一种快速提高三七叶片皂苷含量的方法

摘要

本发明涉及一种快速提高三七叶片皂苷含量的方法，属于医学技术领域。该方法首先配制外源物质工作液；所述的外源物质为茉莉酸甲酯、萘乙酸、6‑苄基腺嘌呤、H2O2、水杨酸、亚精胺或脱落酸；所述的外源物质工作液的溶剂为水；之后，采用配制好的工作液对三七植株叶片进行喷洒。本发明方法利用外源物质对三七叶中皂苷单体积累的诱导效应，筛选出最佳外源物质，为提高三七叶中皂苷含量，开展品质评价和质量分析提供一定的科学依据和参考。

说明书

技术领域

本发明属于医学技术领域，具体涉及一种用外源物质快速提高三七叶皂苷含量的方法。

背景技术

根中皂苷积累漫长的过程，外源物质作用于叶片具有吸收快、诱导快以及积累快等特点。研究表明，外源物质可广泛诱导药用植物次生代谢物质的积累，但具有不同的调控机制。例如外源NO供体硝普钠(SNP)、过氧化氢(H

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种快速提高三七叶皂苷含量的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种快速提高三七叶片皂苷含量的方法，包括如下步骤：

步骤(1)，配制外源物质工作液；所述的外源物质为茉莉酸甲酯、萘乙酸、6-苄基腺嘌呤、H

步骤(2)，采用步骤(1)配制好的工作液对三七植株叶片进行喷洒；连续喷施一周；喷施季节选择每年6月-8月，喷施周期为一周，每天早晚各一次，每株喷施量为1.35ml/次-2ml/次。

进一步，优选的是，茉莉酸甲酯、萘乙酸、6-苄基腺嘌呤、脱落酸、水杨酸、亚精胺、脱落酸工作液的浓度均为400μmol/L；H

进一步，优选的是，所述的三七植株为一年生三七。

进一步，优选的是，两次喷施时间分别为早6至7时，晚7至8时。

进一步，优选的是，喷施时，喷施范围是0.5m×0.5m，该范围内含一年生三七100-150株，每次喷施量为200mL。

本发明同时提供所述的茉莉酸甲酯在制备提高三七中人参皂苷Rb

本发明还提供所述的萘乙酸、6-苄基腺嘌呤、脱落酸、H

本发明另外提供所述的脱落酸在制备提高三七中七叶胆苷XⅦ含量药剂中的应用。

本发明以一年生三七为研究对象，在人工栽培条件下，通过对叶面喷施赤霉素(GA3)、6-苄基腺嘌呤(6-BA)、脱落酸(ABA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、水杨酸(SA)、亚精胺(Spd)、硝普钠(SNP)、萘乙酸(NAA)、乙烯(ETH)、褪黑素(MT)和H

本发明与现有技术相比，其有益效果为：

本发明在建立高效液相色谱(HPLC)测定三七叶皂苷单体方法的基础上，探索11种外源物质对三七叶中皂苷单体积累的诱导效应，筛选出最佳外源物质，为提高三七叶中皂苷含量，开展品质评价和质量分析提供一定的科学依据和参考。

本发明使用外源物质喷施一年生三七叶片，其周期仅为一周，但多种诱导子，即茉莉酸甲酯、水杨酸、萘乙酸、6-苄基腺嘌呤、赤霉素、脱落酸、乙烯、褪黑素、硝普钠、亚精胺、H

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。

本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用材料或设备未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。

实施例1

一种快速提高三七叶片皂苷含量的方法，包括如下步骤：

步骤(1)，配制外源物质工作液；所述的外源物质为茉莉酸甲酯、萘乙酸、6-苄基腺嘌呤、H

步骤(2)，采用步骤(1)配制好的工作液对三七植株叶片进行喷洒；连续喷施一周；喷施季节选择每年6月，喷施周期为一周，每天早晚各一次，每株喷施量为1.35ml/次。

