。接着剥离和扩大腹膜后，暴露侧锥筋膜并使用电手术刀切开。当发生渗血或大出血时，施用纱布束缚。必须在进一步处理之前确定肾动脉、肾静脉和泌尿道。

然后通过使用超声刀切开肾筋膜(肾脏的光滑囊膜)。由于肾筋膜包括无数的毛细血管，谨慎地实施切开，小渗出性出血一般作烧灼处理。纱布束缚也适用于任何大量出血。有时实施完全的被膜剥脱术以确定肿瘤的位置。也完全剥去腹膜和肾脏的前表面之间的结缔组织。当有后续手术的情况下，必须剥去融合筋膜，这最常引起渗出性出血并且需要通过烧灼阻止这种出血。这给手术程序增加了相当多的时间。使用超声波探针识别肿瘤的位置。接着，实施动脉夹持并且应在30分钟内松开。肾动脉和泌尿道周围的结缔组织被剥离。通常情况下，施用纱布束缚或

用冰将肾脏冷却约五分钟以避免缺血性再灌注损伤。有时，将甘露醇溶液施用到肾脏表面，并且用夹持钳切断肾动脉的血流。在一些情况下，当肾盏和肿瘤之间或肾窦与肿瘤之间的距离足够远(超过1厘米)时，不实施肾动脉夹持。然而，这可能会导致大量出血。使用凝切术将肿瘤位置外0.5～1厘米的正常肾组织通过超声刀或梅岑鲍姆剪剖割开。在剖割表面施用纱布束缚并且通过电手术刀、氩气刀、纤维蛋白胶或结扎阻止渗出出血或大出血。出血控制在所述程序的这个时刻很重要，所以通常用手指实施连续束缚。若肾盏被打开，实施结扎和Z-缝合以关闭肾盏。如果未发现重度出血，则使用缝合夹连续缝合或只进行肾实质缝合，而不是结扎。然后通过施用靛蓝胭脂红溶液检查漏尿。

在30分钟内通过松开夹持钳使血流再灌注。在这个时候确认出血停止。如经确认，则施用额外的烧灼、

由于肾筋膜包括众多毛细血管，因而很可能发生渗血(如上所述)。本文所述的肽组合物(如组合物1)，可提前或在发生出血之后自由施用于不希望被凝结或超声凝结的大血管。由于组合物1的透明特性，该施用保留了清晰的手术区域，并且是可清洗的。

已经报道了完整剥离肾外周组织对识别肿瘤的位置非常重要。组合物1的自由施用或保守施用能有效控制肾外出血，从而允许完全剥离。通过电动手术刀及用手施加张力剥离融合筋膜。此程序增加了渗出或重度出血的风险。可通过提前施用组合物1或根据需要在发生出血之后施用来实现出血的控制。由于组合物1的透明和可洗性质，上述施用不会影响下面的程序。组合物1的施用没有限制。在剥离肾外组织的步骤中，因为一般使用超声波探针，通常不施用纤维蛋白胶或其他出血控制措施。

组合物1可以施用于肾动脉结缔组织，不同于纤维蛋白胶，纤维蛋白胶在取出时可能会损坏动脉。

如果不实施肾动脉夹持，经常发生大量的渗出性出血。提前应用组合物1可以防止此类出血，并确保手术视野清晰。闭合腹腔之前可以通过用盐水洗涤去除过量的组合物1以确认出血的完全控制和中止。

30分钟的缺血时间的限制是阻碍肿瘤位置检测的主要原因，因为难以实现在30分钟内完整剥离结缔组织。由于组合物1的施用减少控制出血所花费的手术时间，并且避免了钳制动脉，为肾脏部分切除术期间提供更安全的手术环境。

通过预先施用组合物1控制出血，可选择更温和的剖割方法。然而，即使施用，超声刀的使用也不受限制。提前施用或立即在渗出出血部位施用组合物1能达到预防出血和视野清晰的目的。通过施用组合物1代替纱布束缚节省了手术时间。在许多情况下继续用指压止血，当不能实现充分止血时，可以使用纤维蛋白片和纤维蛋白胶。在上述程序中可用组合物1取代其他的方法，并且由于外科医生可转而进行其它手术程序，因此将显著节约手术时间。

