一种多肽在预防或治疗急性肺损伤相关疾病中的药物应用

摘要

本发明公开了一种多肽在预防或治疗急性肺损伤相关疾病中的药物应用，属于生物医药领域。该多肽氨基酸序列为：SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2。本发明中的多肽对急性肺损伤具有明显的保护作用，可作为预防或治疗急性肺损伤相关疾病的药物，具有临床应用价值。

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地说本发明涉及一种多肽在预防或治疗急性肺损伤相关疾病中的药物应用。

背景技术

急性肺损伤(acute lung injury，ALI)及其严重状态-急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)是临床常见急危重症，严重威胁患者的生命并影响其生存质量，病死率高达35％～60％，给社会及患者家庭带来沉重负担。目前治疗该类疾病的主要措施是机械通气，另外，糖皮质激素、抗炎药物也有一定疗效。虽然目前还有一些药物正在研发中，但仍缺少能取得满意效果的防治药物(例如可以参见《急性肺损伤药物治疗研究进展》(陈小明，赵航；医学理论与实践2017年第19期，第2836～2838页)；或者参见《内毒素所致急性肺损伤治疗药物研究进展》(于子茹，杜冠华；中国新药杂志2017年第13期，第1510～1555页)，因此，进一步研发ALI 及ARDS等肺损伤相关疾病的预防或治疗方面的新药具有非常重要的现实意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种多肽在预防或治疗急性肺损伤相关疾病中的药物应用，以减少或避免前面所提到的问题。

未解决上述技术问题，本发明提供了一种多肽AdKI4的完整氨基酸序列或其突变体在预防或治疗急性肺损伤相关疾病中的药物应用。AdKI4的完整氨基酸序列为：SEQ IDNO.1，或AdKI4的突变体，如在完整氨基酸的氨基端或羧基端缺失一个或多个氨基酸残基后形成的突变体，如氨基酸序列：SEQ ID NO.2。

本发明通过药理实验证实了AdKI4对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤具有明显保护作用，因此，该多肽可应用于预防或治疗急性肺损伤损伤相关疾病，如急性呼吸窘迫综合征等，有广泛的临床应用价值。

附图说明

以下附图仅旨在于对本发明做示意性说明和解释，并不限定本发明的范围。其中，

图1显示的是AdKI4对BALB/c小鼠肺组织的病理影响(200倍镜下)。 A.对照组(假手术组)；B.模型组；C.低剂量组(2.0mg/kg﹒BW)；D.中剂量组(4.0mg/kg﹒BW)；E.高剂量组(8.0mg/kg﹒BW)。BW为体重。

具体实施方式

为了对本发明的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现对照附图说明本发明的具体实施方式。以下具体实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

本发明人前期在十二指肠钩虫(Ancylostoma duodenale)中分离到一种多肽-AdKI4。发明人通过系列探索研究，利用脂多糖(LPS)诱导小鼠建立急性肺损伤模型，首先明确了AdKI4对急性肺损伤具有显著保护作用，因此， AdKI4可作为药物应用于预防或治疗急性肺损伤相关疾病。

实施例rAdKI4对急性肺损伤的保护作用

1实验材料

实验获得AdKI4的完整氨基酸序列为：SEQ ID NO.1，或AdKI4的突变体，如在完整氨基酸的氨基端或羧基端缺失一个或多个氨基酸残基后形成的突变体，如氨基酸序列：SEQID NO.2。

AdKI4是发明人利用原核表达系统重组制备而得到。制备方法可参见：《Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂IsKuI-1的原核表达、纯化及活性研究》，(崔宏娣，邵正，邓莉等；中国新药杂志2014年第34卷第12期，第30～35页)。具体来说，通过构建pET32a-sumo/AdKI4原核表达质粒，转入到大肠埃希菌 BL21(DE3)中，经测序证实序列正确；用IPTG诱导表达，表达产物经镍亲和层析纯化获得融合蛋白，经SUMO蛋白酶切割融合蛋白，并通过离子交换层析制备获得纯度大于95％重组多肽，即获得重组的目的多肽-重组AdKI4 (rAdKI4)。

BALB/c小鼠购自广东省医学实验动物中心[实验动物证：SCXK(粤) 2013-0002；SYXK(粤)2012-0122]；脂多糖(LPS)为Sigma公司产品。

2实验方法

2.1动物分组：体重18～22g的SPF级BALB/c小鼠50只，随机分为5 组，每组10只，分别为：空白对照组(假手术组)、模型组、rAdKI4高剂量组(8.0mg/kg﹒BW)、rAdKI4中剂量组(4.0mg/kg﹒BW)、rAdKI4低剂量组 (2.0mg/kg﹒BW)。BW为体重。

