一种术中全血中依托咪酯和芬太尼的药物提取方法

摘要

本发明公开了一种用于离子迁移谱分析的术中全血样品的混合药物提取方法,本方法简单、快速、制备样品重复性好。全血样品提取方法包括全血样品乳化反应发生装置和方法、混合溶剂提取混合药物方法和提取液过滤方法。溶剂提取过程中操作控制方法解决了通过溶剂将药物与全血分离开；提取液过滤方法将过滤膜改性处理，有利于后续光电离离子迁移谱的分析，提高了检测灵敏度。本方法为离子迁移谱仪分析术中全血样品中药物的血药浓度奠定了工作基础。

说明书

技术领域

本发明涉及了一种用于离子迁移谱分析的术中全血样品的药物提取方法,本方法简单、快速、制备样品重复性好。全血样品提取方法包括全血样品乳化反应发生装置和方法、混合溶剂提取方法和提取液过滤方法。本方法为离子迁移谱仪分析术中全血样品中药物的血药浓度奠定了工作基础。

背景技术

血液经抗凝处理后的全部血液为全血；离心除去血细胞后所得到的淡黄色液体为血浆。如血液不经抗凝处理，让其自行凝固，则在抽血后的一段时间内，血液会自动在一系列凝血因子的作用下发生凝集，血液首先凝固成一个整体，再经过一段时间或用离心机离心，血液中凝固的部分会与一些清澈淡黄色的液体分离开，这些液体称为血清。血清与血浆从表面上看似乎没有什么不同，但其内在的主要区别是血清中不含纤维蛋白原，是未经抗凝处理过的血液凝固后得到的。本发明中的方法是一种术中全血中依托咪酯和芬太尼的药物提取方法。

抽血做化验中常遇到某些化验要求用血清测定、用全血测定、用血浆测定，即是指血液标本的三种主要处理方式和要求。1)血清多用于血液生化、免疫等方面的测定；2)血浆多用于凝血等方面的测定；3)全血则多用在血细胞、血常规、血沉等方面的测定。

由于全血是人和动物个体直接输出，因其不稳定和组分复杂，往往难于对其成分进行分析。因此，目前多数医疗器械领域的药物浓度分析仪都是将全血处理成血浆或血清然后冷冻保存后，再通过其他复杂的样品前处理技术进行分析。

本发明中的方法选择全血样品，不经过血浆和血清，缩短了前处理时间；同时利用氯仿与全血样品的乳化现象，巧妙的控制试验操作装置和方法，再通过改性过滤膜，解决了手术中麻醉诱导和麻醉维持两种药物的同时提取，并通过离子迁移谱仪分析，解决了术中两种药物的同时分析检测。

离子迁移谱仪(Ion Mobility Spectrometry，IMS)技术是20世纪70年代出现的一种快速分离检测技术，与传统的质谱、色谱仪器相比，具有结构简单，灵敏度高，分析速度快，结果可靠的特点。目前已有研究应用于医疗器械领域，用于血液中药物浓度分析

发明内容

一种术中全血中依托咪酯和芬太尼的药物提取方法，本方法包括全血样品乳化过程控制方法、混合溶剂提取方法和提取液过滤方法。

样品乳化和溶剂提取过程在同一样品瓶中；样品瓶(规格5-10ml)和采血使用的一次性医用注射器(规格1ml)需要先进行肝素化前处理，具体方法为：

肝素(医用)首先用生理盐水配成0.5-2mg/ml溶液；然后用肝素溶液浸润样品瓶和一次性医用注射器内壁(涮洗内部腔室)，室温晾干后备用。

使用上述处理过的一次性医用注射器抽取麻醉手术中的人或动物全血样品(0.5-1ml)置于样品瓶中，向其中添加一定体积的两种或两种以上的提取溶剂，其中提取溶剂有一种是能使全血发生乳化作用的有机溶剂氯仿，另一种提取剂是一氯丁烷，再旋紧样品瓶瓶盖；

将样品瓶瓶口斜向上倾斜，倾斜角度与水平面保持在45-60o角度范围内，沿着瓶身中心轴线方向旋转1-2min(转数为80-100rmp)；规范操作可以控制乳化反应使之不会发生在瓶口，同时旋转过程中乳化的全血逐渐的吸附在样品瓶内壁表面上。

再使用一次性注射器插入样品瓶底部取有机溶剂层进行下一步过滤操作。

取预先改性处理好的针筒式滤膜过滤器(Φ13，0.2um)，上述提取液经过改性过滤膜过滤后，透过膜的提取剂可直接用于离子迁移谱仪分析器同时分析全血中依托咪酯和芬太尼的药物浓度。

样品瓶选择尖底玻璃离心管。乳化的全血附着在玻璃瓶内壁上，尖底的玻璃离心管增大了乳化全血附着的面积。

提取溶剂必须是疏水的；全血与提取溶剂的用量之比为1:3；添加两种提取剂(氯仿与二氯甲烷)的比例为1:(1-2)；或者是三种提取剂，添加比例为1:1:1.