在肾盏缝合后还有在其周围施用组合物1的机会。这有助于防止术后出血。由于组合物1是可清洗的，其不妨碍漏尿检查。组合物1并且也许只有组合物1可以防止微小的漏孔其使得结扎非必须，并且进一步减少进行外科手术的时间。

不超过30分钟的缺血时间是理想的。在暂时性止血中，纤维蛋白胶和

当将组合物1施用于剖割部位时，在仍然保持出血的情况下，可以重新灌注血流一段时间。血流下可以实施额外的出血控制措施。在此纤维蛋白胶的应用受到限制，因为它必须被剥离去除，而组合物1可以通过简单地洗涤去除。虽然也采用褥式缝合的方法，组合物1也可被取代。组合物1具有作为预防术后出血而无需在施用后洗涤的控制手段的潜力。与开放式肾部分切除术相关的术后并发术包括尿漏(0-9％)和术后出血(1-9％)并且对积极止血有很高的要求。

实施例13腹腔镜肾部分切除术

下述实施例描述了施用本文所述肽组合物的腹腔镜外科手术肾部分切除术，以及上述实施例12中所述步骤，，特别是能够施用本文所述肽组合物的外科手术方法的步骤。所述示例性肽组合物是组合物1(如上所述)。

简单地说，患者半侧卧躺下，并且制造用于套管针(trocar)的孔(至少四个)。因为需要切断血流，通常准备柔性端口用于夹持钳。接着，剥离并扩大腹膜后，暴露侧锥筋膜，使用电手术刀切开的同时控制任何出血。必须标识肾动脉、肾静脉和泌尿道的位置以便继续。

使用超声刀切开肾筋膜(肾脏的光滑囊膜)。因为肾筋膜包括众多毛细血管，谨慎地实施切开以免引发出血。有时实施完全的被膜剥脱术以识别肿瘤的位置。也完全剥离肾脏的腹膜和前表面之间的结缔组织。用超声波探针识别肿瘤的位置。

应在30分钟内松开动脉夹持。肾动脉和泌尿道周围的结缔组织被剥离。通常情况下，施用

使用凝切术将肿瘤位置以外的0.5～1厘米的正常肾组织通过超声刀剖割开。为了防止重度出血，实施剖割的同时控制任何出血。抬起肿瘤时，实施根群凝切术。如果发生出血，使用电动手术刀、纤维蛋白胶或结扎阻止出血。如果肾盏打开，实施结扎和Z-缝合以关闭肾盏，接着通过施用靛蓝胭脂红溶液确认无漏尿。

在30分钟内通过松开夹持钳使血流再灌注。确认无出血。如果确认出血，实施额外的程序，如烧灼、

由于肾筋膜包括众多毛细血管，因而很可能会发生渗血。施用本文所述肽组合物，可以控制出血并且剥离可以继续进行，而不会干扰手术区域。因为使用超声波探针识别肿瘤的位置，所以很难采用常规止血措施(如纤维蛋白胶)，因为在采用这类措施前需要先识别出血部位。本文所述的肽组合物可以用盐水洗涤冲走，因此它可以被用于在剥离过程中阻断出血。

例如，不同于纤维蛋白胶，组合物1可以施用于肾动脉的结缔组织。这是因为纤维蛋白胶在取出时会损伤动脉。

也可以施用组合物1防止出血，所以可以通过高效和不间断的方式来实施剥离。组合物1是一种透明材料，即使成为胶凝状态也是如此，因此，它不妨碍肿瘤位置的识别。预先施用组合物1可以预防渗出性出血并且为外科医生保持清晰的手术视野。另外，组合物1减小肾静脉夹持的要求。

提前或立即在渗出出血部位施用组合物1能达到止血和防止进一步出血的目的，所有这些都有助于手术视野清晰。组合物1取代了传统且复杂的出血控制措施(如

不超过30分钟的缺血时间是理想的。在暂时性止血中，纤维蛋白胶和

如果腹腔镜期间无法控制出血，外科医生必须改用开腹手术。然而，施用组合物1预防渗出性出血可显著降低这种风险。腹腔镜中纱布束缚难以止血，所以组合物1的施用特别适合这种手术程序。因腹腔镜之后肾切除部分出血的可能性(百分之三至百分之八)，对可靠的控制出血措施需求很高。

