具有抗细菌活性的新型异喹啉药物分子的制备方法

摘要

本发明公开了一种具有抗细菌活性的新型异喹啉药物分子的制备方法，属于医药合成技术领域。本发明的技术要点为：

说明书

技术领域

本发明属于抗菌药物的合成技术领域，具体涉及一种具有抗细菌活性的新型异喹啉药物分子的制备方法。

背景技术

杂环化合物广泛存在于自然界中，许多天然杂环化合物在动、植物体中起着重要的生理作用。例如血红素、叶绿素、DNA及RNA中的碱基、酶和辅酶中催化生化反应的活性部位及中草药的有效成分生物碱等，都是含氮杂环化合物；为数不多的维生素、抗生素以及一些植物色素和植物染料都含有杂环化。目前合成的杂环化合物涉及医药、农药、染料、生物模拟材料、分子器件。储能材料等，尤其在现代药物中，杂环化合物占有有相当大的比重，与人们的生活息息相关。药物治疗方面成熟的杂环化合物有抗高血压系统药物卡托普利，雷米普利、抗心绞痛药哌嗪类衍生物曲美他嗪、调血脂药氟伐他汀、环吡咯酮类镇静催眠药佐匹克隆、咪唑吡啶类催眠药唑吡坦等。

六元杂环化合物是杂环化合物中最重要的部分，尤其是喹啉等含氮六元杂环。喹啉及其衍生物，医药方面喹啉有重要作用，在农药方面其可以作为杀菌剂、除草剂，在材料方面其可作为有机荧光剂，可用邻氨基苯甲酸、邻氨基苯甲酰胺、邻氨基芳香酮、邻卤芳香酮或邻氨基苄胺等为原料合成喹啉。例如，喹啉类衍生物可抗癌、抗菌、抗疟剂、抗痉挛，抗炎作为葡糖脑苷脂抑制剂的药用价值，异喹啉和喹唑啉脲类似物作为人类A3腺酐受体拮抗剂，甲氧喹唑啉酰胺作为多细胞周期激酶抑制剂，这类化合物的衍生物具有很强的免疫抑制功能，喹唑啉为基础的荧光探针可作为肾上腺素的受体，具有前景良好的抗癌活性。

我们在异喹啉的结构基础上进行了修饰，合成了一种结构新颖的异喹啉药物分子，该药物分子对人正常细胞无毒性，并且具有显著的抗菌作用。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供了一种合成方法简单、原料价格低廉，结构新颖的具有抗细菌活性的新型异喹啉药物分子的制备方法。

本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案，一种具有抗细菌活性的新型异喹啉药物分子的制备方法，其特征在于具体步骤为：

(1)、丙二酸二甲酯与N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛先发生缩合反应后再与苄胺发生取代反应得到1,1-二甲酸甲酯基乙烯基胺基甲基苯；

(2)、1,1-二甲酸甲酯基乙烯基胺基甲基苯在氢化钙作用下经自身成环得到2,3-二氢异喹啉-4,4(1H)-二甲酸甲酯；

(3)、2,3-二氢异喹啉-4,4(1H)-二甲酸甲酯在铜催化剂作用下脱去一分子甲酸甲酯得到1,2-二氢异喹啉-4-甲酸甲酯；

(4)、1,2-二氢异喹啉-4-甲酸甲酯在氯化试剂作用下，与N,N-二甲基甲酰胺发生取代反应得到1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸甲酯；

(5)、1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸甲酯经水解得到1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸；

(6)、1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸与脲类化合物发生成环反应得到目标化合物。

进一步优选，步骤(1)的具体过程为：在室温和惰性气体保护下把N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛滴加到丙二酸二甲酯中，滴加完后保持室温搅拌反应至原料消失；降温至内温10～15℃，滴加一定量苄胺，滴加过程中可观察到溶液升温，保持内温在30℃以下滴加加完；再次降温至10～15℃，搅拌一段时间后可见大量固体析出，加入甲基叔丁基醚，缓慢搅拌使固体悬浮，过滤后滤饼以甲基叔丁基醚洗涤，得到固体1,1-二甲酸甲酯基乙烯基胺基甲基苯；母液浓缩，再次析出固体，过滤，滤饼再次用甲基叔丁基醚洗涤三次，得到固体1,1-二甲酸甲酯基乙烯基胺基甲基苯；所述的N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛与丙二酸二甲酯的投料量摩尔比为1:1；所述的N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛与丙二酸二甲酯的反应温度为15～30℃，优选25℃；所述的N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛与苄胺的投料量摩尔比为1：0.8～1.1，优选1:1.0。

