一种在酿酒酵母细胞中构建葡萄糖二酸合成途径的方法

摘要

本发明公开了一种在酿酒酵母细胞中构建葡萄糖二酸合成途径的方法，属于生物工程技术领域。本发明以酿酒酵母BY4741 opi1缺失株为出发菌株，本发明通过亲合体脚手架拉近Inm1和MIOX4‑Udh空间距离，提高途径效率。本发明将肌醇单磷酸酶基因INM1的启动子替换为PTDH3并在其N端加上Ztag标签，然后将肌醇加氧酶MIOX4和糖醛酸脱氢酶Udh通过linker连接，并在融合蛋白的N端添加ZIgA标签，与Anti‑Ztag‑Anti‑ZIgA一起整合在opi缺失株基因组的Delta位点，通过对葡萄糖二酸产量的筛选获得葡萄糖二酸高产菌株，使构建的工程菌的葡萄糖二酸的产量提高了75％。