CD44v17与宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈癌的关系及CD44v17在CIN向宫颈癌进展中的作用

摘要

目的:通过体内、体外实验和临床组织研究一种新的CD44变异体(CD44v17)与宫颈上皮内瘤变（宫颈癌癌前病变）及宫颈癌之间的关系，以及其在宫颈上皮内瘤变向宫颈癌发生、发展中的表达和意义。
　　方法:用lipofectamine2000将CD44v17siRNA、pcDNA3.1-CD44v17质粒及其阴性对照组转染Hale细胞、Siha细胞，通过CCK-8、划痕实验、流式细胞术、Westernblotting、细胞周期测定方法等观察CD44v17对人宫颈癌细胞系Hale细胞及Siha细胞的增殖、凋亡、迁移等能力的影响;建立荷人宫颈癌裸鼠移植瘤模型，在荷瘤裸鼠体内注射针对CD44v17的shRNA慢病毒液，在体内研究观察靶向CD44v17的shRNA慢病毒对裸鼠宫颈癌移植瘤的成瘤情况;PCR检测宫颈正常组织、CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级和宫颈癌组织中CD44v17的含量;通过对比研究正常宫颈组织、各级宫颈上皮内瘤变组织和宫颈癌组织的CD44v17的表达，及用RNA干扰技术探讨CD44v17和MMP9、Ki67在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变中的意义。
　　结果:CCK-8法证实CD44v17促进宫颈癌细胞的生长;划痕实验显示CD44v17可增强宫颈癌细胞的迁移能力;流式细胞术及Western blotting检测凋亡相关蛋白验证了CD44v17具有抑制宫颈癌细胞凋亡作用;细胞周期测定显示干扰CD44v17RNA后，S期细胞比例降低，G1期细胞增高，细胞阻滞于G1期并诱导细胞凋亡。裸鼠试验结果显示在荷瘤裸鼠体内注射针对CD44v17的shRNA慢病毒液，干扰CD44v17 RNA后荷瘤裸鼠的成瘤能力明显降低，成瘤的体积和重量均明显降低。CD44v17、MMP9、Ki67的表达在宫颈正常组织、逐级升高的宫颈上皮内瘤变组织、宫颈癌组织中逐渐升高，且CD44v17、MMP9、Ki67表达的增高幅度在CINⅢ级和宫颈癌间最明显。
　　结论:CD44v17能抑制宫颈癌细胞的凋亡，促进宫颈癌细胞的生长，增强宫颈癌细胞的增殖、迁移能力。CD44v17和MMP9、Ki67均对宫颈上皮内瘤变向宫颈癌发展过程中起到了一定的促进作用。在临床处理宫颈上皮内瘤变时可以将CD44v17作为判定是否有向宫颈癌恶变潜能的重要指标之一，参与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌患者的筛查、诊断、治疗和判断，以及它有可能成为宫颈癌治疗的新靶点。

目录

声明

摘要

缩略词表

第一章 绪论

1．宫颈癌

1．1 宫颈癌的流行病学

1．2 宫颈癌的病因

1．3 宫颈上皮内瘤变与宫颈癌

1．4 宫颈癌级宫颈上皮内瘤变的诊断治疗现状

2．肿瘤细胞相关凋亡基因

2．1 淋巴细胞瘤-2基因(Bel-2)

2．2．Bax

2．3 天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶(Caspase)家族

3．肿瘤生物特性相关因子

3．1 基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases，MMP9)

3．2 Ki67

4．肿瘤与CD44

4．1 CD44变异剪接体研究进展

4．2 CD44与宫颈癌的相关研究

4．3 CD44v17的相关研究

5．本论文研究的目的、方法、实验方案的设计和意义

5．1 研究目的

5．2 研究的主要内容和方法

5．3 实验方案的设计

5．4 实验意义

第二章 CD44v17对宫颈癌细胞增殖、凋亡、迁移等能力的影响

1 材料

1．1 主要试剂

1．2 主要仪器

1．3 细胞株

2 方法

2．1 细胞培养与传代

2．2 转染

2．3 细胞增殖抑制率的检测

2．4 细胞凋亡率的检测

2．5 细胞周期测定

2．6 细胞划痕实验

2．7 Western blot蛋白印迹

2．8 统计学分析

3 结果

3．1 CD44v17在宫颈癌细胞中的表达

3．2 细胞的存活率

3．3 CD44v17增强宫颈癌细胞的迁移能力

3．4 CD44v17抑制宫颈癌细胞凋亡

4 讨论

5 小结

第三章 CD44v17对宫颈癌细胞的生长、增殖能力的体内研究

1．材料

1．1 主要试剂

1．2 主要仪器

1．3 细胞株

1．4 动物

2．方法

2．1 细胞培养

2．2 裸鼠皮下荷瘤模型建立

2．3 统计学分析

3 结果

3．1 CD44v17增加荷瘤裸鼠的成瘤体积

3．2 CD44v17增加荷瘤裸鼠的成瘤重量

4 讨论

5 小结

第四章 宫颈癌及宫颈上皮内瘤变组织中CD44v17表达的意义

1、材料

1．1 主要试剂

1．2 主要仪器

1．3 标本

2．方法

2．1 细胞总RNA的提取

2．2 反转录反应

2．3 Real Time PCR

3 结果

4 讨论

5 小结

第五章 宫颈癌和CIN组织中CD44v17与MMP9、Ki67的表达及其意义

1、材料

1．1 主要试剂

1．2 主要试剂

1．3 标本

2．方法

2．1 细胞总RNA的提取

2．2 反转录反应

2．3 Real Time PCR

3 结果

3．1 CD44v17和MMP9在宫颈癌组织及肿瘤细胞中的表达和意义

3．2 CD44v17和Ki67在宫颈癌组织及肿瘤细胞中的表达和意义

4 讨论

5 小结

主要结论

参考文献

文献综述 CD44在恶性肿瘤发病中的作用

攻读硕士期间发表文章

致谢