悬浮培养昆虫细胞制备重组TPO蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种悬浮培养昆虫细胞制备重组TPO蛋白的方法，首先将重组杆状病毒转染至对数期昆虫细胞中，96h后取上清，收获P0代重组杆状病毒液；原代重组杆状病毒细胞传代培养，以传代接种细胞密度≥3‑5×10^5个的接种量接入三角瓶，至细胞密度生长至2‑3×10^6个，再次传代培养，密度达2×10^6cells/mL时，以MOI为0.1‑0.5进行接毒P0代病毒液，收获细胞培养上清液，离心处理后为病毒液P1代，锡箔纸包裹4℃避光保存；重复以上方法，制得P2代病毒液；继续传代，当密度达到2×10^6cells/mL时，以MOI为1‑5进行接毒P2代病毒液，3‑5天后收获细胞培养上清液，离心处理后为病毒液P3代，效价检测后，得到重组TPO蛋白。本发明方法制备的抗原特异性好，灵敏度高且效价高，能大大提高试剂盒的灵敏度、精密性和稳定性。