实施例14在多种手术程序中施用组合物1的临床研究

本实施例描述了使用本文所述肽组合物的多种体内手术外科手术程序，特别是，能够施用本文所述肽组合物的手术方法的步骤

特别地，多种外科手术和内镜手术程序中的出血(特别是渗出性出血)被设定为组合物1施用的目标部位。主要指标是术中出血，而次要指标是术后出血。该研究的其它目的包括安全性(不良事件发生率)的验证。为本研究建立的方案是开放标记、无对照、多中心协作的研究，其经公司机构审查委员会(IRB)批准，并转达给监管部门-药品和医疗器械管理局(PMDA)。一旦上述PMDA批准的方案经每个研究机构的IRB讨论并批准，则启动研究。

通过将起始肽、CH

在本研究中，采用直接施用和通过导管施用组合物1。在直接施用的情况下，将塑料的一次性喷嘴连接至注射器，并用其将组合物1施用到出血部位。在经导管施用的情况下，将导管连接至注射器尖端并施用到出血部位，通过监视器视频确认。

本临床试验选择的目标手术程序是内镜粘膜切除术(EMR)、内镜粘膜下剥离术(ESD)、血管造口术(在冠状动脉搭桥或其他血管手术中的血管-血管吻合术或血管-人工血管吻合术)以及肝脏切除术(肝叶切除术，肝段或部分肝切除术，包括腹腔镜下肝切除和腹腔镜辅助肝切除术)。组合物施用针对的出血是渗出出血，外科医生通过目视观察来确定出血是否属于该范围。目标患者为计划接受所述手术程序之一的住院患者或被安排住院的患者。在手术前给予患者(20岁-80岁年龄段)书面同意书的说明，并且要求其在手术之前提供书面同意书。

本研究设定的目标招募人数为每个机构约10名患者共计约100名患者。假设以100作为目标患者数，基于在动物中观察到的结果预期组合物1的有效率为85％，估计精度为7％，从而估计组合物1完全止血率范围的下限经计算为78％[(预期有效率*(1-预期止血效率)/(估计精度/1.96)

此项研究是一项在10个机构中进行(两个机构实施上消化道内镜手术外科手术，四个机构实施心血管外科手术以及四个机构实施胃肠手术)的开放标记、无对照的研究。该研究分为研究阶段和验证阶段；独立数据监察委员会(IDMC)在可行性研究阶段及验证阶段对前三例进行中期评审，研究一直持续到招募患者的数量达到目标值。

疗效的主要指标是施用组合物1后使得出血完全停止以及在适于施用组合物1的渗出性出血中不使用标准的方法如结扎或烧灼而在术中维持出血完全停止的发生情况。在本研究中当出血的程度超过渗出出血其首选治疗通常是结扎、烧灼或其它类似方案时，不将其作为本申请中材料施用的目标位置。

在内镜手术中，在外科医生目检判断出血是否为适于施用组合物1的渗出出血后，将组合物1施用于在标准EMR或ESD的受累部位的切除或剥离过程中发生的出血部位。同样地，在血管造口术中，当标准血管造口术后血管吻合部位再次开始流血时，在外科医生目检判断出血是否是适于施用组合物1的渗出性出血后，将组合物1施用于出血。发生处。同样的在肝脏切除术中，在外科医生目检判断标准肝脏切除术(包括开放式和腹腔镜外科手术)的术中或术后出现的出血是否是适于施用组合物1的渗出出血后，施用组合物1。外科医生目检判断组合物1的施用是否能在施用部位达到目标。如果有需要的话，使用可获取的视频或照片图像数据以帮助确认和评价疗效。

用于评价疗效的次要指标是在术后第1天以及术后5至7天(如果病人在5天内出院，则为出院前一天或出院当天)的继发性出血的发生情况；该指标确定了组合物1的施用在施用位置的术后保持。

