使用紫杉烷纳米颗粒治疗宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌的局部疗法

摘要

公开了用于局部治疗宫颈上皮内瘤变(CIN)和/或宫颈癌的方法，其使用包含紫杉醇或其他紫杉烷的纳米颗粒的组合物。

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年3月16日提交的美国临时申请第62/643861号的权益。所引用的申请的内容通过引用结合到本申请中。

技术领域

本发明总体上涉及宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌的局部治疗领域。特别地，本发明涉及包含紫杉烷纳米颗粒的局部用组合物在治疗CIN和宫颈癌中的用途。

背景技术

宫颈上皮内瘤变(CIN)，也称为宫颈异型增生，是一种癌前期(癌前)病症，其特征是宫颈(宫颈上皮)表面包括外宫颈部、宫颈鳞柱状上皮交界处和/或宫颈内膜的细胞/细胞生长异常(病变)。人乳头状瘤病毒(HPV)通常是导致CIN的原因。可以通过细胞学诊断(例如巴氏涂片)、阴道镜检查和/或宫颈活检组织学评估来检测CIN病变。在通过细胞学诊断如异常的巴氏涂片进行初步检测后，可通过阴道镜检查和/或宫颈活检的组织学评估完成CIN的进一步诊断和分级。CIN通常分为三种组织学分类：CIN 1、CIN 2和CIN 3。CIN 1被认为是低度CIN。CIN 2和CIN 3被认为是高度CIN。另一种组织学分类是CIN 2/3，它是CIN 2和CIN 3的组合，具有CIN 2和CIN 3的特征。CIN 2/3被认为是高度CIN。CIN的组织学分类标准如下：

CIN 1：轻度异型增生或轻度核异质。通过宫颈上皮深度的细胞成熟良好，核异常最小，分裂象很少。未分化的细胞被限制在上皮的较深/较低的三分之一处。分裂象不是很多。可以在上皮的整个厚度中观察到由于HPV感染引起的细胞病变。

CIN 2：中度异型增生或中度核异质。异型增生的改变主要限于上皮的下半部或下三分之二，其中核异常比CIN 1更明显。在上皮的整个下半部可以看到分裂象。

CIN 3：重度异型增生或重度核异质。分化和分层可能是完全不存在的，或者仅存在于具有许多分裂象的上皮的浅表四分之一中。核异常遍布上皮的整个厚度。许多分裂象具有异常形式。

CIN的组织学分类对应于以下两种细胞学分类：CIN 1对应于低度鳞状上皮内病变(LSIL)；CIN 2和CIN 3以及CIN 2/3对应于高度鳞状上皮内病变(HSIL)。

如果不及时治疗，CIN可能会发展为浸润性宫颈癌。绝大多数低度CIN(CIN 1)在无需医疗干预的情况下在不到两年的时间内消退；大约20％的CIN 2会发展为CIN 3；4％至5％的CIN 3会发展为浸润性癌症(Petry,Management options for cervicalintraepithelial neoplasia.Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol.2011Oct；25(5):641-51；和Insinga等人,Epidemiologic natural history and clinical management ofhuman papillomavirus(HPV)disease:A critical and systematic review of theliterature in the development of an HPV dynamic transmission model.BMCInfectious Disease.2009；9:119)。

考虑到CIN与宫颈癌之间的关联以及宫颈癌的转移和死亡的可能性，大多数具有高度CIN(CIN 2和/或CIN 3)并且在某些情况下具有持续性低度CIN(CIN 1)的女性，接受治疗。高度CIN通常通过冷冻疗法、宫颈环切电切术(LEEP)或冷刀锥切术(CKC)进行治疗(Santesso等人,Systematic reviews and meta-analyses of benefits and harms ofcryotherapy,LEEP,and cold knife conization to treat cervical intraepithelialneoplasia.Int J Gynecol Obstet.2016；132:266-271)。这些疗法对CIN治愈率高。然而，它们与诸如出血或疼痛之类的立即的不良事件以及不孕、流产和早产等长期问题有关(Santesso等人,2016；和de Witte等人,Imiquimod in cervical,vaginal and vulvarintraepithelial neoplasia:A review.Gynecol Oncol.2015；139:377-384)。在宫颈上皮中局部应用咪喹莫特已显示出对高度CIN具有一定治疗效果。尽管频频出现不良反应如阴道排液、外阴痛、发烧、头痛和疲劳，但通常耐受性良好。此外，咪喹莫特可能对皮肤及其他上皮组织引起局部刺激和反应。美国公开第2013/0211384号公开了使用具有与宫颈接触的药物递送部分的多组分可植入医疗装置将TAXOL局部递送到宫颈以治疗CIN的方法。但是，可植入装置必须在宫颈中保留很长时间，并且会产生不适感。在US 9056137中公开了用于治疗CIN的局部用制剂。所述制剂被设计为在室温下为固体，其响应于生理温度而熔化成可流动的组合物。例如，在实例中，将固体棒状制剂插入小鼠的宫颈管中，固体棒状制剂然后原位转化成凝胶状制剂。‘137专利中的固相制剂可以包含化学治疗剂、丙二醇、渗透促进剂月桂氮卓酮(AZONE)和泊洛沙姆。该组合物被设计用于化学治疗剂的透皮和透黏膜递送。月桂氮卓酮可能会伴随局部刺激，因为在Draize兔皮肤试验模型中已观察到使用月桂氮卓酮出现水肿和红斑(Okabe等人,Percutaneous absorption enhancing effect and skinirritation of monocyclic monoterpenes,Drug Des Deliv,1990Sep；6(3)229-38)。因此，迫切需要一种有效治疗CIN而无疼痛且局部刺激或反应低至可忽略不计的方法。

大多数宫颈癌是鳞状细胞癌或腺癌。但是，不常见的宫颈癌类型包括黑素瘤、肉瘤和淋巴瘤。宫颈癌使用TNM系统进行分级。确定了TNM评分后，全部宫颈癌分级分配如下：I期(1期宫颈癌)：IA1期、IA2期、IB1期、IB2期；II期(2期宫颈癌)：IIA期、IIB期；III期(3期宫颈癌)：IIIA期、IIIB期；IV期(4期宫颈癌)：IVA期、IVB期。当前的宫颈癌治疗方法包括外科手术(冷冻手术、激光手术、锥切术、子宫切除术、宫颈切除术、盆腔清除术)、放射疗法、免疫疗法、静脉化疗和贝伐单抗靶向治疗。手术和放射治疗可能会产生不良的副作用，例如疼痛和出血。免疫疗法、静脉化疗和靶向疗法的副作用可能是全身毒性，例如恶心、呕吐、食欲不振、脱发、口疮和疲劳。

由于皮肤角质层的屏障特性以及上皮组织的病变中上皮的增厚和纤维生长，将治疗药物递送到皮肤和其他上皮组织的病变中可能是一个挑战。将水溶性差的药物递送到这些组织中甚至是更大的挑战。已将渗透促进剂例如月桂氮卓酮(AZONE)、二甘醇单乙醚(DGME或TRANSCUTOL)和肉豆蔻酸异丙酯用于局部用药物制剂中以增加药物对皮肤的渗透，并且对阴道/宫颈上皮组织也有一定功效。但是，某些渗透促进剂例如溶剂和表面活性剂可能会刺激皮肤和阴道/宫颈上皮。挥发性硅酮液已用于局部用制剂，以增加药物对皮肤的渗透。但是，需要使用高浓度的挥发性硅酮液，即大于等于25％的挥发性硅酮液和/或挥发性硅酮液与其他潜在的刺激皮肤的化合物的组合，例如与醇，例如C

紫杉烷，包括紫杉醇和多西他赛，已经用于治疗癌症多年。这些化合物的典型表征为水溶性差。最初为静脉(IV)输注而开发的癌症治疗制剂

发明内容

本发明提供了本领域中与宫颈上皮内瘤变(CIN)和/或宫颈癌的治疗有关的前述限制和不足的解决方案。公开了一种局部疗法，其利用具有增强渗透作用的局部用组合物将紫杉烷纳米颗粒递送至CIN和/或宫颈癌，从而提供了具有低至可忽略的局部刺激性的有效治疗方法。在某些情况下，可以使用本发明的治疗方法，而无需将它们与其他已知的治疗方法如上述方法相结合。

在本发明的一个方面，公开了一种在需要治疗的对象中治疗宫颈上皮内瘤变(CIN)和/或宫颈癌的方法，该方法包括向对象的患处局部施用(局部应用)包含多个紫杉烷纳米颗粒的组合物来治疗CIN和/或宫颈癌。CIN或宫颈癌的“患处”包括宫颈上皮的区域，包括外宫颈、鳞柱状上皮交界处和/或宫颈内膜，其中可以通过细胞学诊断(例如巴氏涂片)、阴道镜检查和/或宫颈活检组织学评估来检测一种或多于一种CIN病变或宫颈癌肿瘤。患处可以包括一个或多于一个病变或肿瘤附近的宫颈上皮区域，病变或肿瘤可能包含无法检测到的临床前病变。在一些实施方案中，紫杉烷纳米颗粒悬浮在组合物中。在其他实施方案中，紫杉烷纳米颗粒的平均粒度(数均)为0.1微米至1.5微米，或0.1微米至小于1微米。在各种实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒或这些纳米颗粒的任意组合。在一些实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒。在一些实施方案中，紫杉醇纳米颗粒的比表面积(SSA)为至少18m

在一些实施方案中，CIN是CIN 1。在一些实施方案中，CIN是CIN 2。在一些实施方案中，CIN是CIN 3。在一些实施方案中，CIN是CIN 2/3。在一些实施方案中，CIN是CIN 2、CIN3或CIN 2/3。在一些实施方案中，宫颈癌是鳞状细胞癌或腺癌。在一些实施方案中，宫颈癌是I期、II期、III期或IV期宫颈癌。

在一些实施方案中，方法还包括在将组合物施用于患处之后将宫颈帽置于宫颈上方。在其他实施方案中，方法不包括在将组合物施用于患处之后将宫颈帽置于宫颈上方。

在本发明的另一方面，公开了一种促进紫杉烷纳米颗粒向对象的CIN或宫颈癌的渗透的方法，该方法包括将包含连续的疏水性载体、一种或多于一种挥发性硅酮液和多个紫杉烷纳米颗粒的疏水性组合物局部施用于患处。在一些实施方案中，紫杉烷纳米颗粒悬浮在组合物中。在其他实施方案中，紫杉烷纳米颗粒的平均粒度(数均)为0.1微米至1.5微米，或0.1微米至小于1微米。在各种实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒或这些纳米颗粒的任意组合。在一些实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒。在一些实施方案中，紫杉醇纳米颗粒的比表面积(SSA)为至少18m

在一些实施方案中，CIN是CIN 1。在一些实施方案中，CIN是CIN 2。在一些实施方案中，CIN是CIN 3。在一些实施方案中，CIN是CIN 2/3。在一些实施方案中，CIN是CIN 2、CIN3或CIN 2/3。在一些实施方案中，宫颈癌是鳞状细胞癌或腺癌。在一些实施方案中，宫颈癌是I期、II期、III期或IV期宫颈癌。

在一些实施方案中，方法还包括在将疏水性组合物施用于患处之后将宫颈帽置于宫颈上方。在其他实施方案中，方法不包括在将组合物施用于患处之后将宫颈帽置于宫颈上方。在一些实施方案中，紫杉烷纳米颗粒从疏水性组合物向CIN或宫颈癌的渗透大于紫杉烷纳米颗粒从局部施加的包含多个紫杉烷纳米颗粒且不含一种或多于一种挥发性硅酮液的疏水性组合物向CIN或宫颈癌的渗透。

在本发明的另一方面，公开了一种促进紫杉烷纳米颗粒向对象的CIN或宫颈癌渗透的方法，方法包括将包含多个紫杉烷纳米颗粒的疏水性组合物局部施用于患处，其中紫杉烷纳米颗粒从疏水性组合物向CIN或宫颈癌的渗透大于紫杉烷纳米颗粒从局部施用的包含多个紫杉烷纳米颗粒的基于水的组合物向CIN或宫颈癌的渗透。在一些实施方案中，紫杉烷纳米颗粒的平均粒度(数)为0.1微米至1.5微米，或0.1微米至小于1微米。在一些实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒或这些纳米颗粒的任意组合。在一些实施方案中，疏水性组合物还包含疏水性载体。在一些实施方案中，CIN是CIN 1。在一些实施方案中，CIN是CIN 2。在一些实施方案中，CIN是CIN 3。在一些实施方案中，CIN是CIN 2/3。在一些实施方案中，CIN是CIN 2、CIN 3或CIN 2/3。在一些实施方案中，宫颈癌是鳞状细胞癌或腺癌。在一些实施方案中，宫颈癌是I期、II期、III期或IV期宫颈癌。

如通过引用并入本文的国际申请PCT/US16/52133中所公开的，发现与来自单独的疏水性载体的紫杉烷纳米颗粒的皮肤渗透(即渗透到皮肤的表皮和真皮部分)相比，浓度小于25重量％的挥发性硅酮液与无水疏水性载体组合的本发明的疏水性组合物表现出更大的紫杉烷纳米颗粒的皮肤渗透。还出人意料地发现，除了少量的挥发性硅酮液(小于25重量％)以外，向疏水性组合物中添加其他皮肤渗透促进剂对组合物的皮肤渗透几乎没有或没有影响。因此，本发明的组合物可以不含(不必包括)这些另外的皮肤渗透促进剂(例如表面活性剂、挥发性溶剂、醇、C

疏水性组合物包含例如紫杉醇的紫杉烷纳米颗粒和挥发性硅酮液与疏水性载体组合，其特别适合于CIN和/或宫颈癌的局部治疗，因为这些组合物具有上述促进的渗透作用。疏水性载体可以是其中悬浮有纳米颗粒的组合物的连续相。

另外，在本发明的上下文中公开了以下实施方案1至80：

实施方案1是一种在需要治疗的对象中治疗宫颈上皮内瘤变(CIN)或宫颈癌的方法，方法包括向对象的患处局部施用包含多个紫杉烷纳米颗粒的组合物，从而治疗CIN和/或宫颈癌。

