阿尔维林在制备预防或治疗门脉高压症的药物中的应用

摘要

本发明公开了一种阿尔维林在制备预防或治疗门脉高压症的药物中的应用。本发明通过构建三种大鼠肝硬化门脉高压症模型：硫代乙酰胺模型、四氯化碳模型、二甲基亚硝胺模型，研究结果表明，阿尔维林在15mg/kg每日灌胃三种肝硬化门脉高压症模型大鼠后，能够明显降低不同肝硬化门脉高压症模型大鼠的门静脉压力。由此可见，阿尔维林可以用于治疗实验性肝硬化门脉高压症，进一步地，阿尔维林还可以用于治疗食管‑胃底静脉曲张及破裂出血、腹水、肝性脑病等门脉高压症。

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域及临床医学技术领域，具体地说，本发明涉及一种阿尔维林在制备预防或治疗食管-胃底静脉曲张及破裂出血、腹水、肝性脑病等门脉高压症的药物中的应用。

背景技术

阿尔维林(Alverine)为人工合成的罂粟碱衍生物，是一种选择性平滑肌松弛药。其化学结构式如式(I)所示，分子式：C₂₀H₂₇N，化学式为N-乙基-N-(3-苯丙基)苯丙胺，分子量：281.43，熔点<25℃，密度是0.973g/cm³(Ghosh>

CAS号：150-59-4

MDL号：MFCD00035086

EINECS号：205-763-5

PubChem号：318160171

阿尔维林为人工合成的罂粟碱衍生物，是一种选择性平滑肌松弛药，可选择性作用于胃肠道及泌尿生殖器官的平滑肌，正常剂量下几乎不影响气管和血管平滑肌。阿尔维林主要通过影响离子通道的电位敏感度及磷酸-肌醇代谢途径而发挥解痉作用，也可抑制由组胺所致的平滑肌收缩反应。目前临床用于肠易激综合征、肠痉挛、腹痛、憩室炎所引起的疼痛、胆道痉挛，也用于痛经、子宫痉挛、泌尿道结石或感染引发的痉挛性疼痛、下泌尿道感染引起的尿频、膀胱痉挛及其他痉挛性疼痛。

慢性肝病是全球范围内重大公共卫生问题之一。由于肝炎病毒感染、药物损伤、免疫损伤、酒精、代谢等因素导致的慢性肝病进展至肝硬化后常常发生门脉高压，门脉高压症(portal hypertension，PH)是指门静脉系统血流受阻和(或)血流量增加，导致门静脉及其属支血管内静水压持续升高。门脉高压可进一步导致腹水、脾功能亢进、食管-胃底静脉曲张、肝性脑病等一系列并发症，严重影响肝硬化患者预后。其中，食管胃-底静脉曲张破裂出血是导致肝硬化患者死亡的重要原因。因此，治疗门脉高压症成为预防及治疗食管胃-底静脉曲张破裂出血、腹水、肝性脑病等的关键环节。

目前临床上治疗门脉高压症的方法主要有药物治疗和非药物治疗，其中药物治疗包括收缩内脏血管药物(如抗利尿激素、生长激素抑制素及类似物奥曲肽、伐普肽等以及非选择性β受体阻滞剂如普纳罗尔、卡维地诺等)、扩张肝内血管药物(如促进NO入肝的硝酸盐、辛伐他汀等，肾上腺素能受体阻滞剂哌唑嗪、可乐定等，血管紧张素阻滞剂甲巯丙脯酸、氯沙坦、伊贝沙坦等)等，非药物治疗包括内窥镜下曲张静脉套扎术(Endoscopicvaricealligation，EVL)、经颈静脉肝内门体分流术(Transjugularintrahepaticportosystemicshunt，TIPS)等，但鉴于现有治疗手段疗效欠佳及存在并发症等原因，治疗门脉高压症仍亟需一种疗效显著、无明显并发症的药物或治疗手段。

发明内容

本发明的目的是提供一种阿尔维林在制备预防或治疗门脉高压症的药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明的一个方面提供了一种阿尔维林在制备预防或治疗门脉高压症的药物中的应用。