实施例2

一种快速提高三七叶片皂苷含量的方法，包括如下步骤：

步骤(1)，配制外源物质工作液；所述的外源物质为茉莉酸甲酯、萘乙酸、6-苄基腺嘌呤、H

步骤(2)，采用步骤(1)配制好的工作液对三七植株叶片进行喷洒；连续喷施一周；喷施季节选择每年8月，喷施周期为一周，每天早晚各一次，每株喷施量为2ml/次。

茉莉酸甲酯、萘乙酸、6-苄基腺嘌呤、脱落酸、水杨酸、亚精胺、脱落酸工作液的浓度均为400μmol/L；H

所述的三七植株为一年生三七。

两次喷施时间分别为早6至7时，晚7至8时。

实施例3

一种快速提高三七叶片皂苷含量的方法，包括如下步骤：

步骤(1)，配制外源物质工作液；所述的外源物质为茉莉酸甲酯、萘乙酸、6-苄基腺嘌呤、H

步骤(2)，采用步骤(1)配制好的工作液对三七植株叶片进行喷洒；连续喷施一周；喷施季节选择每年7月，喷施周期为一周，每天早晚各一次，每株喷施量为1.5ml/次。

茉莉酸甲酯、萘乙酸、6-苄基腺嘌呤、脱落酸、水杨酸、亚精胺、脱落酸工作液的浓度均为400μmol/L；H

所述的三七植株为一年生三七。

两次喷施时间分别为早6至7时，晚7至8时。

实施例4

一种快速提高三七叶片皂苷含量的方法，包括如下步骤：

步骤(1)，配制外源物质工作液；所述的外源物质为茉莉酸甲酯、萘乙酸、6-苄基腺嘌呤、H

步骤(2)，采用步骤(1)配制好的工作液对三七植株叶片进行喷洒；连续喷施一周；喷施季节选择每年6月-8月，喷施周期为一周，每天早晚各一次，每株喷施量为1.35-2ml/次。

茉莉酸甲酯、萘乙酸、6-苄基腺嘌呤、脱落酸、水杨酸、亚精胺、脱落酸工作液的浓度均为400μmol/L；H

所述的三七植株为一年生三七。

两次喷施时间分别为早6至7时，晚7至8时。

应用实例

(1)用十一种外源物质对三七进行喷洒处理，并设置对照组，对照组用蒸馏水进行喷洒；

具体如下：

设12个处理组，每个处理样方面积为0.5m×0.5m，内有一年生三七植株100-150株，各外源物质工作液的喷施范围相互间隔1-1.5m。选其中一组作为空白对照(CK)，其余11组分别为GA3、6-BA、ABA、MeJA、SA、Spd、SNP、NAA、ETH、MT和H

(2)对三七样本进行采收，清洗，测定其生长指标；

测定方法如下：

精密称取碾磨好的三七叶粉末1g于50ml锥形瓶中，加入氯仿50ml静止过夜(去除叶绿素)，第二天用滤纸过滤溶液，去除滤液，取滤纸上沉淀，待沉淀自然风干后，再次溶于30ml氯仿中(去除叶绿素)，静置2h后再次用滤纸过滤，待沉淀自然风干。随后参考《中国药典》2010年版一部对三七根茎样品溶液的制备方法制备供试样品溶液。样品检测采用Agilent 1260系列高效液相色谱仪，仪器组成为：G1311C四元泵、G1329B自动进样仪、G1315D光电二极管阵列检测器。色谱测定条件：色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为0.2％(体积比)磷酸水(A)-乙腈(B)；流速1.0mL·min

梯度洗脱如表1。

表1

注：每个时间段内的浓度变化为线性变化。

(3)确定最佳外源物质；

对11种外源物质处理后的7种三七叶皂苷单体含量进行了测定。结果如表2所示，与CK相比，MeJA处理后三七叶中7种皂苷单体总含量呈显著增加，而其余10种外源物质处理则显著减少7种皂苷单体总含量。就各单体含量而言，MeJA处理显著增加人参皂苷Rb

表2

注：各处理只与CK相比较.**.相关性在0.01上显著(双尾)；*.相关性在0.05

注：各处理只与CK相比较.**.相关性在0.01上显著(双尾)；*.相关性在0.05上显著(双尾)。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。