联合多重PCR及CRISPR-Cas的快速检测多重耐药鲍曼不动杆菌的生物传感器

摘要

在本专利中，我们建立了联合多重PCR及CRISPR‑Cas的快速检测多重耐药鲍曼不动杆菌的生物传感器，通过多重PCR对鲍曼不动杆菌的管家基因以及4个β内酰胺类耐药基因同时扩增，利用LbaCas12a不加区分的单链DNase活性对多重PCR产物进行单一荧光信号输出，在2小时内完成鲍曼不动杆菌的基因型AST，检测限达到50CFU/mL。由于Cas12a的随意切割活性的激活是基于沃森克里克的碱基互补配对原则，只有目标DNA存在时，与引导RNA互补配对激活Cas12a，才可检测到信号。这样检测目标之间完全不受彼此干扰，表明该方法具有高通量高特异的多重基因检测的潜力。