司美替尼在治疗对HER2靶向治疗耐药的胃癌方面的应用

摘要

本发明公开了司美替尼（Selumetinib，AZD6244）在治疗对HER2靶向治疗耐药的胃癌方面的应用。本发明研究发现了司美替尼可以克服NF1缺失的HER2阳性胃癌对HER2靶向治疗的耐药性（包括曲妥珠单抗耐药和拉帕替尼耐药），对耐药HER2阳性胃癌具有显著的疗效，可应用于耐药HER2阳性胃癌的治疗方面，解决克服了胃癌对HER2靶向治疗的耐药性的问题。本发明不仅为司美替尼提供了一种新应用、新的应用领域，同时为耐药HER2阳性胃癌的治疗提供了一种新的治疗方法，且司美替尼为已经临床应用的药物，推广应用前景好。

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域。更具体地，涉及司美替尼在治疗对HER2靶向治疗耐药的胃癌方面的应用。

背景技术

胃癌是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，在我国各种恶性肿瘤中发病率居首位，严重危害着人类的健康。

曲妥珠单抗是一种抗HER2的人源化单克隆抗体，已成功用于治疗HER2过表达的IV期胃癌。

但是，大多数对曲妥珠单抗敏感的患者在开始用药后一年内产生耐药问题；曲妥珠单抗联合化疗用于胃癌患者的客观有效率仍然十分不足。目前，针对HER2阳性胃癌的治疗，曲妥珠单抗耐药后尚无克服耐药的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有胃癌治疗药物的不足，尤其是对曲妥珠单抗耐药的胃癌的治疗药物的不足，探究能够克服HER2阳性胃癌对曲妥珠单抗耐药问题的方案。

本发明的目的是提供司美替尼在制备胃癌的治疗药物中的应用。

本发明另一目的是提供司美替尼在制备能够逆转胃癌对HER2靶向治疗的耐药性的药物中的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明研究发现，司美替尼（Selumetinib，AZD6244）能够逆转胃癌对HER2靶向治疗的耐药问题，司美替尼联合拉帕替尼能够克服NF1缺失的HER2阳性胃癌对HER2靶向治疗的耐药性，对耐药HER2阳性胃癌具有显著的疗效，可应用于耐药HER2阳性胃癌的治疗方面。

因此，以下应用均应在本发明的保护范围之内：

司美替尼在制备治疗胃癌的药物中的应用。

司美替尼在制备能够逆转胃癌对HER2靶向治疗的耐药性的药物中的应用。

司美替尼和拉帕替尼联用在制备胃癌的治疗药物中的应用。

一种含有司美替尼和拉帕替尼的治疗胃癌的药物。

优选地，上述胃癌为对HER2靶向治疗有耐药性的胃癌。

更优选地，所述对HER2靶向治疗有耐药性的胃癌为对曲妥珠单抗或拉帕替尼耐药的胃癌。

更优选地，所述对HER2靶向治疗有耐药性的胃癌为对曲妥珠单抗或拉帕替尼耐药的NF1缺失和/或突变的HER2阳性胃癌。

更优选地，所述胃癌为HER2阳性胃癌。

更优选地，所述HER2阳性胃癌为IV期胃癌。

更优选地，所述胃癌为人胃癌HER2阳性细胞系NCI-N87和/或SNU-216。

本发明具有以下有益效果：

本发明解决克服了胃癌对HER2靶向治疗的耐药性（包括曲妥珠单抗耐药和拉帕替尼耐药）问题，研究发现了司美替尼可以克服NF1缺失HER2阳性胃癌对曲妥珠单抗和拉帕替尼的耐药性，对耐药HER2阳性胃癌具有显著的疗效，可应用于耐药HER2阳性胃癌的治疗方面。