实施方案2是实施方案1的方法，其中紫杉烷纳米颗粒悬浮在组合物中。

实施方案3是实施方案1至2中任一项的方法，其中紫杉烷纳米颗粒的平均粒度(数均)为0.1微米至1.5微米。

实施方案4是实施方案3的方法，其中紫杉烷纳米颗粒的平均粒度(数均)为0.1微米至小于1微米。

实施方案5是实施方案1至4中任一项的方法，其中紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒。

实施方案6是实施方案5的方法，其中紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒。

实施方案7是实施方案6的方法，其中紫杉醇纳米颗粒的比表面积(SSA)为至少18m

实施方案8是实施方案7的方法，其中紫杉醇纳米颗粒的比表面积(SSA)为18m

实施方案9是实施方案1至8中任一项的方法，其中紫杉烷纳米颗粒的浓度为有效改善CIN或宫颈癌的治疗的浓度。

实施方案10是实施方案9的方法，其中紫杉醇纳米颗粒的浓度为约0.15重量％至约2重量％。

实施方案11是实施方案1至10中任一项的方法，其中组合物是无水的。

实施方案12是实施方案1至11中任一项所述的方法，其中组合物是疏水性组合物。

实施方案13是实施方案12的方法，其中疏水性组合物包含疏水性载体。

实施方案14是实施方案13的方法，其中疏水性载体是非挥发性的。

实施方案15是实施方案13至14中任一项的方法，其中疏水性载体是非极性的。

实施方案16是实施方案13至15中任一项的方法，其中疏水性载体包括烃。

实施方案17是实施方案16的方法，其中烃是矿脂、矿物油或石蜡或其混合物。

实施方案18是实施方案17的方法，其中矿物油是重质矿物油。

实施方案19是实施方案13至18中任一项的方法，其中疏水性载体大于组合物的50重量％。

实施方案20是实施方案13至19中任一项的方法，其中疏水性组合物包括一种或多于一种挥发性硅酮液。

实施方案21是实施方案20的方法，其中一种或多于一种挥发性硅酮液的浓度为组合物的5重量％至24重量％。

实施方案22是实施方案21的方法，其中挥发性硅酮液是环聚二甲基硅氧烷。

实施方案23是实施方案22的方法，其中环聚二甲基硅氧烷是环五聚二甲基硅氧烷。

实施方案24是实施方案1至23中任一项的方法，其中组合物是半固体组合物。

实施方案25是实施方案24的方法，其中半固体组合物是软膏剂。

实施方案26是实施方案1至25中任一项的方法，其中组合物不包含挥发性C

实施方案27是实施方案1至26中任一项的方法，其中组合物不包含另外的渗透促进剂。

实施方案28是实施方案1至27中任一项的方法，其中组合物不包含另外的挥发性溶剂。

实施方案29是实施方案1至28中任一项的方法，其中组合物不包含表面活性剂。

实施方案30是实施方案1至29中任一项的方法，其中组合物不包含蛋白质或白蛋白。

实施方案31是实施方案1至30中任一项的方法，其中组合物不包含聚合物或共聚物。

实施方案32是实施方案1至31中任一项的方法，其中对象患有CIN，并且其中CIN被治疗。

实施方案33是实施方案32的方法，其中CIN是CIN 1。

实施方案34是实施方案32的方法，其中CIN是CIN 2、CIN 3或CIN 2/3。

实施方案35是实施方案1至34中任一项的方法，其中对象患有宫颈癌，并且其中宫颈癌被治疗。

实施方案36是实施方案1至35中任一项的方法，其中方法还包括在将组合物施用于患处之后将宫颈帽置于宫颈上方。

实施方案37是一种促进紫杉烷纳米颗粒向对象的宫颈上皮内瘤变(CIN)或宫颈癌渗透的方法，方法包括将包含连续疏水性载体、一种或多于一种挥发性硅酮液和多个紫杉烷纳米颗粒的疏水性组合物局部施用于患处。

实施方案38是实施方案37的方法，其中紫杉烷纳米颗粒悬浮在疏水性组合物中。

实施方案39是实施方案37至38中任一项的方法，其中紫杉烷纳米颗粒的平均粒度(数均)为0.1微米至1.5微米。

实施方案40是实施方案39的方法，其中紫杉烷纳米颗粒的平均粒度(数均)为0.1微米至小于1微米。

实施方案41是实施方案37至40中任一项的方法，其中紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒。

实施方案42是实施方案41的方法，其中紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒。

实施方案43是实施方案42的方法，其中紫杉醇纳米颗粒的比表面积(SSA)为至少18m

实施方案44是实施方案43的方法，其中紫杉醇纳米颗粒的比表面积(SSA)为18m

实施方案45是实施方案42至44中任一项的方法，其中紫杉醇纳米颗粒的浓度为约0.15重量％至约2重量％。

实施方案46是实施方案37至45中任一项的方法，其中组合物是无水的。

实施方案47是实施方案37至46中任一项的方法，其中疏水性载体是非挥发性的。

实施方案48是实施方案37至47中任一项的方法，其中疏水性载体是非极性的。

实施方案49是实施方案37至48中任一项的方法，其中疏水性载体包括烃。

实施方案50是实施方案49的方法，其中烃是矿脂、矿物油或石蜡或其混合物。

实施方案51是实施方案50的方法，其中矿物油是重质矿物油。

实施方案52是实施方案37至51中任一项的方法，其中疏水性载体大于组合物的50重量％。

实施方案53是实施方案37至52中任一项的方法，其中一种或多于一种挥发性硅酮液的浓度为组合物的5重量％至24重量％。

实施方案54是实施方案53的方法，其中挥发性硅酮液是环聚二甲基硅氧烷。

实施方案55是实施方案54的方法，其中环聚二甲基硅氧烷是环五聚二甲基硅氧烷。

实施方案56是实施方案37至55中任一项的方法，其中组合物是半固体组合物。

实施方案57是实施方案56的方法，其中半固体组合物是软膏剂。

实施方案58是实施方案56至57中任一项的方法，其中组合物的黏度为25000cps至500000cps，所述黏度是在打开升降功能的升降支架上用Brookfield RV黏度计用T-E转子在室温下以10RPM旋转45秒测量的。

实施方案59是实施方案37至58中任一项的方法，其中组合物不包含挥发性C

实施方案60是实施方案37至59中任一项的方法，其中组合物不包含另外的渗透促进剂。

实施方案61是实施方案37至60中任一项的方法，其中组合物不包含另外的挥发性溶剂。

实施方案62是实施方案37至61中任一项的方法，其中组合物不包含表面活性剂。

实施方案63是实施方案37至62中任一项的方法，其中组合物不包含蛋白质或白蛋白。

实施方案64是实施方案37至62中任一项的方法，其中组合物不包含聚合物或共聚物。

实施方案65是实施方案37至64中任一项的方法，其中对象患有CIN。

实施方案66是实施方案65的方法，其中CIN是CIN 1。

实施方案67是实施方案65的方法，其中CIN是CIN 2、CIN 3或CIN 2/3。

实施方案68是实施方案37至67中任一项的方法，其中对象患有宫颈癌。

实施方案69是实施方案37至68中任一项的方法，其中方法还包括在将疏水性组合物施用于患处之后将宫颈帽置于宫颈上方。

实施方案70是实施方案37至69中任一项的方法，其中紫杉烷纳米颗粒从疏水性组合物向CIN或宫颈癌的渗透大于紫杉烷纳米颗粒从局部施加的包含多个紫杉烷纳米颗粒并且不含一种或多于一种挥发性硅酮液的疏水性组合物向CIN或宫颈癌的渗透。

实施方案71是一种促进紫杉烷纳米颗粒向对象的宫颈上皮内瘤变(CIN)或宫颈癌渗透的方法，方法包括将包含多个紫杉烷纳米颗粒的疏水性组合物局部施用于患处，其中紫杉烷纳米颗粒从疏水性组合物向CIN或宫颈癌的渗透大于紫杉烷纳米颗粒从局部施用包含多个紫杉烷纳米颗粒的基于水的组合物向CIN或宫颈癌的渗透。

实施方案72是实施方案71的方法，其中所述紫杉烷纳米颗粒的平均粒度(数均)为0.1微米至1.5微米。

实施方案73是实施方案72的方法，其中所述紫杉烷纳米颗粒的平均粒度(数均)为0.1微米至小于1微米。

实施方案74是实施方案71至73中任一项的方法，其中紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒。

实施方案75是实施方案71至74中任一项的方法，其中疏水性组合物还包含疏水性载体。

实施方案76是实施方案71至75中任一项的方法，其中对象患有CIN。

实施方案77是实施方案76的方法，其中CIN是CIN 1。

实施方案78是实施方案76的方法，其中CIN是CIN 2、CIN 3或CIN 2/3。

实施方案79是实施方案71至78中任一项的方法，其中对象患有宫颈癌。

实施方案80是实施方案71至79中任一项的方法，其中疏水性组合物包含其中悬浮多个紫杉烷纳米颗粒的连续疏水相。

本文关于紫杉烷颗粒使用的术语“纳米颗粒”、“纳米粒子”和“纳米微粒”表示紫杉烷颗粒的平均粒度(基于数均加权的微分分布，表示为“数均”)，其为0.01微米至1.5微米(10nm至1500nm)或优选为0.1微米至1.5微米(100nm至1500nm)，或更优选为0.1微米至小于1微米(100nm至小于1000nm)。

如本文所使用的，术语“水溶性”描述了在室温下在水中具有大于10mg/mL或更高的溶解度的化合物。

如本文所使用的，术语“水溶性差”描述了在室温下在水中的溶解度小于或等于10mg/mL的化合物。

如本文所使用的，术语“疏水性”描述了在室温下在水中的溶解度小于或等于10mg/mL的化合物、组合物或载体。

如本文所使用的，术语“挥发性”描述在室温下的蒸气压大于或等于10Pa的化合物、组合物或载体。

如本文所使用的，术语“非挥发性”描述了在室温下的蒸气压小于10Pa的化合物、组合物或载体。

如本文关于本发明的组合物或载体所使用的术语“无水的”是指组合物或载体中存在小于3重量％，优选小于2重量％，更优选小于1重量％，或最优选0重量％的水。这可以解释存在少量的水(例如，组合物或载体的任何成分中固有地包含的水，从大气中获取的水等)。

如本文所使用的，术语“皮肤”或“皮肤的”是指表皮和/或真皮。

术语宫颈上皮内瘤变(CIN)或宫颈癌的“患处”包括宫颈上皮的区域，包括外子宫颈、鳞柱状上皮交界处和/或宫颈内膜，其中可以通过细胞学诊断(例如巴氏涂片)、阴道镜检查和/或宫颈活检组织学评估来检测一种或多于一种CIN病变或宫颈癌肿瘤。患处可以包括一个或多于一个病变或肿瘤附近的宫颈上皮区域，该病变或肿瘤可能包含无法检测到的临床前病变。

如本文所使用的，术语“对象”或“患者”是指脊椎动物。在一些实施方案中，脊椎动物可以是哺乳动物。在一些实施方案中，哺乳动物可以是灵长类动物，包括人。

如本文所使用的，术语“室温”(RT)是指20℃至25℃。

如本文所使用的，术语“渗透促进剂”或“皮肤渗透促进剂”是指有助于药物吸收到皮肤(表皮和真皮)中的化合物或材料或物质。

如本文所使用的，术语“表面活性剂”或“表面活性助剂”是指表现出降低水的表面张力或降低两种不混溶的物质之间的界面张力的能力的化合物或材料或物质。

除非另有说明，否则本文中表示的百分比值是重量，并且是相对于组合物的总重量而言的。

术语“约”或“大约”定义为如本领域普通技术人员所理解的接近于。在一个非限制性实施方案中，术语定义为10％以内，优选5％以内，更优选1％以内，最优选0.5％以内。

对于本申请，可以使用标准舍入准则将具有一个或多于一个小数位的数字值舍入为最接近的整数，即，如果待舍入的数字为5、6、7、8或9，则将其舍入；如果要舍入的数字为0、1、2、3或4，则将其舍去。例如，可以将3.7舍入为4。

词语“包含”、“具有”、“包括”或“含有”是包括性的或开放式的，并且不排除附加的、未列举的要素或方法步骤。

当与术语“包含”、“具有”、“包括”或“含有”的一起使用时，要素前面不使用数量词可以表示“一个”，但是其也符合“一个或更多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的意思。

使用的组合物和方法可以“包含”、“基本组成为”或“组成为”本说明书通篇所公开的成分或步骤中的任一个。关于短语“基本组成为”，本发明的组合物的基本和新颖的性质是它们局部治疗CIN和/或宫颈癌的能力。关于本发明的疏水性组合物，基本的和新颖的性质包括治疗CIN或宫颈癌的能力以及渗透到宫颈上皮组织并不穿透上皮组织进入血流的能力。无需使用C

当“有限的”、“减少的”或“最小的”修饰短语“经皮渗透”时，其指其中通过体外Franz扩散池系统测定，当将组合物施用于人尸体皮肤时，其中少于0.01μg/cm

预期对于本发明的任何方法或组合物，都可以实施本说明书中所讨论的任何实施方案，反之亦然。此外，本发明的组合物可以用于实现本发明的方法。

通过下面的详细说明，本发明的其他目的、特征和优点会变得明显。然而，应该理解详细说明和具体实施例在表明本发明的具体实施方案时仅通过举例说明的方式给出，因为对本领域技术人员而言，在本发明的精神和范围内的各种变化和修改通过该详细说明会变得明显。

附图说明

图1图示了配方F1至F7的从体外递送到表皮中的紫杉醇的浓度(μg/cm2)。

图2图示了配方F6*(重复分析)和F8至F13的从体外递送到表皮中的紫杉醇的浓度(μg/cm2)。

图3图示了配方F1至F7的从体外递送到真皮中的紫杉醇的浓度(μg/cm2)。

图4图示了配方F6*(重复分析)和F8至F13的从体外递送到真皮中的紫杉醇的浓度(μg/cm2)。

具体实施方式

在一些方面，本发明涉及治疗患者的宫颈上皮内瘤变(CIN)和/或宫颈癌的方法，其通过将包含紫杉烷的组合物局部施用于患处(局部疗法)，从而治疗CIN和/或宫颈癌。在一些实施方案中，紫杉烷是紫杉醇。在其他实施方案中，紫杉烷是多西他赛或卡巴他赛。在其他实施方案中，可以使用紫杉烷的组合(例如，紫杉醇和多西他赛，或紫杉醇和卡巴他赛，或多西他赛和卡巴他赛，或紫杉醇、多西他赛和卡巴他赛)。在一些实施方案中，组合物包含载体。在一些实施方案中，载体是无水的和/或疏水的。在其他方面，载体是含水的。在一些实施方案中，紫杉烷是多个紫杉烷纳米颗粒。在其他实施方案中，紫杉烷是溶解的。在国际专利申请第PCT/US16/52133号中公开了用于本发明方法的合适的组合物，其通过引用并入本文。在一个优选的实施方案中，组合物是疏水性组合物，其包含连续的疏水性载体、一种或多于一种挥发性硅酮液和多个紫杉烷纳米颗粒，其中紫杉烷纳米颗粒悬浮在组合物中，并且其中紫杉烷纳米颗粒的平均粒度为0.1微米至1.5微米或0.1微米至小于1微米。在一些实施方案中，一种或多于一种挥发性硅酮液的浓度为5重量％至24重量％。在一些实施方案中，组合物不包含挥发性的C

