抗真菌的大环多烯类新化合物

摘要

本发明的大环多烯类抗真菌的两性霉素B的γ型、ω型和ν型新化合物，具有更少的吸湿性、更好的存储稳定性，更利于药物及制剂质量控制等，适用于制备感染：隐球菌病、北美芽生菌病、播散性念珠菌病、球孢子菌病、组织胞浆菌病、毛霉菌病、孢子丝菌病、曲菌病、着色真菌病、灼烧后皮肤真菌感染、呼吸道念珠菌、曲菌或隐球菌感染、真菌性角膜溃疡、热黑病、肠道病毒感染、抗抑郁症等的治疗或预防的药物中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地说是提供大环多烯类抗真菌药物两性霉素B的稳定性更好的新分子式和新分子结构的化合物及其药物组合物。

背景技术

两性霉素B(Amphotericin B，CAS:1397-89-3，分子式为C

其中，两性霉素B给药模式主要有：静脉用药：开始静脉滴注时先试以1～5mg或按体重一次0.02～0.1mg/kg给药，以后根据患者耐受情况每日或隔日增加5mg，成人最高一日剂量不超过1mg/kg，每日或隔1～2日给药1次，累积总量1.5～3.0g，疗程1～3个月，也可长至6个月，视病情及疾病种类而定。对敏感真菌感染宜采用较小剂量，即成人一次20～30mg。

鞘内给药：首次0.05～0.1mg，以后渐增至每次0.5mg，最大量一次不超过1mg，每周给药2～3次，总量15mg左右。鞘内给药时宜与小剂量地塞米松或琥珀酸氢化可的松同时给与，并需用脑脊液反复稀释药液，边稀释边缓慢注入以减少不良反应。

局部用药：气溶吸入时成人每次5～10mg，用灭菌注射用水溶解成0.2％～0.3％溶液应用；超声雾化吸入时本品浓度为0.01％～0.02％，每日吸入2～3次，每次吸入5～10ml；持续膀胱冲洗时每日以两性霉素B 5mg加入1000ml灭菌注射用水中，按每小时注入40ml速度进行冲洗，共用5～10日。

一些公开文献报道两性霉素B合成、分析、脂质体制剂、微球、纳米粒、等各种剂型、药理毒理临床、联合给药及联合给药增效减毒作用等(专利文献：US4177265；一种治疗深部真菌感染药物的纯化工艺，CN 102746352；纯化与结晶两性霉素B的方法，CN 1053794；张玉莲,黄君勤,池王胄,等，大孔树脂在两性霉素B原料药纯化工艺中的应用研究[J].上海医药,2012,33(09):13-15.；薛以胜,牟善良，大孔树脂吸附法纯化两性霉素B的研究[J].山东电大学报,2005(03):62-63.；涂志英,陈丽辉,邵伟，两性霉素B粗制品的结晶提纯工艺研究[J].精细与专用化学品,2007(12):8-10.；黄泓,仇士林，两性霉素B含量的HPLC测定[J].中国抗生素杂志,2001(01):43-45.；罗东,马文秀,代青,等，HPLC法测定两性霉素B含量[J].药学实践杂志,1998(03):166-168.；一种两性霉素B脂质体的制备方法，CN 107412165；用于治疗真菌感染的两性霉素B多肽类水凝胶载药体系，CN 107375939；一种两性霉素B阴道膨胀栓及其制备方法，CN108310364；两性霉素B及其衍生物在制备快速抗抑郁症药物中的应用，CN 108079004；一种抗真菌的药物组合物，CN 107812011；一种两性霉素B脂质体的制备方法，CN 107412165；灵芝萃取物协同两性霉素B的抗癌医药组合物，CN106474164；用于治疗真菌感染的含胆固醇的脂质体两性霉素的制剂，CN 106361696；使用大豆磷脂酰丝氨酸制备的脂质卷，CN 105050409；一种抑制肠道病毒71的药物，CN 104606215；一种两性霉素B纳米复合物及其制备方法，CN 104856931；注射用两性霉素B脂质复合物及其制备方法，CN 101797264；包括两性霉素B的组合物，CN 101442989；两性霉素B结构化乳剂，CN1447682；两性霉素B的水性组合物，CN 1505519；具有不溶解的活性物质的药物制剂，CN1741789；文献2、王维.两性霉素B治疗黑热病:每天与隔天给药的随机比较[J].国外医学(寄生虫病分册),1995(05):234-235.；卢鑫,孙文逵,高伟,等，雾化吸入两性霉素B对侵袭性肺曲霉病预防效果的Meta分析[J].中国呼吸与危重监护杂志,2012,11(01):28-36.；陈宏,温海,徐红,徐小珂,等，两性霉素B和伊曲康唑的体外联合药敏试验分析[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志,2011,10(03):145-147；鄢秀英,刘莉，两性霉素B脂质体试验剂量致严重心血管不良反应[J].药物不良反应杂志,2007(01):53-54.；梅和坤,王冬,白楠,等，两性霉素B肾毒性文献计量分析[J].中国新药与临床杂志,2014,33(12):924-928.；文献3、张丽霞,王会娟,孙莉，两性霉素B长循环脂质体冻干剂的制备工艺研究[J].药学与临床研究,2007(05):384-386.；刘沛,金辉，两性霉素B新剂型的开发及临床研究进展[J].中国医药导报,2011,8(19):6-7+17.；郭慧丽,梅兴国,李高，两性霉素B脂质干粉吸入剂处方筛选与粉体学性质评价[J].医药导报,2009,28(02):225-228.；彭新生,典灵辉,杨志文,等，.两性霉素B立方液晶前体胶囊的制备及释放度考察[J].中国医院药学杂志,2012,32(11):817-820.；)。专利文献CN 1029617C和专利文献CN 102382158B仅报道两性霉素B产物含有的水分范围，却既未报道所得的产物中是否含有其它溶剂或溶剂化合物，而在任何一定范围内物质的或其中物质在一定范围内物质的马库什分子式必然存在无数个特定的分子式化合物或溶剂化合物，且上述合成方法存在一些问题。