进一步优选，步骤(2)的具体过程为：把1,1-二甲酸甲酯基乙烯基胺基甲基苯和氢化钙加入到无水处理的二氯甲烷中，在氮气保护下加热至回流，TLC监控原料反应完全后，过滤反应液，浓缩滤液后经硅胶柱层析(V石油醚：V乙酸乙酯为2:1)分离得到2,3-二氢异喹啉-4,4(1H)-二甲酸甲酯；所述的1,1-二甲酸甲酯基乙烯基胺基甲基苯与氢化钙的投料量摩尔比为1:3～5，优选1:4。

进一步优选，步骤(3)的具体过程为：把2,3-二氢异喹啉-4,4(1H)-二甲酸甲酯加入二甲基亚砜中，再加入铜催化剂，在120℃加热反应至原料反应完全，过滤反应液，再加入二氯甲烷萃取反应液多次，合并有机相后用水洗涤后浓缩，然后在丙酮和正己烷的混合液中(V丙酮：V正己烷＝3:1)中重结晶得到1,2-二氢异喹啉-4-甲酸甲酯；所述的铜催化剂为溴化铜，碘化铜，硫酸铜，优选碘化铜；所述的2,3-二氢异喹啉-4,4(1H)-二甲酸甲酯与铜催化剂的投料量摩尔比为1:0.1～0.3，优选1:0.15。

进一步优选，步骤(4)的具体过程为：把1,2-二氢异喹啉-4-甲酸甲酯加入到二氯甲烷和N,N-二甲基甲酰胺中，在室温条件下加入氯代化合物，加热至回流反应至原料反应完全后，降至室温，过滤反应液，滤液加入饱和的乙酸钠溶液，搅拌均匀过滤反应液，水洗后浓缩反应液得到1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸甲酯；所述的1,2-二氢异喹啉-4-甲酸甲酯与N,N-二甲基甲酰胺和氯代化合物的投料量摩尔比为1:2～5:2～5；所述的氯代化合物为三氯氧磷，三溴化磷，氢溴酸。

进一步优选，步骤(5)的具体过程为：把1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸甲酯加入四氢呋喃中，再加入氢氧化锂，加热至回流，反应一段时间后降至室温，用稀盐酸调节反应液pH为3～4，搅拌过程中有大量固体析出，抽滤反应液，滤饼烘干后得到1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸。

进一步优选，步骤(6)的具体过程为：把1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸加入N,N-二甲基甲酰胺中，再加入碳酸钾和脲或硫脲，在一定温度下加热反应至原料反应完全，过滤反应液，再加入二氯甲烷萃取反应液多次，合并有机相后用水洗涤后浓缩，然后在丙酮和正己烷的混合液中(V丙酮：V正己烷＝3:1)中重结晶得到所述的的反应温度为80～150℃，优选120℃。

本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案，一种具有抗细菌活性的新型异喹啉药物分子的制备方法，其特征在于具体步骤为：

具体实施方式

以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1

在反应瓶中，氩气保护下，开动冷却，内温15～25℃，把N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛120g(1.0mol)缓慢滴加到丙二酸二甲酯135g(1.0mol)中，20min滴加完毕，可见溶液颜色发黑；保持内温25℃搅拌1.5h，TLC显示原料消失；再次降温至内温10～15℃，滴加苄胺110g(1.0mol)，滴加过程中可观察到溶液升温，保持内温在30℃以下滴加，1.5h加完；体系保持在10～15℃，搅拌30min后可见大量固体析出；加入甲基叔丁基醚1000mL，缓慢搅拌15min使固体悬浮，放料，过滤，滤饼以甲基叔丁基醚(0～5℃)500mL洗涤两次，得到固体210g，液相纯度为99.84％；母液浓缩，再次析出固体，过滤，滤饼再次用甲基叔丁基醚(0～5℃)500mL洗涤三次，得到固体16g，纯度98.83％，合并固体，自然放置过夜晾干，共得到约1,1-二甲酸甲酯基乙烯基胺基甲基苯226g，总收率为90.7％；¹HNMR(600MHz,CDCl₃):δ9.57(s,1H),7.49-7.48(m,2H),7.35(d,J＝12.0Hz,1H),7.17-7.15(m,2H),4.77(s,2H),3.74-3.72(m,6H)。