所述预防或治疗门脉高压症的药物是以阿尔维林唯一活性成分作为药物，或者阿尔维林与其他药学上可接受的成分构成的药物组合物作为药物。

所述门脉高压症为食管-胃底静脉曲张及破裂出血、腹水、肝性脑病、实验性肝硬化等。

所述预防或治疗门脉高压症的药物中，阿尔维林的含量为0.1％-99.9％。

所述其他药学上可接受的成分是与阿尔维林没有拮抗作用的药物(如二甲硅油等)，或药学上允许的一种或多种辅料。

所述预防或治疗门脉高压症的药物可以和药剂学上的常规药用辅料制成药物制剂。

所述药物制剂的剂型为注射剂、胶囊剂、片剂、散剂、颗粒剂、丸剂、微囊微球制剂、栓剂、软膏剂、粉针剂、气雾剂、喷雾剂或靶向制剂。

所述药物制剂的给药方式为口服、注射。

所述阿尔维林的化学结构式为：

由于采用上述技术方案，本发明具有以下优点和有益效果：

本发明提供的阿尔维林在制备预防或治疗门脉高压症的药物中的应用，具体是阿尔维林在制备预防或治疗食管-胃底静脉曲张及破裂出血、腹水、肝性脑病、实验性肝硬化等门脉高压症药物中的应用，通过构建三种大鼠肝硬化门脉高压症模型：硫代乙酰胺(TAA)模型、四氯化碳(CCl₄)模型、二甲基亚硝胺(DMN)模型，研究结果表明，阿尔维林在15mg/kg每日灌胃三种肝硬化门脉高压症模型大鼠后，能够明显降低不同肝硬化门脉高压症模型大鼠的门静脉压力。由此可见，阿尔维林可以用于制备预防或治疗实验性肝硬化门脉高压症药物，进一步地，阿尔维林还可用于制备食管-胃底静脉曲张及破裂出血、腹水、肝性脑病等门脉高压症药物。本发明为临床食管-胃底静脉曲张及破裂出血、腹水、肝性脑病等门脉高压症的治疗提供了新治疗手段。

附图说明

图1为硫代乙酰胺(TAA)模型中大鼠肝脏(左图)及正常对照组大鼠肝脏(右图)的示意图。

图2为硫代乙酰胺(TAA)模型中大鼠肝脏(左图)及正常对照组大鼠肝脏(右图)HE染色(×50)的示意图。

图3为硫代乙酰胺(TAA)模型中大鼠肝脏(左图)及正常对照组大鼠肝脏(右图)天狼星红染色(×50)的示意图。

图4为硫代乙酰胺(TAA)模型及体内阿尔维林干预大鼠门静脉压力结果的示意图，门静脉压力：0.9％NaCl组vs.对照组，P<0.001；阿尔维林15mg/kg组vs.对照组，P<0.001；卡维地洛10mg/kg组vs.0.9％NaCl，P＝0.008；阿尔维林15mg/kg组vs.0.9％NaCl组，P＝0.003；卡维地洛10mg/kg组vs.0.9％NaCl组，P＝0.006；阿尔维林15mg/kg组vs.卡维地洛10mg/kg组，P＝0.648。

图5为四氯化碳(CCl₄)模型中大鼠肝脏(左图)及正常对照组大鼠肝脏(右图)的示意图。

图6为四氯化碳(CCl₄)模型中大鼠肝脏(左图)及正常对照组大鼠肝脏(右图)HE染色(×50)的示意图。

图7为四氯化碳(CCl₄)模型中大鼠肝脏(左图)及正常对照组大鼠肝脏(右图)天狼星红染色(×50)的示意图。

图8为四氯化碳(CCl₄)模型及体内阿尔维林干预大鼠门静脉压力结果的示意图，门静脉压力：0.9％NaCl组vs.正常对照组，P＝0.001；阿尔维林15mg/kg组vs.正常对照组，P＝0.351；阿尔维林15mg/kg组vs.0.9％NaCl组，P＝0.004。

