一种提高产后奶牛抗病力的中药制剂

摘要

本发明公开了一种提高产后奶牛抗病力的中药制剂，属于奶牛疾病预防领域。本发明以中兽医“治未病”为根本原则，首次研制了能有效预防奶牛产后疾病发生的绿色兽药制剂。本发明提供的中药制剂包括如下组分：党参95‑105份，黄芪75‑85份，当归55‑65份，川芎35‑45份，银花45‑55份，连翘45‑55份，益母草95‑105份，其中优选方案为党参100份，黄芪80份，当归60份，川芎40份，银花50份，连翘50份，益母草100份。本发明提供的中药制剂可在奶牛产后12小时内开始灌服所述中药煎剂，每天1剂，连续三天。该中药制剂可显著降低奶牛产后疾病发病率，提高奶牛产奶性能，提高奶牛养殖的经济效益。

说明书

技术领域

本发明属于奶牛疾病预防领域，尤其涉及一种提高产后奶牛抗病力的中药制剂。

背景技术

近十年来，我国奶牛业发展迅速，已成为畜牧业增产、养殖户增收的一个新的经济增长点，并将继续保持良好势头。奶牛产后身体虚弱，加之泌乳活动加强，营养代谢处于负平衡，抵抗力减弱，所以易发生多种疾病，如胎衣不下、子宫炎、子宫复旧不全、消化不良、缺乳、恶露不尽甚至不孕症等疾病。如奶牛胎衣不下的发病率10～25％，有的高达30％；奶牛子宫内膜炎占奶牛病的20～30％，占不孕牛的60～95％；临床型乳房炎占奶牛总发病的21％～23％，其淘汰占奶牛总淘汰率的9％～10％，因其造成奶量明显下降，甚至乳区化脓、坏疽，失去泌乳能力，经济损失相当严重。隐性乳房炎流行面广，为临床型乳房炎的15～40倍，引起奶产量降低4％～10％，影响牛奶质量，并易转变为临床型乳房炎，造成更为严重的经济损失。在美国每年有4％～5％的奶牛患临床酮病，甚至个别牧场是这个数字的3～4倍，亚临床酮病的更高，加拿大研究报道，亚临床酮病的发病率高达59％，在我国，奶牛酮病发病率呈逐年上升趋势，此外，奶牛产后前胃迟缓、子宫迟缓、不孕症等疾病也有很高的发病率。奶牛产后疾病的发生，给奶牛业生产带来了巨大的经济损失。因此，如何有效防止奶牛产后疾病成为广大畜牧兽医工作者急需解决的重要课题。

近年来，国内外学者对奶牛产后疾病防治进行了大量研究，但大多局限于对奶牛产后疾病的治疗研究，而对于奶牛产后疾病的预防则比较少，且主要集中在改善饲养管理，添加营养饲料添加剂等方面。由于各地饲养管理条件、饲养者的技术水平各不相同，使这些措施难以准确实施，从而使目前奶牛生产实践中，奶牛产后疾病仍然发病率很高，严重影响着奶牛业的健康发展，急需研究高效、安全、使用方便的药物制剂来预防奶牛产后疾病，提高奶牛业的经济效益。

中兽医是我国兽医学的瑰宝，它以合理配伍、调制的天然药物防治疾病，具有毒副作用小、不易产生耐药性、药残率低等优点，是世界将来药物防治动物疾病，生产绿色动物产品的重要方向，而许多中草药用来治疗奶牛产后疾病，取得了显著疗效。如管学文用“大地产康”(党参、红花、柴胡、白术、当归、川芎、黄芪、益母草等)治疗恶露滞留与胎衣不下疗效显著。姜国均等用“胎衣顺畅Ⅱ”(当归、川芎、益母草、莪术、甘草等)治疗奶牛胎衣不下，取得显著效果，且具有显著降低NO含量、清除氧自由基和治疗胎衣不下的作用。传卫军用归芪益母汤加味治疗奶牛产后瘫痪23例，全部治愈，有效率100％。李志刚行气逐瘀散和清宫液结合治疗奶牛子宫内膜炎效果显著。但是，如何根据奶牛生理特点和中兽医理论研制出能有效预防奶牛产后疾病，降低奶牛产后病的发病率，提高奶牛产奶性能的高效、安全、使用方便的兽药制剂，成为急需解决的问题。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种提高产后奶牛抗病力的中药制剂。