原料药的稳定性是确保药物制剂稳定和良好制备性的基础，是保证疗效和预防药物不稳定带来的意外不良反应的基础，寻找原料药的最稳定性型态是药物学上不断追求，药物学是一门实验科学，这种稳定性好的分子型态是事先无法预料的，在世界药物发展史上有很多寻找稳定性更好的药物分子的案例，这客观上推动了药物学不断发展和进步。不为许多专业人士所知的是，有的工业化生产多年的原料药甚至在同样的工艺流程下的同一车间同一设备投入同样的批次的原料的不同批生产产品稳定性差异很大，有的甚至仅在规定条件下仅能保持3个月左右的稳定性，一些质量控制指标出现不同程度的明显变化，这带来令人困惑或棘手的问题，各种潜在威胁性问题不断，甚至尽管这些产品或原料药很早就已被各国药典收录，这对临床应用中患者无疑存在极大的意外的危险。从目前实际情况来看，尽管两性霉素B已上市多年，但两性霉素B的稳定性依然也存在一些问题，譬如，引湿性较大，储存期含量下降幅度或有关物质增加幅度过大等，且这些问题多年未能解决，而一般或甚至绝大部分专业人士根本看不到或无法想象这些问题还存在！这使得我们来寻求解决化合物稳定性问题的方案。尽管却在化合物分子式不变的基础上通过一些实验获得晶型等变化希望获得有价值的结果，也未能获得明显改进，不同的问题依然存在。

粉末药物的引湿性的大小与选择合宜的包装和贮存条件，乃至选择合适的制剂工艺和剂型有着密切的关系。由于包装或贮存条件不当引起药物外观的变化如结团、潮解、变色，从而发生内在质量的改变是常见的现象，因此，一些国家药典已把粉末药物的引湿性作为药物的性状来考核。当药物暴露在一定湿度的空气中，或者在同一制剂中有含游离水的辅料时，药物可能会引湿而导致粉末流动性、分散性、压实性及片剂硬度等某些性质发生改变，也可能会导致药物结块、潮解、稳定性下降甚至含量发生变化，因此，药物的引湿性是会影响药物稳定性、有效性和安全性的一项重要特性(熊婧,石岩,吴建敏,胡昌勤,谭德讲,何兰，基于非参数检验分析化学药品引湿性与水溶解性的关系[J].中国药学杂志,2016,51(20):1786-1789.)。而改善药物引湿性，改善药物的理化性质，如稳定性、熔点、溶解性、引湿性、代谢稳定性、分散速率、溶出速率药物缓释、机械性质和生物利用度等，是现阶段国际晶体工程学的研究前沿和焦点(邢娇娇，新型药物共晶的合成及表征[D].吉林大学,2011.)。

目前，无论欧洲药典药品标准还是《中国药典》均增加了药物引湿性试验以考察药物的质量和或指导创新药物或改良药物的研究。

尽管药物化学和药剂学是不断发展的实践科学，不断以推陈出新引导药学进步，不断提升药物安全性以引导药物及制剂发展和指导临床用药，甚至尽管药学上到了通过对原料药的物理态的改变来影响药学和制剂及临床用药的发展，然而，由于合成的不容易和不确定性，到目前为止，国内外尚更没有公开的文献报道对两性霉素B的新的稳定化学态进行深入创新研究和精准合成，更易制备或稳定性更好的化学分子式和分子量或结构式确定的新化合物，譬如ω型晶体化合物和ν型化合物等，即不同分子式或结构形式的新化合物及其制备方法和用途。

热分析方法在材料科学、化学或药物分析等中具有重要的价值和地位，能单独用来检测或表征化合物或其多晶或晶型的变化(李增余，《热分析》，清华大学出版社，1987年8月第一版)。差热分析法(DTA)是较为常用的分析方法，它既可用于物质的定性鉴别，也可用于定量分析，早在1968年的第二届国际热分析会议上，就被Barta等用来鉴定未知化合物。许多国家的药典早已收载差热分析法，十几年前，差热分析法在化工、制药系统就已广为应用。

发明内容

化学领域公认，一个化合物的特定溶剂化合物是否存在是无法预料的，无法事先用马库什通式限定，无法事先用马库什通式限定，且有的溶剂化合物毒性大，有的引湿性强，有的容易风化，稳定性差，并不适合于用做药物的原料药。本发明是对抗真菌药物对两性霉素B的新的化学态进行深入的创新研究和精准合成，这并非制备同一分子式下的不同晶型，而是制备化学结构明确的新型两性霉素B结晶水合物[分子式为C

在完成本发明过程中，出乎意料地发现，尽管目前的文献报道两性霉素B是药物学的唯一选择，但本研究发现，两性霉素B无水物并不是药物学上的最佳选择，其稳定性并不太好，可导致或在出现导致存储过程中使得原料药不合格或制剂制备过程中含量不准确等。而且，由于制备溶剂的近似，更重要的是，甚至在制备两性霉素B结晶水合物的过程中，却发现更易制备得到稳定性更好的两性霉素B的γ型、ω型和ν型化合物，这却长期以来为行业内人士所忽视。

不仅如此，本发明还发现，分子式明确的两性霉素B的γ型、ω型和ν型化合物易于制备，稳定性能满足制药学上的要求。这反映分子式明确的两性霉素B的γ型、ω型和ν型化合物更具有生产或应用的便利性，这也却长期以来为行业内人士所忽视。

此外，按专利文献CN 1029617C的实施例来制备两性霉素B时需要将固体柠檬酸溶解，在相对低的温度下，譬如15℃时，文献的实施例将固体柠檬酸溶解需要耗费的时间比本发明的实施例1加酸溶解直接反应所花费的时间长大约2-8倍以上，而在冷却到更低温度时，有可能结晶析出，导致产物纯度下降。

按专利文献CN 102382158B的实施例1来制备两性霉素B时需要用乙酸，这导致在最后的产物去掉醋酸的气味不易，产物中或多或少都夹杂醋酸气味。而文献的实施例2和实施例3要用到盐酸，工业盐酸中通常含有三价铁离子，导致本来不稳定的两性霉素B易被氧化，有可能增加产物中杂质的含量或种类。

本发明获得的新分子式和新分子结构的两性霉素B的γ型、ω型和ν型化合物，令人惊奇的是，含结晶水的两性霉素B引湿性低于不含结晶水的两性霉素B，无水物的潮解使得在处理时要隔绝空气防止粘连等，而本发明的水合物具有良好的滑动性，从而改善制剂的可操作性，本发明物质比不含结晶水的两性霉素B更能稳定的存在，又比两性霉素B无水物更易于制备，且便于储存和运输，利于降低制造费用和成本，也利于制剂制造和制剂质量的可控性。本发明的不同的新分子式和新分子结构的两性霉素B结晶水合物在稳定性和可制造性等方面有不同的优势。进一步说，本发明发现两性霉素B的γ型、ω型和ν型化合物比两性霉素B有更好的工业化价值或药用价值。

令人惊奇的是，特征性的，本发明的水合物的热分析(TG-DSC或者TG-DTA)图谱的失重平台下(约在140℃之前的失重曲线下)具有对应的吸热峰，热分析图谱上直观显示出新型分子式和新化合物结构的两性霉素B化合物，两性霉素B型化合物。即使同一分子式物质的不同晶型的制备或获得，在药物学上都具有现实或潜在或未来的意义或价值，更不用说是同一药物不同分子式新物质的获得对药物学上都具有现实或潜在或未来的意义或价值。

