一种减少CRISPR-Cas9基因编辑中双链DNA片段串联的方法及其应用

摘要

本发明提供一种减少CRISPR‑Cas9基因编辑中双链DNA片段串联的方法及其应用。所述方法包括如下步骤：使用限制性内切酶I和限制性内切酶II酶切载体得到双链DNA，再将所述双链DNA与CRISPR‑Cas9反应体系混合，转入待编辑的细胞中；其中，所述限制性内切酶I和限制性内切酶II为同向突出非同尾酶或非同向突出酶，所得双链DNA具有同向突出但是不能互补配对的粘性末端或者非同向突出的粘性末端，且粘性末端在体内被抹平的难度较大，因此该方法能够明显减少CRISPR‑Cas9基因编辑中双链DNA片段的串联率。