实施例2

在反应瓶中，氩气保护下，开动冷却，内温15～25℃，把N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛120g(1.0mol)缓慢滴加到丙二酸二甲酯135g(1.0mol)中，20min滴加完毕，可见溶液颜色发黑；保持内温25℃搅拌1.5h，TLC显示原料消失；再次降温至内温10～15℃，滴加苄胺88g(0.8mol)，滴加过程中可观察到溶液升温，保持内温在30℃以下滴加，1.5h加完；体系保持在10～15℃，搅拌30min后可见大量固体析出；加入甲基叔丁基醚1000mL，缓慢搅拌15min使固体悬浮，放料，过滤，滤饼以甲基叔丁基醚(0～5℃)洗涤(500mL×2)，得到固体138g，液相纯度为99.61％；母液浓缩，再次析出固体，过滤，滤饼再次用甲基叔丁基醚(0～5℃)500mL洗涤三次，得到固体24g，纯度98.43％，合并固体，自然放置过夜晾干，共得到约1,1-二甲酸甲酯基乙烯基胺基甲基苯162g，总收率为65％；¹H>3):δ9.57(s,1H),7.49-7.48(m,2H),7.35(d,J＝12.0Hz,1H),7.17-7.15(m,2H),4.77(s,2H),3.74-3.72(m,6H)。

实施例3

在反应瓶中，氩气保护下，开动冷却，内温15～25℃，把N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛120g(1.0mol)缓慢滴加到丙二酸二甲酯135g(1.0mol)中，20min滴加完毕，可见溶液颜色发黑；保持内温25℃搅拌1.5h，TLC显示原料消失；再次降温至内温10～15℃，滴加苄胺120g(1.1mol)，滴加过程中可观察到溶液升温，保持内温在30℃以下滴加，1.5h加完；体系保持在10～15℃，搅拌30min后可见大量固体析出；加入甲基叔丁基醚1000mL，缓慢搅拌15min使固体悬浮，放料，过滤，滤饼以甲基叔丁基醚(0～5℃)洗涤(500mL×2)，得到固体188g，液相纯度为99.76％；母液浓缩，再次析出固体，过滤，滤饼再次用甲基叔丁基醚(0～5℃)500mL洗涤三次，得到固体25g，纯度99.02％，合并固体，自然放置过夜晾干，共得到约1,1-二甲酸甲酯基乙烯基胺基甲基苯213g，总收率为85.2％；¹H>3):δ9.57(s,1H),7.49-7.48(m,2H),7.35(d,J＝12.0Hz,1H),7.17-7.15(m,2H),4.77(s,2H),3.74-3.72(m,6H)。

实施例4

在反应瓶中，把1,1-二甲酸甲酯基乙烯基胺基甲基苯25g(0.1mol)和氢化钙12.6g(0.3mol)加入到无水处理的二氯甲烷100mL中，在氮气保护下加热至回流，TLC监控原料反应完全后，过滤反应液，浓缩滤液后经硅胶柱层析(V石油醚：V乙酸乙酯为5:1)分离得到2,3-二氢异喹啉-4,4(1H)-二甲酸甲酯19.2g，收率为77％；¹H>3):δ9.34(s,1H),7.55-7.54(m,2H),7.17-7.15(m,2H),3.35-3.24(m,2H),3.15(s,2H),3.06-3.04(m,6H),HRMS(ESI):250.2623[M+H]⁺。

实施例5

在反应瓶中，把1,1-二甲酸甲酯基乙烯基胺基甲基苯25g(0.1mol)和氢化钙17g(0.4mol)加入到无水处理的二氯甲烷100mL中，在氮气保护下加热至回流，TLC监控原料反应完全后，过滤反应液，浓缩滤液后经硅胶柱层析(V石油醚：V乙酸乙酯为5:1)分离得到2,3-二氢异喹啉-4,4(1H)-二甲酸甲酯23.6g，收率为95％；¹H>3):δ9.34(s,1H),7.55-7.54(m,2H),7.17-7.15(m,2H),3.35-3.24(m,2H),3.15(s,2H),3.06-3.04(m,6H),HRMS(ESI):250.2623[M+H]⁺。