宫颈上皮内瘤变(CIN)包括CIN的所有组织学分类/分级，包括但不限于低度CIN(CIN 1)和高度CIN(CIN 2、CIN 3和/或CIN 2/3)；以及CIN的所有细胞学分类，包括低度鳞状上皮内病变(LSIL)和高度鳞状上皮内病变(HSIL)。宫颈癌包括所有类型的宫颈癌和所有阶段的宫颈癌，所有类型的宫颈癌包括但不限于鳞状细胞癌、腺癌、黑素瘤、肉瘤和淋巴瘤；所有阶段的宫颈癌包括但不限于I期(1期宫颈癌)：IA1期、IA2期、IB1期、IB2期；II期(2期宫颈癌)：IIA期、IIB期；III期(3期宫颈癌)：IIIA期、IIIB期；IV期(4期宫颈癌)：IVA期、IVB期。

I.组合物

在本发明的一方面，本发明的组合物是疏水的并且包含连续的疏水性载体、一种或多于一种挥发性硅酮液(例如环聚二甲基硅氧烷)和多个紫杉烷纳米颗粒。当将组合物施用于患处时，它可以是可流动的或可铺展的。组合物可以是多个紫杉烷纳米颗粒在疏水性载体和挥发性硅酮液的混合物中的悬浮液。紫杉烷纳米颗粒可以完全分散或部分分散和部分溶解在组合物中。在各种实施方案中，紫杉烷纳米颗粒未完全溶解在组合物中。疏水性组合物可以是无水的。疏水性组合物是其中组合物中的疏水性成分的总量大于组合物中的非疏水性成分的总量的组合物。疏水性载体可以是疏水性组合物的连续相。因此，本发明的组合物可以包含至少两个相，连续的疏水性载体相和悬浮的紫杉烷纳米颗粒相。挥发性硅酮液可以在连续相内溶解和/或分散。

出人意料的是，与来自单独的疏水性载体的紫杉烷纳米颗粒的皮肤渗透(即渗透到皮肤的表皮和/或真皮部分)相比，包含低浓度，即浓度小于25重量％的挥发性硅酮液与连续的无水疏水性载体组合的本发明的疏水性组合物表现出更大的紫杉烷纳米颗粒的皮肤渗透。实际上，甚至更出人意料的是，添加其他皮肤渗透促进剂对这些组合物的皮肤渗透几乎没有影响或无影响。然而，值得注意的是，紫杉烷纳米颗粒没有渗透皮肤(即经皮渗透)，或者只有可忽略量的经皮渗透，即小于0.01μg/cm

在一些实施方案中，疏水性组合物是半固体组合物，包括软膏剂，并且其黏度通过Brookfield RV黏度计在室温下测量为12500cps至247500cps或25000cps至150000cps，所述Brookfield RV黏度计使用具有SC4-14转子和6R腔的小样品适配器，转速为5rpm，平衡时间为2分钟。进行疏水性半固体组合物黏度测量的另一种方法是在打开升降功能的升降支架上用Brookfield RV黏度计用T-E转子在室温下以10RPM运转45秒测量的。在一些实施方案中，疏水性组合物是半固体组合物，包括软膏剂，并且在打开升降功能的升降支架上用Brookfield RV黏度计用T-E转子在室温下以10RPM运转45秒测量的黏度为25000cps至500000cps、或25000cps至400000cps、或25000cps至350000cps、或25000cps至300000cps、或50000cps至500000cps、或50000cps至400000cps、或50000cps至350000cps、或50000cps至300000cps、或75000cps至500000cps、或75000cps至400000cps、或75000cps至350000cps、或75000cps至300000cps、或100000cps至500000cps、或100000cps至400000cps、或100000cps至350000cps、或100000cps至300000cps。

在另一方面，本发明涉及抑制载体中紫杉烷纳米颗粒的晶体生长的组合物。在一些实施方案中，抑制载体中紫杉烷纳米颗粒的晶体生长是通过将纳米颗粒包含在疏水性载体中来实现的。在一些实施方案中，疏水性载体包括烃。在一些实施方案中，疏水性载体包括矿脂、矿物油和/或石蜡。在一些实施方案中，矿物油是重质矿物油。在其他实施方案中，疏水性载体还包含一种或多于一种挥发性硅酮液。在另外的实施方案中，挥发性硅酮液是环聚二甲基硅氧烷。在其他实施方案中，环聚二甲基硅氧烷是环五聚二甲基硅氧烷。在其他实施方案中，抑制水性载体中紫杉烷纳米颗粒的晶体生长是通过将纳米颗粒包含在包含泊洛沙姆407、季铵化合物或交联丙烯酸聚合物或其混合物的水性载体中来实现。

本发明的组合物可以配制成适于药物和局部递送的各种形式。非限制性实例包括半固体组合物、洗剂、液体混悬剂、乳剂、乳膏、凝胶剂、软膏剂、糊剂、气雾剂、气雾剂泡沫、非气雾剂、非气雾剂泡沫、膜和片。半固体组合物包括软膏剂、糊剂和乳膏。为了本发明的目的，半固体组合物是不可喷雾的。所述组合物可以浸渍在纱布、绷带或其他皮肤敷料材料中。在一些实施方案中，组合物是半固体组合物。在一些实施方案中，组合物是软膏剂。在其他实施方案中，组合物是凝胶剂。在另外的实施方案中，组合物是液体混悬剂。在一些实施方案中，组合物不是喷雾剂并且是不可喷雾的。在一些实施方案中，组合物不是干粉。在一些实施方案中，组合物不仅仅包括紫杉烷纳米颗粒。

本发明的组合物可以以适合局部用产品的任何包装形式包装。非限制性实例包括瓶、带泵的瓶、塑料瓶、管(铝、塑料或层压的)、罐、非气雾泵喷雾器、气雾剂容器、袋和包。可以将包装配置为单剂量或多剂量施用。

在各种实施方案中，本发明的组合物是疏水的。在其他实施方案中，疏水性组合物是无水的。在各种实施方案中，疏水性载体是非极性和/或非挥发性的。在另外的实施方案中，组合物是水基的。在其他实施方案中，本发明的组合物是无菌的。在其他实施方案中，疏水性组合物是非无菌的。在其他实施方案中，疏水组合物的生物负荷低。在各种实施方案中，本发明的疏水性组合物不包含另外的皮肤渗透促进剂。在其他实施方案中，本发明的疏水性组合物不包含另外的挥发性溶剂。在另外的实施方案中，本发明的疏水性组合物不包含表面活性剂。在其他实施方案中，本发明的疏水性组合物不包含醇、C

A.紫杉烷纳米颗粒

紫杉烷是水溶性差的药物，在室温下在水中的溶解度小于或等于10mg/mL。紫杉烷被广泛用作化学治疗剂。本文所用的术语“紫杉烷”包括紫杉醇(I)、多西他赛(II)、卡巴他赛(III)和/或任何其他紫杉烷衍生物。

(I)紫杉醇

(II)多西他赛

(III)卡巴他赛

紫杉烷纳米颗粒可以是紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒或其他紫杉烷衍生物的纳米颗粒。紫杉醇和多西他赛原料药(API)可从加拿大温哥华的Phyton Biotech LLC商购获得。按无水、无溶剂计算，多西他赛API和纳米颗粒含有不少于90％，或不少于95％，或不少于97.5％多西他赛。按无水、无溶剂计算，紫杉醇API和纳米颗粒含有不少于90％，或不少于95％，或不少于97％的紫杉醇。紫杉醇API和纳米颗粒可以通过半合成化学过程或例如植物细胞发酵或提取的天然来源制备。紫杉醇有时也用商品名TAXOL来称呼，尽管它用词不当，因为TAXOL是紫杉醇在聚氧乙烯化蓖麻油和乙醇中的溶液的商品名，用于在静脉内输注前用合适的肠胃外流体稀释。紫杉醇是水溶性差的药物。紫杉醇在水中的溶解度小于0.05ppm，这是通过实施例1中所述的溶解度方法实验确定的。紫杉烷纳米颗粒可以是结晶形式或无定形形式或两者的组合。

在本发明的各种实施方案中，紫杉烷或紫杉醇纳米颗粒是未经涂覆的(纯净的)单个颗粒；紫杉烷或紫杉醇纳米颗粒不与任何物质结合或缀合；紫杉烷或紫杉醇纳米颗粒的表面上不吸收或吸附物质；紫杉烷或紫杉醇纳米颗粒没有被包封在任何物质中；紫杉烷或紫杉醇纳米颗粒未涂覆任何物质；紫杉烷或紫杉醇纳米颗粒不是紫杉烷或紫杉醇的微乳、纳米乳、微球或脂质体；紫杉烷或紫杉醇颗粒不结合、附着、包封或涂覆单体、聚合物(或生物相容性聚合物)、蛋白、表面活性剂或白蛋白；和/或单体、聚合物(或生物相容性聚合物)、蛋白、表面活性剂或白蛋白不被吸收或吸附到紫杉烷或紫杉醇纳米颗粒的表面上。在一些实施方案中，组合物不含/不包括或不包含聚合物/共聚物或生物相容性聚合物/共聚物。在一些实施方案中，组合物不含/不包括或不包含蛋白。在本发明的一些方面，组合物不含/不包括或不包含白蛋白。在本发明的一些方面，组合物不含/不包括或不包含透明质酸。在本发明的一些方面，组合物不含/不包括或不包含透明质酸和紫杉烷的缀合物。在本发明的一些方面，组合物不含/不包括或不包含透明质酸和紫杉醇的缀合物。在本发明的一些方面，组合物不含/不包括或不包含泊洛沙姆、苯乙烯-异丁烯-苯乙烯(SIBS)、聚酸酐共聚物、聚己内酯、聚乙二醇、聚双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸和/或聚(D,L)乳酸-co-乙醇酸(PLGA)。

紫杉烷纳米颗粒，包括紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒，其平均粒度(数)可以为0.01微米至1.5微米，或0.01微米至1.2微米，或0.01微米至1微米，或0.01微米至小于1微米，或0.01微米至0.9微米，或0.01微米至0.8微米，或0.01微米至0.7微米，或0.1微米至1.5微米，或0.1微米至1.2微米，或0.1微米至1微米，或0.1微米至小于1微米，或0.1微米至0.9微米，或0.1微米至0.8微米，或0.1至0.7微米，或0.2微米至1.5微米，或0.2微米至1.2微米，或0.2微米至1微米，或0.2微米至小于1微米，或0.2微米至0.9微米，或0.2微米至0.8微米，或0.2微米至0.7微米，或0.3微米至1.5微米，或0.3微米至1.2微米，或0.3微米至1微米，或0.3微米至小于1微米，或0.3微米至0.9微米，或0.3微米至0.8微米，或0.3微米至0.7微米，或0.4微米至1.5微米，或0.4微米至1.2微米，或0.4微米至1微米，或0.4微米至小于1微米，或0.4微米至0.9微米，或0.4微米至0.8微米，或0.4微米至0.7微米，或0.5微米至1.5微米，或0.5微米至1.2微米，或0.5微米至1微米，或0.5微米至小于1微米，或0.5微米至0.9微米，或0.5微米至0.8微米，或0.5微米至0.7微米，或0.6微米至1.5微米，或0.6微米至1.2微米，或0.6微米至1微米，或0.6微米至小于1微米，或0.6微米至0.9微米，或0.6微米至0.8微米，或0.6微米至0.7微米。

通过粒度分析仪测定加入组合物中的紫杉烷的粒度，并且将测量值表示为基于数量分布的平均直径。采用光透法，也称为光区或单颗粒光学传感(SPOS)的分析技术的仪器是一种合适的粒度分析仪。合适的光透粒度分析仪是可从佛罗里达州Port Richey的Particle Sizing Systems获得的ACCUSIZER。

在各种实施方案中，当组合物在室温下储存至少1个月或至少3个月或至少6个月或至少12个月时，加入组合物中的紫杉烷纳米颗粒的平均粒度不大于初始平均粒度的20％。如本文所用，关于紫杉烷纳米颗粒的术语“初始平均粒度”是指在完成组合物的制造(制造日期)后45天内通过粒度分析仪测量时，加入组合物中的紫杉烷的平均粒度，初始平均粒度为0.1微米至1.5微米(数)或0.01微米至1.5微米(数)。

紫杉烷的纳米颗粒可以使用本领域已知的各种减小粒度的方法和设备来制造。此类方法包括但不限于湿磨或干磨、微粉化、崩解、粉碎和超临界二氧化碳粒度减小方法。在各种实施方案中，紫杉烷或紫杉醇纳米颗粒通过超临界二氧化碳颗粒减小方法(也称为“压缩抗溶剂沉淀法”或“PCA”)制备，如美国专利US 5874029、US 5833891、US 6113795、US7744923、US 8778181，US公布2014/0296140，US公布2016/0354336，US公布2016/0374953和国际专利申请公布WO 2016/197091(申请第PCT/US16/35993号)所公布的，其均通过引用并入本文。

在超临界二氧化碳粒度减小方法中，超临界二氧化碳(反溶剂)和溶剂例如丙酮或乙醇用于在特征明确的粒度分布内生成未经涂覆的紫杉烷纳米颗粒。在加工过程中除去二氧化碳和丙酮(可能残留多达0.5％的残留溶剂)，留下紫杉烷纳米颗粒粉末，其尺寸通常为约200nm至约800nm。稳定性研究表明，在小瓶剂型中的所述粉末在受控室温(25℃/60％相对湿度)下可保存达59个月，并在加速条件下(40℃/75％相对湿度)可保存达六个月。

与通过使用例如湿磨或干磨、微粉化、崩解、碾碎、微流化或粉碎的物理冲击或研磨的常规粒度减小方法产生的紫杉烷纳米颗粒相比，通过各种超临界二氧化碳粒度减小方法产生的紫杉烷纳米颗粒可以具有独特的物理特性。如美国公布2016/0354336和国际专利申请公布WO 2016/197091中所公开的，其全部通过引用并入本文，这样的独特特性包括紫杉烷(紫杉醇和多西他赛)纳米颗粒的0.05g/cm