为达上述目的，本发明采用如下的技术方案：

一种提高产后奶牛抗病力的中药制剂，该中药制剂包括如下组分：党参95-105份，黄芪75-85份，当归55-65份，川芎35-45份，银花45-55份，连翘45-55份，益母草95-105份。

进一步的，所述中药制剂包括如下组分：党参100份，黄芪80份，当归60份，川芎40份，银花50份，连翘50份，益母草100份。

进一步的，所述中药制剂的制备方法为取所述配方量的原料混合加水浸泡1h，水煎2次，合并滤汁，浓缩至每毫升含生药0.3-0.7g的水煎剂。

更进一步的，所述中药制剂的制备方法为取所述配方量的原料混合加水浸泡1h，水煎2次，合并滤汁，浓缩至每毫升含生药0.5g的水煎剂。

本发明还提供了所述中药制剂在制备预防奶牛疾病药物中的应用，在奶牛产后12小时内开始灌服所述中药煎剂，每天1剂，连续三天。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1.本发明以中兽医“治未病”为根本原则，首次研制了能有效预防奶牛产后疾病发生，提高奶牛产奶性能的绿色兽药制剂。

2.本发明提供的中药制剂可显著降低奶牛疾病治疗费用，提高经济效益。

附图说明

图1为实施例1中不同中药对奶牛产后发病率的影响图。

图2为实施例2中试验组和对照组产奶量的对比图。

图3为实施例2中参芪益母汤对奶牛产后SOD活力影响图。

图4为实施例2中参芪益母汤对奶牛GSH-PX活力影响图。

图5为实施例2中参芪益母汤对奶牛产后T-AOC影响图。

图6为实施例2中参芪益母汤对奶牛产后MDA含量影响图。

图7为实施例2中参芪益母汤对奶牛血粘度影响图。

图8为实施例2中参芪益母汤对奶牛红细胞积压影响图。

图9为实施例2中参芪益母汤对奶牛红细胞聚集指数影响图。

图10为实施例2中参芪益母汤对奶牛纤维蛋白原含量影响图。

图11为实施例2中参芪益母汤对奶牛中性白细胞吞噬率影响图。

图12为实施例2中参芪益母汤对奶牛产后ANAE

图13为实施例2中参芪益母汤对奶牛淋巴细胞转化率影响图。

图14为实施例2中参芪益母汤对奶牛淋巴细胞亚群影响图。

图15为实施例2中参芪益母汤对奶牛CD4

图16为实施例2中参芪益母汤对奶牛淋巴细胞凋亡影响图。

图17为实施例2中参芪益母汤对奶牛IgG含量含量影响图。

具体实施方式

对比例1

本发明以益母生化汤作为对比例，该益母生化汤包括以下组分：当归120g，川芎60g，桃仁60，炮姜30，炙甘草30，益母草100克。以上各组分混合后加水浸泡1h，水煎2次，合并滤汁，浓缩至每毫升含生药0.5g的水煎剂。

实施例1

本发明中提高产后奶牛抗病力的中药制剂参芪益母汤包括以下组分：党参100g，黄芪80g，当归60g，川芎40g，银花50g，连翘50g，益母草100g。以上各组分混合后加水浸泡1h，水煎2次，合并滤汁，浓缩至每毫升含生药0.5g的水煎剂。

选择产乳量、年龄、体重相近、正常分娩、临床表现健康的2～4胎中国黑白花奶牛400头，随机分为试验1组(200头)和试验2组(200头)，试验1组在奶牛产后第1天起灌服参芪益母汤，每天1剂，连续三天；试验2组在奶牛产后第1天起灌服对比例1中的益母生化汤，每天1剂，连续三天，其他饲养管理均相同。