2.2构建模型及给药：

(1)动物模型：采用气管滴注LPS(2.5mg/kg)建立小鼠急性肺损伤模型，空白对照组气管滴注生理盐水。

(2)给药：在滴注后2min内尾静脉注射给药，其中空白对照组及模型组注射等量生理盐水，药物组分别给予8.0mg/kg、4.0mg/kg和2.0mg/kg体重的rAdKI4。

2.3实验结果观察方法

(1)动物行为学观察：滴注LPS或生理盐水后观察各组小鼠行为学，包括小鼠毛发、精神状态，口唇颜色及呼吸频率等表观现象。

(2)肺组织湿干重比(W/D)的测定：在滴注24h后，颈椎脱臼处死小鼠，打开胸腔，取出左肺，生理盐水洗干净，滤纸吸干，称重，为湿重。左肺60℃烤箱中烤72h至恒重，称重，为干重。计算肺组织湿重/干重比值以反映肺组织的水肿程度。

(3)肺部病理组织检查：取前述小鼠右肺中叶，置于10％福尔马林固定 24h，用于石蜡组织包埋切片、HE染色，观察各组小鼠肺组织病理情况。

2.4统计方法：用SPSS16.0软件包进行统计分析，数据用均数±标准差表示。3组之间比较用单因素方差分析(ANOVA)，两两比较用q 检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

3实验结果

(1)行为学观察结果：空白对照组小鼠与实验前无差异，行为正常、呼吸平稳、表现正常，能正常进食饮水；模型组小鼠精神呆滞、呼吸急促、口唇及四肢紫绀、毛发粗糙无光、少动、稀便情况严重、不进食饮水；与空白对照组比较，给药rAdKI4各组小鼠呼吸频率稍加快、口唇及四肢紫绀，稀便情况不严重、能少量进食饮水，但较模型组症状明显减轻，且给药剂量大者，症状愈轻。

(2)肺部组织W/D结果：各组W/D值见表1，结果表明rAdKI4能明显减轻肺组织水肿，并呈剂量依赖关系。

表1各组小鼠肺组织湿干重比(W/D)变化(n＝10)

(3)肺部病理组织结果观察：

在200倍镜下观察肺组织病理情况，空白对照组小鼠肺泡壁薄、细胞结构清楚、边缘完整，腔内无炎性细胞和液体，肺间质无炎性渗出；模型组肺组织间隔增厚、肺间质水肿、肺泡腔出血、肺泡塌陷、大量炎性细胞浸润明显；给药rAdKI4各组肺组织病理均有不同程度的改善，肺间隔增厚较轻、炎症细胞较少、出血现象较轻，其中4.0mg/kg组及8.0mg/kg组肺泡结构完整、肺间隔明显薄于模型组，炎症细胞及出血点大量减少(图1)。

4结论：AdKI4对急性肺损伤具有显著保护作用，可作为药物应用于预防或治疗急性肺损伤相关疾病。

以上所述仅为本发明示意性的具体实施方式，并非用以限定本发明的范围。任何本领域的技术人员，在不脱离本发明的构思和原则的前提下所作的等同变化、修改与结合，均应属于本发明保护的范围。

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序列表

<110> 广东医科大学

<120> 一种多肽在预防或治疗急性肺损伤相关疾病中的药物应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 61

<212> PRT

<213> 十二指肠钩虫(Ancylostoma duodenale)

<400> 1

Asn Pro His Arg Lys Gly Arg Cys Gly Asp Asp Pro Ala Glu Thr Gly

1 5 1015

Gly Glu Cys Pro Asp Pro Glu Thr Lys Tyr Thr Tyr Lys Phe Gly Asp

202530

Cys His Glu Val Lys Tyr Cys Gly Glu Gln Glu Thr Arg Asn Leu Phe

354045

Asp Ser Tyr Glu Lys Cys Ser Gly Lys Cys Val Ile Phe

505560

<210> 2

<211> 51

<212> PRT

<213> 十二指肠钩虫(Ancylostoma duodenale)

<400> 2

Cys Gly Asp Asp Pro Ala Glu Thr Gly Gly Glu Cys Pro Asp Pro Glu

1 5 1015

Thr Lys Tyr Thr Tyr Lys Phe Gly Asp Cys His Glu Val Lys Tyr Cys

202530

Gly Glu Gln Glu Thr Arg Asn Leu Phe Asp Ser Tyr Glu Lys Cys Ser

354045

Gly Lys Cys

50