BTV-11型、17型、20型、23型、24型基因型分型鉴别的多重RT-PCR试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了一种BTV‑11型、17型、20型、23型、24型基因型分型鉴别的多重RT‑PCR试剂盒及其检测方法，用于单管同时鉴别检测蓝舌病病毒11型、17型、20型、23型、24型。本方法根据各型病毒VP2基因序列保守区设计了5对PCR特异性引物，此外借鉴GeXP原理合成一对非生物来源的通用引物，在各对特异性引物的上下游分别添加通用引物构成5对特异性嵌合引物，用特异性引物进行反转录，最后采用通用引物及特异性嵌合引物构建多重PCR。利用优化的多重PCR体系及条件，可单管同时鉴别检测这蓝舌病病毒5种基因型中的一种或多种，对BTV其它型及PPRV、FMDV核酸无特异性扩增，最低检测浓度可达到pg级。本发明方法灵敏度高、特异性强、节时省力并且易于观察结果。