如美国公布2016/0354336和国际专利申请公布WO 2016/197091中所公开的那样，研究表明，通过在Deco-PBM-V-0.41球磨机中在室温下以600RPM的速度研磨5毫米的球尺寸持续60分钟研磨紫杉醇生产的紫杉醇纳米颗粒的SSA为15.0m

如美国公布2016/0354336和国际专利申请公布WO 2016/197091中所公开的那样，研究表明，通过在Deco-PBM-V-0.41球磨机中在室温下以600RPM的速度研磨5毫米的球尺寸持续60分钟研磨多西他赛生产的多西他赛纳米颗粒的SSA为15.2m

如美国公布2016/0354336和国际专利申请公布WO 2016/197091中所公开的，溶出度研究表明，与通过使用Deco-PBM-V-0.41球磨机以5mm的球尺寸在600RPM下于室温下研磨紫杉醇和多西他赛持续60分钟制得的紫杉醇和紫杉醇纳米颗粒相比，通过美国公布2016/0354336和美国专利申请公布WO2016/197091中所述的超临界二氧化碳方法制得的紫杉醇和多西他赛纳米颗粒在甲醇/水介质中的溶出速率提高。用于确定溶出速率的程序如下。对于紫杉醇，通过将材料和珠在小瓶中滚动约1小时，将约50mg的材料涂覆在约1.5克的1mm玻璃珠上。将珠转移到不锈钢网状容器中，并置于在37℃，pH为7和USP装置II(桨式)下以75rpm运行的含有甲醇/水为50/50(体积/体积)的介质的溶出浴中。在10分钟、20分钟、30分钟、60分钟和90分钟时，取出5mL等分试样，通过0.22μm过滤器过滤，并在227nm的UV/可见分光光度计上进行分析。将样品的吸光度值与在溶出介质中制备的标准溶液的吸光度值进行比较，以确定溶出物质的量。对于多西他赛，将约50mg的材料直接置于在37℃，pH为7和USP装置II(桨式)下以75rpm运行的含有甲醇/水为15/85(体积/体积)的介质的溶出浴中。在5分钟、15分钟、30分钟、60分钟、120分钟和225分钟时，取出5mL等分试样，通过0.22μm过滤器过滤，并在232nm的UV/可见分光光度计上进行分析。将样品的吸光度值与在溶出介质中制备的标准溶液的吸光度值进行比较，以确定溶出物质的量。对于紫杉醇，通过超临界二氧化碳方法制得的纳米颗粒在30分钟内溶出的溶出速率为47％，而对于通过研磨制得的纳米颗粒在30分钟内溶出的溶出速率为32％。对于多西他赛，通过超临界二氧化碳方法制得的纳米颗粒在30分钟内溶出的溶出速率为27％，而对于通过研磨制得的纳米颗粒在30分钟内溶出的溶出速率为9％。

在一些实施方案中，紫杉醇纳米颗粒的SSA为至少18m

在一些实施方案中，紫杉醇纳米颗粒的堆密度(未敲击)为0.05g/cm

在一些实施方案中，紫杉醇纳米颗粒在30分钟或少于30分钟的时间内在37℃，pH7下以75RPM操作的USP II桨式装置中的50％甲醇/50％水(体积/体积)的溶液中溶解的溶出速率为至少40重量％。

在一些实施方案中，多西他赛纳米颗粒的SSA为至少18m

在一些实施方案中，多西他赛纳米颗粒的堆密度(未敲击)为0.05g/cm

在一些实施方案中，多西他赛纳米颗粒在30分钟或少于30分钟的时间内在37℃，pH 7下以75RPM操作的USP II桨式装置中的15％甲醇/85％水(体积/体积)的溶液中溶解的溶出速率为至少20重量％。

发现紫杉醇纳米颗粒晶体倾向于在水或盐溶液的悬浮液中随时间生长，形成大的针状晶体。进行晶体生长研究，结果示于以下实施例2的表2中。发现纳米颗粒晶体在疏水性材料中不生长。另外，出人意料的是，纳米颗粒晶体在苯扎氯铵、CARBOPOL ULTREZ 10或泊洛沙姆407的水溶液中也不生长。

B.疏水性载体

本发明的疏水性载体可以包含来自植物、动物、石蜡和/或合成来源的物质。疏水性物质通常被称为对水缺乏亲和力并排斥水的物质。疏水性载体可以是组合物的连续相。在各种实施方案中，疏水性载体是非极性和/或非挥发性的。非限制性实例包括脂肪、牛油、润滑脂、蜡、溶剂和油；矿物油；植物油；矿脂；水不溶性有机酯和甘油三酯；和氟化物。疏水性载体也可以包括硅酮材料。硅酮材料定义为基于聚二甲基硅氧烷的化合物，包括聚合物、弹性体(交联的硅酮)和黏合剂(带支链的硅酮)。硅酮材料的非限制性实例包括二甲硅油(聚二甲基硅氧烷)、聚二甲基硅氧烷共聚醇、环聚二甲基硅氧烷、西甲硅油，诸如ST-弹性体10(DOW CORNING)的硅酮弹性体、硅油、硅酮聚合物、挥发性硅酮液和硅酮蜡。在一些实施方案中，疏水性载体不包括硅酮材料。

植物来源的材料包括但不限于落花生(花生)油、秘鲁香脂油、巴西棕榈蜡、小烛树蜡、蓖麻油、氢化蓖麻油、可可脂、椰子油、玉米油、棉籽油、霍霍巴油、澳洲坚果籽油、橄榄油、橙油、橙蜡、棕榈仁油、油菜籽油、红花籽油、芝麻籽油、牛油树脂、大豆油、葵花籽油、茶树油、植物油和氢化植物油。

动物来源的材料的非限制性实例包括蜂蜡(黄色蜡和白色蜡)、鳕鱼肝油、鸸鹋油、猪油、貂油、鲨鱼肝油、角鲨烷、角鲨烯和牛脂。石蜡材料的非限制性实例包括异链烷烃、微晶蜡、重质矿物油、轻质矿物油、地蜡、矿脂、白矿脂和石蜡。

有机酯和甘油三酯的非限制性实例包括C12-15烷醇苯甲酸酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、中链甘油三酯、甘油单酯和甘油二酯、三月桂精和三羟硬脂精。

氟化物的非限制性实例是全氟聚醚(PFPE)，例如可从Solvay SpecialtyPolymers商购获得的

本发明的疏水性载体可包含医药级疏水性物质。在本发明的各种实施方案中，疏水性载体包括矿脂、矿物油或石蜡或其混合物。在一些实施方案中，矿物油是重质矿物油。在一些实施方案中，疏水性载体不是聚合物基质，并且不包含聚合物或可生物降解的聚合物，例如苯乙烯-异丁烯-苯乙烯(SIBS)、聚酸酐共聚物、聚己内酯、聚乙二醇、聚双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸和/或聚(D,L-乳酸-co-乙醇酸)(PLGA)和/或不包含共聚物，例如泊洛沙姆。

在一些实施方案中，组合物中疏水性载体的浓度占组合物总重量的大于10重量％。在其他实施方案中，组合物中疏水性载体的浓度占组合物总重量的大于15重量％，或大于20重量％，或大于25重量％，或大于30重量％，或大于35重量％，或大于40重量％，或大于45重量％，或大于50重量％，或大于55重量％，或大于60重量％，或大于65重量％，或大于70重量％，或大于75重量％，或大于80重量％，或大于82重量％，或大于85重量％，或大于87重量％，或大于90重量％。在其他实施方案中，组合物中疏水性载体的浓度占组合物总重量的大于10重量％。在其他实施方案中，组合物中疏水性载体的浓度占总组合物重量的11重量％至95重量％，或12重量％至95重量％，或13重量％至95重量％，或14重量％至95重量％，或15重量％至95重量％，或16重量％至95重量％，或17重量％至95重量％，或18重量％至95重量％，或19重量％至95重量％，或20重量％至95重量％。

(i)矿脂

矿脂是从石油获得的半固体饱和烃的经纯化的混合物，其颜色从深琥珀色到浅黄色不等。白矿脂完全或几乎脱色，颜色从乳白色到雪白色不等。矿脂具有不同的熔点、黏度和稠度特性。矿脂还可以包含稳定剂，例如抗氧化剂。医药级的矿脂包括矿脂USP和白矿脂USP。

可以从Penreco Corporation以商品名：ULTIMA、SUPER、SNOW、REGENT、LILY、CREAM、ROYAL、BLOND和AMBER商购获得各种矿脂。也可以从Sonneborn公司以商品名：ALBA、SUPER WHITE PROTOPET、SUPER WHITE FONOLINE、WHITE PROTOPET 1S、WHITE PROTOPET2L、WHITE PROTOPET 3C、WHITE FONOLINE、PERFECTA、YELLOW PROTOPET 2A、YELLOWFONOLINE、PROTOLINE、SONOJELL#4、SONOJELL#9、MINERAL JELLY#10、MINERAL JELLY#14、MINERAL JELLY#17和CARNATION TROUGH GREASE商购获得各种等级的矿脂。也可以从Spectrum Chemical Mfg.Corp.获得矿脂。

(ii)矿物油

矿物油是从石油中获得的液态烃的混合物。矿物油有各种黏度等级，例如轻质矿物油、重质矿物油和超重质矿物油。轻质矿物油在40℃下的运动黏度不超过33.5厘沱。重质矿物油在40℃下的运动黏度不小于34.5厘沱。矿物油可包含合适的稳定剂。医药级矿物油包括USP矿物油USP，其是重矿物油，和轻质矿物油NF，其是轻质矿物油。矿物油可从Penreco公司以商品名DRAKEOL商购获得，以及可从Sonneborn公司以商品名BENOL、BLANDOL、BRITOL、CARNATION、ERVOL、GLORIA、KAYDOL、KLEAROL、PROTOL和RUDOL商购获得。也可以从Spectrum Chemical Mfg.Corp.商购获得矿物油。

(iii)石蜡

石蜡是从石油中获得的固态烃的经纯化的混合物。它也可以通过费-托法由一氧化碳和氢气合成而得，其中一氧化碳和氢气催化转化为链烷烃的混合物。石蜡可能含有抗氧化剂。医药级石蜡包括石蜡NF和合成石蜡NF。可以从Spectrum Chemical Mfg.Corp、Koster Keunen,Inc.和Frank B.Ross,Inc.商购获得石蜡。

C.挥发性硅酮液

挥发性硅酮液，也称为挥发性硅油，是挥发性液体聚硅氧烷，其可以是环状或直链的。它们在室温下为液体。挥发性硅酮液是疏水性材料。直链的挥发性硅酮液包括聚二甲基硅氧烷、六甲基二硅氧烷和八甲基三硅氧烷，并且分别可以从Dow Corning以商品名DOWCORNING Q7-9180硅酮液0.65cSt和DOW CORNING Q7-9180硅酮液1.0cSt商购获得。环状挥发性硅酮液通常称为环聚二甲基硅氧烷。

(i)环聚二甲基硅氧烷

环聚二甲基硅氧烷是完全甲基化的环状硅氧烷，其含有式(IV)的重复单元：

(IV)[-(CH

其中n是3、4、5、6或7；或其混合物。环聚二甲基硅氧烷是透明、无色的挥发性液体硅酮液。环聚二甲基硅氧烷具有润肤性能，并通过减少油基产品在皮肤上的油腻感而有助于改善其触感。医药级环聚二甲基硅氧烷包括环聚二甲基硅氧烷NF。环聚二甲基硅氧烷NF由式(IV)表示，其中n为4(环四硅氧烷)、5(环五聚二甲基硅氧烷)或6(环六硅氧烷)；或其混合物。环五聚二甲基硅氧烷，也称为十甲基环五聚二甲基硅氧烷、环聚二甲基硅氧烷D5或环聚二甲基硅氧烷5，是由式(IV)表示的环聚二甲基硅氧烷，其中n为5(五聚体)，但可以包含少量(通常小于1％)的一种或多于一种其他环状链长度的环聚二甲基硅氧烷。可以医药级获得的环五聚二甲基硅氧烷为环聚二甲基硅氧烷NF。环聚二甲基硅氧烷可以商品名DOWCORNING ST-环聚二甲基硅氧烷5-NF、DOW CORNING ST-环聚二甲基硅氧烷56-NF和XIAMETER PMX-0245从Dow Corning商购获得。其也可以从Spectrum Chemical Mfg.Corp.商购获得。环五聚二甲基硅氧烷在25℃下的蒸气压为约20Pa至约27Pa。

已证明环聚二甲基硅氧烷对阴道组织无刺激性。Forbes等人在2011年进行的一项研究(Forbes et.al.,Non-aqueous silicone elastomer gels as a vaginalmicrobicide delivery system for the HIV-1entry inhibitor maraviroc,Journal ofControlled Release,156(2011),161-169)将含有20％的环聚二甲基硅氧烷和80％的ST-弹性体-10的硅酮弹性体凝胶与羟乙基纤维素(HEC)作为阴道内施用马拉韦罗(maraviroc，HIV-1进入抑制剂)的载剂进行比较。在恒河猴中进行了一项PK研究，以确定血浆、阴道液和阴道组织水平。将均含有100mg的马拉韦罗的三毫升硅酮弹性体凝胶或HEC经阴道施用于12只未感染的雌性恒河猴。在施用后最多3天的时间点收集阴道液。在施用后24小时，每只恒河猴进行一次阴道镜(vaginal pinch)活检。4小时后的所有时间点显示，硅酮弹性体凝胶的马拉韦罗浓度更高。阴道活检样本显示，硅酮弹性体凝胶的马拉韦罗水平比HEC高7倍。没有提到接受弹性体/环聚二甲基硅氧烷凝胶的恒河猴的阴道刺激或溃疡。为了测试黏膜毒性/刺激性，作者进行了蛞蝓黏膜刺激试验。LDH和其他蛋白质从蛞蝓的脚中释放出来以响应细胞损伤，并充当黏膜毒性的标志物。通过将蛞蝓放置在样品顶部30分钟进行测试。随后将蛞蝓转移至含有PBS的培养皿中60分钟，然后再转移至第二PBS培养皿中60分钟。测量在PBS中留下的LDH蛋白和黏液的量，以确定样品的刺激性。硅酮弹性体凝胶和HEC的LDH和黏液含量均与阴性对照相当。