图9为不同剂量阿尔维林干预四氯化碳(CCl₄)模型中大鼠门静脉压力结果的示意图，门静脉压力：0.9％NaCl组vs.对照组，P＝0.005；阿尔维林3.75mg/kg组vs.对照组，P＝0.009；阿尔维林15mg/kg组vs.0.9％NaCl，P＝0.007；阿尔维林15mg/kg组vs.阿尔维林7.5mg/kg组，P＝0.048；阿尔维林15mg/kg组vs.阿尔维林3.75mg/kg组，P＝0.018。

图10为二甲基亚硝胺(DMN)模型及体内阿尔维林干预大鼠门静脉压力结果的示意图，阿尔维林15mg/kg vs.0.9％NaCl，P＝0.024，T检验(Studentt检验)。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。

本发明实施例中所用阿尔维林购自TargetMol公司，规格为5g(货号：T0428)。

本发明实施例中所用卡维地诺购自TargetMol公司，规格为5g(货号：T0447)。

本发明实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，所用的试剂均从市场购买得到。

实施例1

阿尔维林在硫代乙酰胺(TAA)模型中对门静脉压力的作用

1.实验动物

6周龄体重约180-200g雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠为清洁级，购自上海斯莱克公司，大鼠饲养于第二军医大学动物实验中心，所有动物实验均获得第二军医大学动物伦理学委员会认可。

2.TAA模型制备及体内阿尔维林干预

1)选取6周龄体重约180-200g雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠共23只，随机分成正常对照组(n＝6)和模型组(n＝17)。模型组大鼠予以TAA0.2g/kg腹腔注射，每周注射3次，隔天注射。对照组大鼠在相同时间点给予腹腔注射生理盐水。两组大鼠连续注射16周完成模型制备。于第17周开始将模型组大鼠随机分成治疗对照组(n＝6)、阿尔维林组(n＝5)、卡维地诺组(阳性对照组，n＝6)。

2)阿尔维林粉末(购于TargetMol公司)按照5mg/ml浓度溶于0.9％NaCl注射液中用于给模型组大鼠灌胃。卡维地诺粉末(购于TargetMol公司)按照1mg/ml浓度溶于0.9％NaCl注射液中用于给模型组大鼠灌胃。

3)阿尔维林组、卡维地诺组大鼠于第17周开始分别予以阿尔维林15mg/kg、卡维地诺10mg/kg灌胃，每天1次；治疗对照组在相同时间点给予0.9％NaCl注射液灌胃。3组模型组大鼠连续灌胃1周。

4)所有实验动物于第17周结束后测量门静脉压力并处死留取肝脏组织。

3.大鼠门静脉压力测定

1)利用自制门静脉测压包(包含24G头皮式静脉留置针(Y型)、输液软管)及高敏感度静脉压力传感器、生物信号处理系统(SMUP-U型号上海继德教学实验器械厂)测定大鼠门静脉压力。

2)连接装置、检查装置气密性及调零，打开门静脉测压包后，连接静脉留置针和输液软管、高敏感度静脉压力传感器，并将传感器连接至生物信息采集系统，检查装置气密性，然后用20ml注射器将输液软管及静脉留置针中充满肝素钠注射液0.9％NaCl注射液(1.25wU:500ml)，排除气泡，夹闭静脉留置针小夹子。拔除静脉留置针针芯，将静脉留置针水平放置于大鼠(平卧位)门静脉高度处，打开小夹子，生物采集系统软件中重置零点。

3)大鼠经10％水合氯醛腹腔注射麻醉后，打开腹腔，24G头皮式静脉留置针(Y型)穿刺并插管至门静脉主干，拔除静脉留置针针芯，打开静脉留置针小夹子，待生物信号采集软件中显示的门静脉压力值波形稳定后记录门静脉压力波形图，取其平均值为门静脉压力。

4.大鼠肝脏组织学检测

大鼠门静脉压力测定后分离大鼠肝脏组织并用10％中性甲醛固定，脱水后石蜡包埋，制成蜡块后切成3μm的薄片，贴于涂胶玻片上65℃烘烤2小时，进行苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining，HE)或天狼星红染色后封片，显微镜下观察并拍照。

