一种基于多步等温循环扩增的17β-雌二醇超灵敏检测方法和试剂盒

摘要

本发明属于雌激素检测领域，涉及一种基于多步等温循环扩增的17β‑雌二醇超灵敏检测方法和试剂盒。该方法包括以下步骤：S1.构建复合DNA修饰的磁珠；S2.合成环DNA；S3.多步等温循环扩增；将含有E2的待测溶液与复合DNA修饰的磁珠混合反应，反应后将溶液进行磁分离，取溶液的上清液，加入模板DNA、链置换扩增的限制性核酸内切酶、具有链置换活性的DNA聚合酶和dNTPs混合孵育并反应后，加入circ‑DNA、滚环扩增用酶、dNTPs、分子信标进行滚环扩增和分子信标的识别；然后采用荧光分光光度计测荧光值。本发明的方法无需复杂仪器检测，产物稳定性高、成本较低，该方法检测限可达到15.85fg/mL，达到超灵敏检测的要求。