两性霉素B新化合物的制备包括如下方法：

在反应容器中，加两性霉素B或两性霉素B无水物或无定型的两性霉素B，加二甲亚砜、二甲基甲酰胺DMF、二甲基乙酰胺、水和/或有机溶剂C

其中，反应中所使用的两性霉素B(重量g)与水、或C1-C6的低分子醇、或C2-C8的低级醚(选自但不仅限于乙醚、四氢呋喃、异丙醚、甲基四氢呋喃等)、或C2-C6的低级腈(选自但不仅限于乙腈、丙腈等)、C

两性霉素B新化合物的结晶或重结晶溶剂选自但不仅限于水、乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、丙酮、乙酸乙酯、醋酸丁酯、甲酸乙酯、乙醚、四氢呋喃、异丙醚、二氯甲烷、氯仿、二甲亚砜、二甲基甲酰胺等中的一种或几种；两性霉素B结晶或重结晶溶剂，较优选水、乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、丙二醇、丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醚、异丙醚、二氯甲烷、氯仿、二甲亚砜、二甲基甲酰胺中的一种或几种。在本发明的制备方法中，在重结晶过程中先用二甲亚砜、二甲基甲酰胺等中的一种或几种或和碱或酸溶解两性霉素B结晶水合物，或酸或和碱再中和，再用本发明提到的有机溶剂使其结晶。

本发明中的有机溶剂低级醇或低分子醇的碳原子数定义为C1-C6(即：1-6个碳原子的醇)，如甲醇、乙醇、异丙醇等；低级醚或低分子醚的碳原子数定义为C2-C8，如乙醚、丁醚、四氢呋喃等；低级卤代烃的碳原子数定义为C1-C6，包括二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿等；低级酯的碳原子数定义为C2-C8，除非特别指明为甲酸低级酯的外，否则为包括醋酸甲酯、醋酸丁酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯等；C3-C8的低分子酮定义为3-8个碳原子的酮，包括丙酮，丁酮、异己酮等；关于任何一类描述为“低级或低分子”化合物的碳原子数量的标记方法只要在文本中出现一次，其它任何未进行标记的描述为“低级或低分子”的同类化合物的碳原子数与本文本中已经标明的数量是一致的。

本发明的产物的干燥方式可以为在不同温度(譬如20-70℃之间干燥)、干燥时间(譬如0.5小时到数日)、或附有其它干燥剂(包括硅胶，五氧化二磷、无水氯化钙、无水硫酸钠等)的环境条件下、或使用常压或减压的方式对最后的产物进行干燥。其干燥温度较优选在25-55℃。

本发明中或实施例中的两性霉素B及两性霉素B新化合物的检测可参照2015版中国药典二部两性霉素B项下的方法。本发明中的两性霉素B新化合物或两性霉素B等的水分测定参考(2015版中国药典通则0832第一法1)，以二甲亚砜和DMF为溶剂，采用卡尔费休法测定。

两性霉素B或其制剂包括注射剂的含量和相关物质测定参考文献的方法(参考文献方法(参照2015版中国药典二部两性霉素B及注射剂的方法)，高效液相色谱检测方法的色谱条件：色谱柱：KROMASIL 4.6mm×250mm,5μm，C18柱，检测波长：383nm，柱温为25℃，流动相、流速和进样量等参照2015版中国药典二部两性霉素B的测定方法。

粉末X衍射通常可用来表征和/或鉴别多晶形，对于粉末X衍射在表征和/或鉴别时，在报告峰值前使用修饰语“约”。鉴于峰值的固有变化，这是固态化学领域的惯常做法。粉末图谱峰的2θx-轴值的通常准确度在±0.2°2θ级别上，因此，以“约8.0°2θ出现的粉末X衍射峰意指当在大多数X-射线衍射仪上测量时，峰可能在7.8°2θ与8.2°2θ之间。峰强度的变化是各晶体在样品容器中相对于外部X-射线源如何取向的结果，取向作用不提供关于晶体的结构信息。本发明在一方面，提供两性霉素B的不同的新分子式和新分子结构的化合物。

本发明在另一方面，提供不同的不同的新分子式和新分子结构以及其制备方法。

本发明在另一方面提供一种药用组合物，其中包括任何一种或多种由本发明的方法制备的两性霉素B新化合物，和一种或多种药学可接受的赋形剂。

本发明进一步提供制备药物制剂的方法，其中包括任何一种或多种由本发明的方法制备的两性霉素B新化合物制剂或和至少一种或药学可接受的赋形剂的合并。

本发明进一步提供两性霉素B新化合物与两性霉素B有相同的用途，在制备用于治疗等的药物或药物组合物中的用途。

本发明提供两性霉素B新化合物更稳定，有利于药物的制造、质量控制和临床用药安全。

新晶体药物同时它扩大了制剂科学家设计例如具有目标释放曲线或者其它期望特性的药物的药物剂型而获得的材料的库，药物的化合物的库的建设非常重要，不仅是对比研究用等，本领域需要新的两性霉素B结晶或新的两性霉素B结晶水合物。

本发明提供两性霉素B新化合物为结晶物，不仅便于过滤，便于干燥，药物的稳定性高于两性霉素B无水物。

两性霉素B新化合物可用于与其它的药物等联合治疗真菌感染或病毒感染等。

用于制备隐球菌病、北美芽生菌病、播散性念珠菌病、球孢子菌病、组织胞浆菌病，由毛霉菌、酒曲菌属、犁头霉菌属、内胞霉属和蛙粪霉属等所致的毛霉菌病，由申克孢子丝菌引的孢子丝菌病，由烟曲菌等所致的曲菌病、着色真菌病、灼烧后皮肤真菌感染、呼吸道念珠菌、曲菌或隐球菌感染、真菌性角膜溃疡、肠道病毒感染、热黑病、抗抑郁症等的治疗或预防的药物中的应用。

本发明的两性霉素B新化合物可用于与抗真菌增效药或减毒剂制备药物组合物，该药物组合物由有效剂量的抗真菌增效药和有效剂量的两性霉素B新化合物及其他药学上可接受的辅料组成。抗真菌增效药或减毒剂选自但不仅限于灵芝萃取物、肉桂酸、表没食子儿茶素没食子酸酯、姜黄素、透明质酸、香菇多糖等中的一种或几种。

例如，本发明涉及抗真菌药物组合物及其医药用途，药物组合物的活性成份为：(1)氟康唑、伊曲康唑、酮康唑、咪康唑、伏立康唑、羟基特他康唑、普沙康唑、拉夫康唑、卡泊芬净等药学上可接受的抗真菌药物；(2)两性霉素B新化合物；其中，(1)与(2)的重量比例选自但不仅限于200∶1～1∶5。

