一种腹膜透析液中葡萄糖含量检测方法

摘要

本发明涉及一种腹膜透析液中葡萄糖含量检测方法，采用色谱条件如下：色谱柱：Bio‑Rad AmineX HPX‑87H色谱柱；流动相：0.02mol/L～0.03mol/L硫酸溶液；检测器：紫外检测器；检测波长：190nm～200；流速：0.5ml/min～0.8ml/min；柱温：50℃～60℃；进样体积：10μl，采用葡萄糖作为对照品外标法。与现有技术相比，本发明采用紫外检测器，使得该品种葡萄糖含量检测的灵敏度、准确度高以及重现性好；采用高效液相色谱仪器，可以减少人为误差，提高检测准确性；本发明测定的葡萄糖峰与各辅料的峰均能完全分离，分离效果好，系统良好且稳定。

说明书

技术领域

本发明涉及检测技术领域，具体为一种腹膜透析液中葡萄糖含量检测方法。

背景技术

腹膜透析液主要用于非透析治疗无效而需要连续不卧床性腹膜透析与连续周期性腹膜透析治疗的急性、慢性肾功能衰竭患者。葡萄糖主要作用与产生比血浆渗透压稍高的渗透压，利用此渗透梯度，促进脱水作用的发生，保留一段时间后在重力作用下将腹膜透析液从腹腔中引流出来。

腹膜透析液(乳酸盐-G2.5％)质量标准中规定含葡萄糖含量应为标示量的90.0％～110.0％，目前国内葡萄糖的检测方法为滴定法，但是该方法存在着检测准确度及灵敏度低等问题。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提出了一种腹膜透析液中葡萄糖含量检测方法。

本发明所要解决的技术问题采用以下技术方案来实现：

一种腹膜透析液中葡萄糖含量检测方法，采用色谱条件如下：

色谱柱：Bio-Rad AmineX HPX-87H色谱柱；

流动相：0.02mol/L～0.03mol/L硫酸溶液；

检测器：紫外检测器；

检测波长：190nm～200nm；

流速：0.5ml/min～0.8ml/min；

柱温：50℃～60℃；

进样体积：10μl，采用葡萄糖作为对照品外标法；

包括如下步骤：

(A)对照品溶液的制备：取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含葡萄糖2mg的溶液，作为对照品溶液；

(B)供试品溶液的制备：精密移取本品2.0ml，置25ml量瓶中，加水稀释定容至刻度，即得每1ml约含葡萄糖2mg的溶液，作为供试品溶液；

(C)测定法：精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算葡萄糖含量。

进一步地，采用色谱条件如下：

流动相：0.02mol/L硫酸溶液；

检测波长：190nm；

流速：0.5ml/min；

柱温：50℃。

进一步地，采用色谱条件如下：

流动相：0.0255mol/L硫酸溶液；

检测器：紫外检测器；

检测波长：195nm；

流速：0.6ml/min；

柱温：55℃。

进一步地，采用色谱条件如下：

流动相：0.03mol/L硫酸溶液；

检测波长：200nm；

流速：0.8ml/min；

柱温：60℃。

本发明的有益效果是：

与现有技术相比，本发明采用紫外检测器，使得该品种葡萄糖含量检测的灵敏度、准确度高以及重现性好；采用高效液相色谱仪器，可以减少人为误差，提高检测准确性；本发明测定的葡萄糖峰与各辅料的峰均能完全分离，分离效果好，系统良好且稳定。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明进一步说明：

图1为本发明中葡萄糖检测结果线性图。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合附图以及实施例对本发明进一步阐述。

实施例1

一种腹膜透析液中葡萄糖含量检测方法，采用色谱条件如下：

色谱柱：Bio-Rad AmineX HPX-87H色谱柱；

流动相：0.02mol/L硫酸溶液；

检测器：紫外检测器；

检测波长：190nm；

流速：0.5ml/min；

柱温：50℃；

进样体积：10μl，采用葡萄糖作为对照品外标法；

包括如下步骤：

(A)对照品溶液的制备：取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含葡萄糖2mg的溶液，作为对照品溶液；