5.统计分析

数据值用平均值标准误表示，各组之间的统计学差异采用单因素方差分析(ANOVA)和T检验(Studentt检验)方法进行分析，p＜0.05被认为具有统计学的显著性差异。

6.实验结果

1)大鼠TAA肝硬化模型组与正常对照组大体肝脏形态

造模及阿尔维林或0.9％NaCl注射液灌胃结束完成门静脉压力测定后，获取肝脏标本。通过大体观察，如图1所示，图1为硫代乙酰胺(TAA)模型中大鼠肝脏(左图)及正常对照组大鼠肝脏(右图)的示意图，模型组大鼠肝脏体积明显缩小，且表面呈结节样增生(图1中左图)；正常对照组大鼠肝脏表明光滑，色泽饱满，未见结节样增生(图1中右图)。

2)大鼠TAA肝硬化模型组与对照组肝脏组织HE染色

如图2所示，图2为硫代乙酰胺(TAA)模型中大鼠肝脏(左图)及正常对照组大鼠肝脏(右图)HE染色(×50)的示意图，通过HE染色可见，正常对照组大鼠肝脏实质为正常小叶、汇管区及小叶间隔(图2中右图)；模型组大鼠肝脏实质纤维组织增生、假小叶形成(图2中左图)。

3)大鼠TAA肝硬化模型组与对照组肝脏组织天狼星红染色

如图3所示，图3为硫代乙酰胺(TAA)模型中大鼠肝脏(左图)及正常对照组大鼠肝脏(右图)天狼星红染色(×50)的示意图，通过肝脏组织天狼星红染色，模型组大鼠大量胶原沉积(图3中左图)，正常对照组仅在正常小叶间隔及汇管区有胶原沉积(图3中右图)。

4)各组大鼠门静脉压力值结果如图4和表1所示，图4为硫代乙酰胺(TAA)模型及体内阿尔维林干预大鼠门静脉压力结果的示意图，门静脉压力：0.9％NaCl组vs.对照组，P<0.001；阿尔维林15mg/kg组vs.对照组，P<0.001；卡维地洛10mg/kg组vs.0.9％NaCl，P＝0.008；阿尔维林15mg/kg组vs.0.9％NaCl组，P＝0.003；卡维地洛10mg/kg组vs.0.9％NaCl组，P＝0.006；阿尔维林15mg/kg组vs.卡维地洛10mg/kg组，P＝0.648。

表1 TAA造模及体内阿尔维林干预大鼠门静脉压力结果

组别门静脉压力(cmH₂O)对照组7.08±1.75治疗对照组21.14±2.48阿尔维林组15.57±1.87(-26.35％^#,P＝0.002588145)卡维地诺组14.69±3.74(-30.48％^#,P＝0.005566804)

^#:vs.治疗对照组，T检验(Student’t检验)。

由表1数据可知，阿尔维林药物处理TAA造模大鼠相比于对照组能够明显降低门静脉压力，且与阳性对照组效果无统计学差异(P＝0.0648，Student’t检验)。

实施例2

阿尔维林在四氯化碳(CCl₄)模型中对门静脉压力的作用

1.实验动物

同实施例1。

2.CCl₄模型制备及体内阿尔维林干预

1)选取6周龄体重约180-200g雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠共14只，随机分成正常对照组(n＝4)和模型组(n＝10)。模型组大鼠予以CCl₄0.25ml/kg(按体积比1：3溶于橄榄油)腹腔注射，每周注射2次，对照组大鼠在相同时间点给予腹腔注射橄榄油，两组大鼠连续注射7周完成模型制备，于第6周开始将模型组大鼠随机分成治疗对照组(n＝5)、阿尔维林组(n＝5)。