在内镜手术中，在术后第1天直接通过内镜检查确认继发性出血的发生情况，并通过血液检测进行继发性出血的二次评估。在血管造口术中，在术后第1天对有排管的病人通过排管中分泌物颜色确认继发性出血的发生情况，对无排管的病人通过血液检测确认继发性出血的发生情况；血液检测也用于继发性出血的二次评估。在肝切除术中，在术后第1天通过排管中分泌物颜色确认继发性出血的发生情况，并且血液检测用于继发性出血的二次评估。

作为安全指标，在病人的观察期间内发生的所有问题和/或不良事件(包括实验室检测结果的异常变化)均用于评估组合物1和该研究的因果关系。根据需要及时治疗患者。

其他指标包括：手术时间(对施用部位的出血时间的分布、均值以及标准误差进行计算，使得能够测量从施用时间点到评价完全止血时的时间)和可操作性(对比现有材料和药物在使用容易程度上的差别，用数字表示如下：优秀＝3，好＝2，可接受＝1和不可接受＝0；计算评估结果的频率分布、均值和标准偏差)。

在安全性分析集(SAS)和全分析集(FAS)中分别进行安全性和疗效分析。SAS包含所有施用了组合物1的对象。疗效分析集为FAS，定义为排除违反入选标准的研究招募的对象。由于该研究中包括了多点施用组合物1的患者，因此将数据制成表格并对每个出血部位进行分析。在一些出血部位，根据本研究方案认为是不适合施用本申请所述组合物的；这些部位被排除在FAS之外，同时作为一个符合方案集(PPS)进行分析。对每个患者都进行术后继发性出血评价，一些接收可能影响继发性出血的术后治疗的患者也被排除在FAS之外但在PPS中进行了分析。对PPS的定义的有效性由IDMC确认。

本研究依照所有涉及人类对象的医学研究都必须遵循的“赫尔辛基世界医学协会宣言”(第18届WMA联合国大会大会起草，赫尔辛基，1964年；第55届联合国大会修订，东京，2004年10月；最新修改后，第59届联合国大会最新修改，韩国首尔，2008年10月)的伦理原则进行，并且符合药事法和医疗器械临床试验管理规范(GCP部级条例)。

通过疗效指标、安全性指标和上述其它指标分析结果。

疗效：主要指标(表5)。结果表明，组合物1在FAS中针对全部三个目标外科手术程序的综合止血有效率为82.5％(160/194部位)，并且在PPS中针对全部三个目标外科手术程序的综合有效率为88.8％(158/178部位)。

疗效：次要指标。结果表明，组合物1在FAS中针对全部三个目标外科手术程序在术后第1天和在术后5至7天的继发性出血综合止血有效率均为100.0％(89/89部位)。在PPS中针对全部三个目标外科手术程序在术后第1天的综合(止血)有效率为100.0％(78/78)，部位)，在术后5至7天的综合(止血)有效率为100.0％(79/79部位)。

安全性(表6)。在研究期间，没有在任何研究机构中观察到问题(例如产品故障)的发生。在研究过程中的观察阶段，SAS集合97例患者中有53例发生不良事件，其中不能排除3例不良事件与组合物1的因果关系。这3例不良事件中，2例是异常的实验室测试结果(肝功能相关检测值升高(AST，ALT，AI-P)和尿酸升高)，但它们的异常程度被认为没有临床显著性。余下的1例不良事件为人工血管变色，首席研究员认为没有临床显著性。在研究的观察阶段发生的不良事件主要与外科手术创口相关，症状被证实后，需要接受治疗的不良事件得到了适当的治疗。

操作时间与可操作性(图10)。在155个部位使用组合物1的与止血相关的操作时间平均值为约4分42秒(0:04:42)。在大多数部位上，在三分钟内完成完全止血。针对所有96个FAS病人组合物1的操作性平均值为2.4，并且在大多数情况下，操作性的评价比现有材料(表7)更好。

表5

表6

表7

本研究代表了组合物1在各种手术设置中的第一临床评价。在FAS中组合物1在手术部位的止血有效率为82.5％(160/194部位)。由于其中包括了一些根据研究方案判定为不适合的施用部位，上述止血有效率可能更高。在PPS分析中，这些施用部位被排除在外，所述止血有效率为88.8％(158/178部位)，这超过了研究的目标有效率85％。