(B)供试品溶液的制备：精密移取本品2.0ml，置25ml量瓶中，加水稀释定容至刻度，即得每1ml约含葡萄糖2mg的溶液，作为供试品溶液；

(C)测定法：精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算葡萄糖含量。

(一)专属性实验

(a)氯化钠溶液的制备：称取氯化钠538mg置100ml量瓶中,加去离子水稀释至刻度，摇匀。再精密量取该溶液2ml置25ml量瓶中,加去离子水稀释至刻度，摇匀，即得氯化钠溶液。

(b)乳酸钠溶液的制备：称取乳酸钠(浓度50％)896mg置100ml量瓶中,加去离子水稀释至刻度，摇匀。再精密量取该溶液2ml置25ml量瓶中,加去离子水稀释至刻度，摇匀，即得乳酸钠溶液。

(c)氯化钙溶液的制备：称取氯化钙26mg置100ml量瓶中,加去离子水稀释至刻度，摇匀。再精密量取该溶液2ml置25ml量瓶中,加去离子水稀释至刻度，摇匀，即得氯化钙溶液。

(d)氯化镁溶液的制备：称取氯化镁5.1mg置100ml量瓶中,加去离子水稀释至刻度，摇匀。再精密量取该溶液2ml置25ml量瓶中,加去离子水稀释至刻度，摇匀，即得氯化镁溶液。

(e)空白辅料混合液的制备：称取氯化钠538mg、乳酸钠(浓度50％)896mg、氯化钙26mg、氯化镁5.1mg置100ml量瓶中,加去离子水稀释至刻度，摇匀。再精密量取该溶液2ml置25ml量瓶中,加去离子水稀释至刻度，摇匀，即得空白辅料混合液。

(f)葡萄糖对照储备溶液的制备：精密称取葡萄糖对照品104.68mg置10ml量瓶中,加去离子水稀释至刻度，摇匀，即得葡萄糖对照储备溶液。

(g)对照品溶液的制备：精密量取对照品储备溶液2ml置10ml量瓶中,加去离子水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

(h)供试品溶液：精密移取本品2.0ml(批号：4119050601)，置25ml量瓶中，加水稀释定容至刻度，即得。

精密量取上述各溶液、空白溶剂(水)、对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表1。

表1专属性检测结果

结果表明：空白溶剂、各空白辅料、空白辅料混合均与葡萄糖的峰无干扰。

(二)线性与范围实验

分别精密量取葡萄糖对照品溶液1ml、2ml、5ml置10ml容量瓶中，加去离子水稀释定容至刻度，摇匀，即得相当于供试品浓度的10％、20％、50％溶液，对照品溶液为100％。分别精密量取葡萄糖对照品储备溶液1.2ml、2.5ml置5ml容量品中，加去离子水稀释定容至刻度，摇匀，即得相当于供试品浓度的125％、250％。在实施例1色谱条件下，精密量取各溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；以进样浓度(mg/ml)为X，葡萄糖峰面积(A)为Y，作线性回归方程，结果见表2。

表2葡萄糖含量线性检测结果表

将表2中的结果作成葡萄糖检测结果线性图，如图1所示。

结果表明，葡萄糖含量在0.209～5.225mg/ml范围内，葡萄糖含量与葡萄糖峰面积呈显著线性关系，回归方程为Y＝66152X+905.12，r＝0.9996。

(三)重复性实验

精密量取腹膜透析液2.0ml(批号：4119050601)置25ml容量瓶中，加水稀释定容至刻度，即得供试品溶液。分别配制6份，精密量取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。6份供试品溶液葡萄糖含量检测结果见表3。