试验前调查统计奶牛疾病总发病率(发病母牛头数占被调查母牛头数的百分比)作为对照，试验后，试验1组和试验2组奶牛均从产后第1天至60天，观察记录奶牛总发病率(发病母牛头数占被试验母牛头数的百分比)。总发病率是指不管疾病种类，所有发病奶牛均计算在内的总发病母牛头数占被试验母牛头数的百分比。

试验前，奶牛产后疾病总发病率为24.5％(49头/200头)，试验后，试验1组、2组奶牛总发病率分别为8％(4头/200头)、18％(9头/200头)，分别较试验前下降16.5％和6.5％，差异极显著(p<0.01或p<0.05)；试验1组较试验2组发病率下降10％，异极显著(p<0.01)，结果如图1所示，其中和试验前比较，*表示(p<0.05)，**表示(p<0.01)；和试验2组比较，B表示(p<0.01)。

实施例2

定州市奶牛场选择产乳量、年龄、体重相近、正常分娩、临床表现健康的2～4胎中国黑白花奶牛200头(2胎110头，3胎104头，4胎86头)，随机分为试验组和对照组，每组100头。各奶牛场均以青贮玉米秸和精料(玉米、麸皮、棉籽饼、豆饼等)进行饲养。对照组按常规饲养方法饲养，试验组产后12小时内开始灌服实施例1中的中药煎剂参芪益母汤，每天1剂，连续三天，其他饲养管理同对照组。

1、奶牛产后疾病发病率及疾病防治费用

自产后第一天起，记录各组奶牛产后30天内胎衣不下、子宫炎、乳房炎、产后瘫痪、呼吸道感染、真胃变位，前胃迟缓等疾病的发病情况、恢复情况，并记录各组奶牛的疾病防治费用。胎衣不下、子宫炎、临床型乳房炎、呼吸道感染、产后瘫痪、真胃变位，前胃迟缓等疾病诊断以临床诊断为主，诊断标准按肖定汉著《奶牛病学》相关疾病诊断标准进行，隐性乳房炎诊断在30天采集乳样用CMT法进行测定。因疾病淘汰或因病死亡的奶牛的经济损失计入各组疾病防治费用。统计结果如表1所示。

表1参芪益母汤对奶牛产后发病率的影响(％)

注：和对照组比较，*表示(p<0.05)，**表示(p<0.01)。

从表1可以看出：试验组奶牛总发病率较对照组下降24％，差异极显著(p<0.01)，试验组胎衣不下、呼吸道感染、子宫炎、乳房炎等疾病均较对照组显著下降(p<0.01或p<0.05)。试验组奶牛平均疾病防治费用为63.52±20.05元(含试验用药费20.4元)，较对照组(194.58±29.67元)减少131.06元，经济效益十分显著。

1、奶牛产奶量

试验组和对照组的产奶量统计结果如图2所示。由图2可以看出，试验组奶牛日平均产奶量(24.37kg)较对照组(23.06kg)提高1.31kg，提高5.63％，差异显著(p<0.05)。

2、抗氧化机能测定

生理状态下，细胞在代谢过程中可产生少量氧自由基(Oxygen Free Radicals，OFR)，但同时细胞内也存在着抗氧化物质，可及时清除OFR。在正常情况下，机体内自由基的产生、利用和清除三者处于动态平衡，一旦氧自由基产生过多，或机体清除OFR能力减弱，则引起体内氧自由基积聚，过剩的OFR通过引发脂质过氧化、蛋白质、核酸等生物大分子物质损伤以及其它方式造成组织细胞损伤，从而促进许多疾病的发生与发展(孙存普等，1999)。氧自由基的清除主要依靠体内SOD，GSH-Px等各类抗氧化酶，细胞脂质过氧化反应主要产物是MDA。因此检测血液或组织中SOD、GSH-Px的活性和脂质过氧化产物MDA，是研究机体抗氧化机能的有效方法。

试验组和对照组各随机取10头牛，分别于产后第1、5、15天无菌静脉采血5ml，高速离心取血清，用721分光光度计测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—PX)活性、总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量，测定方法按试剂盒说明书进行测定。测定结果如表2、图3-图6所示。