如本例所示，组合物1的施用为防止在所研究的各种外科手术程序之后发生渗出出血提供了有效替代。虽然在肝脏切除术中发现有效率有较低的趋势，其结果仍然是临床有效的。在肝脏切除术中治疗的目标出血部位范围更宽，并且每个部位的出血点数量比在其他外科手术中要多，表明组合物1在肝切除术中的应用与在其他手术程序中的应用相比代表了更加困难的外科手术情况。在研究初期，某些肝脏切除术的病例中所呈现的部位无法应用适当的施用方法。因此，肝脏切除术可能需要额外的关于组合物1施用培训。

在安全性分析集的97例患者中，有53例在研究的观察阶段发生了不良事件。其中，3例不良事件不能排除与组合物1有因果关系。其中两个事件为异常实验室检查结果，并被认为没有临床显著性。剩下的不良事件是人工血管的变色，也被认为没有临床显著性。观察到4例严重不良事件，但都与组合物1的施用无相关性。总的说来，在研究期间没有观察到与组合物1相关的问题，这表明组合物是安全的，并且在多种外科手术程序中用于外科手术部位上或外科手术部位处时是有效的。

总之，这些数据表明，本发明提供的肽组合物可以有效地抑制在各种外科手术方法期间所遇到的出血，并且，特别是，通过提供更好的疗效和减少的操作时间给出了比现有方法更优越的方法。

至此已经描述了本发明的至少一个实施方式的若干方面，应理解，各种变化、变动和改进对本领域普通技术人员来说将是容易进行的。这样的改变、变动和改进应当被视为本公开内容的一部分，并且包含在本发明的精神和范围内。因此，上述描述和附图仅仅是举例性的说明，本发明通过下列权利要求被详述地描述。

在权利要求中使用序数术语诸如“第一”、“第二”、“第三”等来修饰声称元素本身并不意味着任何优先权、优先级或一个声称元素优于另一个的顺序或其中执行方法的时间顺序，而仅用作区分一个具有特定名称的声称元素与另一个具有相同名称(若非使用序数术语的话)以区分所述声称元素的标记。

如本文中的说明书和权利要求中所用，除非明确地相反地指出，否则冠词“一个/种”应理解为包括复数个指示物。除非指示相反或另外地根据上下文很明显，否则如果一个、超过一个或所有组成员存在于给定的产品或方法中，用于所述产品或方法，或以其它方式与其相关，则包括组的一个或多个成员之间的“或”的权利要求或描述被认为是满意的。本发明还包括实施方案，其中组的正好一个成员存在于给定的产品或方法中，用于所述产品或方法中，或以其它方式与所述产品或方法相关。本发明还包括实施方案，其中超过一个组成员或整个组成员存在于给定的产品或方法中，用于所述产品或方法中，或以其它方式与所述产品或方法相关。此外，应理解，本发明涵盖所有变化、组合和变换，其中除非另有说明或除非对于本领域普通技术人员来说显而易见的是可产生矛盾或不一致，否则取决于相同的基础权利要求(或者，如相关，任何其它权利要求)，来自所列权利要求的一项或多项的一个或多个限制、元素、条款、说明性术语等被引入另一个权利要求。当元素被表示为列表，(例如，在Markush组或类似格式中)时，应理解，本发明还公开了元素的每个亚组，并且任何元素可从该组中删除。应理解，在一般情况下，当本发明，或本发明的方面被称为包含特定元素、特征等时，本发明的某些实施方案或本发明的方面由这样的元素、特征等组成，或基本上由所述元素、特征等组成。为简单起见，这些实施方案在每一种情况下在用本文中未用这么多的词汇进行描述。还应理解，本发明的任何实施方案和方面可被明确地排除在权利要求中，无论具体排除是否在权利要求中被引述。本文中参考以描述本发明的背景和提供关于其实施的额外细节的出版物、网站及本文参考材料通过引用并入本文。