在一个实施方案中，组合物中环聚二甲基硅氧烷的浓度小于25重量％。在另一个实施方案中，组合物中的环聚二甲基硅氧烷的浓度为5重量％至24重量％。在另一个实施方案中，环聚二甲基硅氧烷的浓度为5重量％至20重量％。在另一个实施方案中，环聚二甲基硅氧烷的浓度为组合物的5重量％至18重量％。在另一个实施方案中，环聚二甲基硅氧烷的浓度为13重量％。在各种实施方案中，环聚二甲基硅氧烷的浓度可以占组合物总重量的是5重量％、5.5重量％、6重量％、6.5重量％、7重量％、7.5重量％、8重量％、8.5重量％、9重量％、9.5重量％、10重量％、10.5重量％、11重量％、11.5重量％、12重量％、12.5重量％、13重量％、13.5重量％、14重量％、14.5重量％、15重量％、15.5重量％、16重量％、16.5重量％、17重量％、17.5重量％、18重量％、18.5重量％、19重量％、19.5重量％、20重量％、20.5重量％、21重量％、21.5重量％、22重量％、22.5重量％、23重量％、23.5重量％或24重量％或其间可衍生的任何百分比。在一个实施方案中，环聚二甲基硅氧烷是环五聚二甲基硅氧烷。

D.水基组合物

本发明的水基组合物包含紫杉烷纳米颗粒和水性载体。水性制剂是紫杉烷纳米颗粒在水性载体中的分散体(混悬剂)。紫杉烷纳米颗粒可以完全分散、部分分散和部分溶解，但不能完全溶解在水性载体中。水基组合物是其中水为主要成分的组合物。水性载体可包括单相水溶液和多相水基的乳液，例如水包油和油包水乳液。

观察到紫杉烷纳米颗粒晶体，例如紫杉醇纳米颗粒，在水中和水基载体中快速生长。在许多情况下，在室温下仅需3天即可观察到生长，某些情况下可在24小时内观察到生长。许多晶体呈针状，长度大于5μm。进行了研究，结果示于实施例2的表2中。出人意料地，在加工过程中，通过向水基载体中添加泊洛沙姆407，季铵化合物或交联的丙烯酸聚合物，抑制了紫杉烷纳米颗粒晶体的生长。泊洛沙姆188的添加不抑制纳米颗粒晶体的生长。

还观察到，在包含紫杉烷纳米颗粒晶体的水性载体中季铵化合物或交联的丙烯酸聚合物或其混合物的存在阻止了纳米颗粒晶体随时间的生长。进行了研究，结果示于实施例8的表11中，显示当水性组合物在室温下存储6个月时，在包含泊洛沙姆407、季铵化合物或交联的丙烯酸聚合物或其混合物的水性组合物中的水溶性差的紫杉烷纳米颗粒(紫杉醇)的平均粒度的增长不大于初始颗粒的平均粒度的20％。在一些实施方案中，公开了水基组合物，其包含水性载体；多个紫杉烷纳米颗粒；和季铵化合物，或交联的丙烯酸聚合物，或其混合物；其中紫杉烷纳米颗粒的平均粒度为0.1微米至1.5微米(数)或0.01微米至1.5微米(数)，并且其中当组合物在室温下储存至少6个月时，紫杉烷纳米颗粒的平均粒度的增长不大于初始颗粒的平均粒度的20％。在其他实施方案中，该组合物还包含泊洛沙姆407。

在本发明的一个方面，公开了组合物，其包含紫杉烷纳米颗粒、水性载体和泊洛沙姆407、季铵化合物或交联的丙烯酸聚合物或其混合物。出人意料地发现，泊洛沙姆407、季铵化合物或交联的丙烯酸聚合物的添加抑制了紫杉烷纳米颗粒在水性载体中的晶体生长。本发明的水基组合物适合于局部用、注射用、(IV)输注或口服液体剂型。在一个实施方案中，抑制晶体生长的添加剂是泊洛沙姆407。在各种实施方案中，季铵化合物是抑制晶体生长的添加剂，并且是苯扎氯铵或苄索氯铵。在其他实施方案中，季铵化合物是苯扎氯铵。在其他实施方案中，交联的丙烯酸聚合物是抑制晶体生长的添加剂，并且是卡波姆。

在本发明的一个方面，该组合物在适于注射递送，包括在适于(IV)输注的水性载体中包含泊洛沙姆407和紫杉烷纳米颗粒。在各种实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是多西他赛纳米颗粒、紫杉醇纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒。

在本发明的另一个方面，所述组合物在适于注射递送，包括在适于(IV)输注的水性载体中包含季铵化合物和紫杉烷纳米颗粒。在各种实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是多西他赛纳米颗粒、紫杉醇纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒。在其他实施方案中，季铵化合物是苯扎氯铵或苄索氯铵。

在本发明的一个方面，公开了抑制在水基载体中分散的结晶紫杉烷纳米颗粒的生长的方法，该方法包括在加工过程中将泊洛沙姆407、季铵化合物或交联丙烯酸聚合物或其混合物添加到水基载体，其中紫杉烷纳米颗粒的平均粒度为0.1微米至1.5微米(数)或0.01微米至1.5微米(数)。在一些实施方案中，季铵化合物是苯扎氯铵或苄索氯铵。在一些实施方案中，交联的丙烯酸聚合物是卡波姆。在一些实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒。在另外的实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒。

(i)泊洛沙姆407

泊洛沙姆407是符合通式(V)的环氧乙烷和环氧丙烷的固态亲水性非离子型合成嵌段共聚物

(V)HO(C

其中a为101，b为56。泊洛沙姆407的平均分子量为9840至14600。术语“泊洛沙姆”是所述共聚物的非专有名称。泊洛沙姆有几种类型，它们具有各种物理形式和各种平均分子量。每种特定的泊洛沙姆类型均由非专有名称“泊洛沙姆”后接三位数来标识，三位数的前两位数乘以100对应于共聚物中聚氧丙烯部分的近似平均分子量；第三个数乘以10则对应于聚氧乙烯部分的重量百分比。可获得医药级、化妆品级和工业级的泊洛沙姆。医药级泊洛沙姆已列在公认的药物汇编中，例如USP/NF和欧洲药典(PhEur)。根据USP/NF和PhEur，可以添加合适的抗氧化剂。可以商品名

(ii)季铵化合物

季铵化合物(包括盐)是式(VI)的带正电荷的四取代氮衍生物

(VI)

其中R

(iii)交联的丙烯酸聚合物

交联的丙烯酸聚合物是丙烯酸与聚烯基聚醚交联的高分子量均聚物和共聚物。合适的交联的丙烯酸聚合物包括卡波姆(INCI名称)、丙烯酸酯共聚物(INCI名称)、丙烯酸酯/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物(INCI名称)、丙烯酸交联聚合物4(INCI名称)和聚丙烯酸酯1交联聚合物(INCI名称)。上述聚合物均可以商品名

E.其他成分和佐剂

本发明的组合物还可以包含适用于药物组合物的功能成分。非限制性实例包括吸收剂、酸化剂、抗微生物剂、抗氧化剂、黏合剂、杀生物剂、缓冲剂、填充剂、晶体生长抑制剂、螯合剂、着色剂、除臭剂、乳液稳定剂、成膜剂、香料、湿润剂、溶解剂、酶制剂、乳浊剂、氧化剂、pH调节剂、增塑剂、防腐剂、还原剂、润肤的皮肤调理剂、保湿的皮肤调理剂、保湿剂、表面活性剂、乳化剂、清洁剂、发泡剂、助水溶物、溶剂、悬浮剂、黏度控制剂(流变改性剂)、增黏剂(增稠剂)和抛射剂。本文所述的功能成分的实例的清单和专著在The InternationalCosmetic Ingredient Dictionary and Handbook(INCI),12

本发明的组合物还可以包含适合局部使用的另外的药物活性成分、美容活性成分和兽药。

尽管本发明的疏水性组合物还可以包含另外的渗透促进剂，但是发现没有必要在包含疏水性载体和一种或多于一种挥发性硅酮液的疏水性组合物中包含另外的渗透促进剂以增加紫杉烷纳米颗粒的皮肤渗透(即进入皮肤的表皮和真皮部分的皮肤渗透)。实际上，添加其他皮肤渗透促进剂对疏水性组合物的皮肤渗透几乎没有或没有影响。

术语“渗透促进剂”已经用于描述促进药物通过皮肤吸收的化合物或材料或物质。这些化合物或材料或物质可以直接影响皮肤的渗透性，或者可以通过增加渗透剂的热力学活性来增加经皮吸收，从而增加扩散物质的有效逃逸趋势和浓度梯度。这些渗透促进剂的主要作用是增加角质层的水合度或破坏其脂蛋白基质，在两种情况下的最终结果都是对药物(渗透剂)扩散的抵抗力降低(Remington,The Science and Practice of Pharmacy,22

皮肤渗透促进剂的非限制性实例包括油醇、肉豆蔻酸异丙酯、可以商品名ARLASOLVE DMI得到的异山梨醇二甲醚(DMI)和可以商品名TRANSCUTOL P得到的二甘醇单乙基醚(DGME)。皮肤渗透促进剂的其他实例可以在“Skin Penetration Enhancers Citedin the Technical Literature”,Osborne,David W.和Henke,Jill J.,PharmaceuticalTechnology,November 1997中找到，其通过引用并入本文。这些实例包括：脂肪醇、例如脂肪醇、癸醇、月桂醇(十二烷醇)、亚麻醇(Linolenyl alcohol)、橙花叔醇、1-壬醇、正辛醇、油醇、脂肪酸酯、乙酸丁酯、鲸蜡醇乳酸酯、癸醇N,N-二甲基氨基乙酸酯、癸醇N,N-二甲基氨基异丙酸酯、二乙二醇油酸酯、癸二酸二乙酯、琥珀酸二乙酯、二异丙醇癸二酸酯、十二烷醇N,N-二甲基氨基乙酸酯、十二烷醇(N,N-二甲基氨基)-丁酸酯、十二烷醇N,N-二甲基氨基异丙酸酯、十二烷醇2-(二甲基氨基)丙酸酯、EO-5-油酸酯、乙酸乙酯、乙酰乙酸乙酯、丙酸乙酯、甘油单醚、甘油单月桂酸酯、甘油单油酸酯、甘油单亚油酸酯、异丙醇异硬脂酸酯、异丙醇亚油酸酯、异丙醇肉豆蔻酸酯、异丙醇肉豆蔻酸酯/脂肪酸单甘油酯组合、异丙醇肉豆蔻酸酯/乙醇/L-乳酸(87:10:3)组合、异丙醇棕榈酸酯、乙酸甲酯、癸酸甲酯、月桂酸甲酯、丙酸甲酯、戊酸甲酯、1-单己酰基甘油、甘油单酯(中链长)、烟酸酯(苄基)、乙酸辛酯、辛醇N,N-二甲基氨基乙酸酯、油酸油酯、正戊醇N-乙酰基脯氨酸酯、丙二醇单月桂酸酯、山梨坦二月桂酸酯、山梨坦二油酸酯、山梨坦单月桂酸酯、山梨坦单油酸酯、山梨坦三月桂酸酯、山梨坦三油酸酯、蔗糖椰子脂肪酸酯混合物、蔗糖单月桂酸酯、蔗糖单油酸酯和十四烷醇N,N-二甲基氨基乙酸酯；脂肪酸，例如链烷酸、癸酸、二酸、乙基十八烷酸、己酸、乳酸、月桂酸、反式亚油酸、亚油酸、亚麻酸、新癸酸、油酸、棕榈酸、壬酸、丙酸和异油酸；脂肪醇醚，例如α-单甘油醚、EO-2-油基醚、EO-5-油基醚、EO-10-油基醚以及聚甘油和醇的醚衍生物(1-O-十二烷基-3-O-甲基-2-O-(2',3'-二羟丙基)甘油)；生物药，例如L-α-氨基酸、卵磷脂、磷脂、皂苷/磷脂、脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠和胆酸钠(Sodium tauroglycocholate)；酶，例如酸性磷酸酶、Calonase、透明质酸酶、木瓜蛋白酶、磷脂酶A-2、磷脂酶C和三酰基甘油水解酶；胺和酰胺，例如乙酰胺衍生物、无环酰胺、N-金刚烷基正烷酰胺、对氯苯氧异丁酸酰胺、N,N-双十二烷基乙酰胺、二-2-乙基己胺、二乙基甲基苯甲酰胺、N,N-二乙基间甲苯胺、N,N-二甲基间甲苯胺、Ethomeen S12[双-(2-羟乙基)油胺]、六亚甲基月桂酰胺、月桂胺(十二烷基胺)、辛基酰胺、油酰胺、不饱和环状脲和尿素；络合剂，例如β-和γ-环糊精络合物、羟丙基甲基纤维素、脂质体、萘二酰胺二酰亚胺和萘二酯二酰亚胺；大环化合物，例如大环内酯、酮和酸酐(最佳环16)和不饱和环状脲；经典表面活性剂，例如Brij 30、Brij 35、Brij 36T、Brij 52、Brij 56、Brij 58、Brij 72、Brij 76、Brij 78、Brij 92、Brij 96、Brij 98、十六烷基三甲基溴化铵、Empicol ML26/F、HCO-60表面活性剂、羟基聚乙氧基十二烷、离子表面活性剂(ROONa、ROSO

尽管本发明的疏水性组合物还可以包含醇，但是该组合物不必包含醇、C

尽管本发明的疏水性组合物还可以包含另外的挥发性溶剂，但是疏水性组合物不必包含另外的挥发性溶剂。挥发性溶剂也称为“逃逸”溶剂。挥发性溶剂的非限制性实例包括挥发性醇，例如C