其它提取剂还可以是二氯甲烷或四氯化碳。

选择一种改性过滤膜将含有药物的提取溶剂分离纯化，此膜为PVDF聚偏氟乙烯改性膜制成的针筒式滤膜过滤器。

本方法中使用的改性过滤膜，其反应改性方法分为两步，第一步改性剂为氯仿和一氯丁烷，浸泡2-5min；第二步改性剂为甲苯和苯甲醚，浸泡2-5min；第三步改性剂为四氯化碳，浸泡2-5min。使有机相和药物即可以穿透改性过滤膜，溶剂成分不影响离子迁移谱分析，同时改性剂是离子迁移谱分析仪的化学掺杂剂，有利于提高检测灵敏度。

取上述滤液20-100μL挥干提取剂在光电离离子迁移谱正离子模式下可直接分析依托咪酯和芬太尼的药物浓度。

本发明的优点如下：

1.本发明方法利用有机溶剂氯仿与全血发生乳化作用的现象，通过控制反应装置和方法解决了有机相与水相之间的分离难题。

2.本发明方法使用了PVDF聚偏氟乙烯改性过滤膜，分三步对膜进行改性处理。选择的改性试剂即是提取溶剂，又是光电离离子迁移谱分析仪的化学掺杂剂，有利于提高检测灵敏度。

附图说明

图1为全血中依托咪酯和芬太尼的药物提取过程流程图。

图2为利用本发明中的方法制备的样品提取液用离子迁移谱分析的离子迁移谱图。

具体实施方式

检测提取药物使用的离子迁移谱分析仪主要包括以下几个部分：进样装置、检测器离子迁移管、信号接收与处理系统和气源装置。

试验中采用的实验条件均为：电离源为光电离源的离子迁移谱，正离子模式高压源，步进电机热解析进样器。实验时迁移管温度保持在100℃，进样器200℃，载气(空气)、漂气(空气)气流分别为300mL/min、400mL/min。

样品瓶选用量程为5mL的尖底玻璃离心管，一次性医用注射器选用1ml的。

肝素(医用)首先用生理盐水配成0.8mg/ml溶液；然后用肝素溶液浸润样品瓶和一次性医用注射器内壁(或涮洗样品瓶和一次性医用注射器内部腔室)，室温晾干后备用。

选择一种改性过滤膜将含有依托咪酯和芬太尼药物的提取液分离纯化，膜为PVDF聚偏氟乙烯改性膜，使用的PVDF聚偏氟乙烯过滤膜反应改性过程分为连续的三步浸泡，即第一步改性后取出进行第二步改性、第二步改性后取出进行第三步改性；第一步改性剂为体积比例为1:1的氯仿和一氯丁烷，浸泡5min；第二步改性剂为体积比例为1:1甲苯和苯甲醚，浸泡3min；第三步改性剂为四氯化碳，浸泡4min。

实施例1

如图1，抽取血液样本1ml至5ml样品瓶(样品瓶选择尖底玻璃离心管，)；向其中添加1.5ml氯仿和1.5ml一氯丁烷，溶剂位于下层；样品瓶为轴对称结构，将样品瓶瓶口斜向上倾斜，使样品瓶中轴线倾斜角度与水平面保持在45o，沿着瓶身中心轴线方向旋转1min、转数约为100rmp。再使用内部壁面采用肝素处理过的一次性注射器插入样品瓶底部抽取出提取溶剂层作为提取液进行下一步过滤操作，取有机溶剂过改性处理好的针筒式滤膜过滤器(Φ13，0.2um)，滤液备用。

实施例2

取50ul实施例1中制备的待测液，进入离子迁移谱血药浓度分析仪热解析分析器。在光电离离子迁移谱正离子模式下,依托咪酯检出信号在5.12ms；舒芬太尼检出信号在5.60ms和6.52ms。各自信号强度分别带入拟合的标准曲线方程可以分析计算全血中依托咪酯和芬太尼的药物浓度，如图2所示。

本发明公开了一种用于离子迁移谱分析的术中全血样品的混合药物提取方法,本方法简单、快速、制备样品重复性好。全血样品提取方法包括全血样品乳化反应发生装置和方法、混合溶剂提取混合药物方法和提取液过滤方法。溶剂提取过程中操作控制方法解决了通过溶剂将药物与全血分离开；提取液过滤方法将过滤膜改性处理，有利于后续光电离离子迁移谱的分析，提高了检测灵敏度。本方法为离子迁移谱仪分析术中全血样品中药物的血药浓度奠定了工作基础。