三步法提取纯化肺腺癌组织中HSPgp96多肽复合物

摘要

目的 建立从人肺癌组织中提取,为肺癌肿瘤免疫治疗的临床应用提供实验依据纯化热休克蛋白(HSP heat shock protein)gp96多肽复合物的方法;并通过体外实验对其在肺癌肿瘤免疫中的作用进行初步研究.方法 运用三步蛋白纯化法从肺腺癌(PAa)组织中提取、纯化HSP gp96 肽复合物,SDS PAGE、Western blot鉴定HSP gp96多肽复合物.提取的gp96-多肽复合物与树突状细胞共孵育培养3～10天后,第10天加入到由人外周血中分离的淋巴细胞,继续培养3～7天刺激细胞毒T淋巴细胞的产生;以gp96-多肽复合物致敏淋巴细胞作为阳性对照组;以未加入任何抗原成分的DC为阴性对照.收集被致敏淋巴细胞的上清,采用IFN-γ ELISA检测试剂盒分析淋巴细胞所释放的IFN-γ量作为CTL反应的指标.结果 应用该方法提取的蛋白质经SDS PAGE和Western blot特异性鉴定,证实是HSP gp96多肽复合物;蛋白产率为每克PAa肺癌组织可纯化HSP gp96肽复合物约50μg.肿瘤免疫学实验发现,以gp96-多肽复合物作为肿瘤抗原负载DC,以及单独以gp96-多肽复合物作为肿瘤抗原,分别致敏淋巴细胞后均可以诱导产生CTL反应;且gp96/DC为疫苗所释放的IFN-γ量高于单独以gp96为疫苗所释放的IFN-γ量,有显著性差异(P<0.01).结论 三步蛋白纯化法不仅操作简便、重复性高,而且提取的HSP gp96 肽复合物具有高获率、高纯度、高免疫效应等优点.gp96-多肽复合物能诱导出肿瘤特异性CTL反应,而将其负载DC后能激发起更强的CTL,显示出gp96-多肽复合物/DC疫苗抗肿瘤作用的广泛前景.