尽管本发明的疏水性组合物还可以包含表面活性剂，但是疏水性组合物不必包含表面活性剂。术语“表面活性剂”或“表面活性助剂”是指表现出降低水的表面张力或降低两种不混溶的物质之间的界面张力的能力的化合物或材料或物质，包括阴离子、阳离子、非离子、两性和/或磷脂表面活性剂。表面活性剂的非限制性实例可见于McCutcheon’sEmulsifiers&Detergents,2001 North American Edition，其在此引入作为参考，以及可见于International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook(INCI)第12版，2008，其在此引入作为参考。这些实例包括但不限于以下：嵌段聚合物，例如泊洛沙姆124；乙氧基化醇，例如十六烷基聚氧乙烯醚-2、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、月桂基聚氧乙烯醚-3；乙氧基化脂肪酸酯和油，例如PEG-40氢化蓖麻油、PEG-36蓖麻油、PEG-150二硬脂酸酯；甘油酯，例如聚甘油-3二异硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯；二醇酯，PEG-12二油酸酯、LEXEMUL P；磷酸酯，例如鲸蜡醇磷酸酯；聚合表面活性剂，例如PVM/MA共聚物、丙烯酸酯/C10-30醇丙烯酸酯交联聚合物；季铵表面活性剂，例如十六烷三甲基氯化铵；基于硅酮的表面活性剂，例如PEG/PPG-20/6二甲硅油；山梨坦衍生物，例如山梨坦硬脂酸酯、聚山梨酯80；蔗糖和葡萄糖酯及衍生物，例如PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯；和醇的硫酸盐，例如月桂醇硫酸钠。更一般地，表面活性剂可以按其离子类型，例如阴离子、阳离子、非离子或两性的来分类。它们还可以按其化学结构进行分类，例如嵌段聚合物、乙氧基化醇、乙氧基化脂肪酸酯和油、甘油酯、二醇酯、磷酸酯、聚合物表面活性剂、季盐表面活性剂、基于硅酮的表面活性剂、山梨坦衍生物、蔗糖和葡萄糖酯和衍生物和醇的硫酸盐。

F.制造

本发明的组合物可以通过本领域已知的用于制造药物产品的方法和设备来制造，所述药物产品包括局部用、注射用和口服用液体产品。这样的方法包括但不限于使用机械混合器、溶解器、分散器、均化器和研磨机。非限制性实例包括LIGHTNIN螺旋桨混合器、COWLES溶解器、IKA ULTRA TURRAX分散器、SILVERSON均化器、LEE反向旋转侧刮混合器、串联和罐内转子-定子均化器、3辊研磨机、软膏剂研磨机和转子定子研磨机。也可以使用具有旋转侧刮板混合器和罐内均化器的“多合一”真空混合系统。这样的混合器包括但不限于OLSA混合器、FRYMA-KORUMA混合器和LEE TRI-MIX TURBO-SHEAR釜。本发明的组合物可以使用实验室混合设备从小规模的实验室批量生产到大规模批量生产。

II.增强的局部递送方法

在本发明的一个方面，公开了一种用于促进紫杉烷纳米颗粒向对象的宫颈上皮内瘤变(CIN)或宫颈癌的渗透的方法，该方法包括将本文公开的局部用组合物施用于CIN或宫颈癌的患处。在一个优选的实施方案中，该方法包括将疏水性组合物施加到CIN或宫颈癌的患处，该疏水性组合物包括疏水性载体、一种或多于一种挥发性硅酮液和多个紫杉烷纳米颗粒。在一些实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒。在一些实施方案中，紫杉烷纳米颗粒，包括紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒，其平均粒度(数)为0.01微米至1.5微米，或0.01微米至1.2微米，或0.01微米至1微米，或0.01微米至小于1微米，或0.01微米至0.9微米，或0.01微米至0.8微米，或0.01微米至0.7微米，或0.1微米至1.5微米，或0.1微米至1.2微米，或0.1微米至1微米，或0.1微米至小于1微米，或0.1微米至0.9微米，或0.1微米至0.8微米，或0.1至0.7微米，或0.2微米至1.5微米，或0.2微米至1.2微米，或0.2微米至1微米，或0.2微米至小于1微米，或0.2微米至0.9微米，或0.2微米至0.8微米，或0.2微米至0.7微米，或0.3微米至1.5微米，或0.3微米至1.2微米，或0.3微米至1微米，或0.3微米至小于1微米，或0.3微米至0.9微米，或0.3微米至0.8微米，或0.3微米至0.7微米，或0.4微米至1.5微米，或0.4微米至1.2微米，或0.4微米至1微米，或0.4微米至小于1微米，或0.4微米至0.9微米，或0.4微米至0.8微米，或0.4微米至0.7微米，或0.5微米至1.5微米，或0.5微米至1.2微米，或0.5微米至1微米，或0.5微米至小于1微米，或0.5微米至0.9微米，或0.5微米至0.8微米，或0.5微米至0.7微米，或0.6微米至1.5微米，或0.6微米至1.2微米，或0.6微米至1微米，或0.6微米至小于1微米，或0.6微米至0.9微米，或0.6微米至0.8微米，或0.6微米至0.7微米。在其他实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒。在一些实施方案中，紫杉醇纳米颗粒的SSA为至少18m

在本发明的另一方面，公开了一种促进紫杉烷纳米颗粒向对象的CIN或宫颈癌渗透的方法，所述方法包括将包含多个紫杉烷纳米颗粒的疏水性组合物局部施用于CIN或宫颈癌在患处，其中疏水性组合物中的紫杉烷纳米颗粒的渗透大于紫杉烷纳米颗粒在水基组合物中的紫杉烷纳米颗粒悬浮液的渗透。确定紫杉烷纳米颗粒在CIN或宫颈癌中的渗透的合适方法是使用人尸体皮肤或其他合适的膜通过体外Franz扩散池(FDC)系统。合适的体外Franz扩散池系统在下面的实施例9中描述。在一些实施方案中，所述紫杉烷纳米颗粒的平均粒度(数)为0.1微米至1.5微米。在其他实施方案中，所述紫杉烷纳米颗粒的平均粒度(数)为0.1微米至小于1微米。在其他实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒。在其他实施方案中，疏水性组合物还包含疏水性载体。在一些实施方案中，CIN是CIN 1。在一些实施方案中，CIN是CIN 2。在一些实施方案中，CIN是CIN 3。在一些实施方案中，CIN是CIN 2/3。在一些实施方案中，CIN是CIN 2、CIN 3或CIN2/3。在一些实施方案中，该方法还包括在将组合物施用于患处之后将宫颈帽置于宫颈上方。

III、抑制制剂中晶体生长的方法

在本发明的一个方面，公开了抑制结晶紫杉烷纳米颗粒生长的方法，该方法包括使紫杉烷纳米颗粒与疏水性载体接触。在一些实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒。在一些实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒。在其他实施方案中，组合物是无水的。在其他实施方案中，疏水性载体包括烃。在其他实施方案中，烃是矿脂、矿物油或石蜡或其混合物。在一些实施方案中，矿物油是重质矿物油。在一些实施方案中，组合物还包含一种或多于一种挥发性硅酮液。在其他实施方案中，挥发性硅酮液是环聚二甲基硅氧烷。在其他实施方案中，环聚二甲基硅氧烷是环五聚二甲基硅氧烷。

在本发明的另一个方面，公开了抑制在水基载体中的结晶紫杉烷纳米颗粒的分散体的生长的方法，该方法包括制造时将泊洛沙姆407、季铵化合物或交联的丙烯酸聚合物添加到水基载体中。在一些实施方案中，添加剂是泊洛沙姆407。在各种实施方案中，季铵化合物是添加剂，并且是苯扎氯铵或苄索氯铵。在一些实施方案中，季铵化合物是苯扎氯铵。在一些实施方案中，交联的丙烯酸聚合物是添加剂，并且是卡波姆。在一些实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒。

IV.宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌的局部疗法

本发明的方法包括治疗患者的宫颈上皮内瘤变(CIN)和/或宫颈癌的方法，其通过将本文公开的包含紫杉烷的组合物局部施用于患处(局部疗法)，从而治疗CIN和/或宫颈癌。CIN或宫颈癌的“患处”包括宫颈上皮的区域，其包括外宫颈部、鳞状上皮交界处和/或宫颈内膜，其中通过细胞学诊断(例如，巴氏涂片)、阴道镜检查和/或宫颈活检组织学评估可检测到一个或多于一个CIN病变或宫颈癌肿瘤。患处可以包括一个或多于一个病变附近的宫颈上皮区域，病变可能包含无法检测到的临床前病变。该组合物可以直接局部施用于宫颈上皮，其包括外宫颈部、鳞状上皮交界处和/或宫颈内膜。在一些实施方案中，将该组合物施用于外宫颈部。在一些实施方案中，将该组合物施用于鳞状上皮交界处。在一些实施方案中，将该组合物施用于宫颈内膜。在一些实施方案中，将该组合物施用于外宫颈部、鳞状上皮交界处或宫颈内膜或其组合。所述组合物可以由执业医生或护士使用戴手套的手、刮铲或其他宫颈施用方式施用。施用组合物后，可在宫颈上放置适当大小的宫颈帽，以在整个治疗期间内使制剂定位于宫颈。在治疗期间可以随时取下宫颈帽以检查宫颈，然后在需要进一步治疗时可以重新应用或可以永久取下。

可以使用以下标准，将组合物局部施用于经组织学评估(宫颈活检)为CIN 1、CIN2、CIN 3或CIN 2/3或其组合的CIN：

CIN 1：轻度异型增生或轻度核异质。通过宫颈上皮深度的细胞成熟良好，核异常最小，分裂象很少。未分化的细胞被限制在上皮的较深/较低的三分之一处。分裂象不是很多。可以在上皮的整个厚度中观察到由于HPV感染引起的细胞病变。

CIN 2：中度异型增生或中度核异质。异型增生的改变主要限于上皮的下半部或下三分之二，其中核异常比CIN 1更明显。在上皮的整个下半部可以看到分裂象。

CIN 3：重度异型增生或重度核异质。分化和分层可能是完全不存在的，或者仅存在于具有许多分裂象的上皮的浅表四分之一中。核异常遍布上皮的整个厚度。许多分裂象具有异常形式。

CIN 2/3：具有CIN 2和CIN 3的特征。

可以将组合物局部施用于在阴道镜检查后使用改良的Reid阴道镜指数(RCI)评分被组织分类的CIN(即CIN 1、CIN 2、CIN 3和/或CIN 2/3)(参见下面的表21)。根据WHO国际癌症研究机构(2017)的指导原则，RCI总体得分可与组织学诊断相关联，如下所示：得分为0至2，则可能是CIN 1。得分为3至4，则可能是CIN 1或CIN 2。得分为5至8，则可能是CIN 2或CIN 3。

可以将组合物局部施用于已经在细胞学上评估为低度鳞状上皮内病变(LSIL)或高度鳞状上皮内病变(HSIL)的CIN。

所述组合物可以局部施用于已经被分类为以下任何阶段的宫颈癌肿瘤：

I期(1期宫颈癌)：在I期宫颈癌中，癌症仅限于宫颈，但尚未扩散到宫颈之外。将该阶段进一步分为子类别：

IA1期：仅在显微镜下才能看到非常少量的癌症，深度小于3mm(约1/8英寸)，宽度小于7mm。

IA2期：癌症的深度为3mm至5mm(约1/5英寸)，而宽度小于7mm(约1/4英寸)。

IB1期：不用显微镜就可以看到癌症，但是它不大于4cm(约1 3/5英寸)。

IB2期：不用显微镜就可以看到癌症，其尺寸超过4cm。

II期(2期宫颈癌)：II期宫颈癌是指癌症已扩散到宫颈和子宫之外，但尚未到达骨盆壁或阴道下部。在宫颈癌的这个阶段，疾病尚未扩散到淋巴结或远处。II期还有两个另外的子类别：

IIA期：癌症尚未扩散到宫颈旁的宫旁组织中，但可能已经扩散到阴道的上部。

IIB期：癌症已经扩散到宫颈旁的宫旁组织中。

III期(3期宫颈癌)：III期宫颈癌是指癌症已扩散至阴道下部或骨盆壁，但未扩散至远处。将该阶段分为两个子类别：

IIIA期：癌症已经扩散到阴道下部或骨盆壁。癌症可能会阻塞输尿管(将尿液从肾脏输送到膀胱的管)。它可能已经扩散到淋巴结。

IIIB期：癌症已长入骨盆壁和/或阻塞了两个输尿管，但尚未扩散到远处。

IV期(4期宫颈癌)：在该宫颈癌阶段，疾病已扩散到附近的器官或身体的其他部位。将IV期分为两个子类别：

IVA期：癌症已经扩散到膀胱或直肠，但没有扩散到远处。

IVB期：癌症已经扩散到骨盆以外的器官，例如肺或肝。

局部施加于CIN或宫颈癌的患处的疏水性组合物的量可以根据CIN病变或宫颈癌肿瘤的患处的大小/数目以及组合物中紫杉醇的浓度而变化，但是通常用量≤1ml。

组合物的剂量可以变化，但是通常可以包括每日或每周施用，直到实现CIN或宫颈癌的治疗改善或消除。

在一些实施方案中，紫杉烷是紫杉醇。在其他实施方案中，紫杉烷是多西他赛或卡巴他赛。在一些方面，该组合物是疏水的，并且可以包含疏水性载体。在其他方面，该组合物是水基组合物，并且可以包含水性载体。在一些实施方案中，载体是无水的。在一些实施方案中，紫杉烷是多个紫杉烷纳米颗粒。在一些实施方案中，多个紫杉烷纳米颗粒悬浮在组合物中。在其他方面，紫杉烷溶解在组合物中。

在需要治疗的对象中局部治疗CIN或宫颈癌的优选方法包括向对象的患处局部施用疏水性组合物，所述疏水性组合物包含连续的疏水性载体、一种或多于一种挥发性硅酮液和多个紫杉烷纳米颗粒，其中紫杉烷纳米颗粒悬浮在组合物中，其中紫杉烷纳米颗粒的平均粒度(数)为0.1微米至1.5微米或0.1微米至小于1微米，并且其中紫杉烷纳米颗粒的浓度为在CIN或宫颈癌的病症下有效提供治疗改善(治疗)的量。在一些实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒。在一些实施方案中，紫杉烷纳米颗粒，包括紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒，其平均粒度(数)为0.01微米至1.5微米，或0.01微米至1.2微米，或0.01微米至1微米，或0.01微米至小于1微米，或0.01微米至0.9微米，或0.01微米至0.8微米，或0.01微米至0.7微米，或0.1微米至1.5微米，或0.1微米至1.2微米，或0.1微米至1微米，或0.1微米至小于1微米，或0.1微米至0.9微米，或0.1微米至0.8微米，或0.1至0.7微米，或0.2微米至1.5微米，或0.2微米至1.2微米，或0.2微米至1微米，或0.2微米至小于1微米，或0.2微米至0.9微米，或0.2微米至0.8微米，或0.2微米至0.7微米，或0.3微米至1.5微米，或0.3微米至1.2微米，或0.3微米至1微米，或0.3微米至小于1微米，或0.3微米至0.9微米，或0.3微米至0.8微米，或0.3微米至0.7微米，或0.4微米至1.5微米，或0.4微米至1.2微米，或0.4微米至1微米，或0.4微米至小于1微米，或0.4微米至0.9微米，或0.4微米至0.8微米，或0.4微米至0.7微米，或0.5微米至1.5微米，或0.5微米至1.2微米，或0.5微米至1微米，或0.5微米至小于1微米，或0.5微米至0.9微米，或0.5微米至0.8微米，或0.5微米至0.7微米，或0.6微米至1.5微米，或0.6微米至1.2微米，或0.6微米至1微米，或0.6微米至小于1微米，或0.6微米至0.9微米，或0.6微米至0.8微米，或0.6微米至0.7微米。在其他实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒。在一些实施方案中，紫杉醇纳米颗粒的SSA为至少18m