序 列 表

<110> 三维矩阵有限责任公司

<120> 使用纯化的两亲性多肽组合物的外科手术方法

<130> 2004837-0033

<150> 61/773,359

<151> 2013-03-06

<160> 54

<170> PatentIn 版本3.5

<210> 1

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 1

Arg Ala Asp Ala

1

<210> 2

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 2

Arg Ala Asp Ala Arg Ala Asp Ala

1 5

<210> 3

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 3

Arg Ala Asp Ala Arg Ala Asp Ala Arg Ala Asp Ala

1 5 10

<210> 4

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 4

Arg Ala Asp Ala Arg Ala Asp Ala Arg Ala Asp Ala Arg Ala Asp Ala

1 5 10 15

<210> 5

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 5

Arg Ala Asp Ala Arg Gly Asp Ala Arg Ala Asp Ala Arg Gly Asp Ala

1 5 10 15

<210> 6

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 6

Arg Ala Arg Ala Asp Ala Asp Ala Arg Ala Arg Ala Asp Ala Asp Ala

1 5 10 15

<210> 7

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 7

Arg Ala Arg Ala Asp Ala Asp Ala

1 5

<210> 8

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 8

Ala Glu Ala Lys Ala Glu Ala Lys Ala Glu Ala Lys Ala Glu Ala Lys

1 5 10 15

<210> 9

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 9

Ala Glu Ala Lys Ala Glu Ala Lys

1 5

<210> 10

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 10

Arg Ala Glu Ala Arg Ala Glu Ala Arg Ala Glu Ala Arg Ala Glu Ala

1 5 10 15

<210> 11

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 11

Arg Ala Glu Ala Arg Ala Glu Ala

1 5

<210> 12

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 12

Lys Ala Asp Ala Lys Ala Asp Ala Lys Ala Asp Ala Lys Ala Asp Ala

1 5 10 15

<210> 13

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 13

Lys Ala Asp Ala Lys Ala Asp Ala

1 5

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<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 14

Lys Leu Asp Leu Lys Leu Asp Leu Lys Leu Asp Leu

1 5 10

<210> 15

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 15

Ala Glu Ala Glu Ala His Ala His Ala Glu Ala Glu Ala His Ala His

1 5 10 15

<210> 16

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 16

Ala Glu Ala Glu Ala His Ala His

1 5

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<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 17

Phe Glu Phe Glu Phe Lys Phe Lys Phe Glu Phe Glu Phe Lys Phe Lys

1 5 10 15

<210> 18

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 18

Phe Glu Phe Lys Phe Glu Phe Lys

1 5

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<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 19

Phe Lys Phe Glu Phe Lys Phe Glu Phe Lys Phe Glu

1 5 10

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<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 20

Phe Lys Phe Glu Phe Lys Phe Glu

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<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 21

Phe Lys Phe Glu Phe Lys Phe Glu Phe Lys Phe Glu Phe Lys Phe Glu

1 5 10 15

<210> 22

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 22

Phe Lys Phe Gln Phe Lys Phe Gln Phe Lys Phe Gln

1 5 10

<210> 23

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 23

Ile Lys Ile Glu Ile Lys Ile Glu Ile Lys Ile Glu

1 5 10

<210> 24

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 24

Val Lys Val Glu Val Lys Val Glu Val Lys Val Glu

1 5 10

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<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 25

Ile Glu Ile Lys Ile Glu Ile Lys Ile

1 5

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<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 26

Ile Glu Ile Lys Ile Glu Ile Lys Ile Glu Ile Lys Ile

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<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 27

Ile Glu Ile Lys Ile Glu Ile Lys Ile Glu Ile Lys Ile Glu Ile Lys

1 5 10 15

Ile

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<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 28

Leu Glu Leu Glu Leu Lys Leu Lys Leu Glu Leu Glu Leu Lys Leu Lys

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 29

Leu Glu Leu Glu Leu Lys Leu Lys

1 5

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<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 30

Ala Glu Ala Glu Ala Lys Ala Lys Ala Glu Ala Glu Ala Lys Ala Lys

1 5 10 15

<210> 31

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 31

Ala Glu Ala Glu Ala Glu Ala Glu Ala Lys Ala Lys

1 5 10

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<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 32