实施例6

在反应瓶中，把1,1-二甲酸甲酯基乙烯基胺基甲基苯25g(0.1mol)和氢化钙21g(0.5mol)加入到无水处理的二氯甲烷100mL中，在氮气保护下加热至回流，TLC监控原料反应完全后，过滤反应液，浓缩滤液后经硅胶柱层析(V石油醚：V乙酸乙酯为5:1)分离得到2,3-二氢异喹啉-4,4(1H)-二甲酸甲酯21g，收率为84％；¹H>3):δ9.34(s,1H),7.55-7.54(m,2H),7.17-7.15(m,2H),3.35-3.24(m,2H),3.15(s,2H),3.06-3.04(m,6H),HRMS(ESI):250.2623[M+H]⁺。

实施例7

在反应瓶中，把2,3-二氢异喹啉-4,4(1H)-二甲酸甲酯25g(0.1mol)加入喹啉150mL中，再加入溴化铜3.3g(0.015mol)，在170℃加热反应1h，TLC监控原料反应完全，过滤反应液，再加入二氯甲烷200mL萃取反应液三次，合并有机相后用水200mL洗涤后浓缩，然后在丙酮和正己烷的混合液中(V丙酮：V正己烷＝3:1)100mL中重结晶得到1,2-二氢异喹啉-4-甲酸甲酯14g，收率为74％；¹H>3):δ7.38(s,1H),7.21(dd,J₁＝6.0Hz,J₂＝6.0Hz,1H),7.13(s,1H),7.06(d,J＝6.0Hz,1H),6.96(s,1H),3.67-3.66(m,2H),3.65(s,3H)；HRMS(ESI):190.2115[M+H]⁺。

实施例8

在反应瓶中，把2,3-二氢异喹啉-4,4(1H)-二甲酸甲酯25g(0.1mol)加入喹啉150mL中，再加入碘化铜4.8g(0.015mol)，在170℃加热反应1h，TLC监控原料反应完全，过滤反应液，再加入二氯甲烷200mL萃取反应液三次，合并有机相后用水200mL洗涤后浓缩，然后在丙酮和正己烷的混合液中(V丙酮：V正己烷＝3:1)100mL中重结晶得到1,2-二氢异喹啉-4-甲酸甲酯17g，收率为90％；¹H>3):δ7.38(s,1H),7.21(dd,J₁＝6.0Hz,J₂＝6.0Hz,1H),7.13(s,1H),7.06(d,J＝6.0Hz,1H),6.96(s,1H),3.67-3.66(m,2H),3.65(s,3H)；HRMS(ESI):190.2115[M+H]⁺。

实施例9

在反应瓶中，把2,3-二氢异喹啉-4,4(1H)-二甲酸甲酯25g(0.1mol)加入喹啉150mL中，再加入无水硫酸铜2.4g(0.015mol)，在170℃加热反应1h，TLC监控原料反应完全，过滤反应液，再加入二氯甲烷200mL萃取反应液三次，合并有机相后用水200mL洗涤后浓缩，然后在丙酮和正己烷的混合液中(V丙酮：V正己烷＝3:1)100mL中重结晶得到1,2-二氢异喹啉-4-甲酸甲酯13g，收率为68％；¹H>3):δ7.38(s,1H),7.21(dd,J₁＝6.0Hz,J₂＝6.0Hz,1H),7.13(s,1H),7.06(d,J＝6.0Hz,1H),6.96(s,1H),3.67-3.66(m,2H),3.65(s,3H)；HRMS(ESI):190.2115[M+H]⁺。

实施例10

在反应瓶中，把1,2-二氢异喹啉-4-甲酸甲酯19g(0.1mol)加入到二氯甲烷100mL和N,N-二甲基甲酰胺14g(0.2mol)中，在室温条件下加入三氯氧磷30g(0.2mol)，加热至回流反应2.5h，TLC监控原料反应完全后，降至室温，过滤反应液，滤液加入饱和的乙酸钠溶液450mL，搅拌30min，再次过滤反应液，水洗后浓缩反应液得到1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸甲酯17.4g，收率为80％；H>3):δ9.58(s,1H),8.05(s,1H),7.77(s,1H),7.66-7.64(m,2H),4.39(s,2H),3.55-3.54(m,3H)；HRMS(ESI):218.1966[M+H]⁺。

