法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2020-03-17
授权
授权
2019-05-03
实质审查的生效 IPC(主分类):G01N33/573 申请日:20161121
实质审查的生效
2018-05-29
公开
公开
技术领域
本发明涉及一种利用细胞表面分子ALPPL2鉴定人类
背景技术
多能性作为包括ESCs及iPSCs在内的多能干细胞(Pluripotent Stem Cells,PSCs)的重要特性,是指单个细胞可分化成整个成体所有特化细胞类型的能力。在体内系统中,多能性状态随着受精卵到囊胚的发育过程产生,也随着胚胎的发育过程分成两种阶段。在囊胚晚期,内细胞团(Inner Cell Mass,ICM)表先出异质性(heterogeneity),其部分细胞发育形成上胚层(epiblast)细胞,这些细胞以表达多能性分子标志物Nanog为特征,可发育成三个胚层的组织,并能够代表胚胎发育最初始的状态,处于“原态”(
近年的研究通过过表达关键外源基因、添加特定小分子抑制剂以及改变培养条件等方法,可成功的将体细胞或者处于primed态的PSCs重编程至
ALPPL2(Alkaline phosphatese,placental-like 2,胎盘样碱性磷酸酶)是一类组织特异性的定位于细胞膜表面的碱性磷酸酶,其主要在睾丸,胸腺及特定的生殖细胞肿瘤中表达,与胎盘及肠道形式的碱性磷酸酶密切相关;并在胚胎发育相关研究中被认为是植入前胚胎/滋养外胚层相关的分子标志物。我们在近期的研究中通过可诱导的人类2代重编程系统结合iTRAQ标记-蛋白质谱定量(iTRAQ-LC/MS)技术,发现ALPPL2蛋白高度富集于
发明内容
本发明旨在提供细胞表面分子ALPPL2特异指征人类
本发明的一个目的是提供一种寻找并鉴定可特异性指征人类
本发明的另一个目的是提供由上述方法获得的表面标志物ALPPL2来鉴定人类
本发明的第一方面提供一种寻找并鉴定可特异性指征人类
1.建立可诱导的2代重编程系统,利用特定的诱导培养体系从人的成纤维细胞中分别建立
2.分别提取所建立的
3.在
根据本发明所述的分析步骤,所获得的
1)在
2)相比于primed重编程过程,其在
在此发明中,利用上述方法并参考上述指标,我们筛选并鉴定出
本发明的第二方面提供利用细胞表面分子ALPPL2鉴定人类
1.通过免疫荧光染色及报告基因系统,确定ALPPL2定位于
2.运用报告基因系统,在上述人类2代重编程系统中,追踪ALPPL2在
3.运用CRISPR/CAS9基因编辑系统,在
4.运用CRISPR/CAS9基因编辑系统,在人成纤维细胞分别重编程至
本发明的有益效果为利用可诱导的人类2代重编程系统及iTRAQ-MS技术相结合筛选的方法,找到了可特异指征人的
本项研究有助于填补重编程研究领域的空白,并可以深化对
附图说明
图1中a表示通过可诱导的2代重编程系统将人成纤维细胞分别诱导至
图2中a表示通过免疫荧光检测ALPPL2在
图3中a表示通过免疫荧光检测ALPPL2在
图4表示在ALPPL2::GFP
图5表示在OCT4-ΔPE-GFP
图6表示敲除ALPPL2对
图7表示通过ALPPL2::GFP报告系统,将iPSCs从
具体实施方式
实施例1:ALPPL2蛋白定位检测。
一、目的:确定ALPPL2蛋白的表达定位。
二、方法:
1.运用抗体免疫荧光检测方法,分别检测ALPPL2在
2.运用抗体免疫荧光检测方法,分别检测
3.运用ALPPL2-promoter-GFP(ALPPL2::GFP)报告系统,检测ALPPL2在
三、结果及结论:ALPPL2特异性表达于
实施例2:敲除ALPPL2对
一、目的:验证ALPPL2对
二、方法:
1.运用CRISPR/Cas9基因编辑系统,在ALPPL2::GFP
2.运用CRISPR/Cas9基因编辑系统,在OCT4-ΔPE-GFP
3.运用CRISPR/Cas9基因编辑系统,在
三、结果及结论:在
实施例3:
一、目的:验证ALPPL2对于
二、方法:运用ALPPL2::GFP报告系统,通过将5iLAF培养系统换成经典的primed细胞培养系统(DMEM/F12+20%KSR+4ng/ml bFGF),使
三、结果及结论:使用经典的primed细胞培养系统培养
这里本发明的描述和应用是说明性的,并非想将本发明的范围限制在上述实施例中。这里所披露的实施例的变形和改变是可能的,对于那些本领域的普通技术人员来说实施例的替换和等效的各种部件是公知的。本领域技术人员应该清楚的是,在不脱离本发明的精神或本质特征的情况下,本发明可以以其它形式、结构、布置、比例,以及用其它组件、材料和部件来实现。在不脱离本发明范围和精神的情况下,可以对这里所披露的实施例进行其它变形和改变。
机译: 核酸的多肽编码分子,由DNA分子编码的人类生长蛋白质,人类生长蛋白质编码CDNA,药物化合物,人类生长蛋白质和DNA序列的应用,低生长度的测定方法,方法基因缺陷,DNA序列转化的细胞,鉴定或筛选试验的表达系统和方法,表达载体以及人类生长蛋白的应用
机译: 人类分离的,合成的或重组的抗体或其功能部分或功能等同物,分离的,合成的或重组的核酸分子,载体,分离的或重组的细胞或非人类动物,抗体的组成,用途或功能部分等同物,以及产生抗体或功能性部分或功能等同物的方法,用于检测骨髓增生性或淋巴增生性细胞,确定髓样或淋巴增生性细胞是骨髓增生性或淋巴增生性细胞,鉴定骨髓增生性或淋巴增生性细胞,以确定骨髓增生性或淋巴细胞增生性样品中存在淋巴增生细胞,以治疗和/或预防骨髓增生性或淋巴增生性疾病,以确定个体是否患有骨髓增生性或淋巴增生性疾病,以代表包含m细胞的样品。或来自个体的含有淋巴样细胞的样本,并且
机译: 补体抑制分子,抗体,融合蛋白,核酸分子,载体,宿主细胞,制备补体抑制分子或其功能等同物或融合蛋白的方法,以鉴定补体抑制分子的配体或其功能等同物治疗患有补体介导的疾病或疾患的动物,或防止动物发展补体介导的疾病或疾患,为动物接种疫苗以抵抗传播的疾病或疾患。通过节血节肢动物并抑制非人类细胞,组织或生物体中的经典和替代补体途径,组成,补体抑制分子,融合蛋白或核酸分子的用途