2)阿尔维林粉末(购于TargetMol公司)按照5mg/ml浓度溶于0.9％NaCl注射液中用于给模型组大鼠灌胃。

3)阿尔维林组大鼠于造模第6周开始予以阿尔维林15mg/kg灌胃，每天1次；治疗对照组在相同时间点给予0.9％NaCl注射液灌胃，2组模型组大鼠连续灌胃2周。

4)所有实验动物于第7周结束后测量门静脉压力并处死留取肝脏组织。

3.大鼠门静脉压力测定

同实施例1。

4.大鼠肝脏组织学检测

同实施例1。

5.统计分析

同实施例1。

6.实验结果

1)大鼠CCl₄肝硬化模型组与正常对照组大体肝脏形态

造模及阿尔维林或0.9％NaCl注射液灌胃结束完成门静脉压力测定后，获取肝脏标本。通过大体观察，如图5所示，图5为四氯化碳(CCl₄)模型中大鼠肝脏(左图)及正常对照组大鼠肝脏(右图)的示意图，模型组大鼠肝脏体积明显缩小，且表面呈结节样增生(图5中左图)；对照组大鼠肝脏表明光滑，色泽饱满，未见结节样增生(图5中右图)。

2)大鼠CCl₄肝硬化模型组与对照组肝脏组织HE染色

如图6所示，图6为四氯化碳(CCl₄)模型中大鼠肝脏(左图)及正常对照组大鼠肝脏(右图)HE染色(×50)的示意图，通过HE染色可见，正常对照组大鼠肝脏实质为正常小叶、汇管区及小叶间隔(图6中右图)；模型组大鼠肝脏实质纤维组织增生、假小叶形成(图6中左图)。

3)大鼠CCl₄肝硬化模型组与对照组肝脏组织天狼星红染色

如图7所示，图7为四氯化碳(CCl₄)模型中大鼠肝脏(左图)及正常对照组大鼠肝脏(右图)天狼星红染色(×50)的示意图，通过肝脏组织天狼星红染色，模型组大鼠大量胶原沉积(图7中左图)，正常对照组仅在正常小叶间隔及汇管区有胶原沉积(图7中右图)。

4)各组大鼠门静脉压力值结果如图8和表2所示，图8为四氯化碳(CCl₄)模型及体内阿尔维林干预大鼠门静脉压力结果的示意图，门静脉压力：0.9％NaCl组vs.正常对照组，P＝0.001；阿尔维林15mg/kg组vs.正常对照组，P＝0.351；阿尔维林15mg/kg组vs.0.9％NaCl组，P＝0.004。

表2 CCl₄造模及体内阿尔维林干预大鼠门静脉压力结果

组别门静脉压力(cmH₂O)对照组8.3±0.3治疗对照组12.4±1.6阿尔维林组8.9±1.1(-28.23％^#,P＝0.003661958)

^#:vs.治疗对照组，Student’t检验

由表2数据可知，阿尔维林药物处理CCl₄造模大鼠相比于治疗对照组能够明显降低门静脉压力。

实施例3

不同剂量阿尔维林在四氯化碳(CCl₄)模型中对门静脉压力的作用

1.实验动物

6周龄体重约180-200g雄性Wister大鼠为清洁级，购自上海斯莱克公司，大鼠饲养于第二军医大学动物实验中心，所有动物实验均获得第二军医大学动物伦理学委员会认可。

2.CCl₄模型制备及体内阿尔维林干预

1)选取6周龄体重约180-200g雄性Wister大鼠共33只，随机分成正常对照组(n＝6)和模型组(n＝27)。模型组大鼠予以CCl₄0.25ml/kg(按体积比1：3溶于橄榄油)腹腔注射，每周注射2次，正常对照组大鼠在相同时间点给予腹腔注射橄榄油，两组大鼠连续注射6周完成模型制备，于第6周开始将模型组大鼠随机分成治疗对照组(n＝5)、阿尔维林30mg/kg组(n＝4)、阿尔维林15mg/kg组(n＝6)、阿尔维林7.5mg/kg组(n＝6)、阿尔维林3.75mg/kg组(n＝6)。