本发明的两性霉素B新化合物用于制备与其它抗真菌药物的联合给药的复方药物组合物。

两性霉素B新化合物通常的给药途径选自但不仅限于口服或静脉滴注或外用：用法用量可与两性霉素B类似。

药物的引湿性是考察药物稳定性的一个重要内容，也是药物研究过程中必须进行的工作，选择化合物更合理的形态作为药物原料药是药物研究内容之一，药物学上历来倾向于选择稳定性更好化合物做原料药，这与药物临床安全有效及准确制造和质量可控密切相关。本发明的新型两性霉素B化合物优点还表现如下：本发明的新型两性霉素B化合物能稳定存储。将本发明的两性霉素B结晶水合物和无水物样品进行引湿性试验对比研究发现其优点。

1、引湿试验

本发明的两性霉素B结晶水合物更利于稳定存储。将两性霉素B新化合物和无水物样品进行引湿性试验：分别取两性霉素B无水物和本发明各新化合物约5g，置于干燥恒重的表面皿中，精密称重，置于约25±2℃、相对湿度约为50±5％的实验箱中，分别于试验0h和8h取样，计算引湿增重的百分率，结果显示，无水物引湿性比对应的本发明的两性霉素B新化合物都具有显著性的差异，本发明的新化合物能更好地稳定存储，结果见表1。

表1.引湿试验结果

引湿试验结果表明，无水物引湿性比本发明的两性霉素B新化合物的差异具有非常显著性，而实验过程中观察到本发明的新化合物并无风化现象，从两个不同角度看，可见本发明的两性霉素B新化合物有更好地稳定应对干燥温度或湿度等的变化，更利于稳定存储。

两性霉素B本身的给药剂量很低，有效剂量与严重毒性反应剂量高度紧密相关，制剂剂量的准确性显得非常重要。本发明的两性霉素B新化合物不同于无水物的潮解使得在处理时要隔绝空气防止粘连等，本发明新化合物具有良好的滑动性，从而改善制剂过程中的可操作性，以利于在制备过程中剂量更准确，也有利于提升原料药或制剂生产的成品率，防止产品的不合格，生产过程中被迫出现报废损失，或因为不合格的产品进而流入市场。

引湿性实验表明，两性霉素B无水物储存稳定性不如本发明的两性霉素B新化合物，而药物学上历来倾向于选择稳定性更好化合物做原料药，显然，实验表明，两性霉素B新化合物是更合理的原料药药物形态的更好选择。

2、制剂质量可控性比较实验

原料药在制剂制备过程对于制剂质量的控制具有重要作用。由于制剂制备过程压片片重或灌装过程中装量等误差的存在，导致每个制剂的含量不会具有绝对等同性因此，药品标准中对注射用两性霉素B制剂设置主药的标示量90-110％作为控制制剂的含量合格的指标。尽管如此，基于两性霉素B的制剂状况，同时必然还是会产生制剂的含量均匀度问题。然而特别在当原料药出现以主药的标示量的95％投料时，若原料药吸潮导致称样不准，而制剂成品的含量必须控制在主药的法定标示量为90-110％之间，由于制造过程中的操作误差无法避免，这种误差将更加放大，这会导致成品不合格率大幅提升。在RH52±5％、25±2℃条件下将不同来源的主药两性霉素B含量已确定的原料药(实施例法制备的原料、两性霉素B无水物)暴露在空气中3小时，然后分别称取样品按照本说明书实施例8法的方法制备标示量为90-110％之间之间即为合格的样品(含量规格为两性霉素B 5mg/支)，当原料药以主药的标示量的100％投料时，譬如按绝对无水物计算精密称取同等重量两性霉素B投料用于制备200支单位制剂时，其余辅料及配比等均相同。最终制剂产品分别随机取样50支注射剂测定两性霉素B主药含量，以主药含量超过其标示量(5mg/支)的90-110％范围为不合格，实验结果如下表2。

表2.制剂可控性比较实验研究结果

在RH52±5％、25±2℃条件下将不同来源的主药两性霉素B含量已确定的原料药(实施例法制备的原料、两性霉素B无水物)暴露在空气中3小时，然后分别称取样品按照本说明书实施例9法的方法制备标示量为90-110％之间即为合格的样品(含量规格为两性霉素B 10mg/支)，当原料药以主药的标示量的95％投料时，按绝对无水物计算精密称取同等重量两性霉素B主药0.95克投料用于制备200支单位制剂时，其余辅料及配比等均相同。最终制剂产品分别随机取样50支注射剂测定主药含量，以主药含量超过其标示量(10mg/支)的90-110％范围为不合格，实验结果如下表3。

表3.制剂可控性比较实验研究结果

由上述实验结果可见，对于同样的制备工艺，两性霉素B无水物为原料投料的产品不合格率大大超过本发明的两性霉素B新化合物的,显然，本发明的两性霉素B新化合物更利于制剂制造时的质量可控性，更利于制剂成品合格率提升。

本发明的新型两性霉素B化合物用途：用于制备含有该化合物或两性霉素B的固体制剂、栓剂、注射剂、微乳剂、纳米制剂、乳剂、洗剂、软膏或乳膏或凝胶(包括眼用凝胶等)、透皮制剂、外用制剂、气雾剂、吸入剂以及药学上可接受的制剂，其中注射剂选自但不仅限于注射用冻干粉针制剂、小容量注射剂、无菌分装粉针制剂、大输液制剂、可注射给药的脂质体制剂或注射微球制剂、注射用微乳制剂、注射用纳米制剂等，其中，大输液制剂选自但不仅限于氯化钠注射液、瓶装或袋装大输液、双室即配型大输液、非PVC固液双室即配型大输液、非PVC多层共挤膜制成的即配型大输液等药学上可接受的大输液制剂；固体制剂选自但不仅限于片剂、胶囊剂、含脂质体的制剂等。

本发明所述两性霉素B新化合物或其药物组合物用于制备药学上可接受的固体制剂，其所用辅料可包含填充剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、抗氧化剂、乳化剂、防腐剂或稳定剂等。

用于制备药学上可接受的片剂(包括肠溶片、速崩片、泡腾片、阴道片、阴道泡腾片等)、胶囊(包括肠溶胶囊、缓释胶囊)等，其中可含有药学上可接受的辅料或载体，填充剂如淀粉、变性淀粉、乳糖、微晶纤维素、环糊精、山梨醇、甘露醇、磷酸钙、氨基酸等；药学上可接受的崩解剂，如淀粉、变性淀粉、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素、表面活性剂(十二烷基硫酸钠等)；药学上可接受的润湿剂和粘合剂，如胶化淀粉、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、低取代羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸及其盐等；药学上可接受的润滑剂和助流剂，如硬脂酸、硬脂酸镁、聚乙二醇4000－20000、滑石粉、微粉硅胶、十二烷基硫酸镁等；药学上可接受的甜味剂和香精，如阿斯巴甜、甜蜜素、糖精钠、三氯蔗糖、食用香精等。

