人蛋白基因Notch3胞内片段克隆载体及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种人蛋白基因Notch3胞内片段克隆载体，在pcDNA3.1载体的KpnI和XbaI酶切位点之间构建有人蛋白基因Notch3胞内片段序列。据此，还建立了相应构建方法。实验结果显示，使用该测序验证后的过表达质粒转染的细胞经qPCR检测和蛋白质免疫印迹检测，均可在细胞中特异性高表达N3ICD的mRNA及蛋白，测定结果清晰准确，价格低廉，大幅缩减实验成本。因此，本发明构建的N3ICD过表达载体可以作为现成的亚克隆模板，参与到过表达载体构建和过表达慢病毒包装中，为心肌系统疾病的研究带来巨大便利。本发明有效解决了人源N3ICD片段克隆困难和在细胞系中高表达的问题，为Notch3基因通路研究提供了实验基础。