Ala Glu Ala Glu Ala Lys Ala Lys

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<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 33

Lys Ala Lys Ala Lys Ala Lys Ala Glu Ala Glu Ala Glu Ala Glu Ala

1 5 10 15

<210> 34

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 34

Ala Glu Ala Glu Ala Glu Ala Glu Ala Lys Ala Lys Ala Lys Ala Lys

1 5 10 15

<210> 35

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 35

Arg Ala Arg Ala Arg Ala Arg Ala Asp Ala Asp Ala Asp Ala Asp Ala

1 5 10 15

<210> 36

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 36

Ala Asp Ala Asp Ala Asp Ala Asp Ala Arg Ala Arg Ala Arg Ala Arg

1 5 10 15

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<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 37

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<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 38

Ala Asp Ala Asp Ala Asp Ala Asp Ala Arg Ala Arg Ala Arg Ala Arg

1 5 10 15

Ala Asp Ala Asp Ala Asp Ala Asp Ala Arg Ala Arg Ala Arg Ala Arg

20 25 30

<210> 39

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 39

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1 5 10 15

<210> 40

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 40

His Glu His Glu His Lys His Lys

1 5

<210> 41

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 41

Val Glu Val Glu Val Glu Val Glu Val Glu Val Glu Val Glu Val Glu

1 5 10 15

Val Glu Val Glu

20

<210> 42

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 42

Arg Phe Arg Phe Arg Phe Arg Phe Arg Phe Arg Phe Arg Phe Arg Phe

1 5 10 15

Arg Phe Arg Phe

20

<210> 43

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 43

Arg Gly Asp Tyr Arg Tyr Asp Tyr Arg Tyr Asp Tyr Arg Gly Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 44

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 44

Arg Gly Asp Phe Arg Phe Asp Phe Arg Phe Asp Phe Arg Gly Asp Phe

1 5 10 15

<210> 45

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 45

Arg Gly Asp Trp Arg Trp Asp Trp Arg Trp Asp Trp Arg Gly Asp Trp

1 5 10 15

<210> 46

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 46

Arg Ala Asp Tyr Arg Tyr Glu Tyr Arg Tyr Glu Tyr Arg Ala Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 47

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 47

Arg Ala Asp Phe Arg Phe Asp Phe Arg Phe Asp Phe Arg Ala Asp Phe

1 5 10 15

<210> 48

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 48

Arg Ala Asp Trp Arg Trp Asp Trp Arg Trp Asp Trp Arg Ala Asp Trp

1 5 10 15

<210> 49

<211> 26

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 49

Arg Gly Asp Tyr Arg Tyr Asp Tyr Thr Phe Arg Glu Glu Glu Gly Leu

1 5 10 15

Gly Ser Arg Tyr Asp Tyr Arg Gly Asp Tyr

20 25

<210> 50

<211> 26

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 50

Arg Gly Asp Tyr Arg Tyr Asp Tyr Thr Phe Lys Glu Glu Glu Gly Leu

1 5 10 15

Gly Ser Arg Tyr Asp Tyr Arg Gly Asp Tyr

20 25

<210> 51

<211> 26

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 51

Arg Gly Asp Tyr Arg Tyr Asp Tyr Thr Ala Ser Glu Leu Glu Gly Arg

1 5 10 15

Gly Thr Arg Tyr Asp Tyr Arg Gly Asp Tyr

20 25

<210> 52

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 52

Arg Gly Asp Tyr Arg Tyr Asp Tyr Ala Pro Thr Ala Gln Glu Ala Gly

1 5 10 15

Glu Gly Pro Arg Tyr Asp Tyr Arg Gly Asp Tyr

20 25

<210> 53

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 53

Arg Gly Asp Tyr Arg Tyr Asp Tyr Pro Thr Ile Ser Gln Glu Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Pro Arg Tyr Asp Tyr Arg Gly Asp Tyr

20 25

<210> 54

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 54

Arg Gly Asp Tyr Arg Tyr Asp Tyr Pro Thr Val Ser Gln Glu Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Pro Arg Tyr Asp Tyr Arg Gly Asp Tyr

20 25