表2参芪益母汤对奶牛产后抗氧化机能的影响

由表2以及图3-图6可知，试验组奶牛SOD活力在产后第5天、第15天分别较对照组提高10.42％(p<0.01)和9.10％(p<0.05)；GSH—PX活力在产后第5天、第15天分别较对照组提高10.25％(p<0.01)和7.88％(p<0.05)；T-AOC在产后第5天、第15天分别较对照组提高18.12％(p<0.01)和17.11(p<0.01)；MDA在产后第5天、第15天分别较对照组降低15.14％(p<0.01)和10.99(p<0.01)。

3、血液流变学测定

试验组和对照组各随机取10头牛，分别于产后第1、5、15天无菌静脉采血5ml(肝素抗凝)，用FASCO-3010全自动血流变快测仪全血粘度、血浆粘度、红细胞压积、全血还原粘度、红细胞聚集指数、血浆纤维蛋白原含量。测定结果如表3、表4及图7-图10所示。

表3参芪益母汤对奶牛产后血液全血粘度、血浆粘度的影响(mPa.s)

表4参芪益母汤对血液红细胞压积、红细胞聚集指数、纤维蛋白原含量的影响

由表3、表4及图7-图10可知，试验组奶牛在产后第5天、第15天高切(200s-1)、中切(30s-1)、低切(3s-1)全血粘度较对照组均显著降低(p<0.05)，血浆粘度差异不显著(p>0.05)；红细胞压积、红细胞聚集指数、纤维蛋白原含量均显著降低(p<0.05)，改善奶牛血液流变性。

5、奶牛免疫机能测定

试验组和对照组各随机取10头牛，分别于产后第1、5、15天无菌静脉采血10ml，加肝素抗凝，分离淋巴细胞，测定ANAE

(1)中性白细胞吞噬活性测定

中性白细胞是奶牛体内主要的吞噬细胞之一，它在识别、吞噬和消化入侵病原上起着重要作用。

参照张庆茹等(2004)葡萄球菌吞噬法测定中性白细胞吞噬活性。

取分离液6ml于试管中，再沿管壁缓慢加入血液3ml抗凝血，离心使细胞分层，取粒细胞层血液0.5ml，加入葡萄球菌液0.1ml，摇匀，37℃孵育40min，其中每隔10min振荡1次。然后，取上清夜推片，姬姆萨染色，油镜下计数100个中性白细胞，计算中性白细胞吞噬率。

其中，吞噬率＝(吞噬有葡萄球菌的中性白细胞数/100个中性白细胞)*100％。其检测结果如表5和图11所示。

表5参芪益母汤对奶牛中性白细胞吞噬活性的影响(％)

由表5和图11可知，试验组奶牛外周血中性白细胞吞噬活性在产后第5天、第15天分别较对照组升高10.40％(p<0.05)和9.04％(p<0.05)。

(2)ANAE

机体细胞免疫功能的高低与T淋巴细胞的数量和活性有密切关系。α-酸萘酯酶法是测定外周血中T淋巴细胞百分率的一种直观、有效的方法。ANAE是溶酶体的酯酶的同功酶，只有在静止的、成熟的T淋巴细胞中活性较强。一定条件下，ANAE标记法可灵敏地反映T淋巴细胞数量上的变化，且可初步反映机体细胞免疫功能的高低和评价抗病力的强弱(杜念兴，1985)。

T淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)染色法按郑红等(1986)的方法，并稍加改进，以反应液中不加底物(酸性α-醋酸萘酯)作为阴性对照，用孔雀绿复染10s。在高倍镜下检查，凡胞质内出现棕红色反应产物者为T淋巴细胞。检测结果如表6和图12所示。

表6参芪益母汤对ANAE

由表6和图12可知，试验组奶牛ANAE

(3)淋巴细胞转化率的测定

淋巴细胞转化率是评价细胞免疫功能的一个重要指标，其过程是T细胞与抗原或有丝分裂原如ConA结合，细胞代谢和形态相继发生变化，主要表现为短时间内细胞表面电荷起变化，数小时后细胞内酶活化，导致DNA合成启动，从而产生一系列变化，如细胞变大、细胞浆扩大，出现空泡、核仁明显、染色质疏松，淋巴细胞转变成母细胞。在转变过程中DNA、RNA及蛋白质合成增加，使细胞分裂增殖，而淋巴细胞的分裂、增殖则是其发挥作用大小的一个衡量标准。

