一种血红蛋白保存液、应用、检测方法及粪便保存装置

摘要

本发明经配方筛选与反复实验，确定了极简、有效的血红蛋白保存液配方，确定了其在粪便血红蛋白保存中的应用及效果，血红蛋白保存液包括：50mM的磷酸保存液、2.5mM的分散剂、0.05mM的防腐剂，其中：所述的磷酸保存液：pH为7.0，包括5mM的硫代硫酸、连二亚硫酸、亚硫酸、硫氰酸、氧氰酸；所述的分散剂为吐温20；所述的防腐剂为proclin950，提供了一种检测血红蛋白保存液保存效果的方法以及两种类型的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种血红蛋白保存液、应用、检测方法及粪便保存装置。

背景技术

结直肠癌早期无明显症状，有大便隐血。因此，粪便中带有的微量血红蛋白成为大肠癌早期筛查的最适用的方法，如果能尽早发现早期患者并进行及时治疗，其生存率可以高达90％以上。

粪便中的血红蛋白，在自然条件下，极其容易降解，常温下通常一天之内就会降解完毕。实际工作中，往往很多样本在未检测前，就已经发生了血红蛋白的降解，由此造成″假阴性″样本，导致漏检现象的发生。发明人认为，如果粪便中的血红蛋白能够在常温下保存3天，且残存率在90％以上，即可满足从粪便采集到检测的整个流程所需的时间，可以保证粪便血红蛋白检测结果的准确性，极大的降低漏检的可能性。

发明内容

本发明经配方筛选与反复实验，确定了极简、有效的血红蛋白保存液配方，确定了其在粪便血红蛋白保存中的应用及效果。

根据本发明的第一个方面，提供了一种血红蛋白保存液，其特征在于，包括：

50mM的磷酸保存液、2.5mM的分散剂、0.05mM的防腐剂，其中：所述的磷酸保存液：pH为7.0，包括5mM的硫代硫酸、连二亚硫酸、亚硫酸、硫氰酸、氧氰酸；

所述的分散剂为吐温20；

所述的防腐剂为proclin950。

根据本发明的第二个方面，提供了一种粪便血红蛋白保存液保存效果检测方法，其特征在于，包括：

S1：分别向权利要求1所述的血红蛋白保存液以及纯化水中加入溶血血红蛋白或溶血血红蛋白与粪便的混合物，测定各实验液的血红蛋白浓度；

S2：在25℃下保存72h，测量保存后的血红蛋白浓度；

S3：计算血红蛋白的残存率。

根据本发明的第三个方面，提供了一种粪便保存装置，包括前述的血红蛋白保存液以及盛放所述保存液的保存装置，其中所述的保存装置为保存管或者保存盒。

根据本发明的第四个方面，提供了一种粪便保存装置，其特征在于，用到前述的血红蛋白保存液，直接将新鲜粪便按照15mg∶3ml的比例加入到所述的粪便保存装置中混匀，置于常温下保存。

进一步地，血红蛋白在常温下保存时间为长达3天并且血红蛋白的残存率在90％以上。

根据本发明的第五个方面，提供了一种血红蛋白保存液在粪便检测前预处理中的应用，用到的是前述的血红蛋白保存液。

进一步地，将新鲜粪便与前述的血红蛋白保存液按照15mg∶3ml的比例混合均匀后置于常温下保存。

进一步地，血红蛋白在常温下的保存时间长达3天并且血红蛋白的残存率在90％以上。

综上，本发明的有益效果如下：

(1)本发明配方极其简单，只在磷酸溶液中添加了少量的防腐剂及分散剂，使用少量溶液可以减少化学试剂的使用，更好的保护环境，这也是发明人在进行配方研发时考虑的重要指标；

(2)本发明保存液可以保存血红蛋白在常温下长达3天并且残存率保持在90％以上，由此检测可以很好的保证检测结果的准确性，降低漏检率，提高筛查的检出率；

(3)本发明在粪便检测预处理中的应用简单，配合装置使用更加方便，可以方便体检人群采样，甚至可以实现家庭采样再送检。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