表3样品重复性检查结果

结果表明，6份腹膜透析液中葡萄糖含量RSD为0.319％＜2.0％，样品重复性良好。

(四)准确度实验

80％水平溶液配制：精密量取空白辅料贮备液0.4ml，葡萄糖对照品储备液1.6ml，置同一个10.0ml量瓶中，加空白溶剂稀释定容至刻度，即得，平行配制3份。

100％水平溶液配制：精密量取空白辅料贮备液0.4ml，葡萄糖对照品储备液2.0ml，置同一个10.0ml量瓶中，加空白溶剂稀释定容至刻度，即得，平行配制3份。

120％水平溶液配制：精密量取空白辅料贮备液0.4ml，葡萄糖对照品储备液2.4ml，置同一个10.0ml量瓶中，加空白溶剂稀释定容至刻度，即得，平行配制3份。

精密量取各标准浓度溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，分别计算各浓度的回收率，各浓度下回收率应在95％～105％之间，9份浓度回收率RSD％＜2％。准确度检测结果见表4。

表4准确度检查结果

结果表明，葡萄糖含量回收均在在95％～105％的范围内，平均回收率99.95％(n＝9)，RSD为0.33％＜2％，符合规定，方法准确性良好。

(五)系统适用性实验

按照上述检测方法，用对照品溶液连续进样5次，计算对照品图谱中的葡萄糖峰面积，其RSD不得大于2.0％，葡萄糖峰理论塔板数应大于5000，具体结果见表5。

表5葡萄糖含量系统适用性试验

结果表明：本系统中葡萄糖峰理论塔板数9717大于5000，峰面积RSD为0.66％＜2.0％，符合要求。

(六)溶液稳定性实验

将供试品溶液及对照品溶液于室温下，分别于0h、4h、8h、24h、48h进样上述溶液，精密量取各时间段对照品溶液和供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，计算对照品溶液峰面积及供试品溶液随时间变化的RSD。溶液稳定性结果见表6、7。

表6供试品溶液稳定性结果

表7对照品溶液稳定性结果

结果表明，腹膜透析液的供试品溶液及对照品溶液在0h、4h、8h、24h、48h，葡萄糖含量RSD为0.496％、0.321％＜2％，符合规定，说明本发明溶液稳定良好。

(七)耐用性实验

在上述条件下，精密量取腹膜透析液2.0ml(批号：4119050601)置25ml容量瓶中，加水稀释定容至刻度，即得供试品溶液，系统改变波长变化±5nm、流速变化±0.1ml/min、柱温变化±5℃、流动相浓度变化±0.002mol/L；要求：不同条件下，含量相对于初始条件的回收率在98.0％～102.0％。溶液稳定性结果见表8、9、10、11。

表8耐用性结果(不同柱温)

结果表明，腹膜透析液的供试品溶液在检测时，柱温变化±5℃，葡萄糖回收率分别为100.80％、99.18％＜2％，符合规定，说明本发明耐用性良好。

表9耐用性结果(不同流速)

结果表明，腹膜透析液的供试品溶液在检测时，流速变化±0.1ml/min，葡萄糖回收率分别为100.23％、100.54％＜2％，符合规定，说明本发明耐用性良好。

表10耐用性结果(不同流动相浓度)

结果表明，腹膜透析液的供试品溶液在检测时，流动相浓度变化±0.002mol/L，葡萄糖回收率分别为100.30％、100.02％＜2％，符合规定，说明本发明耐用性良好。

表11耐用性结果(不同波长)

结果表明，腹膜透析液的供试品溶液在检测时，波长变化±5nm，葡萄糖回收率分别为99.98％、101.73％＜2％，符合规定，说明本发明耐用性良好。

实施例2

与实施例1不同之处在于，采用色谱条件如下：

流动相：0.0255mol/L硫酸溶液；

检测器：紫外检测器；

检测波长：195nm；

流速：0.6ml/min；

柱温：55℃。

实施例3

与实施例1不同之处在于，采用色谱条件如下：

流动相：0.03mol/L硫酸溶液；

检测波长：200nm；

流速：0.8ml/min；

柱温：60℃。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。