两性霉素B新化合物的注射剂，其制备包括：

无菌分装的粉针的制备：按照通常惯例使用无菌原料进行分装。

大输液制剂，包括瓶装或袋装大输液、双室即配型大输液、非PVC固液双室即配型大输液、非PVC多层共挤膜制成的即配型大输液，均可按照常规方法制备。

冻干粉针制剂的制备方法为：取两性霉素B结晶水合物，可以加药学上可接受的助溶剂、冻干支持剂或辅形剂、稳定剂、注射用水，搅拌使溶解，若需要，可用药学上可接受的酸碱调节pH为7.2～8.0，加活性碳0.005～0.5％(W/V)搅拌15～45min，过滤，补水，无菌过滤，按5～20mg/瓶分装，冷冻干燥，压塞，得成品。

冻干支持剂或辅形剂选自但不仅限于去氢胆酸钠、胆固醇硫酸钠、木糖醇、山梨醇、甘露醇、转化糖、麦芽糖、右旋糖酐、麦芽糖醇、乳糖醇、赤藓糖醇、氯化钠、乳酸钠、硫酸钠等中的一种或几种。山梨醇包括D-山梨糖醇、无水山梨醇或山梨醇半水物或1水山梨醇或速溶山梨醇等中的一种或多种。

药学上可接受的辅料也包括但不限于：增溶剂(可包括表面活性剂在内)，增溶剂选自聚氧化乙烯单油酸山梨醇酐酯、吐温-80、维生素E琥珀酸聚乙二醇酯(维生素E TPGS)、甘油-聚乙二醇氧基硬脂酸酯、PEG-32硬脂酸棕榈酸甘油酯、十二烷基硫酸钠、单月桂酸山梨醇酐酯、聚乙二醇、聚乙二醇400-20000、聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、去氢胆酸钠、胆固醇硫酸钠、药学上可接受的路易斯酸或路易斯碱、氨基酸或其药用盐、药学可接受的醇类、药学可接受的多元醇、泊洛沙姆、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、氮酮、月桂氮革酮、环糊精或环糊精药学上可接受的衍生物。

去热源和除菌方式可以是加入配液量0.005～3％的活性炭去热源，微孔滤膜除菌和热压灭菌，也可以采用超滤除菌、去热源。超滤方法中，超滤器可选用平板式、卷式、管式、中空纤维式或圆盒式等，优选卷式和中空纤维式超滤器，采用截留相对分子质量为5万至30万的滤膜除去大部分发热性物质和细菌后，再采用截留相对分子质量3000～60000的超滤膜除去剩余热源，优选相对分子质量6000～20000的超滤膜。

其药学上可接受的pH调节剂可以是药学上可接受的无机酸或有机酸、无机碱或有机碱，也可以是广义的路易斯酸或碱，可以含有一种或者几种，选自但不仅限于盐酸、磷酸、丙酸、醋酸及醋酸盐、如醋酸钠等，乳酸以及乳酸药用盐、枸橼酸药用盐、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸盐、酒石酸及其药用盐、硼砂、硼酸、丁二酸、己酸、己二酸、反丁烯二酸、顺丁烯二酸、多羟基羧酸及药用盐，如葡萄糖醛酸、葡萄糖酸、乳糖酸、苹果酸、苏糖酸、葡庚糖酸等中的一种或者几种。

其药学上可接受的抗氧剂和稳定剂选自但不仅限于亚硫酸、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、焦亚硫酸盐、连二亚硫酸盐、硫代硫酸盐，有机硫化合物硫脲、谷胱甘肽、二巯基丙醇、巯基乙酸及盐、硫代乳酸及盐、硫代二丙酸及盐、苯酚类化合物，如没食子酸及盐、咖啡酸及其盐、阿魏酸及其盐、二叔丁基对苯酚、2，5-二羟基苯甲酸及其盐、水杨酸或其盐；抗坏血酸及其盐、异抗坏血酸及其盐、烟酰胺、酒石酸、硝酸盐、磷酸盐、醋酸药用盐、柠檬酸盐、EDTA及EDTA盐、包括EDTA二钠、EDTA四钠或其水合物、依地酸钙钠盐(包括乙二胺四乙酸钠钙或乙二胺四乙酸钠钙2水合物、乙二胺四乙酸钠钙4水合物)、N－二(2－羟乙基)甘氨酸等中的一种或者几种。

本发明所述的两性霉素B新化合物可以用来制备其脂质体及药学上可接受的制剂，含有两性霉素B新化合物和中性磷脂和胆固醇和/或负电荷磷脂和/或长循环磷脂，按每1000mL脂质体溶液计，其中的原料量可以为：

其中：中性磷脂与胆固醇的摩尔比例为1∶2～1∶0.1，中性磷脂与负电荷磷脂的摩尔比例为5∶5～5∶0.1，两性霉素B新化合物与磷脂的重量比例为0.01∶1～1∶3。

优选每1000mL脂质体溶液中的原料量为：

上述脂质体所包含但不仅限于中性磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、双硬脂酸卵磷脂或双软脂酸卵磷脂。

上述脂质体所包含但不仅限于的带负电荷磷脂选自双肉豆蔻酸磷脂酰甘油、双月桂酸磷脂酰甘油、双软脂酸磷脂酰甘油、双硬脂酸磷脂酰甘油、双肉豆蔻酸磷脂酸、双硬脂酸磷脂酸、双月桂酸磷脂酸、双软脂酸磷脂酸、双油酸磷脂酰丝氨酸或双亚油酸磷脂酰肌醇。

述脂质体所包含的长循环磷脂材料选自但不仅限于所有不同分子量的聚乙二醇(PEG)与双硬脂酸磷脂酰乙醇胺(DSPE)反应生成的PEG-DSPE。

上述脂质体通过下述方法和步骤制备：

分别称取配方量的中性磷脂、负电荷磷脂、长循环磷脂、胆固醇或胆固醇硫酸钠，用二甲亚砜或氯仿等溶剂溶解于茄形瓶中，于旋转蒸发仪上减压蒸发除去二甲亚砜或氯仿等溶剂，在瓶壁上形成均匀的脂质薄膜，在脂质薄膜中加入pH7.0-7.5的乳酸钠或和柠檬酸钠等的缓冲液，振摇至脂质膜完全水化，用微型挤压器制备空白脂质体。加入pH调节剂溶液，调节pH至7.2-8.0，将空白脂质体溶液与处方量的两性霉素B新化合物蔗糖溶液混合，置于55-75℃水浴中保温15～30min，即得。