紫杉烷纳米颗粒的浓度为有效治疗CIN或宫颈癌的量。CIN的治疗提供CIN病症的治疗改善(治疗)。可以通过以下一种或多于一种情况表明此改善：(a)通过宫颈活检的组织学评估确定的组织学等级降低；(b)通过细胞学诊断确定的细胞学等级降低；(c)经阴道镜检查确定的改良的Reid阴道镜指数(RCI)评分降低；(d)CIN病变尺寸的减小，以病变最长直径的减少或病变最长直径的总和来衡量；(e)彻底消除CIN病变；(f)减轻或消除疼痛。宫颈癌的治疗提供以下一种或多于一种：(a)缩小宫颈癌的肿瘤大小；(b)减少宫颈癌肿瘤的生长；(c)减少或限制转移的发展和/或扩散，或消除转移；(d)消除宫颈癌肿瘤；(e)减轻或消除痛苦。

相对于组合物的总重量，紫杉烷纳米颗粒的浓度可以为0.05重量％至10重量％，或紫杉烷纳米颗粒的浓度可以为0.05重量％至5重量％，或紫杉烷纳米颗粒的浓度可以为0.1重量％至5重量％，或紫杉烷纳米颗粒的浓度可以为0.05重量％、0.1重量％、0.15重量％、0.2重量％、0.25重量％、0.3重量％、0.4重量％、0.5重量％、0.6重量％、0.7重量％、0.75重量％、0.8重量％、0.9重量％、1.0重量％、1.1重量％、1.2重量％、1.25重量％、1.3重量％、1.4重量％、1.5重量％、1.6重量％、1.7重量％、1.75重量％、1.8重量％、1.9重量％、2.0重量％、2.1重量％、2.2重量％、2.25重量％、2.3重量％、2.4重量％、2.5重量％、2.6重量％、2.7重量％、2.75重量％、2.8重量％、2.9重量％、3.0重量％、3.1重量％、3.2重量％、3.25重量％、3.3重量％、3.4重量％、3.5重量％、3.6重量％、3.7重量％、3.75重量％、3.8重量％、3.9重量％、4.0重量％、4.1重量％、4.2重量％、4.25重量％、4.3重量％、4.4重量％、4.5重量％、4.6重量％、4.7重量％、4.75重量％、4.8重量％、4.9重量％、5重量％、6重量％、7重量％、8重量％、9重量％或10重量％或其间可衍生的任何百分比。在一些实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒、多西他赛纳米颗粒或卡巴他赛纳米颗粒。在其他实施方案中，紫杉烷纳米颗粒是紫杉醇纳米颗粒。在一些实施方案中，紫杉醇纳米颗粒的浓度为组合物的约0.05重量％至小于3重量％，或约0.05重量％至约2重量％，或约0.05重量％至约1重量％，或约0.05重量％至约0.3重量％，或约0.05重量％至约0.2重量％，或约0.05重量％至约0.15重量％，或约0.1重量％至约2重量％，或约0.1重量％至约1重量％，或约0.1重量％至约0.3重量％，或约0.1重量％至约0.2重量％，或约0.15重量％至约2重量％，或约0.15重量％至约1重量％，或约0.15重量％至约0.3重量％，或约0.3重量％至约2重量％，或约0.3重量％至约1重量％，或约1重量％至约2重量％，或约0.2重量％至约0.4重量％，或约0.5重量％至约1.5重量％或约1.5重量％至约2.5重量％。在其他实施方案中，紫杉醇纳米颗粒的浓度为1重量％的80％至120％(即，0.8重量％至1.2重量％)，或0.05重量％的80％至120％，或0.1重量％的80％至120％，或0.15重量％的80％至120％，或0.2重量％的80％至120％，或0.25重量％的80％至120％，或0.3重量％的80％至120％，或0.35重量％的80％至120％，或0.4重量％的80％至120％，或0.45重量％的80％至120％，或0.5重量％的80％至120％，或0.55重量％的80％至120％，或0.6重量％的80％至120％，或0.65重量％的80％至120％，或0.7重量％的80％至120％，或0.75重量％的80％至120％，或0.8重量％的80％至120％，或0.85重量％的80％至120％，或0.9重量％的80％至120％，或0.95重量％的80％至120％，或1.5重量％的80％至120％，或2重量％的80％至120％，或2.5重量％的80％至120％。

在一些实施方案中，疏水性组合物是无菌的。在其他实施方案中，疏水性组合物是非无菌的。在其他实施方案中，疏水组合物的生物负荷低。在其他实施方案中，疏水性组合物是无水的。在一些实施方案中，疏水性组合物是半固体组合物。在另外的实施方案中，疏水性组合物是软膏剂。在一些实施方案中，疏水性组合物是半固体组合物，包括软膏剂，并且其黏度通过布氏RV黏度计在室温下测量为12500cps至247500cps或25000cps至150000cps，所述布氏RV黏度计使用具有SC4-14转子和6R腔的小样品适配器，转速为5rpm，平衡时间为2分钟。当将组合物施用于患处时，它可以是可铺展的或可流动的。进行疏水性半固体组合物黏度测量的另一种方法是使用在升降支架上的布氏RV黏度计打开了升降功能用T-E转子在室温下以10RPM运转45秒测量的。在一些实施方案中，疏水性组合物是半固体组合物，包括软膏剂，并且使用在升降支架上的布氏RV黏度计打开了升降功能用T-E转子在室温下以10RPM运转45秒测量的黏度为25000cps至500000cps，或25000cps至400000cps，或25000cps至350000cps，或25000cps至300000cps，或50000cps至500000cps，或50000cps至400000cps，或50000cps至350000cps，或50000cps至300000cps，或75000cps至500000cps，或75000cps至400000cps，或75000cps至350000cps，或75000cps至300000cps，或100000cps至500000cps，或100000cps至400000cps，或100000cps至350000cps，或100000cps至300000cps。在一些实施方案中，疏水性组合物不是喷雾剂并且是不可喷雾的。在一些实施方案中，组合物不是干粉。在一些实施方案中，组合物不仅仅包括紫杉烷纳米颗粒。

通过具体的实施例更详细地描述本发明。以下实施例仅为了说明的目而提供，不旨在以任何方式限制本发明。本领域技术人员会容易识别出可以改变或修改以产生基本相同结果的各种非关键参数。

实施例1-紫杉醇在各种溶剂中的溶解度

通过以下方法测定紫杉醇在各种溶剂中的溶解度：(a)对于每种溶剂，将约2g的溶剂称量到透明的玻璃小瓶中，(b)将约0.1g紫杉醇添加到每个小瓶中，(c)在室温下将每个小瓶用搅拌棒混合，在磁力搅拌器上搅拌2小时，(d)然后每1小时至2小时检查一次小瓶，判断溶液是否变澄清。如果是，则向小瓶中再加入约0.1g紫杉醇，并继续混合。每个小瓶继续执行步骤“d”持续共48小时。

根据安捷伦关于紫杉醇的技术应用说明“Analysis of Taxol by HPLC”(2002年)，使用HPLC方法测量每个小瓶中溶液的紫杉醇浓度，并将其修改为使用227nm检测波长，而不是204nm(227nm检测波长是在USP紫杉醇专著中使用的波长，并降低了在较低波长下看到的溶剂效应)。

溶解度值示于表1。

表1

实施例2在各种物质和物质的溶液中观察紫杉醇纳米颗粒晶体

紫杉醇纳米颗粒分散在各种物质和物质的水溶液中，观察晶体生长。结果如表2所示。

表2

紫杉醇纳米颗粒晶体未在任何疏水性载体中生长。同样，纳米颗粒在苯扎氯铵、CARBOPOL ULTREZ 10或泊洛沙姆407的水溶液中也不生长。

实施例3紫杉醇纳米颗粒的粒度、SSA和堆密度分析

使用ACCUSIZER 780通过以下粒度方法分析表3和表16至表19中列出的配方中使用的紫杉醇纳米颗粒批次的粒度：

表3和表16至表19中列出的配方中使用的紫杉醇纳米颗粒批次的比表面积(SSA)通过上述吸附比表面(“BET”)等温线法进行了分析。表3中列出的配方中使用的紫杉醇纳米颗粒批次的SSA为41.24m

表3中列出的配方中使用的紫杉醇纳米颗粒批次的堆密度(未敲击)为0.05g/cm

实施例4：具有疏水性载体的紫杉醇纳米颗粒的无水的疏水性组合物

紫杉醇纳米颗粒与疏水性载体的无水的疏水性组合物列于表3。

表3

F4至F13的程序：制备了紫杉醇纳米颗粒与一部分环聚二甲基硅氧烷(或矿物油(F4)或FOMBLIN(F7))的浆液。将矿脂加热至52±3℃，加入剩余成分并混合直至融化并均匀。加入紫杉醇浆液并混合直至均匀。混合，使批料冷却至35℃或低于35℃。形成软膏剂。

实施例5：具有疏水性载体的紫杉醇纳米颗粒的无水的组合物的物理和化学稳定性

将无水的疏水性组合物样品分别储存在25℃和30℃的20mL玻璃闪烁瓶中。使用HPLC进行紫杉醇的测定。测定和外观稳定性研究的结果显示在下表4和表5中。在室温下用布氏RV黏度计测量黏度，所述布氏RV黏度计使用具有SC4-14转子和6R腔的小样品适配器，转速为5rpm，平衡时间为2分钟。黏度结果示于下表6中。

表4-在25℃下的稳定性

**重复批次

表5-在30℃下的稳定性

**重复批次

表6-黏度稳定性

实施例6具有疏水性载体的无水的组合物中紫杉醇纳米颗粒的粒度分析

使用ACCUSIZER 770/770A型的粒度方法。

粒度分析的结果显示在下表7和表8中。

表7-在25℃下的粒度稳定性

**重复批次

表8-在30℃下的粒度稳定性

**重复批次

从数据可以看出，在室温(25℃)和30℃下保存1个月时，样品F4至F6中的紫杉醇纳米颗粒的粒度生长不超过初始平均粒度的20％。在室温(25℃)和30℃下保存6个月和12个月时，样品F6中的紫杉醇纳米颗粒的粒度生长不超过初始平均粒度的20％。在室温(25℃)和30℃下保存3个月时，样品F6**(与配方F6相同的重复批次)和F8至F13中的紫杉醇纳米颗粒的粒度生长不超过初始平均粒度的20％。

实施例7紫杉醇纳米颗粒的水基组合物

紫杉醇纳米颗粒的水基组合物示于表9。

表9

观察样品中紫杉醇纳米颗粒的晶体生长。结果示于下表10中。

表10

从数据可以看出，苯扎氯铵、CARBOPOL 974P或CARBOPOL ULTREZ 10的存在抑制了水基组合物中晶体的生长。

实施例8：水基组合物中紫杉醇纳米颗粒的粒度分析

使用ACCUSIZER 770/770A型的粒度方法。

粒度分析的结果显示在下表11中。

表11水基组合物的粒度

从表11中的配方F1、F2和F3的数据可以看出，苯扎氯铵、CARBOPOL 974P或CARBOPOL ULTREZ 10的存在抑制了水基组合物中晶体的生长，从而，当组合物在室温下保存6个月时，药物纳米颗粒的生长不超过初始平均粒度的20％。

实施例9体外皮肤渗透扩散研究

进行了一项研究，以使用Franz扩散池系统确定配方F1至F13进入和通过完整人体尸体皮肤的体外皮肤渗透的速度和程度。在不同时间点在扩散池的受体腔中测量紫杉醇的浓度。扩散研究结束后，将皮肤用胶带剥离并分成表皮层和真皮层。使用提取溶剂提取表皮和真皮组织中的紫杉醇，也进行分析。

分析方法：开发了用于分析紫杉醇的质谱(MS)方法。MS条件如下表12所示。

表12

Franz扩散池(FDC)研究-方法

皮肤准备：完整的人体尸体皮肤购自纽约消防员组织库(NFFTB)。收集上背部皮肤，并由组织库切成约500μm的厚度。从组织库收到皮肤后，将皮肤冷冻保存在-20℃直至实验早晨。使用前，将皮肤从冰箱中取出并使其在室温下完全融化。然后将皮肤短暂浸泡在PBS浴中以去除任何残留的冷冻保护剂和防腐剂。在实验期间，仅使用视觉上完整的皮肤区域。对于每个研究，使用两个单独的供体，每个供体具有相应的三个重复。

受体体液的准备：基于初步溶解度数据的结果，选择pH 7.4的96重量％的磷酸盐缓冲盐水(“PBS”)和4重量％的羟丙基β-环糊精(HPBCD)的受体体液。在研究过程中，活性物质在受体体液中的溶解度(约0.4μg/mL)足以维持漏槽条件。通过在抽真空的同时通过ZapCap CR 0.2μm膜过滤受体体液，对受体体液进行脱气。将经过滤的受体体液再搅拌20分钟，同时保持真空以确保完全脱气。

扩散池组装：将尸体皮肤从冰箱中取出，并在生物安全通风柜中除霜30分钟。打开包装之前，先对皮肤彻底除霜。将尸体皮肤从包装中取出，并以角质层朝上的方式放在生物安全通风柜的台面上。用Kim Wipe将皮肤拍干，然后喷上新鲜的PBS，然后再次拍干。重复此过程3次以上，以去除皮肤上存在的任何残留物。然后用脱气的受体体液填充受体孔。将Teflon涂覆的搅拌棒添加至每个受体孔。检查除霜的尸体皮肤，仅使用厚度均匀且表面无可见损伤的区域。将皮肤切成约2cm×2cm的正方形。将皮肤块放到供体孔的中心，角质层(SC)朝上。皮肤居中，使边缘平整。然后将供体孔和受体孔对准并用夹具夹在一起。必要时添加其他受体体液。通过倾斜池将存在的气泡除去，使空气沿样品端口逸出。然后将扩散池置于搅拌的干式加热器中，并使其从受体体液中复水20分钟。在整个实验过程中，在连续搅拌的情况下，将加热器保持在32℃。使皮肤复水20分钟，并测试每个皮肤部分的屏障完整性。膜完整性检查研究完成后，将整个受体腔室容积替换为受体体液。