本发明不仅为司美替尼提供了一种新应用、新的应用领域，同时为耐药HER2阳性胃癌的治疗提供了一种新的治疗方法。

附图说明

图1为体外实验shRNA干扰HER2阳性胃癌细胞NCI-N87和SNU-216的NF1表达。

图2为沉默HER2阳性胃癌细胞NCI-N87和SNU-216的NF1表达后对曲妥珠单抗和拉帕替尼敏感性的影响。

图3为NF1沉默对下游信号通路的影响。

图4为拉帕替尼联合司美替尼对NF1缺失耐药HER2阳性胃癌细胞的协同抑制作用。

图5为裸鼠移植瘤模型实验中各实验组肿瘤图片。

图6为裸鼠移植瘤模型实验中各实验组肿瘤抑制结果。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

本发明所述司美替尼（Selumetinib，AZD6244）的化学结构式如下式所示：

实施例1 体外实验shRNA干扰NF1的表达降低HER2阳性胃癌细胞（NCI-N87和SNU-216）对曲妥珠单抗和拉帕替尼的敏感性

1、首先在两株HER2阳性的胃癌细胞株（NCI-N87和SNU-216）中使用慢病毒沉默NF1表达。结果如图1，NF1表达被成功抑制。

2、再用相同浓度的曲妥珠单抗（Trastuzumab，即抗HER2的单克隆抗体）处理上述胃癌细胞株。结果显示，NF1低表达细胞株对曲妥珠单抗耐药（图2）。

3、同样使用小分子HER2抑制剂拉帕替尼（Lapatinib）处理后可以得到相同的结果（图2），表明NF1下调介导了癌细胞对拉帕替尼的耐药性。

实施例2NF1沉默对下游信号通路的影响

1、在实施例1中所述的沉默NF1表达后，通过Western blot检测PI3K/AKT和MEK/ERK（均是HER2下游信号通路中的关键分子）的磷酸化水平。

结果显示，PI3K/AKT和MEK/ERK的磷酸化水平明显增加（如图3），表明shRNA干扰NF1可增强下游PI3K/AKT及RAS/RAF/MEK/ERK信号通路的激活，AKT和ERK信号分子参与了NF1介导的HER2靶向治疗的耐药。

实施例3 拉帕替尼联合司美替尼（Selumetinib，AZD6244）克服HER2阳性胃癌对HER2靶向拉帕替尼的耐药性

1、实验方法

MTT比色分析方法用于细胞毒性实验，选择稳定转染的NCI-N87-NC、NCI-N87-NF1-sh#1、NCI-N87-NF1-sh#2和SNU-216-NC、SNU-216-NF-1-sh#1、SNU-216-NF-1-sh#2细胞分别加入拉帕替尼（0.2 μM，培养24小时），司美替尼（1 μM，培养24小时）和拉帕替尼（0.2 μM）联合司美替尼（1 μM）进行细胞毒性实验。使用OPSYS microplate Reader（DYNEXTechnologies，Inc.（Chantilly，VA））仪器在570 nm波长下测定相对应吸光值（OD）。实验重复3次，计算其平均值（mean）及标准差（SD）。根据吸光值，计算药物对细胞的半数抑制率（IC50），即抑制细胞生长50%时所需的药物浓度。

2、实验结果如图4所示，拉帕替尼联合MEK/ERK抑制剂司美替尼（Selumetinib，AZD6244）可逆转NF1缺失的NCI-N87和SNU-216细胞对拉帕替尼的耐药性，进一步证实NF1介导的MEK/EEK信号通路与HER2靶向耐药相关。

实施例4 动物模型探索RAS/RAF/MEK/ERK抑制剂司美替尼（Selumetinib，AZD6244）联合拉帕替尼对耐药HER2阳性胃癌的协同抑制作用

1、实验方法

选择HER2阳性胃癌细胞SNU-216作为体外研究靶细胞，将NF1 shRNA#1克隆到慢病毒载体，在CMV启动子调控下表达，将重组慢病毒感染HER2阳性胃癌细胞并筛选阳性细胞，建立稳定表达的细胞株及其对照株。

选择稳定转染NF1 shRNA#1的HER2阳性胃癌细胞SNU-216构建裸鼠移植瘤模型，进行动物实验，比较对照组、拉帕替尼单药组、司美替尼（Selumetinib，AZD6244）单药组、司美替尼（Selumetinib，AZD6244）联合拉帕替尼组的协同抗肿瘤作用。

药物的体内抗肿瘤活性评价：每隔4天测量肿瘤的长径（A）和短径（B），并计算瘤体积（V），绘出肿瘤生长曲线，观察药物对肿瘤生长的抑制作用，观察裸鼠体重变化，死亡率。

最后处死裸鼠，取出肿瘤称重。采用指标肿瘤体积（V）和肿瘤抑瘤率IR（%）对药物的抗肿瘤活性进行评价，计算公式如下：

肿瘤体积（V）= π/6（(A+B)/2）^3

肿瘤抑瘤率IR（%）＝（1- 实验组平均瘤重/对照组平均瘤重）×100

2、实验结果

如图5和6，结果显示，司美替尼（Selumetinib，AZD6244）联合拉帕替尼能够克服NF1缺失的HER2阳性胃癌对HER2靶向治疗的耐药性。