实施例11

在反应瓶中，把1,2-二氢异喹啉-4-甲酸甲酯19g(0.1mol)加入到二氯甲烷100mL和N,N-二甲基甲酰胺14g(0.2mol)中，在室温条件下加入三溴氧磷86g(0.3mol)，加热至回流反应2.5h，TLC监控原料反应完全后，降至室温，过滤反应液，滤液加入饱和的乙酸钠溶液500mL，搅拌30min，再次过滤反应液，水洗后浓缩反应液得到1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸甲酯18.6g，收率为86％；H>3):δ9.58(s,1H),8.05(s,1H),7.77(s,1H),7.66-7.64(m,2H),4.39(s,2H),3.55-3.54(m,3H)；HRMS(ESI):218.1966[M+H]⁺。

实施例12

在反应瓶中，把1,2-二氢异喹啉-4-甲酸甲酯19g(0.1mol)加入到二氯甲烷100mL和N,N-二甲基甲酰胺14g(0.2mol)中，在室温条件下加入氢溴酸40g(0.5mol)，加热至回流反应2.5h，TLC监控原料反应完全后，降至室温，过滤反应液，滤液加入饱和的乙酸钠溶液300mL，搅拌30min，再次过滤反应液，水洗后浓缩反应液得到1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸甲酯13.5g，收率为62％；¹H>3):δ9.58(s,1H),8.05(s,1H),7.77(s,1H),7.66-7.64(m,2H),4.39(s,2H),3.55-3.54(m,3H)；HRMS(ESI):218.1966[M+H]⁺。

实施例13

在反应瓶中，把1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸甲酯22g(0.1mol)加入四氢呋喃300mL中，再加入氢氧化锂4.8g(0.2mol)，在加热至回流，反应4h后降至室温，用稀盐酸调节反应液pH为3～4，搅拌过程中有大量固体析出，抽滤反应液，滤饼烘干后得到1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸17g，收率为85％。

实施例14

在反应瓶中，把1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸20g(0.1mol)加入N,N-二甲基甲酰胺150mL中，再加入碳酸钾40g(0.3mol)和脲6.6g(0.11mol)，在120℃加热反应1h，TLC监控原料反应完全，过滤反应液，再加入二氯甲烷200mL萃取反应液三次，合并有机相后用水200mL洗涤后浓缩，然后在丙酮和正己烷的混合液中(V丙酮：V正己烷＝3:1)100mL中重结晶得到17g，HPLC纯度为99％，收率为75％；¹H>3):δ7.56-7.55(m,1H),7.49-7.48(m,1H),7.42(s,1H),7.35(d,J＝6.0Hz,1H),7.11(s,1H),3.97(s,2H)；HRMS(ESI):228.0725[M+H]⁺；Anal.Calcd>12H₉N₃O₂:C,63.43；H,3.99；N,18.49.Found:C,63.55；H,4.07；N,18.30。

实施例15

在反应瓶中，把1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸20g(0.1mol)加入N,N-二甲基甲酰胺150mL中，再加入碳酸钾40g(0.3mol)和脲6.6g(0.11mol)，在80℃加热反应1h，TLC监控原料反应完全，过滤反应液，再加入二氯甲烷200mL萃取反应液三次，合并有机相后用水200mL洗涤后浓缩，然后在丙酮和正己烷的混合液中(V丙酮：V正己烷＝3:1)100mL中重结晶得到11g，HPLC纯度为99％，收率为48％；¹H>3):δ7.56-7.55(m,1H),7.49-7.48(m,1H),7.42(s,1H),7.35(d,J＝6.0Hz,1H),7.11(s,1H),3.97(s,2H)；HRMS(ESI):228.0725[M+H]⁺；Anal.Calcd>12H₉N₃O₂:C,63.43；H,3.99；N,18.49.Found:C,63.55；H,4.07；N,18.30。

