能有效编辑猪miR-17-92基因簇的sgRNA

摘要

本发明提供一条能有效编辑猪miR‑17‑92基因簇的sgRNA，以能特异识别猪miR‑17‑92基因簇的sgRNA为前提，利用CRISPR/Cas9和RNAi技术，成功将shRNA定点整合到猪肾细胞PK‑15‑EGFP‑KI细胞，并筛选出敲低了EGFP基因表达的阳性细胞克隆；利用上述sgRNA将shRNA定点整合到猪胎儿成纤维细胞，成功筛选出shRNA定点整合的阳性细胞系，并检测到shRNA的稳定转录和定点整合事件，该细胞系的制备过程中，shRNA在猪miR‑17‑92基因簇的启动子的作用下稳定转录和有效表达，没有引入任何的外源的启动子基因及正负筛选标记基因，增加了转基因猪的安全性，对去除转基因猪的生物安全隐患具有重要意义。