配方施用程序：将该制剂施用于皮肤的角质层。本研究使用一次性给药方案。使用正位移Nichiryo移液器以10μl剂量将测试物施用于皮肤。然后使用玻璃棒将制剂在皮肤表面上铺展。在实验过程中将室保持不加帽。紫杉醇每细胞的理论剂量示于下表13中。

表13

*重复分析

受体体液采样：在3小时、6小时、12小时和24小时，使用带刻度的Hamilton型注射器从受体孔中吸取300μL样品等分试样。加入新鲜的受体培养基代替300μL的样品等分试样。

胶带剥离和热分裂：24小时时，用PBS/乙醇浸泡的KimWipes纸巾擦拭皮肤。擦去残留的制剂并用KimWipes擦干皮肤后，将角质层用胶带剥离3次—每次胶带剥离包括在均匀压力下将玻璃纸胶带涂在皮肤上并将胶带剥离。收集剥离的胶带并冷冻以备将来分析。前三个剥离的胶带去除角质层的最上层，并作为额外的皮肤清洁步骤。通常认为活性物质在该区域没有被完全吸收。通常仅对这些条带进行质量平衡分析。将皮肤用胶带剥离后，用镊子或刮刀将每一块的表皮从下面的真皮组织中分离出来。收集表皮和真皮组织，并将其置于4mL硼硅酸盐玻璃小瓶中。分离所有皮肤碎片后，将等分的萃取溶剂加入玻璃小瓶中。该过程包括向小瓶中加入2mL的DMSO，然后在32℃下孵育24小时。提取时间结束后，收集并过滤300μL提取液的样品等分试样。

样品分析：使用上述分析方法对样品等分试样中的紫杉醇进行分析。

结果：

下表14中的结果显示了配方F1至F13在24小时消耗时间后各个时间点在受体体液中紫杉醇的递送剂量(μg/cm

备注：在一项体外研究中测试了配方F1至F6，在第二项用不同尸体皮肤批次的单独的体外研究中测试了配方F6*和F8至F13。在第二项研究中重复了对配方F6的分析(记为F6*)，以便可以对其进行评估并与第二项研究中的其他配方进行比较。

表14

*重复分析

从表14的结果可以看出，紫杉醇通过皮肤(表皮和真皮)的透皮通量为零或仅可忽略不计，即小于0.01μg/cm

实施例10——用于CIN和宫颈癌研究的制剂

制备表15中所示的以下软膏剂制剂，以用于CIN和宫颈癌研究。

表15

表15中列出的包含紫杉醇纳米颗粒的配方均以6千克批量生产。然后将配方制剂包装在15克层压管中。

F14、F15和F16批次的制造过程如下：将矿脂、矿物油、石蜡和部分环聚二甲基硅氧烷添加到容器中，并在用螺旋桨混合器混合的同时加热到52±3℃，直到熔化并均匀。将紫杉醇纳米颗粒添加到包含另一部分环聚二甲基硅氧烷的容器中，然后先用刮刀混合以润湿纳米颗粒，然后与带有S25-25G分散工具的IKA Ultra Turrax均质器混合，直到获得均匀浆液，同时将容器保持在冰/水浴。然后将浆液添加到矿脂/石蜡蜡容器中，同时用螺旋桨混合器混合，之后用剩余部分的环聚二甲基硅氧烷冲洗并混合直至批料在52±3℃下视觉上均匀。然后使用Silverson均质器将批料均质。之后，用螺旋桨式混合器将批料混合直至形成均匀的软膏剂，并将批料冷却至35℃或低于35℃。

F17批次的制造过程如下：将矿脂和石蜡添加到容器中，并在用螺旋桨混合器混合的同时加热到52±3℃，直到熔化并均匀。将紫杉醇纳米颗粒添加到包含环聚二甲基硅氧烷和部分矿物油的容器中，然后先用刮刀混合以润湿纳米颗粒，然后与带有S25-25G分散工具的IKA Ultra Turrax均质器混合，直到获得均匀浆液，同时将容器保持在冰/水浴。然后将浆液添加到矿脂/石蜡蜡容器中，同时用螺旋桨混合器混合，之后用剩余部分的矿物油冲洗并混合直至批料在52±3℃下视觉上均匀。然后使用Silverson均质器将批料均质。之后，用螺旋桨式混合器将批料混合直至形成均匀的软膏剂，并将批料冷却至35℃或低于35℃。

表15中每个配方的化学和物理分析结果如表16至19所示，在25℃下T＝0个月、1个月和3个月。

表16

注1：灰白色至黄色软膏剂

注2：使用在升降支架上的布氏RV黏度计打开了升降功能用T-E转子在室温下以10RPM运转45秒。

表17

注1：灰白色至黄色软膏剂

注2：使用在升降支架上的布氏RV黏度计打开了升降功能用T-E转子在室温下以10RPM运转45秒。

表18

注1：灰白色至黄色软膏剂

注2：使用在升降支架上的布氏RV黏度计打开了升降功能用T-E转子在室温下以10RPM运转45秒。

表19

注1：灰白色至黄色软膏剂

注2：使用在升降支架上的布氏RV黏度计打开了升降功能用T-E转子在室温下以10RPM运转45秒。

实施例11——宫颈上皮内瘤变(CIN)的剂量增加、功效、安全性和耐受性研究

将表15中的局部用制剂用于人类宫颈上皮内瘤变(CIN)的II期剂量上升安全性研究。该研究将比较表15中4种配方的安全性和有效性：F14(0.15％)、F15(0.3％)、F16(1.0％)和F17(2.0％)局部应用于患有CIN的对象的宫颈。可以使用或不使用宫颈帽将制剂定位在宫颈至少7天，最多14天。计划将活检证实为CIN 2或3并计划移除CIN的对象纳入具有3个对象的四个剂量逐增群体，依次分配如下：群体1：3个对象用F14(0.15％)；群体2：3个对象用F15(0.3％)；群体3：3个对象用F16(1.0％)；群体4：3个对象用F17(2.0％)。在第1天，单次治疗将最多1ml的制剂局部施用于外宫颈部。在随访期内，对象将在治疗后第8天、第15天和第28天返回诊所，此时对象将退出研究。在最后的研究访问(治疗后28天)中，对象将接受切除或穿孔活检以记录CIN的阶段。将在注射后第1天的第1小时、第2小时、第4小时、第8小时和第24小时以及随后的每次就诊时获得PK样品。在剂量逐增之前，医疗监控器将检查所有可用数据。制剂的剂量逐增将由医学监测器确定。对于每个逐增剂量，将重复此操作，直到所有剂量水平均已纳入或确定某个剂量不安全为止。

将以持续的方式评估安全性，并对每个群体进行两次正式的安全审查：在该群体中最后一个对象的第15天之后和第28天之后。下一个剂量水平群体将在先前群体的第一次安全性审查中发现安全性和耐受性后进行招募。如果一个群体中的安全性和耐受性问题变得明显，则将在该剂量水平上招募另外三名对象，该群体中最多可容纳六名对象。如果在另外3名对象中再次出现≥1个相同的安全性和耐受性问题，则将先前的剂量水平确定为具有可接受的安全性和耐受性特征的最高剂量。如果在扩大后的群体中未发现其他安全性和耐受性问题，剂量逐增将继续。由医学监护人、PI和赞助商医学总监确定了具有可接受的安全性和耐受性特征的最高剂量后，将再招募3名对象施用该剂量水平，以增加对象数量。在这最后的3个对象之后停止研究。

将有效性评估为参加研究前进行的初始诊断性活检与配方的单次施用28天后从切除或穿孔活检获得的CIN状态之间的CIN状态变化。

这项研究的主要目的是评估通过治疗紧急不良事件(TEAE)、生命体征、实验室结果和体检评估的患有宫颈上皮内瘤变(CIN)对象中外宫颈部局部用制剂的安全性和耐受性。次要目的是(a)描述应用于外宫颈部的局部用制剂的药代动力学，以及(b)获得有关应用于CIN的局部制剂功效的初步信息，这些信息由CIN的消退或清除率以及阴道镜的变化确定。由改良的Reid阴道镜指数(RCI)定义。

在两个CIN 2或3位置上，研究的群体最少为15名，最多为24名经组织学确认的合格对象。

主要终点将是安全性和耐受性，可通过不良事件，生命体征变化，实验室结果和身体检查来评估。第二终点为PK参数和应用于外宫颈部的局部用制剂的初步功效，其定义如下：(a)通过活检确定的CIN病变等级变化；(b)在基线(第1天)和第28天之间的改良的Reid阴道镜指数(RCI)的变化；(c)CIN病变的大小减少，以病变最长直径的减少或病变最长直径的总和来衡量；(d)在第28天，被定义为“完全缓解”(CR)和“部分缓解”(PR)的对象所占比例(参见下表20)。CIN的分类标准如下：

CIN 1：轻度异型增生或轻度核异质。通过宫颈上皮深度的细胞成熟良好，核异常最小，分裂象很少。未分化的细胞被限制在上皮的较深/较低的三分之一处。分裂象不是很多。可以在上皮的整个厚度中观察到由于HPV感染引起的细胞病变。

CIN 2：中度异型增生或中度核异质。异型增生的改变主要限于上皮的下半部或下三分之二，其中核异常比CIN 1更明显。在上皮的整个下半部可以看到分裂象。

CIN 3：重度异型增生或重度核异质。分化和分层可能是完全不存在的，或者仅存在于具有许多分裂象的上皮的浅表四分之一中。核异常遍布上皮的整个厚度。许多分裂象具有异常形式。

临床反应由基线至28天之间CIN的变化定义。基线定义为在进入研究前2周内和施用制剂前4周内通过活检获得的CIN分类。表20显示了由组织学反应定义的临床反应。

表20

将对制剂做出反应的对象比例与无反应的对象进行比较。“反应者”定义为CR或PR。无反应者定义为SD或PD。

改良的Reid阴道镜指数(RCI)是阴道镜分级系统，将在所有研究访视时用于对宫颈上皮进行分级。该系统对四个阴道镜体征施加0至2分：颜色、病变边缘和表面结构、血管和碘染色。将第8天、第15天和第28天的总体RCI得分的变化与基线进行比较。基线定义为筛选访视和治疗访视(第1天)确定的阴道镜检查结果的平均RCI评分。表21显示了改良的Reid阴道镜指数的标准。

表21

在每次访问时拍摄所有目标CIN病变的照片。这些照片将在研究结束时进行回顾，以评估有效性和局部毒性。

实施例12——宫颈癌的剂量增加、功效、安全性和耐受性研究

将表15中的局部用制剂用于II期剂量增加的用于人类宫颈癌的安全性研究。该研究将比较表15中4种配方的安全性和有效性：F14(0.15％)、F15(0.3％)、F16(1.0％)和F17(2.0％)局部应用于患有宫颈癌的对象的外宫颈部和宫颈内管。可以使用或不使用宫颈帽将制剂定位在宫颈至少7天，最多14天。将活检证实为宫颈癌的计划进行全腹子宫切除术和双侧淋巴结清扫术的对象纳入具有3个对象的四个剂量逐增群体，依次分配如下：群体1：3个对象用F14(0.15％)；群体2：3个对象用F15(0.3％)；群体3：3个对象用F16(1.0％)；群体4：3个对象用F17(2.0％)。在第1天，单次治疗将最多1ml的制剂局部施用于外宫颈部和宫颈内管。在随访期内，对象将在治疗后第8天、第15天和第28天返回诊所，此时该对象将接受全腹子宫切除术和双侧淋巴结清扫术并退出研究。将在注射后第1天的第1小时、第2小时、第4小时、第8小时和第24小时以及随后的每次就诊时获得PK样品。在增加剂量之前，医疗监测器将检查所有可用数据。制剂的剂量逐增将由医学监测器确定。对于每个逐步增加的剂量，将重复此操作，直到所有剂量水平均已纳入或确定某个剂量不安全为止。

将以持续的方式评估安全性，并对每个群体进行两次正式的安全审查：在该群体中最后一个对象的第15天之后和第28天之后。下一个剂量水平群体将在先前群体的第一次安全性审查中发现安全性和耐受性后进行。如果一个群体中的安全性和耐受性问题变得明显，则将在该剂量水平上招募另外三名对象，该群体中最多可容纳六名对象。如果在另外3名对象中再次出现≥1个相同的安全性和耐受性问题，则将先前的剂量水平确定为具有可接受的安全性和耐受性特征的最高剂量。如果在扩大后的群体中未发现其他安全性和耐受性问题，剂量逐增将继续。由医学监护人、PI和赞助商医学总监确定了具有可接受的安全性和耐受性特征的最高剂量后，将再招募3名对象施用该剂量水平，以增加对象数量。在这最后的3个对象之后停止研究。

将有效性评估为参加研究前进行的初始诊断性活检与(配方的单次施用28天后)子宫切除术后宫颈的病理评估之间的宫颈癌状态变化。

这项研究的主要目的是通过治疗紧急不良事件(TEAE)，生命体征，实验室结果和体格检查评估宫颈癌患者的宫颈和宫颈管外用制剂的安全性和耐受性。次要目标是(a)描述应用于宫颈外管和宫颈管的局部制剂的药代动力学，(b)确定局部制剂对盆腔淋巴结的影响，以及(c)获得有关骨盆淋巴结疗效的初步信息用于宫颈癌的局部制剂。

该研究的群体将是最少15名和最多24名在两个宫颈癌部位经组织学证实合格的对象。

主要终点将是安全性和耐受性，可通过不良事件、生命体征变化、实验室结果和身体检查来评估。次要终点为(a)PK参数；(b)根据活检中的基底膜评估确定的癌症存在的变化；(c)子宫切除术时盆腔淋巴结中是否存在肿瘤细胞；(d)子宫切除时盆腔淋巴结中是否存在紫杉醇，以及(d)在第28天时该制剂的完全反应者(CR)和部分反应者(PR)的比例(临床反应定义为在子宫切除术时是否患有宫颈癌或没有宫颈癌)。

实施例13——皮肤毒性研究

使用表22中所示的配方进行了皮肤毒性研究。

表22

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