2)阿尔维林粉末(购于TargetMol公司)按照5mg/ml浓度溶于0.9％NaCl注射液中用于给模型组大鼠灌胃。

3)阿尔维林不同剂量组大鼠于造模第6周开始分别予以阿尔维林30mg/kg、15mg/kg、7.5mg/kg、3.75mg/kg灌胃，每天1次；治疗对照组在相同时间点给予0.9％NaCl注射液灌胃，5组模型组大鼠连续灌胃1周。

4)所有实验动物于第6周结束后测量门静脉压力。

3.大鼠门静脉压力测定

同实施例1。

4.统计分析

同实施例1。

5.实验结果

各组大鼠门静脉压力值结果如图9和表3所示，图9为不同剂量阿尔维林干预四氯化碳(CCl₄)模型中大鼠门静脉压力结果的示意图，门静脉压力：0.9％NaCl组vs.对照组，P＝0.005；阿尔维林3.75mg/kg组vs.对照组，P＝0.009；阿尔维林15mg/kg组vs.0.9％NaCl，P＝0.007；阿尔维林15mg/kg组vs.阿尔维林7.5mg/kg组，P＝0.048；阿尔维林15mg/kg组vs.阿尔维林3.75mg/kg组，P＝0.018。

表3不同剂量阿尔维林干预CCl₄造模大鼠门静脉压力结果

组别门静脉压力(cmH₂O)对照组6.65±1.12治疗对照组10.33±2.12阿尔维林30mg/kg组8.13±2.35(-21.32％^#,P＝0.183)阿尔维林15mg/kg组6.25±1.78(-39.46％^#,P＝0.007)阿尔维林7.5mg/kg组8.82±2.16(-14.60％^#,P＝0.275)阿尔维林3.75mg/kg组8.56±0.90(-17.13％^#,P＝0.094)

^#:vs.治疗对照组，Student’t检验

由表3数据可知，阿尔维林不同剂量组与治疗对照组及CCl₄对照组间大鼠门静脉压力值存在差异，且差异具有统计学意义(F＝3.991，P＝0.008，ANOVA检验)。阿尔维林药物15mg/kg处理CCl₄造模大鼠相比于对照组能够明显降低门静脉压力。

实施例4

阿尔维林在二甲基亚硝胺(DMN)模型中对门静脉压力的作用

1.实验动物

同实施例1。

2.DMN模型制备及体内阿尔维林干预

1)选取6周龄体重约180-200g雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠共11只，1％DMN生理盐水溶液按10mg/kg腹腔注射，每周注射3次，隔天注射，连续注射4周完成模型制备，于第3周开始将模型组大鼠随机分成治疗对照组(n＝4)、阿尔维林低剂量组(n＝4)、阿尔维林高剂量组(n＝3)。

2)阿尔维林粉末(购于TargetMol公司)按照5mg/ml浓度溶于0.9％NaCl溶液中用于给模型组大鼠灌胃。

3)阿尔维林低剂量组、高剂量组大鼠于第3周开始分别予以阿尔维林15mg/kg、30mg/kg灌胃，每天1次；治疗对照组在相同时间点给予0.9％NaCl注射液灌胃，3组模型组大鼠连续灌胃2周。

4)所有实验动物于第4周结束后测量门静脉压力。

3.大鼠门静脉压力测定

同实施例1。

4.统计分析

同实施例1。

5.实验结果

各组大鼠门静脉压力值结果如图10和表4所示，图10为二甲基亚硝胺(DMN)模型及体内阿尔维林干预大鼠门静脉压力结果的示意图，阿尔维林15mg/kgvs.0.9％NaCl，P＝0.024，T检验(Studentt检验)。

表4 DMN造模及体内阿尔维林干预大鼠门静脉压力结果

组别门静脉压力(cmH₂O)治疗对照组12.2±2.0阿尔维林低剂量组8.9±0.9(-27.04％^#,P＝0.024)阿尔维林高剂量组9.2±3.5(-24.59％^#,P＝0.202)

^#:vs.治疗对照组，Student’t检验

由表4数据可知，阿尔维林药物15mg/kg处理DMN造模大鼠相比于对照组能够明显降低门静脉压力。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。