本发明实施例中提供了一种血红蛋白保存液包括：50mM的磷酸保存液、2.5mM的分散剂、0.05mM的防腐剂。

其中：磷酸保存液的pH为7.0，包括5mM的硫代硫酸、连二亚硫酸、亚硫酸、硫氰酸、氧氰酸；分散剂为吐温20；防腐剂为proclin950。血红蛋白保存液包括三种成份，磷酸保存液、分散剂以及防腐剂，其中分散剂以及防腐剂经过优选，选择最适合的吐温20以及proclin950，关键的磷酸溶液包括能起到血红蛋白保存的硫代硫酸、连二亚硫酸、亚硫酸、硫氰酸、氧氰酸。

本发明实施例所选物质的使用量经过严格的配比，只要是选择同一类型的血红蛋白保存剂以及相近的配比，均能起到提高残存率的效果，只是残存率的高低有一定差别。下面为具体的实施例：

实施例1：

血红蛋白保存液包括50mM的pH7.0的磷酸保存液，其中含有5mM的硫代硫酸以及包括2.5mM的吐温20、0.05mM的proclin950。

实施例2：

血红蛋白保存液包括50mM的pH7.0的磷酸保存液，其中含有5mM的连二亚硫酸以及包括2.5mM的吐温20、0.05mM的proclin950。

实施例3：

血红蛋白保存液包括50mM的pH7.0的磷酸保存液，其中含有5mM的亚硫酸以及包括2.5mM的吐温20、0.05mM的proclin950。

实施例4：

血红蛋白保存液包括50mM的pH7.0的磷酸保存液，其中含有5mM的硫氰酸以及包括2.5mM的吐温20、0.05mM的proclin950。

实施例5：

血红蛋白保存液包括50mM的pH7.0的磷酸保存液，其中含有5mM的氧氰酸以及包括2.5mM的吐温20、0.05mM的proclin950。

为了检测各实施例的血红蛋白保存液对血红蛋白保存的效果，本发明还确定了一种粪便血红蛋白保存液保存效果检测方法，包括以下三个步骤：

S102：向血红蛋白保存液以及纯化水(对照组)中加入溶血血红蛋白或溶血血红蛋白与粪便的混合物，测定各组的血红蛋白浓度；

S104：在25℃下保存72h，测量保存后的血红蛋白浓度；

S106：计算血红蛋白的残存率。

根据上述方法测定了各实施例以及对照组的血红蛋白残存率，具体结果如下：

表1实施例1-5及对照组血红蛋白残存率统计表

由表1结果可知，实施例1-5均达到了很好的保存血红蛋白的效果，残存率均在90％以上，另外实施例1中含有硫代硫酸的溶液其保存效果最佳，残存率高达95.4％。

对于血红蛋白保存液的应用，本发明提供了两个实施例，具体如下：

实施例6：

粪便保存装置，包括实施例1-5任意一配方的血红蛋白保存液以及盛放保存液的保存装置，保存装置可以是粪便采集管、粪便保存管或者保存盒，保存装置的作用是为了盛放保存液以及粪便。使用时，直接收集或者取新鲜粪便按照15mg∶3ml的比例加入到粪便保存装置中混匀，至于常温下保存，保存效果与表1的结论一致，可以将粪便中的血红蛋白保存3天且残存率在90％以上。

需要说明的是如果是常规保存装置会设置有刻度，使用时按照刻度指示收集即可，稍有偏差不会影响其保存效果，这里的15mg∶3ml是为了实验室实验的确定性设置的指标，具体实际操作过程参照保存装置的刻度说明直接采样即可，有条件的也可以严格按照比例准备。

实施例7：

实施例1-5的血红蛋白保存液除可以用在粪便保存装置中外，还可以直接作为粪便检测前预处理试剂使用，使用时将新鲜粪便与血红蛋白保存液按照15mg∶3ml的比例混合均匀后置于常温下保存，其实验结果与表1的结论一致，可以将血红蛋白在常温下的保存时间长达3天并且血红蛋白的残存率在90％以上。

此应用场景可以应用在待测试样较多，来不及全部处理完毕的情况，此时可以先用血红蛋白保存液对粪便进行预处理，再在3天内处理完毕即可，虽然粪便与保存液的比例在一定偏差内都可以达到效果，但是仍然建议实验室中的操作严格按照15mg∶3ml的比例进行处理。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。