上述脂质体的制备方法，还可以用如下方法制得：

分别称取配方量的中性磷脂、负电荷磷脂、长循环磷脂、胆固醇或和胆固醇硫酸钠，用二甲亚砜或氯仿等溶剂溶解于茄形瓶中，于旋转蒸发仪上减压蒸发除去氯仿等溶剂，在瓶壁上形成均匀的脂质薄膜。在脂质薄膜中加入适量的药学上可接受的盐溶液，振摇至脂质膜完全水化，用微型挤压器制备空白脂质体，将空白脂质体溶液以5-15％蔗糖溶液洗脱通过Sephadex G50凝胶柱或者通过透析的方法(透析液为5-15％蔗糖溶液)更换外水相，加入处方量的两性霉素B新化合物蔗糖溶液，混合，置于55-75℃水浴中保温15～30min，即得。

本发明制得的脂质体的包封率均大于80％，通过投射电镜观察，脂质体圆整，表面光滑，测定粒径得到，脂质体分布较窄，粒径约为80-150nm。

两性霉素B脂质体注射液，可由脂质体膜和包埋在其中水相的两性霉素B组成，两性霉素B和脂质体膜的药/脂比例(w/w)为0.01∶1～1∶3。

所述脂质体膜中含有但不仅限于大豆氢化卵磷脂(HSPC)、胆固醇或和胆固醇硫酸钠和多聚乙烯-乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)等。

所述脂质体膜可由注射用大豆氢化卵磷脂(HSPC)、胆固醇或和胆固醇硫酸钠和多聚乙烯-乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)组成。

本发明提供的脂质体可有效地躲避网状内皮系统的吞噬，稳定性及包封率得到提高，漏出率降低，使脂质体的体循环时间明显延长。此种脂质体在病灶组织中的浓度也显著提高，而在心脏骨髓等脏器的浓度降低，达到降低毒性的作用。

一般情况下，对于本发明的两性霉素B新化合物或其药物组合物在静脉给药时，可溶于50ml以上的氯化钠注射液或5％葡萄糖注射液等容量注射液中滴注。

附图说明

图1为两性霉素B 2水合物的热分析图谱(实施例1)

图2为两性霉素B 2水合物的粉末X衍射图(实施例1)

图3为两性霉素B 1.75水合物的热分析图谱(实施例3)

图4为两性霉素B 3.5水合物的热分析图谱(实施例4)

具体实施方式

除了在实施例中以及另有指示时，说明书和权利要求书中所用的所有的数值应被理解为在所有的实例中以术语“约”进行修饰，因此，除非有相反的指示，本说明书和所附的权利要求书中所给出的数值参数是近似值，其可以根据通过本公开内容所寻求的所需要性质而改变，最起码地，并且不是意欲限制等同原则权利要求范围的应用，每个数值参数应考虑有效数字的数和常规四舍五入方法来解释。

虽然设定公开内容的宽范围的数值范围和参数是近似值。但是在具体实施例中所给出的数值被尽可能精确地报道，任意数值本质上包含某些由在它们各自的测试中发现的标准偏差所必然产生的误差。

需要指出的是，除非文中明确地另外说明，在本说明书和附加的权利要求中使用的单数形式“一个”、“一种”以及“该”包括指代物的复数形式，所以，例如，如果提及含有“一种化合物”的组合物时包括两种或多种化合物的混合物，另外需要注意的是，除非本文明确地另外说明，术语“或”通常包括“和/或”。

如本文所用，术语“得到”，或“获得”是指有价值的含量或纯度水平分离得到的化合物，所述的含量和纯度水平包括但不限于大于90％、95％、96％、97％、98％和99％的含量和纯度水平。所述的含量或纯度水平可以通过但不限于关于两性霉素B的药典标准中规定的高效液相色谱方法或其它文献方法测定。采用傅立叶变换红外光谱仪测定样品红外光谱数据，所使用的仪器包括Nexus智能型傅立叶变换红外光谱仪(Thermo Nicolet)等。

本“溶剂合物”在此处是指还包括渗入到晶体结构中的溶剂分子的分子、原子和/或离子的晶型，溶剂合物的溶剂分子可处于规则排列和/或无序排列，本发明的溶剂合物是溶剂水合物。

多晶型在此处是指具有相同的化学组成但形成晶体的分子、原子和/或离子的空间排列不同的晶体。

药物组合物：本文所用“药物组合物”是指药物的组合物，所述的药物组合物可以含有至少一种药学上可接受的辅料或载体。

本文所用“药学上可接受的辅料或载体”是指适用于本文所提供的化合物给药的药用载体或溶媒，包括本领域技术人员公知的适用于特定给药方式的任何此类载体。

在本发明中，除非有其他说明，其药学上可接受的盐或溶剂合物或其包合物中的“其”代表其中之一或它们的或它们中的任一。

在本发明中，除非有其他说明，“适量”代表完成本发明所需要的较佳或最佳的量或最低需要的量或质量或重量或体积等。

在本发明中，除非有其他说明，“该组合或其组合”表示所述各元件的多组分混合物，例如两种、三种、四种以及直到最大可能的多组分混合物。

在本发明中，除非有其他说明，所有“份”和百分数(％)可以是指重量份数或重量百分数或重量体积百分数。

凡是无菌原料均在无菌环境或GMP规范的洁净环境下制备，符合制药工业中的GMP规范洁净环境选自但不仅限于100级洁净区环境或1万级洁净环境等，在制备无菌原料时，使用无菌注射用水或无菌溶剂等溶剂或原辅料或包材或设施，并对设备、设施和环境进行洁净处理或和灭菌。

两性霉素B无水物：可取市售两性霉素B无水物样品进行实验，或取市售两性霉素B样品或按文献方法制备的，在真空干燥箱中80℃左右高真空干燥约4小时后，然后在真空干燥箱放置盛有足量氢氧化钠的三角瓶，在室温下继续保持较高真空下干燥三天，得两性霉素B无水物，卡尔费休法测定其水分含量约≤0.7％。

为了进一步了解本发明，下面结合实施例对本发明优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本发明的特征和优点，而不是对本发明权利要求的限制。

红外光谱：溴化钾压片，测定样品红外光谱数据，所使用的仪器包括美国热电公司NICOLET 5700 FTIR Spectrometer，Nexus智能型傅立叶变换红外光谱仪(ThermoNicolet)等。红外光谱仪仪器公司名称：美国热电公司NICOLET 5700 FTIR Spectrometer，使用功能:中红外4000-400cm

热分析方法

测试条件：Setaram公司Setsys 16，样品量3-10mg左右，升温速度：10K/min，N2流速：50ml/min，温度：一般为室温～400℃左右。

令人意外的是，特征性的，本发明的水合物的热分析(TG-DTA或者TG-DSC)图谱的失重平台下具有对应的吸热峰，热分析图谱显示出两性霉素B的结晶水合物，如其2水合物等。