实施例16

在反应瓶中，把1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸20g(0.1mol)加入N,N-二甲基甲酰胺150mL中，再加入碳酸钾40g(0.3mol)和脲6.6g(0.11mol)，在150℃加热反应1h，TLC监控原料反应完全，过滤反应液，再加入二氯甲烷200mL萃取反应液三次，合并有机相后用水200mL洗涤后浓缩，然后在丙酮和正己烷的混合液中(V丙酮：V正己烷＝3:1)100mL中重结晶得到16g，HPLC纯度为98.5％，收率为70％；¹H>3):δ7.56-7.55(m,1H),7.49-7.48(m,1H),7.42(s,1H),7.35(d,J＝6.0Hz,1H),7.11(s,1H),3.97(s,2H)；HRMS(ESI):228.0725[M+H]⁺；Anal.Calcd>12H₉N₃O₂:C,63.43；H,3.99；N,18.49.Found:C,63.55；H,4.07；N,18.30。

实施例17

在反应瓶中，把1,2-二氢异喹啉-3-甲醛基-4-甲酸19g(0.1mol)加入N,N-二甲基甲酰胺150mL中，再加入碳酸钾40g(0.3mol)和硫脲8.5g(0.11mol)，在120℃加热反应1h，TLC监控原料反应完全，过滤反应液，再加入二氯甲烷200mL萃取反应液三次，合并有机相后用水200mL洗涤后浓缩，然后在丙酮和正己烷的混合液中(V丙酮：V正己烷＝3:1)100mL中重结晶得到21g，HPLC纯度为99％，收率为87％；¹H>3):δ7.51(s,1H),7.45-7.43(m,2H),7.39(d,J＝6.0Hz,1H),7.19-7.18(m,1H),3.85(s,2H)；HRMS(ESI):244.0587[M+H]⁺；Anal.Calcd>12H₉N₃OS:C,59.24；H,3.73；N,17.27.Found:C,59.41；H,3.62；N,17.33。

实施例18

生物活性测定

我们选用大肠杆菌(革兰氏阴性短杆菌)和金黄葡萄糖球菌(革兰氏阳性菌)作为抗菌活性测试对象。首先是制备液体培养基(将蛋白胨1g、酵母膏0.5g、氯化钠1g、蒸馏水100mL置于250mL锥形瓶中，放在电炉上边搅拌边加热，待混合澄清均匀时，停止加热，将瓶口用纱布和牛皮纸依次封口待用)和固体培养基(将蛋白胨1g、酵母膏0.5g、氯化钠1g、琼脂2g、蒸馏水100mL置于250mL锥形瓶中，放在电炉上边搅拌边加热，待混合澄清均匀时，停止加热，将瓶口用纱布和牛皮纸依次封口待用)；然后通过高压灭菌锅对培养基进行灭菌处理。其次是菌液的制备，把大肠杆菌和金黄葡萄糖球菌菌种活化后，用移液枪移取100μL活化后的菌液，置于灭完菌的100mL蒸馏水中混合均匀。最后通过紫外灯对平板进行灭菌，然后趁热将培养基快速倒入平板中，厚度约0.15cm，均匀铺平，静置，让其缓慢凝固，凝固后放入37℃的保温箱中培养一天做无杂菌检测。

用DMF分别配置所合成的目标化合物及对照化合物溶液，置于容量瓶中待用。用打孔器在滤纸上打孔，孔径为5mm，然后将滤纸片灭菌后浸泡在浓度为1mg/mL的样品溶液中待用。

在超净工作台上，点燃酒精灯，用移液枪取10μL稀释的培养液加到固体培养基表面，并涂布均匀。用无菌镊子取浸泡过的园滤纸片铺到培养基表面。每个平板放4片，进行3次平行实验，其中一片进行空白对照。将放有药片的平板置于37℃恒温箱中培养24h，观察现象。通过琼脂培养基上分别出现不同大小的透明圆环-抑菌圈，通过测量抑菌圈直径就可以看出各样品的抑菌活性大小。

实施例19

细胞毒性检测

通过CCK-8法检测不同浓度的目标化合物对人成纤维细胞存活率的影响，结果表明，不同浓度的目标化合物分别与细胞共同培养，各浓度组与阴性对照组相比较，差异无统计学意义，目标化合物对人成纤维细胞具有安全性。

以上实施例描述了本发明的基本原理、主要特征及优点，本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明原理的范围下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进均落入本发明保护的范围内。