参照张庆茹等(2004)形态检查法测定淋巴细胞转化率。

取淋巴细胞分离液6ml于试管中，再沿管壁缓慢加入血液3ml，28℃离心(3000r/min，20min)，再用Hanks液洗3次，离心(2000r/min，3～5min)，弃去上清液，然后加入1640培养液3ml，混匀后置于37℃培养箱中培养72h。培养结束后，离心(2000r/min，10min)，弃去上清液，留沉淀，沉淀中加入1640培养液2滴摇匀，水平涂片，干燥，加甲醇固定2～5min，姬姆萨—瑞氏染色，镜检，计数，计算淋巴细胞转化率。

其中，淋巴细胞转化率＝(转化的淋巴细胞/淋巴细胞总数)×100％。检测结果如表7和图13所示。

表7参芪益母汤对奶牛外周血淋巴细胞转化率的影响(％)

由表7和图13可知，试验组奶牛外周血淋巴细胞转化率在产后第5天、第15天分别较对照组升高6.29％(p<0.05)和5.87％(p<0.05)。

(4)T淋巴细胞亚群凋亡测定

T淋巴细胞亚群的稳定是维持机体正常免疫调节功能所必需的，CD4

T淋巴细胞亚群测定用流式细胞仪参照曹荣等(2007)方法进行测定。无菌采集静脉血4ml，肝素抗凝，用淋巴细胞分离液分离得单个核细胞。用20％的小牛血清RPMI-1640培养液调整细胞浓度约2×10

表8参芪益母汤对奶牛外周血T淋巴细胞亚群的的影响(％)

由表8和图14、15可知，奶牛产后灌服参芪益母汤可以显著增加外周血CD4

(5)淋巴细胞凋亡率测定

细胞凋亡(apoptosis)是一个生理性的细胞自我毁灭过程，在胚胎发育、生物体内环境的稳定及多细胞生物防御、外在及内在伤害等方面均起着重要的作用。随着对细胞凋亡的深入研究，揭示了细胞凋亡在淋巴细的发育、增殖、分化及行使免疫功能中起着重要作用。淋巴细胞凋亡包括成熟过程中的凋亡、活化诱导的细胞死亡(activation-inducedcell death，AICD)等。淋巴细胞过度凋亡将引起淋巴细胞数量减少(赵建斌等，2008)，机体抵抗力显著下降，因此检测淋巴细胞凋亡率是衡量机体免疫力的重要指标。

参照李忠浩(2007)Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。

用冰冷(4℃)的PBS洗涤淋巴细胞2次，调整细胞数为1×10

表9参芪益母汤对奶牛外周血淋巴细胞凋亡率的影响(％)

由表9和图16可知，试验组奶牛外周血淋巴细胞凋亡率在产后第5天、第15天分别较对照组升高3.36％(p<0.01)和2.83％(p<0.01)。

(6)IgG含量测定

体液免疫是主要由B淋巴细胞通过分泌抗体进行的免疫方式，体内抗体主要为IgG、IgM、IgA 3种免疫球蛋白。其中主要是IgG，IgG能抵抗多种细菌、病毒与毒素的侵袭，使机体免受感染。因此血清IgG含量是反映机体体液免疫机能的重要指标。

试验组和对照组各随机取10头牛，分别于产后第1、5、15天无菌静脉采血5ml，高速离心取血清，用OlympusAu400全自动生化分析仪测定血清IgG含量，检测结果如表10和图17所示。

表10参芪益母汤对奶牛血清IgG含量的影响(g/L)

由表10和图17可知，试验组奶牛外周血中性白细胞吞噬活性在产后第5天、第15天分别较对照组升高10.12％(p<0.05)和9.39％(p<0.05)。

本发明中奶牛产后灌服参芪益母汤可以显著提高外周血ANAE

总之，本发明提供的中药制剂可显著降低奶牛产后疾病发病率，提高奶牛产奶性能，提高奶牛养殖的经济效益。

以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。