粉末X衍射法

利用D/MX-ⅢA X射线衍射仪，电压：约30-60kv，电流：约30-100mA，扫描速度：10°/min，铜靶，波长wavelength(A):1.54，衍射角2θ，扫描范围3-60°，测定了两性霉素B结晶水合物的粉末X射线衍射图，全部峰位置在±0.2° 2θ内；或利用德国Bruker公司的D8Advance X射线衍射仪，波长

本说明书中的实施例1的附图2与下列数据互为佐证。

具体实施例

实施例1两性霉素B 2水合物的制备(两性霉素Bω型化合物)

在250ml烧瓶中加两性霉素B 10g，加二甲基亚砜8ml、加甲醇120ml、异丙醇10ml，水50ml，通氮气保护，搅拌，温度维持在30-45℃左右，加入8％的氢氧化钠溶液，调节pH值到约7.4，搅拌至全溶，加少量活性炭搅拌15分钟左右过滤，滤液中加入60％的乳酸溶液，调节pH值到约5.5，加二氯甲烷8ml，搅拌，0～-10℃之间放置，待沉淀充分析出，抽滤，少量氯仿、水和乙醇洗三次，抽滤，所得固体摊薄在烘箱中50℃左右鼓风干燥3h，得黄色固体约6.5g；鉴别：①HPLC：含量测定中HPLC的主峰保留时间与两性霉素B对照品的HPLC的主峰保留时间一致；②酸度参照2015年版药典二部两性霉素B项下方法):取本品，加水制成3％的混悬液，依法测定，pH值为5.66；卡氏法测定水分为3.86％,热分析:平台失重约3.93％(见附图1)，在约140℃前的失重平台下具有对应的吸热峰(DTA)，这与样品含有2个结晶水的结果(理论值3.75％)在误差范围内；红外光谱(ν

实施例2两性霉素B 2水合物的制备(两性霉素Bω型化合物)

在250ml烧瓶中加两性霉素B 10g，加二甲基甲酰胺10ml、加95％乙醇120ml，丙酮50ml，水40ml，通氮气保护，搅拌，温度维持在35-50℃之间，加入5％的氢氧化钾溶液，调节pH值到约7.1，搅拌使溶解，加少量活性炭搅拌20分钟左右过滤，滤液中加入40％的乳酸溶液，调节pH值到约5.5，加三氯甲烷5ml，搅拌，0～-10℃之间放置，待沉淀充分析出，抽滤，少量水和乙醇洗四次，抽滤，所得固体摊薄在烘箱中40℃鼓风干燥3h左右，得黄色结晶固体7.3g；鉴别：①HPLC：归一化含量测定中其HPLC的主峰保留时间与两性霉素B无水物的HPLC的主峰保留时间一致；②酸度(参照2015年版药典二部两性霉素B项下方法):取本品，加水制成3％的混悬液，依法测定，pH值为5.62；卡氏法测定水分为3.86％，热分析:平台失重约3.93％，在约140℃前的失重平台下具有对应的吸热峰(DTA)，这与样品含有2个结晶水的结果(理论值3.75％)在误差范围内；红外光谱(ν

实施例3两性霉素B 1.75水合物的制备(两性霉素Bγ型化合物)

在250ml烧瓶中加两性霉素B 10g，加二甲基亚砜5ml、加95％乙醇80ml，异丙醇30ml，水40ml，通氮气保护，搅拌，温度维持在35-40℃之间，加入6％的氢氧化钠溶液，调节pH值到约7.5，搅拌至溶解，加少量活性炭搅拌20分钟左右过滤，滤液中加入40％的乳酸溶液，调节pH值到约5.5，加二氯乙烷5ml，搅拌，0～-10℃之间放置，待沉淀充分析出，抽滤，少量水和乙醇洗四次，抽滤，所得固体摊薄在烘箱中40℃真空干燥3h左右，得黄色结晶固体约7.0g；鉴别：①HPLC：归一化含量测定中其HPLC的主峰保留时间与两性霉素B无水物的HPLC的主峰保留时间一致；②酸度(参照2015年版药典二部两性霉素B项下方法):取本品，加水制成3％的混悬液，依法测定，pH值为5.62；卡氏法测定水分为3.41％，热分析:平台失重约3.33％(见附图3)，在约140℃前的失重平台下具有对应的吸热峰(DTA)，这与样品含1.75个结晶水的结果(理论值3.30％)在误差范围内；两性霉素B含量(参照2015年版药典二部两性霉素B项下方法)：1036IU/mg。

实施例4两性霉素B 3.5水合物的制备(两性霉素Bν型化合物)

在250ml烧瓶中加两性霉素B 10g，加二甲基亚砜5ml、加95％乙醇100ml，四氢呋喃50ml，水50ml，通氮气保护，搅拌，温度维持在50-60℃之间，加入6％的氢氧化钠溶液，调节pH值到约7.3，搅拌至溶解，加少量活性炭搅拌20分钟左右过滤，滤液中加入20％的乳酸溶液，调节pH值到约5.5，加二氯乙烷5ml，搅拌，0～-10℃之间放置，待沉淀充分析出，抽滤，固体用少量水和甲醇洗三次，抽滤，所得固体摊薄在烘箱中35℃鼓风干燥4h左右，得黄色结晶固体7.2g；鉴别：①HPLC：含量测定中其HPLC的主峰保留时间与两性霉素B无水物的HPLC的主峰保留时间一致；②酸度(参照2015年版药典二部两性霉素B项下方法):取本品，加水制成3％的混悬液，依法测定，pH值为5.64；卡氏法测定水分为6.31％，热分析:平台失重约6.37％，在约140℃前的失重平台下具有对应的吸热峰(DTA)(见附图4)，这与样品含有3.5个结晶水的结果(理论值6.39％)在误差范围内。两性霉素B含量(参照2015年版药典二部两性霉素B项下方法)：1013IU/mg。

实施例5两性霉素B结晶水合物冻干粉针的制备(处方：1000瓶)

处方：两性霉素B结晶水合物(按实施例1或实施例2法制备，主药重量以两性霉素B计)10g，去氧胆酸钠40g，山梨醇40g，三乙醇胺2g，EDTA二钠2水合物0.1g，1M左右的乳酸和磷酸三钠溶液，适量，注射用水适量；

取处方量的两性霉素B结晶水合物、山梨醇、去氧胆酸钠、三乙醇胺、EDTA二钠2水合物于配液罐中，加注射用水1500ml左右，用1M左右的乳酸和磷酸三钠溶液调节pH为7.5～8.0，搅拌使溶，加注射用水使得溶液体积至2000ml左右，加活性碳0.01％(W/V)搅拌30min，用0.22微米微孔滤膜过滤，按主药重量10mg/瓶分装，-55～-45℃冷冻约4小时，-45～-10℃真空冷冻干燥约10小时，-10～30℃真空干燥约6小时，压塞，轧铝盖得成品。

实施例6两性霉素B结晶水合物冻干粉针的制备(处方：1000瓶)

处方：两性霉素B结晶水合物(按实施例1或实施例2法制备，主药重量以两性霉素B计)5g，去氧胆酸钠20g，甘露醇50g，精氨酸3g，EDTA钙钠4水合物0.6g，1M左右的乳酸和氢氧化钠溶液适量，注射用水适量；

取处方量的两性霉素B结晶水合物、去氧胆酸钠、精氨酸、甘露醇、EDTA钙钠于配液罐中，加注射用水2000ml左右，用1M左右的乳酸和氢氧化钠溶液调节pH约为7.5，搅拌使溶，加注射用水使得溶液体积至2500ml左右，加活性碳0.02(W/V)搅拌15-30min，过滤，用0.22微米微孔滤膜过滤，按主药重量5mg/瓶分装，-50～-40℃冷冻约4小时，-45～-10℃真空冷冻干燥约25小时，-10～26℃真空干燥约6小时，压塞，轧铝盖得成品。

实施例7两性霉素B新化合物冻干粉针的制备(处方：1000瓶)

处方：两性霉素B结晶水合物(按实施例1法制备)10g，去氧胆酸钠50g，山梨醇40g，EDTA钙钠4水合物0.2g，葡甲胺6g，2M苹果酸溶液和1M氢氧化钠溶液适量、加注射用水至全量3000ml

制备工艺：按处方称取或制备原辅料，在配液罐中将处方量的各组分依次用适量新鲜的注射用水搅拌，再用适量的苹果酸溶液和氢氧化钠溶液调节pH值至7.8，搅拌使溶，补加注射用水至全量，搅拌均匀并循环过滤0.22μm微孔滤膜，滤液按按主药重量10mg/瓶分装，-45～-35℃冷冻约4小时，-45～-10℃真空冷冻干燥约18小时，-10～20℃真空干燥约6小时，压塞，轧铝盖得成品。

实施例8两性霉素B新化合物冻干粉针的制备(处方：200瓶)

处方：两性霉素B结晶水合物(按实施例2法制备，按无水物计重量)1g，去氧胆酸钠4g，磷酸氢二钠1g，山梨醇50g，EDTA钙钠4水合物0.05g，2M柠檬酸溶液和1M氢氧化钠溶液适量、加注射用水至全量600ml

制备工艺：按处方称取或制备原辅料，在配液罐中将处方量的各组分依次用适量新鲜的注射用水搅拌，再用适量的柠檬酸溶液和氢氧化钠溶液调节pH值至7.6，搅拌使溶，补加注射用水至全量，搅拌均匀并经0.22μm微孔滤膜过滤两次，滤液用3ml注射剂抽取溶液按3ml/支分装，-55～-40℃冷冻约4小时，-45～-10℃真空冷冻干燥约16小时，-10～25℃真空干燥约6小时，压塞，轧铝盖得成品。

实施例9两性霉素B新化合物冻干粉针的制备(处方：200瓶)

处方：两性霉素B新化合物(按实施例4法制备，按无水物计重量)2g，去氧胆酸钠7g，磷酸氢二钠2g，葡甲胺3g、山梨醇50g，EDTA钙钠4水合物0.1g，2M苹果酸溶液和1M氢氧化钠溶液适量、加注射用水至全量600ml

制备工艺：按处方称取或制备原辅料，在配液罐中将处方量的各组分依次用适量新鲜的注射用水搅拌，再用适量的苹果酸溶液和氢氧化钠溶液调节pH值至7.6，搅拌使溶，补加注射用水至全量，搅拌均匀并经0.22μm微孔滤膜过滤两次，滤液用3ml注射剂抽取溶液按3ml/支灌装于安瓿中，-50～-40℃冷冻约4小时，-45～-10℃真空冷冻干燥约24小时，-10～25℃真空干燥约6小时，压塞，轧铝盖得成品。

实施例10：两性霉素B新化合物胶囊的制备(处方1000粒)

处方：两性霉素B新化合物 5g

微晶纤维素 40g

硬脂酸镁 0.5g

将处方量的两性霉素B新化合物(按实施例1方法制备)、微晶纤维素和硬脂酸镁过100目筛，充分混匀，灌装于2号胶囊。

实施例11：两性霉素B新化合物胶囊的制备(处方1000粒)

将处方量的两性霉素B新化合物(按实施例2方法制备)、微晶纤维素、β-环糊精和硬脂酸镁过100目筛，充分混匀，灌装于1号胶囊。

实施例12：两性霉素B新化合物胶囊的制备(处方1000粒)

将处方量的两性霉素B新化合物(按实施例3方法制备)、表没食子儿茶素没食子酸酯、微晶纤维素和硬脂酸镁过100目筛，混匀，灌装于1号胶囊。

实施例13两性霉素B新化合物片(处方1000片)

将处方量的两性霉素B新化合物(按实施例1法制备)、速溶山梨醇、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、硬脂酸镁过100目筛，混匀，压成大片，再将该片研压成18－24目筛的颗粒，加过100目筛硬脂酸镁，混匀，压片。

实施例14两性霉素B新化合物软膏的制备(规格10g/支)

处方：两性霉素B新化合物10g，精氨酸8g，牛磺酸1g，维生素E琥珀酸聚乙二醇酯10g，聚乙二醇4000 12g，注射用水150ml，EDTA2钠4水合物1g，硬脂醇30g、羊毛脂30g，黄凡士林加至1000g；

制备方法：取处方量的本发明的两性霉素B新化合物、精氨酸、牛磺酸、维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、EDTA2钠4水合物于适量的注射用水的小不锈钢小桶中，加热搅拌使溶解，备用；另取聚乙二醇4000、硬脂醇、羊毛脂、黄凡士林置适宜的有盖容器中，加热熔化，加灭菌液状石腊混匀，作为基质；当基质温度降至70-80℃左右时，将已溶解的含两性霉素B新化合物的备用物在快速搅拌下，加入基质中，边加边搅拌，再加黄凡士林至全量，含量测定，分装，即得。

以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了详细说明，不过应理解，这些说明并不对本发明的范围构成任何限制，相关技术人员明显能在在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下，可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换与组合，来实现本发明技术，这些均因落入本发明的保护范围内。特别需要指出的是，可以理解，很多细节的变化是可能的，所有相类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明的精神、范围和内容中，本发明并不限于上述实施例。